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《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验[目的]1．掌握皮肤消毒方法。
2．掌握标准纸片扩散法(K-B法)的原理、操作方法、结果的判读与解释及其临床意义。
3．掌握纸片扩散法的质量控制方法。
了解空气、水中细菌的检查方法。
4．熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法。
5．熟悉紫外线灭菌方法。
6．了解高压蒸汽灭菌方法一、细菌的分布检查[材料]普通琼脂平板，1％高层琼脂，无菌试管，1毫升无菌吸管，无菌平皿。
[方法]1．空气中的细菌检查取琼脂平板一个，打开皿盖，暴露于空气中10分钟，然后盖好，在平皿底面注明地点、班组，放入37℃温箱内培养24小时后观察结果，计算菌落数，并观察不同的菌落形态。
2．污水和净水中细菌数的检查（1）用无菌试管分别采取自来水和未经净化消毒处理的污水各一管。
取自来水样时，须先将水龙头用酒精灯烧灼灭菌，再将龙头完全开放，放水5分钟，然后用无菌试管以无菌操作采集水样。
（2）用无菌吸管吸取自来水及经适当稀释的污水各1毫升，分别放入两个无菌平皿内。
（3）将已溶化并冷至约45℃（手握琼脂管感觉热而不烫手）的高层琼脂1支，倾注入平皿内，盖好平皿，立即将皿底贴桌面轻轻摇动，使琼脂与水样均匀混合后（但勿溢出于皿外），静置桌面，待琼脂凝固。
（4）标记，皿底向上置于37℃培养24小时，取出观察结果。
比较自来水及污水内生长的菌落数。
3．皮肤及飞沫中的细菌检查材料：普通琼脂平板，血琼脂平板。
方法：（1）皮肤细菌检查取普通琼脂平板一块，用手指轻轻涂抹培养基表面，置37℃温箱中培养24小时，观察结果。
（2）飞沫中的细菌检查取血琼脂平板一个，打开皿盖，将培养基面置于口腔前约10厘米处，用力咳嗽数次，约30秒钟，然后盖上皿盖，置37℃温箱培养24小时，观察结果。
二、外界因素对细菌的影响（一）高压蒸汽灭菌法（示教）[材料] 手提式高压蒸汽灭菌器、电炉等构造：手提式高压蒸汽灭菌器是一双层金属圆桶，外层坚厚，顶端有厚盖，盖边有翅状螺旋，借此紧闭此盖，防止蒸汽外溢。
第四章细菌的分布与外界环境对细菌的影响第一节细菌的分布细菌种类多、繁殖快、适应环境能力强，因此，细菌广泛分布于自然界，在水、土壤、空气、食物、人和动物的体表以及与外界相通的腔道中，常有各种细菌和其它微生物存在。
在自然界物质循环上起重要作用，不少是对人类有益的，对人致病的只是少数。
一、细菌在自然界的分布（一）土壤中的细菌土壤中含有大量的微生物，土壤中的细菌来自天然生活在土壤中的自养菌和腐物寄生菌以及随动物排泄物及其尸体进入土壤的细菌。
它们大部分在离地面10～20厘米深的土壤处存在。
土层越深，菌数越少，暴露于土层表面的细菌由于日光照射和干燥，不利于其生存，所以细菌数量少。
土壤中的微生物以细菌为主，放线菌次之，另外还有真菌、螺旋体等。
土壤中微生物绝大多数对人是有益的，它们参与大自然的物质循环，分解动物的尸体和排泄物；固定大气中的氮，供给植物利用；土壤中可分离出许多能产生抗生素的微生物。
进入土壤中的病原微生物容易死亡，但是一些能形成芽胞的细菌如破伤风杆菌、气性坏疽病原菌、肉毒杆菌、炭疽杆菌等可在土壤中存活多年。
因此土壤与创伤及战伤的厌氧性感染有很大关系。
（二）水中的细菌水也是微生物存在的天然环境，水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。
水中微生物种类及数量因水源不同而异。
一般地面水比地下水含菌数量多，并易被病原菌污染。
在自然界中，水源虽不断受到污染，但也经常地进行着自净作用。
日光及紫外线可使表面水中的细菌死亡，水中原生生物可以吞噬细菌，藻类和噬菌体能抑制一些细菌生长；另外水中的微生物常随一些颗粒下沉于水底污泥中，使水中的细菌大为减少。
水中的病菌如伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、钩端螺旋体等主要来自人和动物的粪便及污染物。
因此，粪便管理在控制和消灭消化道传染病有重要意义。
但直接检查水中的病原菌是比较困难的，常用测定细菌总数和大肠杆菌菌群数，来判断水的污染程度，目前我国规定生活饮用水的标准为1m1水中细菌总数不超过100个；每1升水中大肠菌群数不超过3个。
