果蝇培养基配制ppt课件

果蝇培养基配制方法及果蝇的转接饲养一、果蝇培养基配制方法配方：760ml水+6.2g琼脂+82.5g玉米粉+62g白糖+7g克酵母+5g丙酸（一）、准备工作：1、清洗试管:规格20*30。

2、烘干试管：电热鼓风干燥箱烘干（60-70度）或自然风干。

塞上棉塞。

另外做一试管滤纸。

3、包扎试管：2层报纸包扎。

包扎镊子；包扎一块大小适中的4层纱布4、高压灭菌：将上述包扎好的试管、镊子、纱布高压灭菌（高压锅切勿忘记加水，121度0.1Mpa，维持20-30分钟）5、高压后取出烘干（60-70度）。

（二）、准备工作1、用酒精棉球将操净工作台台面、侧壁消毒。

2、将上述灭菌好的试管、纱布，一个250或300毫升的三角烧瓶，酒精灯、火柴，小红桶放入操净工作台内，紫外灭菌20分钟，同时开启风机。

（注意；紫外灭菌后，要风机开启10分钟后方可用）也可在超净工作台外倒培养基（三）、培养基配制步骤：1、量筒量取760毫升自来水（或者蒸馏水），置入搪瓷缸内，电炉加热（注意：电炉下垫电板，以免烧坏新实验台面）2、称取琼脂条6.2克，剪成小段，放入上述水中加热溶解。

3、材料：玉米粉82.5克、白糖62克、酵母粉7克、5毫升丙酸。

4、加入顺序：等琼脂完全溶解后，将玉米粉少量慢慢加入，一边搅拌一边加入，待完全成糊状，煮出香味、煮熟为止。

再加入白糖，搅拌均匀溶解。

离开电炉，放凉至60度左右，加入酵母粉搅匀，最后再放入丙酸搅匀。

5、倒培养基：酒精棉球消毒手，点燃酒精灯，将试管插入三角瓶，将培养基直接倒入试管内，作成斜面6、培养基倒好后，直接用灭菌纱布封住试管口。

拉下操净工作台的门，风机开着（目的是让试管内的水蒸气蒸发得更快）。

7、 3-4天后，水汽蒸发完全后，即可塞上棉塞，拿出操净工作台。

二、果蝇的转接饲养1、在果蝇培养基试管内加入一片灭菌滤纸（助于吸收水分和果蝇产卵），2、转接果蝇：新管在上，果蝇管在下，试管口对口，这样果蝇就会自动向上爬行，待有5对左右时即可。

第一部分果蝇培养基的配制培养基的配制：培养果蝇前需要配制培养基，培养基成分如下表（表1）所示：果蝇培养基2000ml表1 果蝇培养基配方表成分含量成分含量果蝇培养基①玉米粉180g ②大豆粉20g③琼脂15g ④啤酒酵母37g⑤糖稀80g ⑥麦芽糊精80g⑦对羟基苯甲酸甲酯溶液（防腐剂）16ml（2.5g对羟基甲酸甲酯固体粉末溶于16ml95%的乙醇中）操作：1）先1.5L水烧开，然后①玉米粉溶于额外500ml水中，慢加并混匀，再慢慢加入已煮沸的1.5L水中，混匀，煮沸后，调节温度至50度，保温3-4小时（约50度左右）2）大约保温3小时左右，回到实验室，进行接下来的预备工作。

将②、③、④、⑥混合搅匀，一块加入保温的玉米糊中，边加边搅拌至混合均匀。

3）紧接着，加入⑤，慢加快搅，此步很重要，务必防止糖稀粘锅煮糊。

4）然后，将温度调大一块煮沸，再将温度降下来，冷却至60度左右（可用冷水浴约3min 的方法较快速降温），待温度冷却下来，即加入⑦防腐剂，用玻璃棒搅拌均匀后分装到培养瓶内，注意在分装时不要把培养基倒在瓶壁上。

用瓶塞塞好，使多余的水分蒸发出去，待培养基冷却后塞好瓶塞，放入冰箱。

分装至每瓶高1cm左右。

注：2L 培养基可倒瓶约100-120个左右。

若配置1L 培养基，以上成分均减半。

注意在分装时不要把培养基倒在瓶壁上。

刚配制完的培养基放凉后在瓶壁上会有许多水滴，这时如果把果蝇放进去，水滴可能将果蝇的翅膀粘住，为避免发生此事，可将配好的培养基放在温箱内2～3d，待水分蒸发后再使用，或用酒精棉将瓶壁上的水分擦掉。

分装培养基时，注意不要将培养基倒在侧壁上，这样果蝇会将大量的卵产在壁上，产在壁上的卵是无法孵化的。

在配制培养基的过程中，既要尽量避免培养基被煮糊，又要注意在装瓶的过程中尽量不出现培养基贴壁现象，只有整个过程中的细致和耐心才能使这个大实验得以顺利进行，如果培养基一旦出现问题，会对所有同学的实验进度和结果产生很大影响。

1、果蝇培育基的制备
(1) 培养瓶的洗涤：
在超声清洗器中参加少许洗涤剂，将培养瓶放入其中超声清洗约30min，取出培养瓶用净水将洗涤剂冲刷清洁，然后倒放晾干或于培养箱中烘干。

(2) 培养瓶的灭菌：
果蝇的培养基要装在经过灭菌处置的培养瓶中。

灭菌可防止真菌污染，也可杀逝世培养瓶中可能残留的幼虫或蛹，防止混淆。

灭菌的方式是：将带塞的培养瓶在高压蒸气灭菌锅中，121˚C条件下灭菌15~20min。

(3) 培养基的配制：
表1.4 果蝇培养基配方
水1L
玉米粉105g
红糖75g
琼脂7.5g
丙酸 6.25ml
酵母粉20g
量取1L水，将大约一半倒入一清洁的锅中，加入琼脂加热溶解；水开后，加入蔗糖，搅拌均匀，将玉米粉参加剩余的水中，搅拌均匀，再沿着锅边慢慢倒入，边倒边搅拌（这样玉米粉不易结块）。

持续煮5~10min，锅中的培养基成为一种糊状物时即可离火。

参加丙酸（用以防腐）及酵母粉，搅拌均匀即可分装。

分装时，将造就基悬空倒进培养瓶中，尽量不要有培养基粘在瓶壁上，减少污染的可能性，每瓶培育基厚约2cm。

(4) 培养基的紫外灭菌：
等培养基凝固后，将培养基置于超净工作台中，在紫外灯下灭菌30min。

(5) 培养基的干燥：
刚配制的培养基含有较多的水份，为防止由于水份太多以致培养基太软会粘住果蝇致逝世，紫外灭菌
后的培养基需在室温下干燥1~2天。

配好的培养基如暂时不用，可放在4˚C下贮存。