《培养基的制备》PPT课件
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培养基的配制-PPT
摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
压力蒸汽灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
1、检查水位，放入物品。
2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气 阀，排净冷空气。
5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为
1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。
6、降压、取物
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
分装：
操作步骤 (continued)
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
20
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
培养基的制备ppt课件
第2组:100ml （先分装7支）
2.普通琼脂平板培养基
第3.4.5.6组:各100ml
每组倒7枚平板供6小组下次用
6
四、方法
1.肉膏汤培养基的配制: ⑴称样： 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g
加至100ml蒸馏水 中，加热溶化
(2) 待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6
(3) 分装于试管内（每管约2ml）置高压蒸汽 灭菌器内灭菌(121.3-20min)。
3
三、材料 牛肉膏、蛋白胨 氯化钠、蒸馏水 琼脂，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶 量筒，天平 酒精灯、等。
4
四、方法 培 养 基 配 制 步 骤
⑴调配成分 ⑵溶解 ⑶调节 pH ⑷ 分装 ⑸灭菌 ⑹质量检验 ⑺保存
5
各组所需要配制的培养基
1.肉膏汤培养基 3.普通斜面培养基
第1组:各100ml （ 先分装7支）
半固体斜面培养基的制备细菌培养基的制备一目的掌握培养基的制备方法二原理培养基是人工合成的一种混合营养料用以分离细菌
食品微生物学实验
实验四
1
实验项目
细菌培养基的制备
肉膏汤培养基的制备 普通琼脂平板培养基的制备 半固体斜面培养基的制备
2
一、目的
掌握培养基的制备方法 二、原理
培养基是人工合成的一种混合营养料， 用以分离细菌。基础培养基中含有大多数 常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可 制成液体、半固体、固体三种不同的性状 以供选用。
配制出以下培养基： 1.肉膏汤培养基 2.普通琼脂平板培养基 3.普通斜面培养基
16
六、实验报告要求 实验报告中描述本组所配制的培养基。
七、思考题
何谓培养基？ 培养基的制备过程有哪几个步骤？
2.普通琼脂平板培养基
第3.4.5.6组:各100ml
每组倒7枚平板供6小组下次用
6
四、方法
1.肉膏汤培养基的配制: ⑴称样： 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g
加至100ml蒸馏水 中，加热溶化
(2) 待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6
(3) 分装于试管内（每管约2ml）置高压蒸汽 灭菌器内灭菌(121.3-20min)。
3
三、材料 牛肉膏、蛋白胨 氯化钠、蒸馏水 琼脂，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶 量筒，天平 酒精灯、等。
4
四、方法 培 养 基 配 制 步 骤
⑴调配成分 ⑵溶解 ⑶调节 pH ⑷ 分装 ⑸灭菌 ⑹质量检验 ⑺保存
5
各组所需要配制的培养基
1.肉膏汤培养基 3.普通斜面培养基
第1组:各100ml （ 先分装7支）
半固体斜面培养基的制备细菌培养基的制备一目的掌握培养基的制备方法二原理培养基是人工合成的一种混合营养料用以分离细菌
食品微生物学实验
实验四
1
实验项目
细菌培养基的制备
肉膏汤培养基的制备 普通琼脂平板培养基的制备 半固体斜面培养基的制备
2
一、目的
掌握培养基的制备方法 二、原理
培养基是人工合成的一种混合营养料， 用以分离细菌。基础培养基中含有大多数 常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可 制成液体、半固体、固体三种不同的性状 以供选用。
配制出以下培养基： 1.肉膏汤培养基 2.普通琼脂平板培养基 3.普通斜面培养基
16
六、实验报告要求 实验报告中描述本组所配制的培养基。
七、思考题
何谓培养基？ 培养基的制备过程有哪几个步骤？
培养基及制备PPT课件
0.01
0.05
0.2
0.03
0.1
0.3
0.05
0.15
第36页/共67页
第37页/共67页
改进后培养基 原培养基
改进后培养基的发酵结果
第38页/共67页
表3-1 Plackett–Burman设计筛选影响Y-21生长的关 键培养基组分
第39页/共67页
表3-2 Plackett–Burman设计12次试验确定9种变量的影响
第34页/共67页
结果： 碳源：乙酸钠 0. 2% 氮源：氯化铵 0.2% 酵母膏0.03% 无机盐: 复合无机盐0.05%
第35页/共67页
▪ 正交设计确定优化的配方
正交分析表
水平
1 2 3
A（乙酸钠）/% 0.2 0.3 0.4
因素 B（NH4Cl）/% C（酵母膏）/% D（无机盐）/%
0.1
产物 前体
发酵生产中常用的前体
前体
产物
• 青霉素Ｇ 物
• 青霉素Ｖ • 金霉素 • 链霉素 • 红霉素
苯乙酸及衍生
苯氧乙酸 氯化物 肌醇、精氨酸 丙酸、丙醇
• VB12 • 葫萝卜素
• L-异亮氨酸
• L-色氨酸 酸
• L-丝氨酸
钴化物 -紫罗兰酮 - 氨基酸 邻氨基苯甲
甘氨酸
第15页/共67页
促进剂(promoter)：既不是营养物，又不是前体， 却能提高产量的添加剂。
第8页/共67页
3.无机盐
构成菌体的成分，作为酶的组成部分、酶的激活剂或 抑制剂、调节渗透压、pH值和氧化还原电位等
第9页/共67页
4.微量元素
例A：铁离子 青霉素发酵中，铁离子的浓度要小于20μg/ml 发酵罐必须进行表面处理
常用培养基的制备、灭菌与消毒幻灯片PPT
2、制备污水稀释液：10g土样，参加90ml 无菌水中，在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 参加 盛有4.5ml无菌水的试管中，以此类推，制成不同稀 释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记 稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即104、10-5和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上， 用玻棒涂布。
护剂的使用。
5、真空枯燥法 这类方法包括冷冻真空枯燥法和L－枯燥法。 冷冻真空枯燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然
后在低温状态下进展减压枯燥。 L-枯燥法那么不需要低温预冻样品，只是使样品维持在10
－20C˚范围内进展真空枯燥。
操作方法
1、斜面保藏法
将菌种转接在适宜固体斜面培养基上， 待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞局部包 扎好〔棉塞换成胶塞效果更好〕，置4C˚ 冰箱中包藏。
2、热空气灭菌利用高温枯燥空气〔160－170C〕 加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。 原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当 环境和细胞含水量越大，凝固越快。
3、本卷须知：
1〕培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；
2〕温度控制在<180°；
3〕物品不能太挤；
4〕温度降至70°时才开箱门。
微生物培养技术 1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 4、将已接种的斜面、半固体和液体培养
基放置培养箱中培养 5、将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
冰箱中保存。
实验三、菌种保藏
几种常用的保藏方法： 1、传代培养法
保藏的菌种通过斜面、穿刺或 疱肉培养基〔用于厌氧细菌〕培养好 后，置4C˚冰箱中存放，定期进展传代 培养、再存放。
1〕冷空气彻底排除；2〕加水；3〕压力降为“0〞时方 可翻开。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记 稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即104、10-5和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上， 用玻棒涂布。
护剂的使用。
5、真空枯燥法 这类方法包括冷冻真空枯燥法和L－枯燥法。 冷冻真空枯燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然
后在低温状态下进展减压枯燥。 L-枯燥法那么不需要低温预冻样品，只是使样品维持在10
－20C˚范围内进展真空枯燥。
操作方法
1、斜面保藏法
将菌种转接在适宜固体斜面培养基上， 待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞局部包 扎好〔棉塞换成胶塞效果更好〕，置4C˚ 冰箱中包藏。
2、热空气灭菌利用高温枯燥空气〔160－170C〕 加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。 原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当 环境和细胞含水量越大，凝固越快。
3、本卷须知：
1〕培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；
2〕温度控制在<180°；
3〕物品不能太挤；
4〕温度降至70°时才开箱门。
微生物培养技术 1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 4、将已接种的斜面、半固体和液体培养
基放置培养箱中培养 5、将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
冰箱中保存。
实验三、菌种保藏
几种常用的保藏方法： 1、传代培养法
保藏的菌种通过斜面、穿刺或 疱肉培养基〔用于厌氧细菌〕培养好 后，置4C˚冰箱中存放，定期进展传代 培养、再存放。
1〕冷空气彻底排除；2〕加水；3〕压力降为“0〞时方 可翻开。
培养基的制备-PPT课件
四、培养基成分配比的选择
培养基的组分、配比、缓冲能力、黏度、 消毒是否彻底、消毒后营养破坏的程度及 原料中杂质的含量都对菌体生长和产物形 成有影响。 理论+经验 数学分析方法
• 正交实验设计，方差分析
正交表因素水平
因素水 平
1 2 3
玉米粉 （％） A 0.5
1.0 1.5
豆饼粉 （％） B 4
③ 淀粉、糊精 使用条件：微生物必须能分泌水解淀粉、糊精的酶类 缺点：难利用、 发酵液比较稠、一般>2.0%时加入一定的α-淀粉酶 成分比较复杂，有直链淀粉和支链淀粉等等。 优点：来源广泛、价格底 难利用，可以解除葡萄糖效应
(半纤维素酶)
(1.5g麸皮)
李江华，无锡轻工大学学报，2019
二、氮源
斜面培养基
作用：这是供微生物细胞生长繁殖用的， 包括细菌，酵母等的斜面培养基以及霉菌、 放线菌生孢子培养基或麸曲培养基等。这 类培养基主要作用是供给细胞生长繁殖所 需的各类营养物质。
特点： 1.富含有机氮源，少含或不含糖分。有机氮有 利于菌体的生长繁殖，能获得更多的细胞。 2.对于放线菌或霉菌的产孢子培养基，则氮源 和碳源均不宜太丰富，否则容易长菌丝而较少 形成孢子。 3.斜面培养基中宜加少量无机盐类，供给必要 的生长因子和微量元素。
２、硫酸镁
镁是某些细菌的叶绿素的组成成分。虽不参 加任何细胞结构物质的组成，但它的离子状 态是许多重要的酶的激活剂。 硫，含硫蛋白质的组分；酶的活性基。
• 硫酸镁
２、钾盐
钾不参加细胞结构物质的组成，但它是许多 酶的激活剂。
３、微量元素
铜、锰、锌、钼、碘、溴等。 避免有害离子加入到培养基中。
培养基的制备及消毒与灭菌ppt实用资料
《基础生物学实验》精品课程
• 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空 气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀 压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含 有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度 低于饱和蒸气的温度。
《基础生物学实验》精品课程
不能灭菌的物质：
• 硝化丙烷 、硝化甘油、硝化纤维，含氮硅酯。 • 三硝基苯、三硝基甲苯、苦味酸、和其它爆炸性
《基础生物学实验》精品课程
牛肉膏蛋白胨培养基的制备
❖ 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基；
❖ 牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维 生素；
❖ 蛋白胨主要提供氮源和维生素； ❖ NaCl提供无机盐； ❖ 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝
固剂； ❖ 用稀酸稀碱将其pH调至中性或微碱性。
• 要检查压力表上的指数为“0Mpa”后才能打开 锅盖。
• 外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否则 会引起装置故障、起火、短路。
《基础生物学实验》精品课程
一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度 及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等 具体情况而有所改变。例如含糖培养基用 0.06Mpa,112.6℃灭菌，然后以无菌操作手 续加入灭菌的糖溶液。又如盛于试管内的 培养基以0.1Mpa,121.5℃灭菌20min即可， 而盛于大瓶内的培养基最好以0.1Mpa， 122℃灭菌30min。
《基础生物学实验》精品课程
半合成培养基
❖ 在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适 当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基 叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养 基上生长，应用广泛。
《基础生物学实验》精品课程
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7、包扎 塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆 扎，然后在外面用一层牛皮纸包扎。试管应 先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上 标签，注明培养基名称、日期、组别，准备 灭菌。
8、灭菌 操作流程： 检查杀菌锅各部件是否正常→加水→装 锅→加盖密封→通电加热→排空气（大量蒸汽排出 时，维持5 min）→升温→恒温杀菌→断电降温→开 盖→取出物品 培养基、无菌水等：放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热 灭菌。 1、含糖培养基：115℃灭菌10min或113℃灭菌 15min 2、无糖培养基：121℃灭菌15～20min 玻璃器皿：干热灭菌，放入烘箱加热灭菌：160～ 165℃灭菌2h；或湿热灭菌：121℃灭菌20～ 30min。
9、搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50 ℃左右，将试管 棉塞端搁置在玻璃棒上，搁置的斜面长度以 不超过试管总长度的一半为宜。
10、无菌检验 将灭菌的培养基放入37 ℃的温室中培养24－ 48h，以检验灭菌是否彻底。
思考题
1、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检
查灭菌后的培养菌是无菌的？ 2、加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表 上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？ 为什么？ 3、管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉 皮塞代替？为什么？
高压灭菌器的构造: 外筒:用于盛水,内有加热装 置; 内筒:置于外筒内,内由金属 隔板相隔,用于盛装待灭菌 的物品; 厚盖:盖的边缘附有螺旋,借 以紧闭灭菌器; 压力表:指示灭菌器内的温 度与压力; 安全阀:当压力达到一定值 时,可自行打开,以确保安全; 放气阀:用于灭菌过程中,放 出余气;
1、称量 除琼脂外，按培养基配方比例依次准确地称 取药品，放入适当大小的烧杯中。蛋白胨极 易吸水，称量时动作要快。
2、加热溶解
向烧杯内加入所需水量的一部 分，放到电炉上加热，同时不断进行搅拌， 使其溶解，如配制固体培养基则向溶液中加 入所需的碎琼脂，在电炉上一面加热一面搅 拌，直到琼脂完全融化后才能停止搅拌，并 加入热水补足水分。
实验 一 培养基的制备
一、实验目的 1、学习并熟练培养基的制备的方法、步骤 和技术。 2、学习和掌握高压蒸汽灭菌的具体操作方 法和技术。
二、原理
培养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或 积累代谢产物的营养基质，它是进行科学研究，生 产微生物制品及应用等方面的基础。由于各类微生 物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同， 因而培养基的种类很多，要根据培养目的和检测需 要不同，选择配制不同的培养基。 从培养基的用途来区分，培养基可分为选择培养基、 增殖培养基、鉴别培养基等。
5、分装 将培养基趁热加至漏斗上进行分装。如果要制作斜 面培养基，须将培养基分装于试管中，装试管时，装量不要 超过试管的1/5；如果要制作平板培养基或液体、半固体培 养基，则须将培养基分装于三角瓶内，一般以其容积的1/2 为宜。注意管口不要沾上培养基。
6、加塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。 堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。 棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不 要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法 使用。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提 棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在 管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。
3、调pH值
用精密pH试纸（或pH电位计、 氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如 不符合需要，可用1mol/LNaOH或1mol/L NaCl进行调节，直到调节到配方要求的pH值 为止。
4、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好 的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成 六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱 形，铺在漏斗上过滤。没有悬浮物的不用过 滤。
三、牛肉膏蛋白胨培养基的制备
（一）试剂和仪器 1、药品及试剂： 牛肉膏、蛋白胨、 琼脂、NaCl 、1mol/LNaOH、 1mol/L NaCl。 2、仪器用品 天平、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、 试管、三角瓶 、烧 杯、量筒、玻棒、药匙、玻璃漏斗、pH试纸（5.59.0） 、棉花、牛皮纸、记号笔、棉线、纱布、培养皿 等。 3、配方 牛肉膏3g、蛋白胨10g、 琼脂15-20g、NaCl 5g 、水 1000ml、 PH 7.4－7.6
灭菌原理： 高压蒸汽灭菌高温蒸汽导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌 的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。 一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达 到灭菌的目的。与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高 （160—170℃），时间长（1—2小时）。但干热灭菌温度 不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至 引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
（二）操作步骤
1.称量 称量蛋白胨要快。牛肉膏用玻璃棒蘸取放入空烧杯。 2.加热溶解 加入部分水，边加热边搅拌，溶解后再碎琼脂， 边加热边搅拌直到完全溶解。 3.调pH值 4.过滤 5.分装 装量合适、管口或者瓶口不要沾上培养基。 6.加塞 松紧合适，深浅适度 7.包扎 8.灭菌 9.搁置斜面 长度为试管的1/2。 10.无菌检查