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HPLC法测定三叶青中槲皮素和山奈酚含量研究刘洋;钱丽华【摘要】目的：建立HPLC法测定三叶青中槲皮素和山奈酚的方法。
方法：三叶青组培物样品经甲醇超声提取，HLB固相萃取小柱净化，在色谱条件：色谱柱Varian ODS C18（4.6mm×250mm×5μm）、柱温30℃、流动相0.2%磷酸水-甲醇、流速1.0mL/min、检测波长360nm下进行测定。
结果：槲皮素和山奈酚的方法检出限和线性范围分别为0.05mg/kg和0.05～50μg/mL，且线性范围内的相关系数均大于0.9999，加标回收率为71.9%～105.8%，相对标准偏差为1.5%～3.4%。
结论：HPLC法结合固相萃取技术可用于测定三叶青中槲皮素和山奈酚的含量，方法检出限低，结果准确可靠，重复性好。
%Objective:A high performance liquid chromatography method for determination of quercetin and kaempferol in Radix tetrastigmae was studied. Method:The samples of tissue cultures were extracted with methanol by ultrasonic and purified with HLB solid phase extraction. Then,the analysis was performed on a Varian ODS C18(4.6mm × 250mm × 5μm)chromatographic column with methanol and 0.2% phosphoric acid as mobile phase at a flow-rate of 1.0mL/min,the column temperature was 30℃ and the detectionwave⁃length was 360nm.Results:method detection limits for quercetin and kaempferol were both 0.05mg/kg,and good linearity for them over the range of 0.05~50μg/mL(r>0.999 9). The average recovery and RSD of the method for quercetin and kaempferol were 71.9%~105.8% and1.5%~3.4%,respectively. Conclusion:high performance liquid chromatography(HPLC)method combined with solid phase extractiontechnology can be used for the determination of quercetin and kaempferol in Radix tetrastigmae with low method detection limits,high accuracy and good repeatability.【期刊名称】《安徽农学通报》【年(卷),期】2015(000)017【总页数】4页(P26-28,35)【关键词】HPLC;固相萃取;三叶青;槲皮素;山奈酚【作者】刘洋;钱丽华【作者单位】杭州市农业科学研究院，浙江杭州310024;杭州市农业科学研究院，浙江杭州 310024【正文语种】中文【中图分类】R284三叶青（Tetrastigma hemsleyanumDiels et Gilg）是葡萄科崖爬藤属多年生蔓生藤本植物，为中国特有珍稀中药植物，是一种民间常用的中草药，其性凉味苦，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功效［1-2］。
三叶青，学名三叶崖爬藤，为葡萄科崖爬藤属植物，主要分布于长江以南如浙江、江西、福建等省。
三叶青常以块根或全草入药，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功效。
在药理及临床方面具有抗肿瘤、抗病毒、退高热等显著疗效。
1三叶青化学成分研究三叶青的主要化学成分是淀粉、还原糖、黄酮类、甾体类化合物和氨基酸等。
以三叶青块根为原料，霍昕等[1]从三叶青乙醚提取物中，共分离出21个化合物，检测出18个组分，它们分别是亚油酸、棕榈酸、油酸、二苯胺、亚麻酸甲酯、硬脂酸、樟脑、2，3-丁二醇、己酸、苯甲酸、苯乙醇、苯酚、6，10，14-三甲基-2-十五烷酮、异丙苯、豆蔻酸、十五酸、补骨脂素、十七酸，其中前6种提取物含量较高。
李瑛琦等[2]将三叶青块根碾碎，70%乙醇热回流提取后得浸膏。
浸膏溶于适量水中，依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取，分离得到7种化合物；毛一亮等[3]从石油醚萃取物中分离得到4种化合物，分别鉴定为蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、β2谷甾醇和麦角甾醇；刘东等[4]对三叶青地上部分的化学成分进行研究，采用溶剂提取和硅胶柱层析法进行分离，根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定其结构，共分离出16种化合物，分别是蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、β-谷甾醇、麦角甾醇、α-脂醇、三十二酸、水杨酸、丁二酸、胡萝卜嵌、芹菜素6-α-L-鼠李糖（1-4）-α-L-阿拉伯糖苷、芹菜素-8-α-L-鼠李糖（1-4）-α-L-阿拉伯糖苷、山柰酚-7-氧-鼠李糖基-3-氧-葡萄糖苷、甘露醇、没食子酸乙酯、芹菜素-6，8-二葡萄糖苷、环四谷氨肤。
张立明等[5]实验已得出用乙醇溶剂提取三叶青中总黄酮的最佳工艺条件；黄真等[6]用正交实验法对三叶青中总黄酮的提取工艺进行优化设计；郑军献等[7]采用紫外可见分光光度法以芦丁为对照品，在波长500nm处对不同产地三叶青中的总黄酮进行含量测定。
2三叶青药理研究目前有关三叶青药理作用的研究较多，三叶青的药理作用主要体现在以下几个方面。
濒危药用植物三叶青研究进展钱丽华;戴丹丽;姜慧燕;林蔚红【摘要】三叶青为中国特有的具有重要药用价值的植物.现代药理研究表明,三叶青具有较好的抗肿瘤活性,黄酮类化合物是三叶青的主要组成成分和功效成分.在相关文献的基础上,从植物学、化学成分、毒理药理学、临床应用、人工栽培、生物技术等方面对三叶青在各个领域的研究成果进行了总结,并探讨了今后的研究方向,在保护濒危种质资源三叶青的同时,为合理开发与利用三叶青的药用价值提供科学依据.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2015(027)007【总页数】8页(P1301-1308)【关键词】三叶青;黄酮类化合物;抗肿瘤;生物技术【作者】钱丽华;戴丹丽;姜慧燕;林蔚红【作者单位】杭州市农业科学研究院实验中心,浙江杭州310024;浙江省农业科学院科研与合作处,浙江杭州310021;杭州市农业科学研究院实验中心,浙江杭州310024;海宁市农业农村经济信息中心,浙江海宁314400【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9;R285.5三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，中文学名为三叶崖爬藤，又名蛇附子、石抱子、石猴子、石老鼠、金线吊葫芦，药名为三叶青，是葡萄科崖爬藤属多年生蔓生藤本植物，为中国特有珍稀中药植物。
《中国植物志》[1]记载三叶崖爬藤全株供药用，有活血散瘀、解毒、化痰的作用，临床上用于治疗病毒性脑膜炎、乙型脑炎、病毒性肺炎、黄疸性肝炎等，特别是块根对小儿高烧有特效。
20世纪90年代以来，中国学者从三叶青中分离到了黄酮类化合物，经药理试验发现其具有抗肿瘤作用，引发了国内外学者的关注。
近年来，由于人为过度采挖，三叶青已处于濒危状态，被列入了浙江省首批农作物种质资源保护名录品种。
为更好地保护并开发利用好这一珍贵药材资源，从植物学、化学成分、毒理药理、临床应用、人工栽培和生物技术研究等方面对三叶青进行了全面系统的阐述，以期为三叶青的系统深入研究及今后的开发应用提供参考。
不同三叶青提取物体外抗肿瘤细胞作用研究邱模昌;徐子金;杨章坚【摘要】目的明确三叶青水、乙醇、乙酸乙酯三种提取物体外对乳腺癌细胞(MCF-7)的抑制作用,分析不同提取方式对肿瘤细胞抑制强弱差异.方法 MTT法检测三叶青三种提取物含药血清分别在2、10、50、100、200μg·mL-1时对MCF-7细胞存活率的影响;采用流式细胞仪检测三种提取物含药血清在200μg·mL-1浓度时对MCF-7细胞凋亡的影响.结果三种提取物均具有与浓度相关的MCF-7细胞体外抑制作用(P＜0.05),作用强弱依次是乙酸乙酯提取物＞乙醇提取物＞水提取物;三种提取物均能促进MCF-7细胞凋亡(水、乙醇组P＜0.05,乙酸乙酯组P＜0.01);乙酸乙酯提取物比水提物组、乙醇组具有更强的凋亡促进作用(P＜0.05).结论三种提取物均具有体外抗乳腺癌MCF-7细胞作用,其中乙酸乙酯提取物作用最强.【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》【年(卷),期】2018(016)017【总页数】3页(P93-95)【关键词】三叶青;乳腺癌细胞;提取物;细胞存活率【作者】邱模昌;徐子金;杨章坚【作者单位】江西医学高等专科学校药学系,江西上饶334000;江西医学高等专科学校药学系,江西上饶334000;江西医学高等专科学校药学系,江西上饶334000【正文语种】中文三叶青 (Tetrastigmatis hemsleyani)为葡萄科植物三叶崖爬藤的块根或全草，别名为金线吊葫芦、丝线吊金钟、三叶扁藤等[1]，为江西省道地药材。
近年来，对于三叶青抗肿瘤活性研究较多，三叶青黄酮能显著地抑制肺癌A549细胞、SGC-7901胃癌细胞、及SMMC-7721肝癌细胞的生长，并且具有浓度依赖性[2-4]。
三叶青乙酸乙酯提取物能有效抑制结肠癌HT-29细胞、白血病HL60细胞、颈癌Hela细胞[5-7]的增殖。
三叶青乙醇提取物在一定浓度范围内能抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖，且呈剂量依赖关系[8]。
三叶青抗肿瘤作用研究进展作者：黄明远邹强来源：《科学导报·学术》2019年第36期摘要：三叶青为葡萄科崖爬藤属植物，是我国传统的中药材，具有多种生物活性。
肺癌、肝癌、乳腺癌均为临床上常见的癌症，药理学研究表明三叶青醇提取物，萃取物均具有一定的肿瘤抑制作用。
现就三叶青的抗肿瘤活性进行综述，为以后更好的利用开发这一植物资源和临床抗肿瘤方面的应用提供理论依据。
关键词：三叶青;提取物;抗肿瘤提起癌症让人们不寒而栗，一般人们所说的癌症泛指所有的恶性肿瘤，癌症是起源于上皮组织的恶性肿瘤。
自上世纪来癌症已经成为人类的第二大类疾病，同时癌症也被世界卫生组织列为世界五大疑难杂症之一。
近年来我国的癌症发病率一直表现出上升的一种状态。
现在对恶性肿瘤的治疗主要包括手术治疗，但是对早期癌症治疗效果相对较好，对于晚期治疗效果就不太好;化学治疗主要是用化学药品对肿瘤细胞生长起到抑制或者直接杀死，同时化学药品也存在许多的缺点比如开发费用较为昂贵而且它的毒副作用也是比较大的，同时伴随不同程度的致突变毒性;目前中医中药治疗越来越吸引大量的医学研究者的目光，因为它的毒副作用较小的而且促进患者恢复，增强对放化疗的耐受力。
目前，报道的中草药具有抗肿瘤作用的不在少数，其中就包括三叶青，同时它也是我国的珍贵的民间传统天然药食两用植物，古典药籍就有记载它的应用广泛，具有十分重要的价值，值得我们深入研究[1] 。
三叶青属于葡萄科崖爬藤植物，中国特有的植物，主要分布在我国华南以及西南地区[2] 。
同时三叶青也是我国老百姓家中常备的一种中草药，因为根据古典药籍记录三叶青可以用于一些热毒病症及温毒并且具有比较好的药效。
据现代药理学研究发现三叶青在抗肿瘤、抗炎、抗病毒和保肝等方面具有显著的效果。
通过查阅国内外近年来有关于三叶青研究的相关的文献，对三叶青的活性成分及其生理活性作用的研究进行了总结。
1 三叶青抗肿瘤作用1.1抑制肺癌李礼斌等[3] 发现两产地不同处理三清叶的乙醇提取物对肺癌细胞A549存在抑制效果，呈現剂量依赖性，常温浸提后的来源于浙江的三青叶切片抑制肿瘤生长效果最佳。
三叶青抗肿瘤一个人对你说，有棵草可以预防和治疗肿瘤，你可能不信，完全可以不信，可周边所有的人都相信这棵草可以预防和治疗肿瘤，也许你就不得不信了，一棵名不见经传的小草在街坊间盛传着一个个“抗癌故事”，被渴望生命的肿瘤患者称为“抗癌神草”，但在《中华大药典》中却找不到它。
淋巴癌患者谢女士说：“我吃三叶青一年多了，医生告诉我淋巴癌化疗治疗后，小下去的淋巴会重新长大，想想化疗的痛苦心里有些害怕，所以，服用三叶青后各项指标能控制我就没有接受化疗。
”肺癌患者刘先生说：“我吃三叶青有段时间了，当初的胸积水已消失，各项指标都康复得很好。
”更有赫赫有名的风投资金和上市公司追着为三叶青投资。
也有人质疑，这是不是又是一次炒作，现在社会上各种信息真假难辨……经调查，浙江省中医药管理局、浙江省经贸委等部门都曾将科研基金资助三叶青抗肿瘤项目的研究和三叶青育苗研究，原因是在浙江民间用三叶青治疗肿瘤较为久远，三叶青是地方性药材，极为珍稀，分布在江西、浙江、福建、安徽、广东、广西、云南等地，三叶青具有散热、理气、活血、补脾、解毒、祛风、消炎的作用，民间用来治疗小儿高热、慢性咽喉炎、扁桃体炎、肝炎、肺炎、胃炎、淋巴结核及蛇咬伤等有奇效。
就药性而言，浙江三叶青为上品。
国家级名中医、博士生导师、全国五一劳动奖章获得者、全国卫生系统先进工作者魏克民教授，用三叶青的乙酸乙酯提取物对肝癌、肺癌、血癌及增强免疫的作用做了实验研究，结果证实，中药三叶青的乙酸乙酯提取物能直接促进癌细胞凋亡，对癌细胞生长具有阻滞作用，对癌细胞增殖和端粒酶基因的表达具有显著的抑制作用，实验还表明，三叶青具有增强细胞免疫和体液免疫。
这项三叶青抗肿瘤作用机制的分子生物普研究达到了国际先进水平。
更有多名医学专家用三叶青提取物对治疗胃癌、肠癌的作用作了研究。
《中国科学院上海药物研究所实验报告》得出结论，三叶青粗提物对肿瘤接种后的小鼠口服给药实验显示，对小鼠H22肝癌的生长有一定抑制作用，抑制率为39.2%，三叶青在抗肿瘤临床应用中，对多癌种（肺癌、乳腺癌、胃癌、恶性淋巴癌、肝癌、肾癌、鼻咽癌、子宫癌、慢性粒细胞白血病、多发性骨髓瘤等）临床观察，按照世界卫生组织（WHO）对恶性肿瘤疗效判定标准统计总有效率达78.33%，已经相当高了。
一、三叶青介绍1、三叶青为我国特有药用植物，2、黄酮类化合物是三叶青的重要药用成分，它能抑制癌细胞生长，诱导癌细胞凋亡，具良好的抗肿瘤作用，且无毒副作用。
3、三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤（的干燥块根/地下块茎/块根或全草）4、具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，消肿等功效。
具有清热解毒、活血祛风、抗肿瘤、抗病毒、抗炎镇痛与解热、保肝作用等。
抗炎、抗病毒、抗肿瘤等功效，消肿散结5、用于治疗（小儿）高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬、痈疔疮疖等症。
小儿感冒发热、喉痒肿痛、咳嗽、肠炎、痢疾等疾病。
支气管炎及支气管哮喘等症，对一些病毒性疾病，慢性和迁延性疾病有很好的功效。
及恶性肿瘤。
腹痛痢疾、咽喉炎、病毒性脑膜炎，外敷可治疗毒蛇咬伤、扁桃体炎、蜂窝织炎、跌打损伤。
各种热症（不明原因的高热）、各种水肿（各种炎性水肿、蛇伤）等症有独特的疗效，是西药无法替代的“植物抗生素”。
各种火毒炽盛之内、外科疾病（高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬等症）。
6、福建、浙江地区传统习用青草药，习称为“一粒珠”。
7、其性凉、味辛、苦，无毒，性寒味苦味微苦，性平20108、三叶青块根又名为蛇附子、石猴子、石抱子、拦山虎、雷胆子、破石珠、阴灵子、三叶扁藤、金丝吊葫芦。
土经丸、搜夹风、三叶对、小扁藤、阴灵子、三叶扁藤、丝线吊金钟、金线吊葫芦、金线吊马铃薯。
9、三叶青又名有角乌蔹莓、石老鼠，又名金线吊葫芦、丝线吊金钟、石猴子等。
别名红花青藤、三姐妹藤、毛青藤等。
又名蛇附子（《植物名实图考》）、石抱子（《江西草药》）、破石珠、土经丸、搜夹风、三叶对（《浙江民间常用草药》）、小扁藤、三叶扁藤、金丝吊葫芦、金线吊马铃薯、拦山虎（《广西实用中草药新选》）、雷胆子（《湖南中草药新医疗法资料选编》）等。
10、分布于我国浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、广东、广西、四川、贵州及云南等省区，主要分布于长江以南各地。
三叶青化学成分及抗肿瘤活性研究的开题报告一、研究背景与意义三叶青，又称雷公根、雷公藤，是为常用的中草药之一。
根茎中含有丰富的化学成分，已被证明具有多种药理活性，包括抗炎、抗氧化、抗病毒、降血压和抗肿瘤等。
此外，三叶青还具有很好的安全性和较强的耐受性，在临床上广泛应用。
在三叶青的化学成分中，主要成分为总黄酮、单宁、三萜类化合物以及多种生物碱等。
其中，一些生物碱被认为具有抗肿瘤效应，如雷公藤碱、雷公藤毒素、雷公藤原碱等。
因此，本研究旨在通过分离纯化三叶青中的化学成分，并对其中抗肿瘤活性的生物碱进行深入研究，为开发三叶青作为抗肿瘤药物的基础研究提供依据。
二、研究内容和方法本研究将从三叶青中分离纯化其主要化学成分，并对其进行化学结构和生物活性的鉴定和分析。
根据分子量和质量谱等分析方法，鉴定出其中的主要生物碱成分。
接下来，通过体外和体内实验，评估其抗肿瘤活性，并探索其作用机制。
具体方法包括：采用硅胶柱、反相高效液相色谱等技术，对三叶青进行分离纯化；利用分子生物学方法，检测其对癌细胞生长的影响；建立体外抗肿瘤细胞系，通过MTT法、细胞周期分析和细胞凋亡检测等方法评估其抗肿瘤活性和作用机制；最后，建立小鼠荷瘤模型，研究其在体内的抗肿瘤活性。
三、预期成果与意义本研究的预期成果包括：1. 鉴定出三叶青中的主要生物碱成分，并揭示其化学结构和生物活性2. 评价其对肿瘤细胞增殖、凋亡和周期的影响，并探究其作用机制3. 在小鼠荷瘤模型中，评估其抗肿瘤活性和安全性4. 提供三叶青作为抗肿瘤药物的基础研究和开发的理论和实践依据本研究对于深入了解三叶青的化学成分和抗肿瘤活性，有助于探索其开发作为新型抗肿瘤药物的潜力，并为药用植物资源的合理利用和开发提供参考。
