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四大中文核心期刊评价体系本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March四种中文核心期刊评价体系资料介绍对中国内地出版的期刊中核心期刊的认定，目前国内比较权威的有以下几种版本：第一种是中国科技信息研究所（简称中信所）每年出一次的《中国科技期刊引证报告》（限理工科期刊，以下简称《引证报告》）。
中信所每年第四季度面向全国大专院校和科研院所发布上一年的科研论文排名。
排名包括SCI、Ei、ISTP分别收录的论文量和中国期刊发表论文量等项指标。
《引证报告》以1300多种中、外文科技类期刊作为统计源，报告的内容是对这些期刊进行多项指标的统计与分析，其中最重要的是按类进行“影响因子”排名。
第二种是北京大学图书馆与北京高校图书馆期刊工作研究会联合编辑出版的《中文核心期刊要目总览》（以下简称《要目总览》）。
《要目总览》不定期出版，1996年出版了第一版，2000年出了第二版。
《要目总览》收编包括社会科学和自然科学等各种学科类别的中文期刊。
其中对核心期刊的认定通过五项指标综合评估。
《引证报告》统计源期刊的选取原则和《要目总览》核心期刊的认定各依据了不同的方法体系，所以二者界定的核心期刊（指科技类）不完全一致。
在《引证报告》和《要目总览》中每次都被评为核心期刊的期刊在其刊名前面加注了“#”，共597种。
被《要目总览》1996年版，2000年版都定为核心期刊的社科类期刊，加注“=”，共434种。
此外，被1999年EI和SCI收录的期刊，分别注以“+”(71种)或“ &”(28种)。
第三种是中国科学引文数据库，限于理工科期刊)。
它是由中国科学院文献情报中心建立的, 分为核心库和扩展库。
核心库的来源期刊经过严格的评选,是各学科领域中具有权威性和代表性的核心期刊。
我校在科研成果认定中把中国科学引文数据库核心库中的刊物均认定为核心期刊。
2021年2月第29卷㊀第1期中国实验动物学报ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICAFebruary 2021Vol.29㊀No.1楚璐萌,田子颖,崔蕊,等.低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的抑制作用[J].中国实验动物学报,2021,29(1):1-8.Chu LM,Tian ZY,Cui R,et al.Inhibition effects of hypoxia on embryonic development and erythropoiesis in zebrafish [J].Acta Lab Anim Sci Sin,2021,29(1):1-8.Doi:10.3969/j.issn.1005-4847.2021.01.001[基金项目]国家自然科学基金(31301135),河南省高等学校重点科研项目资助计划(21A320018),河南省高校科技创新人才支持计划(17HASTIT047),河南省高等学校青年骨干教师资助计划(2016GGJS-103),新乡医学院精神神经医学学科群支持计划(2016PNKFKT-08),新乡医学院产学研合作项目(2017CXY-2-14),河南省生物精神病学重点实验室开放课题(ZDSYS2016001),研究生创新支持计划资助项目(YJSCX201811Z)㊂Funded by National Natural Science Foundation of China (31301135),Key Scientific Research Projects of Henan Province (21A320018),Innovative Talents in Science and Technology of Fund Program of Universities of Henan Province(17HASTIT047),the Young Backbone TeachersFellowship in Henan Province (2016GGJS-103),the Disciplinary Group of Psychology and Neuroscience,Xinxiang Medical University (2016PNKFKT-08),Production,Study and Research Project Funding of Xinxiang Medical University(2017CXY-2-14),Open Program of Henan Key Laboratory of Biological Psychiatry(ZDSYS2016001),Graduate Innovation Support Program Funded Projects(YJSCX201811Z).[作者简介]楚璐萌(1994 ),女,在读硕士研究生,研究方向:造血分化发育研究㊂Email:670381639@ [通信作者]于海川(1979 ),男,博士,副教授,研究方向:造血分化发育㊂Email:haichuan_yu@;吴娇(1978 ),女,博士,副教授,研究方向:神经分化发育研究㊂Email:wujiao@㊂∗共同通信作者低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的抑制作用楚璐萌1,4,田子颖1,崔蕊1,吴娇2∗,于海川1,3∗(1.新乡医学院医学检验学院,河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心,河南新乡㊀453003;2.新乡医学院药学院,河南新乡㊀453003;3.新乡医学院第二附属医院,河南省生物精神病学重点实验室,河南新乡㊀453002;4.河南省郑州市第七人民医院,郑州㊀450000)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀本文以斑马鱼(Danio rerio )为研究对象,探讨了低氧对早期胚胎发育㊁造血分化和红系分化的影响㊂方法㊀选取受精后12h 的斑马鱼胚胎,随机分为两组,以常氧组为对照组,低氧组为实验组,实时观察斑马鱼胚胎发育形态学的变化;通过联苯胺染色㊁邻联茴香胺染色㊁AO 染色及瑞氏吉姆萨染色观察红细胞的生成及形态学变化;并通过Real time PCR 检测了斑马鱼胚胎造血相关基因的表达情况㊂结果㊀与常氧相比,低氧降低了斑马鱼胚胎卵黄囊的营养消耗,抑制了色素细胞的形成,减慢了心率,延缓了斑马鱼胚胎的孵化,观察和分析了低氧对红细胞产生和成熟的抑制作用㊂结论㊀低氧延缓了斑马鱼胚胎发育,抑制了红细胞的产生和成熟㊂ʌ关键词ɔ㊀斑马鱼;低氧;胚胎发育;造血分化;红细胞生成ʌ中图分类号ɔQ95-33㊀㊀ʌ文献标识码ɔA㊀㊀ʌ文章编号ɔ1005-4847(2021)01-0001-08Inhibition effects of hypoxia on embryonic development anderythropoiesis in zebrafishCHU Lumeng 1,4,TIAN Ziying 1,CUI Rui 1,WU Jiao 2∗,YU Haichuan 1,3∗(1.School of Laboratory Medicine,Henan Collaborative Innovation Center of Molecular Diagnosis and Laboratory Medicine,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453003,China.2.School of Pharmacy,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453003.3.the Second Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University,Henan Key Laboratory of Biological Psychiatry,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453002.4.Zhengzhou No.7People s Hospital of Henan Province,Zhengzhou 450000)Corresponding author:YU Haichuan.E-mail:haichuan_yu@;WU Jiao.E-mail:wujiao@ ʌAbstract ɔ㊀Objective ㊀The vertebrate model of zebrafish (Danio rerio )was employed to explore the effects ofhypoxia on early embryonic development,hematopoietic differentiation,and erythroid differentiation.Methods ㊀At 12hpost-fertilization,zebrafish embryos were randomly divided into two groups.The normoxic group was used as the control group,and the hypoxic group was used as the experimental group.The morphological changes of zebrafish embryos were observed in real-time.Erythropoiesis and morphological changes were observed by benzidine,O-dianisidine,acridine orange,and May-Grunwald Giemsa staining.Real time PCR was used to analyze hematopoietic gene expression in zebrafish embryos.Results㊀Hypoxia reduced nutritional consumption of the yolk sac,inhibited the formation of pigment cells, slowed down the heart rate,and delayed the hatching of zebrafish embryos.Inhibitive effects of hypoxia on the production and maturity of red blood cells were observed.Conclusions㊀Hypoxia delays zebrafish embryonic development and inhibits the production and maturity of red blood cells.ʌKeywordsɔ㊀zebrafish;hypoxia;embryonic development;hematopoietic differentiation;erythropoiesis Conflicts of Interest:The authors declare no conflict of interest.㊀㊀斑马鱼(Danio rerio)是研究发育㊁造血和遗传学的强大模型[1],其具有体外受精发育㊁产卵量大㊁胚胎透明等多种优势[2-4]㊂斑马鱼与人类之间的遗传同源性达87%[5],同时具有遗传操作和再生能力[6],这使得斑马鱼成为目前研究脊椎动物胚胎发育和造血分化的优秀动物模型[7]㊂低氧是影响水生系统的最重要的压力源之一[8-9],目前有关低氧对斑马鱼胚胎发育的影响机制研究报道非常少㊂斑马鱼胚胎发育是一个复杂的㊁高度协同的过程㊂斑马鱼与人的造血分化是保守一致的,已经发现并克隆了造血过程中的阶段特异性表达基因,包括EPO㊁Globin和GATA1等[3,10]㊂研究发现红细胞生成受到低氧环境的影响,其中一个或多个异常可能导致不同类型的红细胞生成障碍[10]㊂本文采用联苯胺染色㊁邻联茴香胺染色及瑞氏吉姆萨染色来显示红细胞的生成及形态学变化,观察了低氧下斑马鱼胚胎的整个发育过程,并对常氧和低氧下的基因表达水平进行了比较,从而加深了低氧对脊椎动物影响的认识㊂目前涉及低氧对斑马鱼影响的详细研究很少,本研究为揭示低氧影响斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的具体过程提供了新数据㊂1㊀材料与方法1.1㊀材料1.1.1㊀实验动物本实验得到新乡医学院动物实验伦理委员会的审批(XYLL-2020163),于河南省免疫与靶向药物重点实验室中进行实验,实验动物实验使用许可证号ʌSYXK(豫)2018-0014ɔ㊂约100对状态良好的生育期的AB品系斑马鱼养殖于上海海圣斑马鱼实验养殖系统中,光照/黑暗14h/10h,水温为28ħ㊂受精卵在28.5ħ下孵育,并根据Kimmel等[2]方法进行分期㊂1.1.2㊀主要试剂与仪器3,3 ,5,5 -四甲基联苯胺(MACKLIN,中国);瑞氏吉姆萨染液(Baso,中国);AO染液(索莱宝,中国);邻联茴香胺(Sigma,美国);TRIzol试剂(ambion,美国);逆转录试剂盒(诺唯赞,中国)㊂斑马鱼养殖系统(上海海圣生物实验设备有限公司,中国);YCP系列三气培养箱(长沙华曦电子科技有限公司,中国);ZEISS Discovery.V8体式荧光显微镜(ZEISS,德国);BX51正置荧光显微镜(Olympus,日本);PikoReal TM实时荧光定量PCR检测仪(Thermo Fisher Scientific,美国);Tanon-3500凝胶成像系统(上海天能公司,中国)㊂1.2㊀方法1.2.1㊀斑马鱼的繁殖和胚胎处理斑马鱼是根据已有文献的标准条件饲养和繁殖[11],交配和胚胎培养方法由中国斑马鱼资源中心提供㊂12hpf(hours post fertilization)后收集高质量的胚胎进行实验㊂将胚胎分为低氧和常氧培养组,低氧组的胚胎暴露于5%O2浓度下㊂每12h收集1次斑马鱼胚胎,鉴定胚胎的发育阶段㊂在不同发育时期,从常氧和低氧组各随机选取10个胚胎,用ZEISS ZEN软件计算卵黄囊的比例;用Image J软件分析体表色素沉着的比例;在体视显微镜下观察并计算胚胎个体的心率㊂1.2.2㊀联苯胺染色和邻联茴香胺染色联苯胺染色按照本实验室的方法进行[12],邻联茴香胺染色参照文献方法进行[13]㊂使用体式显微镜对各发育阶段的胚胎进行观察并拍照,用Image J 软件分析整个斑马鱼中染色部分的占比㊂图像至少是从3个独立的实验中获得,每组至少有6个胚胎或幼鱼㊂1.2.3㊀瑞氏吉姆萨染色对胚胎进行断尾处理收集血细胞,制备血涂片㊂斑马鱼预处理及瑞氏吉姆萨染色方法参照文献进行,并稍作改进[14-15]㊂使用BX51正置荧光显微镜观察并鉴定红细胞类型,并依据统计学方法计算红细胞在所有血细胞中的比例㊂1.2.4㊀AO染色随机收集10个胚胎/幼鱼移至包含1mL ddH2O的EP管中,然后加入30μL10μg/mL的AO染液,避光染色1h[16-17]㊂立即使用体式荧光显微镜观察并拍摄胚胎中的荧光㊂1.2.5㊀RNA提取和Real time PCR每组随机取50个胚胎/幼鱼,溶于TRIzol试剂中提取总RNA㊂使用逆转录试剂盒将总RNA逆转录为cDNA㊂使用特异性基因引物(见表1)进行常规RT-PCR和Real time PCR㊂表1㊀实时荧光定量PCR引物名称及序列Table1㊀Primer names and sequences of Real time PCR引物名称Primer names引物序列(5 -3 )Primer sequences(5 -3 ) Z-Globin-F TTTCCGCAAAGGACAAAGCGZ-Globin-R AGGAGAGTTGGGGCTTAGGTZ-GATA1-F TTTACGGCCCTTCTCCACACZ-GATA1-R GGTGGCACCACAATTCACACZ-l-plastin-F GATGTGGATGGGAACGGTCAZ-l-plastin-R ATGAACCACCTTGGCGAACTZ-scl-F CGGGCTGACAACTAGCGTATZ-scl-R TACCTGATGAGGCGTGGGTAZ-c-myc-F TATGCTGCAAGTGACCGGAGZ-c-myc-R GCTGGATGGAGTCGTAGTCGZ-NFIL3-F TAGCCCGATGTCCTTCCAGAZ-NFIL3-R TGGTGAGTCTGGACATTGCCZ-GAPDH-F TCACATTAAGGGTGGTGCAAZ-GAPDH-R GTGATGGCATGAACAGTGCT 1.3㊀统计学分析使用GraphPad Prism7软件对实验数据进行分析㊂计量资料以平均值ʃ标准差( xʃs)表示,采用t检验比较两组样本的均值,多组间的样本采用单因素方差分析㊂P<0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结果2.1㊀低氧延迟斑马鱼胚胎发育依据前期实验结果,最终选定5%O2浓度作为低氧条件㊂将12hpf的斑马鱼胚胎(图1A)随机分为两组,分别在常氧和低氧下培养㊂24hpf,咽囊期原基-5期视网膜色素沉着和皮肤黑色素沉积较早,卵黄囊内出现红细胞,此时出现早期心脏搏动(图1B);36hpf,原基-25期,绒毛膜中的斑马鱼胚胎出现早期运动㊁尾部色素沉着和血液循环(图1C); 48hpf,长胸鳍期,卵黄囊开始变薄,侧边带出现黑素细胞,视网膜上的虹膜色素细胞丰富,头部出现黄色(图1D);60hpf,高胸鳍期,血液循环明显,视网膜虹膜色素细胞环加深(图1E);72hpf,孵化期的突口阶段,虹膜色素细胞覆盖眼睛,背部与头部相同颜色(图1F);84hpf,斑马鱼胚胎已经发育到幼鱼期(图1G)㊂低氧下,胚胎在24hpf时发育到卵裂期的20-体节阶段,在胚胎背侧区域共观察到20个体节,相当于在常氧下19hpf时的发育阶段(图1H)㊂同样,低氧下,36㊁48㊁60㊁72㊁84hpf的胚胎发育阶段分别为原基-6期㊁原基-25期㊁高胸鳍期㊁长胸鳍期和胸鳍期,分别与常氧下的25㊁36㊁42㊁48㊁60 hpf一致(图1I㊁1J㊁1K㊁1L㊁1M),即低氧在一定程度上延迟了斑马鱼胚胎的整体发育㊂2.2㊀低氧对于斑马鱼卵黄囊㊁色素沉着㊁胚胎孵化和心率的影响在相同发育阶段,低氧组斑马鱼的卵黄囊体积明显大于常氧组(图2A㊁2B);低氧组斑马鱼眼睛㊁头部㊁躯干和卵黄囊中的色素沉着明显低于常氧组(图2A㊁2C);在相同的长胸鳍阶段,常氧组胚胎完成了孵化,低氧组胚胎仍然包裹在绒毛膜中(图2A)㊂常氧组斑马鱼在24hpf时胚胎开始出现早期的心脏搏动,而此时低氧组未发现心脏搏动㊂从24 hpf开始,无论是否低氧培养,胚胎早期心率随时间变化趋势一致,约60hpf后心率趋于稳定,而在相同发育时间,低氧组斑马鱼胚胎心率明显低于常氧组(图2D)㊂另外,相同发育阶段,低氧下的胚胎心率明显低于常氧(图2E)㊂2.3㊀低氧减少斑马鱼早期胚胎发育红细胞的生成邻联茴香胺染色结果显示,经低氧处理的斑马鱼胚胎的邻联茴香胺的着色面积显著降低,染色部位主要位于卵黄囊,而常氧组斑马鱼胚胎的染色部位则逐渐从卵黄囊转移到心脏和头部(图3A-a,c, e,g)㊂联苯胺染色结果与邻联茴香胺染色基本一致,常氧下胚胎的主要染色部位逐渐从卵黄囊和大血管转移到心脏㊁大血管和节间血管,低氧下的染色部位逐渐从卵黄囊转移到心脏和血管,节间血管染色不明显(图3B)㊂使用Image J软件对联苯胺染色结果进行分析,在同一发育阶段,低氧下胚胎的着色面积比例明显低于常氧(图3C)㊂AO染色结果显示,低氧下斑马鱼胚胎卵黄囊的前部和上部有大量的凋亡细胞(绿色荧光颗粒);但其会随着斑马图1㊀斑马鱼胚胎发育代表性图片(ˑ150)Figure 1㊀Representative images of zebrafish embryonic development(ˑ150)注:A:斑马鱼胚胎的代表性图片(ˑ150);B㊁C:斑马鱼卵黄囊体积占比和色素沉着占比;D:不同发育时间斑马鱼胚胎的心率变化;E:相同发育阶段下斑马鱼胚胎的心率的差异㊂与常氧相比,∗P <0.05,∗∗P <0.01,∗∗∗P <0.001㊂(下图同)图2㊀低氧对于斑马鱼胚胎卵黄囊㊁色素沉着和心率的影响Note.A.Representative images of zebrafish embryos(ˑ150).B,C.The proportion of yolk sac volume and the proportion of pigmentation.D.The heart rate of zebrafish embryos under normoxic and hypoxic conditions at different developmental time.E.The heart rate of zebrafishembryos under normoxic and hypoxic conditions at the same developmental pared with normal oxygen,∗P <0.05,∗∗P <0.01,∗∗∗P <0.001.(The same in the following figures)Figure 2㊀Effects of hypoxia on yolk sac,pigmentation and heart rate of zebrafish embryos鱼胚胎的发育逐渐减少(图3A-b,d,f,h)㊂2.4㊀低氧抑制红细胞成熟瑞氏吉姆萨染色结果显示,同一发育时期,低氧下斑马鱼的总红细胞(包括幼稚红细胞和成熟红细胞)比例低于常氧(图4A㊁4B)㊂图4A 中,蓝色箭头处为未成熟红细胞,胞体呈圆形,胞质丰富,细胞核呈圆形或类圆形,蓝色,多居中;红色箭头处为成熟的红细胞,胞体比未成熟红细胞小,呈椭圆形,胞质丰富,细胞核呈椭圆形,深紫色㊂低氧下84hpf 的斑马鱼血液中只有未成熟的红细胞存在㊂但是同一发育阶段下常氧和低氧相比较,红细胞总数的比例没有统计学意义(图4C)㊂以往的研究表明,斑马鱼血液中的红细胞呈连续性年龄分布,成熟的红细胞血红蛋白含量较高[18]㊂这些结果表明低氧在一定程度上抑制了红细胞的成熟㊂2.5㊀低氧对于斑马鱼胚胎发育过程中造血相关基因表达的影响通过绘制斑马鱼胚胎发育早期的造血细胞分化发育图谱,我们选定了部分重要的造血相关基因进行表达检测㊂首先使用RT-PCR 的方法观察了在正常培养过程中斑马鱼胚胎发育6㊁12㊁24㊁48㊁72hpf 时一些重要造血相关基因的表达情况(图5A),在24hpf 之后,红系特异性造血因子GATA1和Globin 随着发育时间的增加其表达强度逐渐增加;注:A:斑马鱼胚胎的邻联茴香胺染色图片和AO 染色图片(ˑ150);B:斑马鱼胚胎的代表性联苯胺染色图片(ˑ100);C:联苯胺染色量化图㊂图3㊀低氧对斑马鱼胚胎血红蛋白的生成和细胞凋亡的影响Note.A.O-dianisidine staining pictures and Acridine orange staining pictures of zebrafish embryos(ˑ150).B.Representative benzidine staining of zebrafish embryos(ˑ100).C.Quantitative line chart of Benzidine staining.Figure 3㊀Effects of hypoxia on hemoglobin production and cell apoptosis of zebrafishembryos注:A:斑马鱼胚胎血细胞的瑞氏吉姆萨染色(ˑ1000);B:不同发育时期斑马鱼胚胎中红细胞的比例;C:在相同的发育阶段,斑马鱼胚胎中红细胞的比例㊂图4㊀低氧抑制红细胞成熟Note.A.May-Grunwald Giemsa staining of zebrafish embryonic blood cells(ˑ1000).B.The proportion of red blood cells in blood of zebrafish embryos at different developmental time.C.At the same developmental stage,the proportion of red blood cells in blood of zebrafish embryos.Figure 4㊀Hypoxia inhibits red blood cell maturity同时其他的与造血相关的基因c-myc㊁scl㊁GATA2和NFIL3等在斑马鱼胚胎发育早期,也随着发育时间呈逐渐升高的趋势,而l-plastin 在早期的表达更加明显㊂另外,Real time PCR 结果显示了常氧和低氧下一些红系相关基因的表达差异㊂Globin 在相同的发育时期低氧下的表达强度要明显低于常氧下的表达强度,与之相反Epo 基因在低氧下则显示较高,同时其他相关造血基因在某些发育阶段也显示出低氧下表达强度低于常氧下(图5B)㊂这些基因表达的变化情况证实并解释了先前观察到的低氧抑制斑马鱼胚胎早期红系分化的结果㊂注:A:RT-PCR 分析常氧条件下斑马鱼胚胎发育过程中的mRNA 表达水平;B:Real time PCR 分析比较常氧和低氧条件下造血相关mRNA 的表达差异㊂图5㊀低氧对于斑马鱼胚胎发育中基因表达的影响Note.A.Some mRNA level was analyzed by RT-PCR during embryonic development of zebrafish.B.Real time PCR was employed to analyze the differential expression of hematopoietic related mRNA.Figure 5㊀Effects of hypoxia on gene expression in embryonic development of zebrafish3㊀讨论为了探讨低氧对斑马鱼胚胎发育和造血作用的影响,我们使用了不同的低氧浓度和低氧处理时间㊂前期的实验结果表明当受精后的胚胎直接暴露于1%O 2浓度下超过24h,死亡率几乎是100%㊂我们最终选定了5%O 2浓度作为最适低氧浓度,而12hpf 作为最佳低氧处置时间㊂斑马鱼胚胎是一个 封闭系统 ,且发育早期不能合成血红蛋白来供应自身氧气的需求,只能通过外界氧气的被动扩散才能满足斑马鱼胚胎的正常生长发育,所以绒毛膜上的孔洞是氧气和营养物质从外部水环境运输到胚胎和清除废物所必需的[19],通过独特的绒毛膜结构,未孵化的胚胎感受到低氧并影响其发育,本研究发现低氧延缓了斑马鱼的孵化时间㊂卵黄囊的主要作用是为斑马鱼早期发育提供所需的营养物质,使发育不受外界干扰[20]㊂但有研究发现抵抗动物缺氧的最重要的防御机制之一是能量消耗的下调[21],本实验结果显示:低氧下斑马鱼胚胎卵黄囊的体积占比大于常氧,即实验证实低氧抑制卵黄囊的消耗㊂同时低氧减少了胚胎的体外色素沉着,这可能是由于低氧降低细胞色素P450的表达[22],或者因为低氧影响了酪氨酸酶的活性从而延迟了胚胎色素细胞的发育[23]㊂总之,低氧从整体上抑制了斑马鱼胚胎的发育过程,而持续的低氧不利于胚胎发育和生物学进化,在某些情况下甚至可能导致严重的疾病或死亡㊂鱼类心脏对多种环境因素敏感,其中之一就是低氧㊂在低氧状态下,由于外部氧气浓度较低,通过绒毛膜被动扩散进入斑马鱼胚胎的氧气含量无法满足斑马鱼胚胎心脏形成和发挥功能的需求,从而导致其出现持续性心动过缓,通过降低心率和能量消耗从而提高成活率[24]㊂与文献报道相一致,本研究发现低氧会导致斑马鱼心率发生复杂的变化,其确切的变化取决于发育阶段,并且在较小的程度上取决于饲养温度[25]㊂同时,以往文献显示,低氧导致斑马鱼胚胎出现一定程度的心包水肿,伴有卵黄囊水肿,胚胎血管系统发育不良,血液流速变缓[26-28]㊂我们的研究结果再一次证实了这一结果,心包水肿影响血液循环㊁心率,并很可能对血细胞生成有一定影响㊂低氧不仅影响斑马鱼胚胎的形态和心脏功能,造血分化和红细胞生成也受到了影响㊂斑马鱼是研究胚胎红细胞生成的理想系统[29]㊂红细胞的产生在许多水平上受到调节,包括基因表达的控制,环境条件的改变㊂本研究结果显示胚胎发育早期低氧对红细胞产生和成熟具有抑制作用㊂这可能是由于在胚胎发育的早期,低氧下卵黄囊前部和上部的血供不足引起的细胞凋亡,但在发育后期斑马鱼胚胎出现低氧耐受,凋亡模式发生改变,细胞凋亡数量减少㊂为了揭示低氧对红细胞生成过程中基因表达可能存在的调控机制,我们检测了一些重要的造血相关基因㊂有研究表明斑马鱼胚胎发育后期,12hpf胚胎血红蛋白的表达水平开始增加,并在孵化前后达到高峰,且胚胎血红蛋白基因水平一直保持在高水平,直到成年[30]㊂本实验的初步结果表明,常氧下12hpf,红系特异性造血因子Globin开始表达,随着发育时间的增加其表达强度逐渐增加,这与已有的研究报道结果是一致的;但是低氧下Globin的表达水平降低,及HiF1α的表达水平升高,提示在斑马鱼胚胎发育早期,低氧确实影响基因表达,但其分子机制尚不清楚㊂据报道,低氧可以通过调节斑马鱼胚胎的HIF通路,影响斑马鱼胚胎造血干细胞的产生和造血末期红细胞的终末分化[31-33]㊂综上所述,低氧延缓了斑马鱼胚胎的发育,抑制了红细胞的产生和成熟㊂我们的结果加深了人们对低氧诱导脊椎动物产生影响的认识,同时也提供了低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的最新认识㊂由于斑马鱼相对于小鼠模型具有许多优势,斑马鱼疾病模型的进一步发展将加速我们对疾病各种病理㊁生理过程的了解㊂随着斑马鱼疾病模型的可用性和日益增加的多样性,该动物系统将为疾病诊断,有效治疗和预后提供强大的基础㊂在高海拔地区,低氧与中风或癌症等疾病相关[34]㊂所以此项研究在一定程度上为探索临床上低氧性疾病提供了新的认识和见解,但低氧究竟如何影响斑马鱼的胚胎发育和造血分化,还有待进一步研究㊂参㊀考㊀文㊀献(References)[1]㊀王小琦,孙岩,张洋,等.斑马鱼模型在常见骨疾病研究中的应用[J].中国比较医学杂志,2017,27(6):86-91.Wang 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关于医学实验动物学的书籍
关于医学实验动物学的书籍有很多，以下是部分推荐：
《医学实验动物学》（作者：刘民、朱孝荣等）：这本书从实验动物科学
绪论、实验动物质量控制、医学常用实验动物、人类疾病动物模型、实验动物的选择与应用、动物实验基本操作方法与技术、实验动物科学相关热点技术和实验动物常用生物学数据等方面进行了介绍，旨在提高动物实验研究人员选择和应用实验动物的水平。
《实用医学实验动物学》（作者：郑振辉等）：这本书从实践和应用的角
度对医学实验动物学进行了全面的阐述，包括实验动物和动物实验的基本知识、实验动物学的研究方法和基本技术、不同类型实验动物的特性和应用、比较医学等内容。
《中华医学百科全书-医学实验动物学》（作者：汪海）：这本书作为中华
医学百科全书的分支，系统介绍了医学实验动物学的各个方面，包括实验动物的分类、遗传学和繁殖、微生物和寄生虫、营养和饲料、疾病控制和保健、实验动物设施和设备等内容。
《医学实验动物操作基本技术》（作者不详）：这本书主要介绍了医学实
验动物操作的基本技术，包括实验动物的抓取和固定、注射和给药、血液和组织采集、手术操作等内容，适合作为医学实验动物学教材或参考书。
此外，还有《The Use of Animals in Medical Research》、《Animal Liberation》、《The Case for Animal Rights》等书籍也是关于动物实验的经典之作，但它们更多地从伦理和哲学角度探讨了动物权利和动物实验的问题。
以上书籍仅作参考，具体选择哪一本还需根据您的实际需求和兴趣来决定。
583中国实验动物学杂志目次索引2002年第12卷1～6期第1期实验动物血液检验中溶血因素的干扰和影响程树军 黄韧 梁金强等 1…………………………………………………………………………………SPF级动物实验中心建设中存在的问题和解决方案探讨张洁宏 4………………………小鼠颈动脉狭窄模型与T细胞免疫缺陷的初步研究穆军升 朱洪生 郑家豪等 5……………………………………………乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学观察康爱君 董宇红 田枫等 8…………………………………………武汉所昆明小鼠生产性能试验研究胡秀兰 胡柏林 韩世亮等 11………………………………S180肉瘤,艾氏腹水瘤肿瘤移植模型建立的研究叶明霞 周顺长 孔利佳 14……………………………大鼠阴栓的实验观察和孕鼠模型鉴定方法的比较李彦清 邵龙江 李森等 17…………………………………………………磁水对小鼠睾丸生精功能的影响赵建文 徐翠 时明宇 21…………………………………实验恒河猴肝脏自发病变的组织学初步观察黄韧 程树军 谭文雅等 24……………………………………………犬肝静脉阻力制做腹水实验模型的改进白殿卿 詹峰 郑颖 28…………………………………………………国外动物实验替代法研究的现状与发展贺争鸣 方喜业 31……………………………………………应重视和加强对基因工程动物的法制化管理杨果杰 方喜业 35………………………………………清洁级动物设施及动物质量管理初探时彦胜 洪宝庆 郑振锋等 37…………………………………………试论云南省实验动物产业化的发展梁崇礼 沈培清 李海山等 40广西药品检验所SPF级实验动物中心设施的建立郭光 44………………………………………………………………………………………………丹麦G ottingen小型猪科学考察报告王爱德 甘世祥 冯书堂等 47…………………………………G LP规范对实验动物饲料垫料及饮水质量监测的要求岳秉飞 邢瑞昌 49………………………………………细菌内毒素检查法及其在药品检验中的应用进展黄清泉 李冠民 51…………………………市场经济条件下我国实验动物法制化建设存在的问题与对策傅江南 傅曼丽 54………………………………外科手术制备先天性心脏病动物模型的研究进展刘瀚 罗春华 郭玉 57………………………………………………………………………………中医温病动物模型的研制杨进 61第2期波尔山羊批量胚胎移植陈建泉 王述宇 潘勇等 67………………………………………………………………………………………………Wistar大鼠L2蛋氨酸灌胃后血脂变化观察王禄增 张梅英 季勇等 71……………………………B病毒抗原片在猕猴B病毒抗体检测中的应用田克恭 遇秀玲 蔺会云等 74…………………………………………分光光度法测定兔输卵管液蛋白含量汤宏斌 邹国林 钟作权 76……………………………………………灰旱獭实验感染H BV的血清学反应赵素元 黄星 邹林木越等 79……………………………………红鲫主要器官组织的显微和超微结构研究王宗保 吴端生 宋颖等 82……………………………不同小鼠之间异基因骨髓移植免疫耐受的实验研究胡岩松 袁彦平 孙恺 87683新西兰兔髂动脉血管球囊导管损伤后内膜肥厚模型的建立陈纪猛 陈天宝 谢金东等 89………………野生小鼠抗肺肿瘤特性筛选实验初探管彤 王凤山 于国德等 92…………………………………………………………………………………………ICR小鼠妊娠期能量需要研究安清聪 李琦华 曹 贤等 94……………戊二醛和季铵盐复合消毒剂对鸡常见病原微生物杀灭效果的研究张冰 秦秀慧 李军等 95……………………………………………………312例正常小鼠心电图分析崔小岱 许峥 马连华等 99猕猴早期妊娠的B型超声测值范春梅 王雁玲 李志雄等 102…………………………………………………………………………………消眩止晕片对实验动物脑缺血影响的研究黄家政 陈万群 郑振源 105………………………杂色曲霉素对小鼠肝脏细胞凋亡和增殖影响的研究黄向华 张祥宏 左连富等 109………………………………………………………………………早老素基因的研究进展张兵林 秦川 113广州市药检所实验动物屏障设施的运行和管理何永平 杨愉君 黄燕钜 117…………………………………………………………………SPF级实验动物设施环境参数的自动化控制张泽全 常晟 金树兴等 120我国实验动物行业结构分析于海英 125…………………………………………………………………………………………………………………………………………………福氏佐剂的替代物和抗体生产贺争鸣 128第3期封闭繁殖的成年东方田鼠消化能力的观察俞远京 苏志杰 丁志刚等 131…………………………………北京地区Wistar大鼠种群繁殖与生长比较研究李根平 李学勇 赵金鹏等 135……………………………合成H BcAg多肽干预灰旱獭感染H BV的实验研究赵素元 黄星 邹林樾 138………………………………………………………D2半乳糖衰老模型大鼠的羰基毒化机理初步探讨刘晓秋 李卫东 唐惠琼等 141………………………………蜂胶提取物对大鼠吸虱的药效筛选试验研究梁崇礼 李海山 赵稳兴等 144不同地区东方田鼠染色体数及带型比较潘漪清 谢建云 邵伟娟等 147…………………………………………………………………………………………………………………………热原家兔培育研究褚晓峰 151 BA LBΠc2HSF1K nockout小鼠的主要脏器重量、脏器系数及主要血液生化指标的测定汤百争 刘惺 马亚东 153…………………………………………………………………………………证、病结合的子宫内膜异位症动物模型的复制肖纯 黄桂林 刘小刚等 157……………………………………………中医实验动物学多媒体课件的制作张永斌 郭学军 邹移海 160实验性变态反应性脑脊髓炎的致敏抗原———髓鞘素的制备陈慧芳 吕佩源 林嘉友等 161………………小鼠肺支原体抗体E LIS A检测法的建立巩薇 罗建辉 王春玲等 163………………………………………………………………………………关于生物医学研究中实验动物替代的探讨崔淑芳 解珉 汤球等 166体外培养小鼠睾丸间质细胞的形态学特征田德宝 张学明 李莲军等 167…………………………………关于我国实验动物社会化的思考李继平 李冠民 王金恒 168…………………………………………………………………………………SPF环境设施净化空调工程节能技术的探讨巴彩凤 刘学政 秦书俭 171…………………………9002#对IRM22纯系小鼠移植瘤生长的抑制作用周则卫 刘培勋 李松年等 173加工、贮存因素对实验动物颗粒饲料质量的影响刘学旭 174…………………………………………………慢性肾衰动物模型方法学研究现状肖炜 马云 傅江南 176………………………………………………………………………………………………………………………………影响动物实验结果的因素许崇辉 180………………………………………………………………………………灰仓鼠实验动物化研究廖力夫 183………………………………………………………………骨肉瘤动物模型研究概述范伟 谭毅 安洪 186动物硒蛋白种类及其生化功能的研究进展谢忠忱 王海宏 190 (4)马脑垂体促生长激素细胞和血浆生长激素浓度的性别差异谭建华 安铁洙 万忠海等 195………………小鼠体细胞核移植的早期研究黄青山 贾敏 张继恩等 199…………………………………………………被毛突变无毛昆明小鼠的初步报告张伟亻告 张杨杨 樊志文等 203…………………………………………心理应激大鼠卵巢内分泌功能降低模型的实验研究王建红 王敏璋 伍庆华等 204………………………AF LP 技术用于巴马小型猪遗传多样性的研究吴丰春 魏泓 王爱德 207…………………………………ICR 生长小鼠的能量需要研究安清聪 曹 贤 李琦华等 210………………………………………………大鼠坐骨神经的解剖学研究曹学成 213…………………………………………………………………………小鼠胚胎成纤维细胞的分离、扩增和抑制刘民 李柏青 215…………………………………………………清丽爽减肥茶减肥作用的研究范文今 谢韬 刘素清等 220…………………………………………………近交系大鼠微卫星DNA 与生化标记分析的比较研究李瑞生 陈振文 栾蓉晖等 225……………………实验恒河猴猴群暴发细菌性痢疾的治疗及控制唐东红 孙晓梅 匡德宣等 229……………………………热原检查的研究进展及有关问题的探讨李冠民 黄清泉 232…………………………………………………我国开展动物实验替代方法工作的前景研究(一)李继平 贺争鸣 李冠民等 236…………………………吸烟导致慢性阻塞性肺疾病地鼠模型的建立李莉 阮英茆 张旭晨等 239…………………………………地区实验动物管理动态分析贾白玲 吴玉良 240………………………………………………………………参加“第49届日本实验动物学会年会”及赴日考察报告中国实验动物学会赴日代表团 243………………早老素与Notch 信号系统的研究进展张兵林 秦川 245………………………………………………………模式生物与比较基因组学研究进展景志忠 哈金梅 才学鹏 248……………………………………………帕金森病和L -DOPA 诱导的运动障碍动物模型师长宏 周少波 李六金 253……………………………反复低剂量链脲佐菌素与四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型的比较及其胸腺淋巴细胞增殖活性张汝学 贾正平 徐丽婷等 封三 (5)第一内含子对人胰岛素基因在BHK 细胞中表达的影响李华 王吉贵 刘维全等 257……………………溶脲脲原体人工感染对家兔精子的影响刘雪芹 耿霞 262……………………………………………………615小鼠胚胎移植初探董婉维 时伟红 李华 263……………………………………………………………鸡迟发性神经毒性病理学检测方法及评价孔庆喜 姚宝玉 张静 265………………………………………应激因素对家兔疾病发生和流行的影响金璐娟 265……………………………………………………………Wistar 大鼠皮瓣移植前后FG F 受体分布变化赵建文 刘芬兰 白富春 266…………………………………实验动物排泄废物处理技术的探讨张少石 龙德英 王旭鹏 268……………………………………………龙凤酒补肾壮阳作用的试验研究潭明 刘晓飞 王秀等 268…………………………………………………蛋黄卵磷脂对高血脂大鼠血脂水平的影响李春艳 成小松 崔美芝等 269…………………………………蛋黄卵磷脂改善记忆作用的实验研究李春艳 成小松 崔美芝等 272………………………………………SPF 级动物实验室无菌操作初探李锦伟 275 (7)83883阿力佳治疗兔螨病的对比实验包玉龙 275………………………………………………………………………103pd放射性支架持续照射犬胆管放射性损伤的动物实验研究孙坚 何贵金 张申众等 276………………………………………………………………………S D大鼠缺铁性贫血模型张俊英 崔美芝 李春艳 278雌雄不同配比Wistar大鼠受孕率的比较季勇 张梅英 279……………………………………………………………………………………………………氨气引起金黄地鼠肺炎的观察王仁辉 颜淑琴 姜媛丽等 281………………………………甲醛熏蒸灭菌产生的粉尘对空气洁净度的影响宗阿南 史晓萍 秦英等 283对环磷酰胺引起低白细胞大鼠的白细胞分类变化研究赵厚德 郝智慧 郑海发等 285……………………对大鼠动静脉采血方法的探讨王珲 王英 郑学民 287………………………………………………………………………………………………………………S D大鼠自发性粒细胞白血病14例报告孙平 于峰 287糖尿病大鼠早期肾病模型的实验研究郑学民 林毅 乔文军等 288…………………………………………大小鼠鼻腔检查法及其常见病变梁震 王智琴 宫丽鸿 291……………………………………………………………………………………………………NIH小鼠生长繁殖性能的观察张静旭 刘淑霞 马丹等 292两种饲料饲喂K M小鼠效果的观察李贵才 高洪喜 颜淑琴等 294………………………………………………………………家兔胫骨骨折模型及体内可降解材料固定治疗的研究杜家忠 李松滨 李宝龙等 296空调系统及环境对实验动物的影响郑海发 赵厚德 郝智慧 296…………………………………………………………………………………………………乳腺康口服液的药效学研究霍继明 孙国志 赵伟等 297…………………………………………烹调油烟冷凝物致小鼠遗传毒性的研究李丁 王淑华 高丹等 299………………………止痛剂、催眠剂、镇静剂和麻醉剂在实验动物中的应用张永江 陈洪岩 夏长友 299黑龙江省2000—2001年度普通级实验动物………………………………………… 微生物学检测结果总结与分析陈洪岩 刘怀然 关云涛等 300鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的体外表达和纯化杜恩歧 刘胜旺 孔宪刚等 302……………………应用RT-PCR技术检测禽白血病病毒及其在不同组织中 检出结果的比较张立成 关云涛 陈洪岩等 303………………………………………………………………黑龙江省2000—2001年度普通级实验动物沙门菌检测结果与分析李昌文 刘怀然 关云涛等 305…………………………应用PCR和琼脂扩散检测禽白血病病毒的比较关云涛 李昌文 张立成等 306………………………………对大鼠胰岛两种不同分离纯化方法的实验研究王海霞 郭守利 林彦等 309用于抗癌药开发的新脏器模型———人癌的同所重建转移模型刘宇峰 311……………………………………………………………………………………………………SPF鸡的营养与饲养夏长友 陈洪岩 南锡 311屏障系统内层流柜中繁育裸鼠的初探陈玉升 李艳玲 张梅英 312…………………………………………………………………………………屏障系统中容易忽视的几点安全问题李志满 邴国强 李英惠等 314………………………………实验研究中实验动物的选择及其相关干扰因素张永江 陈洪岩 夏长友 316大鼠自发性眼病变介绍高淑彬 杨海荣 张沈平 320……………………………………………………………………………………………………………………C AR2bacillus研究概况刘英霞 刘兆铭 宋维汉等 S1鱼类实验动物的研究与应用郝智慧 赵厚德 郑海发等 S3…………………………………………………………………………………………………………S D大鼠营养性肥胖症模型崔美芝 李春艳 张俊英 S4……………………………………………………………………实验动物的标准化与社会化浅析白富春 S5关于医学院校发展实验动物学科的思考(摘要)赵林山 柳英侠 郑继奎 S6………………………………浅谈中医研究生《实验动物学》教学方法(摘要)李宝龙 李松滨 杜家忠 S6………………………………………………………………人Bcl22乳腺定位表达转基因小鼠模型的建立赵君 任文陟 张守峰等 S7983………………………………………………………兔的单引物PCR指纹分析徐勇 张嘉保 任文陟等 S7…………………………………人C2myc乳腺定位表达转基因小鼠模型的建立赵君 张守峰 刘彬等 S7………………………………………微卫星标记及其在实验动物中的应用朱玉峰 任文陟 张嘉保等 S8………………………………………………………实验动物致病性真菌感染引起的人畜共患病鲁连城 S8第6期小鼠肝癌H………………………22细胞克隆株的选择及其细胞特性比较刘军须 吕占军 王秀芳等 323…………………………DNA指纹图技术对国内S D大鼠遗传距离的分析李瑞生 张文志 王承利等 327……………………………柯萨奇B3病毒感染小鼠不同时间的心电图观察崔小岱 许峥 马连华等 330………………………………版纳小型猪近交系心脏的异种移植解剖学观察孙建森 张伟 应大君等 333…………………………生命核酸口服液对化学性肝损伤辅助保护作用的研究刘阳 于勇 刘素清等 335…………………………………………………生长比格犬蛋白质需要量研究刘源 呙于明 安星兰等 336………………………………………实验性大鼠肝性脑病动物模型的研究熊益群 周大桥 李航森等 340…………………………………………………………………无毛小鼠繁育及其特性的初步观察王映兰 342……………………………………………灰旱獭感染H BV的临床和病理分析赵素元 黄星 邹林樾 343复方丹参对60C o2γ照射小鼠淋巴细胞和巨噬细胞影响的研究孙坚 王家辉 346………………………………………上海市卫生系统清洁级以上实验动物科技设施的检测结果分析潘振业 陈俏梅 石建华等 349小鼠泰泽菌抗体IFA检测方法的建立及其与E LIS A方法的初步比较罗建辉 王春玲 贺争鸣等 354……………………………………“低温微波2硝酸快速脱钙”技术研究及应用熊正文 孙印臣 张绪斌等 356………………………………异种动物移植中超急排斥反应动物模型的建立王海燕 李涛 郭守利等 359…………………幼猪小肠冷保存再灌注模型制作的麻醉和围手术期处理胡玉红 傅廷亮 张佃良等 361我国开展动物实验替代方法工作的前景研究(二)………………………………———我国动物实验替代方法研究的问题贺争鸣 李冠民 岳秉飞等 362…………………………………………………K L胶囊辅助降糖作用的实验研究于勇 刘阳 谢韬等 363我国实验动物细菌学质量检测中亟待解决的若干问题李红 364………………………………………………中医药动物模型研究述要李兴琴 徐增年 368…………………………………………………………………………………………两种微生物学等级S D、Wistar大鼠脏器系数的比较肖育华 詹纯列 艾秀娟等 370…………………………………………………分子标记及在犬中的应用进展郭多 秦书俭 苏玉虹等 371………………………………………………喉咽清水蜜丸毒理学实验研究张一飞 郭守利 吴琳华等 374………………………………………………………………小鼠H OXc8基因的研究进展张兵林 秦川 375……………………………………胚胎生物技术在实验动物中的应用与展望张嘉保 任文陟 宋德光 379…………………………………恒河猴和食蟹猴红细胞免疫粘附功能的比较程树军 黄韧 柯茂军等 383……………益母草和当归注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用比较郑鸿翱 陈穗 陈少如 384。
