葡萄糖(Glu)测定氧化酶法标准操作程序SOP文件

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。

过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。

红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。

2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。

3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。

4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。

5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。

6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。

2h 以后方可使用。

7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。

【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。

葡萄糖（GLu）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：葡萄糖（GLu）测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）使用说明书【摘要】糖是人体的主要供能物质，也是组织细胞的主要成分。

血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖症状。

1.病理性高血糖：（1）原发性糖尿病（2）内分泌疾病：嗜铬细胞瘤、甲状腺毒瘤、肢端肥大症、巨人症、Cushing综合征、高血糖素细胞瘤；（3）胰腺疾病：急性或慢性胰腺炎、流行性腮腺炎引起的胰腺炎、胰腺囊性纤维化、血色病（血红蛋白沉着症）等；（4）抗胰岛素受体抗体与有关疾病：棘皮症、Wernicke’s脑病。

2.病理性低血糖：（1）胰岛细胞瘤、高血糖素缺乏；（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长激素、肾上腺皮质激素和甲状腺素分泌减少；（3）严重肝病患者，肝细胞糖原储存不足及糖原异生功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。

【预期用途】该试剂盒采用葡萄糖氧化酶法，用于体外定量测定人血清或血浆中葡糖糖的含量。

【检验原理】葡糖糖被葡萄糖氧化酶氧化后生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠缩合，生成醌系色素，通过测定此反应的吸光度可求得葡糖糖的含量。

D-2葡萄糖氧化酶D-葡萄糖醛酮+H2O22 H2O2 + 4-APP ++ H3O+POD醌系色素+ 5H2O【主要组成成份】试剂1（R1）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L抗环血酸氧化酶4700 U/L葡糖糖氧化酶4000 U/L试剂2（R2）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L过氧化物酶6700U/L4-氨基安替比林0.7 mmol/L对羟基苯甲酸钠 1.3 mmol/L校准品：葡萄糖溶液。

*不同批号试剂盒各组分请勿混用。

【试剂准备】R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂【储存条件与有效期】未开启的试剂盒避光保存于无腐蚀性气味和通风良好的室内，在2℃~8℃有效期为一年。

葡萄糖试剂盒（氧化酶法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中葡萄糖的含量。

2. 适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中葡萄糖的含量。

3. 职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定葡萄糖浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的葡萄糖试剂盒采用的是氧化酶法(GOD-POD)。

5. 原理葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下与水分子和氧分子反应生成葡萄糖酸和双氧水,最后双氧水在过氧化物酶的催化下与色原底物、4-氨基安替比林和苯酚反应生成红色化合物醌亚胺。

由于醌亚胺在波长500nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 500nm 处吸光度的变化值与样本中葡萄糖的含量成正比。

O H O H O H O O H 22222224+−−−→−+-++−−−−→−++醌亚胺苯酚氨基安替比林葡萄糖酸葡萄糖过氧化物酶葡萄糖氧化酶6. 仪器AU5811自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：磷酸盐缓冲液、过氧化物酶、苯酚、防腐剂；R2：磷酸盐缓冲液、葡萄糖氧化酶、4-氨基安替比林、防腐剂；校准品：葡萄糖、防腐剂7.3 试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年。

开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定14天。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

实验室工作制度1.室内应经常保持整洁，各种仪器设备要安装适当，器皿试剂摆放整齐，标志清晰，有良好的通风设备。

2.实验室工作人员工作时一律穿制服，保持衣帽整洁，试验过程中应专心致志、认真负责，坚守工作岗位，不得随意串岗、闲谈，保持实验室安静，下班离开实验室前要检查并关好水、电、门、窗等，注意实验室安全。

3.认真开展实验室质量控制工作，仪器设备应定期保养，有温度记录，检测标本的保存要求符合规范要求。

4.实验室不得放置与测试无关的物品，水、温、湿度、光照、防震、防尘、防噪声等，环境必须符合实验室的工作要求。

5.实验和楼道内必须配置足够的安全防火措施，并定期检查保养。

6.对不同属性、品种和含量水平的试样，应有足够的试验区域，予以分离检验，尤其是已知具有生物危害的试样必须分离检验。

防止损害工作人员健康和污染环境。

7.与检验无关人员不得进入实验室，外单位人员联系工作，一律在办公室接待。

8.实验结束后，应及时清理实验现场和用品，对染菌带毒的器具废弃物应严格进行消毒无菌处理。

9.实验室内禁止吸烟、用餐和进食。

丙氨酸氨基转移酶测定SOP【预期用途】用于对人血清样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力的体外定量检测，作辅助诊断用。

【临床意义】丙氨酸氨基转移酶在肝脏中有较高的含量，面在肾、心骨骼肌、胰、脾、肺脏中则含量较少。

丙氨酸氨基转移酶活性升高通常是由某些与肝脏有关的冷热病引起的，这些疾病包括：肝硬化、肝癌、病毒性或中毒性肝炎和阻塞性黄疸。

在急性病毒性或中毒性肝炎时，丙氨酸氨基转移酶活性明显高于天门科氨酸氨基转移酶，而对于绝大多数的慢性肝炎病人丙氨酸氨基转移酶则低于天门冬氨酸氨基转移酶。

丙氨酸氨基转移酶活性升高也见于广泛损伤和肌肉疾病、伴有休克的循环衰竭、缺氧、心肌梗塞和溶血性疾病。

【检验原理】（1）样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨基转换至ɑ-氧代戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。

（2）丙酮酸补试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为L-乳酸的同时还原型辅酶I（NADH+H）被氧化办辅酶I（NAD），而使波长340nm处吸光度值下降。

1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司葡萄糖（GLU）测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）测定方法2、适用范围：适用于人血清、血浆葡萄糖的测定。

3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。

3.2未开启的试剂盒避光保存于无腐蚀性气体和通风良好的室内，在2℃～8℃有效期为一年。

试剂开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定1个月。

试剂不可冰冻。

3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化后生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠缩合，生成醌系色素，通过测定此反应的吸光度可求得葡萄糖的含量。

4.2样本要求空腹血清或血浆。

如血浆在采集30分钟内分离，保存在2℃～8℃可稳定24小时。

4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。

4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。

当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。

4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。

4.3.3 测试基本参数4.4参考范围3.33～6.11 mmol/L（60～110 mg/dL）（注：各实验室应有自己的参考范围。

）4.5 方法评价线性范围：0.3～28 mmol/L。

样本中含量超出可报告范围，请用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。

反应曲线异常时应进行重复测定确认。

精密度：批内CV ≤ 3.0%批间CV ≤ 5.0%分析灵敏度：本试剂盒的检测低限不高于0.3 mmol/L。

葡萄糖1.目的规范葡萄糖测定的操作程序，确保葡萄糖测定结果准确。

2.检验方法氧化酶法（两点终点法） 3.检验原理 葡萄糖+O 2+H 2O 葡萄糖酸+H 2O 2H 2O 2+4-AAP+苯酚红色醌亚胺+4H 2O在波长505nm 处比色，计算出GLU 浓度。

4.临床意义临床检测GLU 浓度主要用于糖尿病诊断、昏迷鉴别诊断及糖代谢研究。

血糖增高主要见于：①生理性高血糖：可见于饭后1-2小时或情绪紧张肾上腺分泌增加时;②病理性高血糖：可见于内分泌功能障碍引起的糖尿病、颅外伤、颅内出血、脑膜炎引起的颅内高压、脱水引起的高血糖、急慢性胰腺炎、肝功能障碍等。

血糖降低主要见于：①生理性低血糖：常见于饥饿和剧烈运动后。

②病理性低血糖：可见于高胰岛素血症、非胰性肿瘤、糖原累积症、自身免疫性疾病、半乳糖血症和肾脏疾病等。

5.标本采集及干扰因素 5.1标本要求空腹不抗凝静脉血2~3ml 。

5.2标本保存室温保存，及时送检。

血清ALT 在20-25℃可稳定24小时，在2-8℃储存可稳定7d ，-20℃冰冻保存可稳定30d 。

5.3注意事项推荐选用血清，避免溶血，红细胞中ALT 比血浆高约7倍，溶血时红细胞内ALT 可进入血浆，导致测定结果偏高。

标本应避免溶血、脂血、黄疸。

6.检测仪器日立7180全自动生化分析仪，使用具体要求和校准程序详见《仪器GOPOD操作规程》。

7.试剂 7.1试剂品牌美康生物 7.2包装规格200mL （R1:2×65mL+R2:1×70mL ） 7.3主要组成成分 试剂成分含量（最终反应体系） 试剂1 磷酸盐缓冲液 0.1mol/L 苯酚0.01×10-3mol/L 试剂2葡萄糖氧化酶 16000u/L 过氧化物酶 1000u/L 4-氨基安替比林0.02×10-3mol/L不同批次的试剂不推荐混合使用 7.4储存条件有效期试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。

葡萄糖测定标准化操作程序（SOP）文件测定单位：故城县计划生育技术服务站编写者：宿金涛日期：2012年5月28日一、方法学原理在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。

过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。

此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。

GODβ-D-葡萄糖+ H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸PODH2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚---------- 醌亚胺（红色）+ H2O二、试剂深圳迈瑞规格：R1：4*40mL，R2：2*20mL，S：1*1.5mL试剂文号：粤食药监械（准）字2011第2400475号主要组成成分：试剂1（R1）：磷酸盐缓冲液100mmol/L抗坏血酸氧化酶4700U/L葡萄糖氧化酶4000U/L试剂2（R2）：磷酸盐缓冲液100mmol/L过氧化物酶6700U/L4--氨基安替比林0.7mmol/L对羟基笨甲酸钠 1.3mmol/L 校准品：葡萄糖溶液。

校准品最终可溯源至参考方法GC-MS。

不同批号试剂盒各组分请勿混用。

三、仪器迈瑞BS-390生化分析仪四．标本采集与处理1 、受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。

常用药物中可致血糖增高的有以下几类。

糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。

糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。

葡萄糖检验方法化学葡萄糖是一种重要的碳水化合物，它在人体内起着供能和调节血糖浓度的重要作用。

葡萄糖的检验方法在临床诊断和生物学研究中具有重要意义。

本文将介绍葡萄糖检验的化学方法，包括常用的尿糖试纸法、酶法和光度法，以及其原理、操作步骤和应用范围。

首先介绍尿糖试纸法。

尿糖试纸法是一种简便快捷的葡萄糖定性定量检测方法。

其原理是利用尿液中的葡萄糖和在酸性条件下氧化还原反应产生的色素进行检测。

操作步骤包括取一小片试纸，用尿液浸湿后与容器边缘擦拭，然后在规定的时间内观察试纸颜色变化，并用试纸上的标度比色确定尿糖含量。

其次介绍酶法。

酶法是一种常用的葡萄糖定量检测方法，通过将葡萄糖与葡萄糖氧化酶反应产生过氧化物，并与酶标底物反应产生发光，利用光强度与葡萄糖浓度成正比的关系进行定量分析。

操作步骤包括将标本与反应试剂混合，允许酶促反应进行一段时间后，通过光度计测定发光强度并据此获得葡萄糖含量。

最后介绍光度法。

光度法是一种常用的葡萄糖定量检测方法，通过测定葡萄糖与某种特定试剂发生的反应产生的吸收、荧光或发光信号来定量分析葡萄糖。

其操作步骤包括将样品与试剂混合后，允许反应一段时间，然后通过光度计测定吸收、荧光或发光强度，并根据标准曲线确定葡萄糖浓度。

葡萄糖检验方法化学的应用范围非常广泛，包括但不限于临床糖尿病筛查、胰岛素抵抗检测、葡萄糖代谢疾病诊断、食品和饮料质量检验等。

葡萄糖检验方法化学在医学和生物学领域中具有重要意义，不断的技术革新和方法优化将进一步提高葡萄糖检测的准确性和灵敏性，有利于更好地指导临床诊断和治疗。

葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中葡萄糖(GLU)的含量。

1.1包装规格序号规格1 试剂1：2×40ml；校准品：1×3ml。

2 试剂1：6×60ml；校准品：1×3ml。

3 试剂1：4×100ml；校准品：1×3ml。

4 试剂1：6×100ml；校准品：1×3ml。

5 试剂1：1×1000ml；校准品：1×3ml。

6 试剂1：5×24ml；校准品：1×3ml。

7 试剂1：10L。

1.2主要组成成分本试剂由试剂1（R1）和校准品（STD）组成试剂1(R1)：磷酸盐缓冲液100mmol/L 4-氨基安替比林0.3g/L苯酚0.35g/L过氧化物酶 1.2KU/L葡萄糖变旋酶0.5KU/L葡萄糖氧化酶 1.2KU/L校准品：葡萄糖（基质：水溶液：浓度：5.55mmol/L）2.1 外观试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；R1为无色至淡粉色透明，澄清液体，校准品为无色透明液体。

液体试剂不得有沉淀和絮状物。

2.2 装量试剂瓶内液体装量应不少于标示值。

2.3 空白吸光度以生理盐水为样品，在37℃、505nm波长、1cm光径条件下，吸光度≤0.2。

2.4 分析灵敏度浓度为6.4mmol/L的样本，吸光度差值△A＞0.3。

2.5 准确性相对偏差应不大于20%（＞4.16mmol/L），绝对偏差在±0.833 mmol/L（≤4.16mmol/L）。

2.6 重复性用不同浓度的两个样本进行检测，各重复检测10次，其批内变异系数（CV）应不超过5％。

2.7 线性2.7.1在(2.2，25)mmol/L范围内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2 在(2.2，4.16]mmol/L范围内绝对偏差不超过±0.833mmol/L；(4.16，25) mmol/L范围内相对偏差不超过±15%。