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肝癌动物模型的建立_徐静

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共识.中华肝脏病杂志,2004,12∶425～42811　Perrillo RP ,Lai CL ,Liaw YF ,et al .Predictors of HBeAg loss afterlamivudine treatment for chronic hepatitis B .Hepatotogy ,2002,36∶186～19412　Rizzetto M ,Tassopoulos NC ,Goldin RD ,et al .Extended lamivu -dine treatment in patients with HBeAg -negative chronic hepatitis B .J Hepatol ,2004,41∶1070～107613　Ryu SH ,Chung YH ,Choi MH ,et al .Long -term additional lamivu -dine therapy enhances durability of lamivudine -induced HBeAg loss :a prospective study .J Hepatol ,2003,39∶641～61914　Chien RN ,Yeh CT ,Tsai SL ,et al .Determinants for sustainedHBeAg response to lamivudine therapy .Hepatology ,2003,38∶1267～127315　党红星,何瑞,马跃东.拉米夫定致小儿锥体外系反应二例.中华儿科杂志,2004,42∶43616　Lok ASF ,Zoulim F ,Locarnini S ,et al .Monitoring drug resistancein chronic hepatitis B virus (HB V )-infected patients durin g lamivud ine therapy :evaluation of performance of INNO -LiPA HBV DR assay .J Clin Microbio ,2002,40∶3729～373417　Suzuki F ,Suzuki Y ,Tsubota A ,et al .Mutations of polymerase ,precore and core promoter gene in hepatitis B virus during 5-yearlamivudine therapy .J Hepatol ,2002,37∶824～83018　Qaq ish RB ,Pharm D ,Mattes KA ,et al .Ad fovir dipivoxil :A newantiviral agent for the treatment of hepatitis B virus infection .Clin Therapeut ,2003,25∶3084～309919　Bozdayi AM ,E yigun CP ,Turkyilmaz AR ,et al .A novel pattern(sW195a )in surface gene of HBV DNA due to YSDD (L180M plus M204S )mutation selected during lamivudine therapy and success -ful treatment with adefovir dipivoxil .J Clin Virol ,2004,31∶76～7720　Qarugan RB ,Gomez LC ,Serrano PL .Use of adefovir in the treat -ment of the chronic hepatitis B virus infection with res istance to lamivudine .Transplant Proc ,2003,35∶1841～184321　Villeneuve JP ,Durantel D ,Durantel S ,et al .Selection of a hepati -tis B virus strain resistant to adefovir in a liver transplantation pa -tient .J Hepatol ,2003,39∶1085～108922　梁扩寰,主编.肝脏病学.第1版,北京:人民卫生出版社,1995.52023　张瑞琪,缪晓辉,倪武.膦甲酸钠治疗慢性乙型肝炎47例.中华传染病杂志,2002,20∶180～181(收稿:2004-12-10)(校对:郭顺明)肝癌动物模型的建立徐　静　综述　李　旭　审校作者单位:230022　合肥市　安徽医科大学附属医院感染科 自20世纪初获得小鼠自发性肝癌动物模型以来,人们对肝癌动物模型的研究不断深入,逐渐建立了诱发性肝癌模型、移植性肝癌模型及转基因动物肝癌模型。

下面就各类肝癌动物模型的建立方法和特点作一简述。

一、自发性肝癌动物模型　是指实验动物未经任何有意识的人工处置,在自然情况下所发生的肿瘤。

实验动物多选用近交系小鼠,由于实验动物种属、品系的不同,肿瘤发生类型和发病率有很大差异。

14月龄以上的C3Hf 系雄鼠、C3H 系雄鼠和C3He 雄鼠的发生率分别为72%、85%和80%[1]。

自发性肝癌动物模型最大的优点是,系完全在自然条件下发生的疾病,排除了人为因素,肝癌的发生、发展与人类肝癌相似,反映了动物的肿瘤易感性和环境致癌物质、促癌物质的积聚程度,但其发生率低且不稳定,发生时间较长、难预测且参差不齐,荷瘤动物个体在动物(性别、体重、肿瘤发生时间等)和肿瘤(大小、数目、部位等)两方面差异较大,造模有一定的困难。

该模型主要用于病理学研究和作为移植性肿瘤的瘤源。

二、诱发性肝癌动物模型　诱发性肝癌模型是指用化学、物理、生物的致癌因素在实验条件下诱发动物发生肝癌,它是进行实验肿瘤学研究的常用方法。

其中化学性致癌物最常见,如亚硝胺类(DEN )、黄曲霉素类(AFB1)、氨基偶氨燃料类(3′-Me -DAB )、芳香胺类化合物(2-AAF )等。

最常用的实验动物为大鼠,多选用敏感性高的纯系大鼠。

目前常用的品系有:Wistar 、Spraque -Dawley 和Fischer344,前两者在国内应用更为广泛。

大鼠的年龄和性别均对致癌性有影响。

一般认为幼年雄性大鼠对致癌的敏感性较高,但有时也可出现幼年雌性大鼠诱癌成功。

鼠龄以3个月以内、体重120克以下的大鼠诱癌启动率高于月龄大的大鼠,而体重200克以上或1岁以上的大鼠的肝癌启动率低,很难诱发肝癌。

这与其组织中的肝细胞或幼稚细胞的状态以及细胞的增殖水平有关。

诱发性大鼠肝癌的给药途径主要有经口给药法和注射给药法。

经口给药法又分为自动口服给药和强制灌胃两种,前者是将水溶性致癌物溶于水中或将非水溶性致癌物混于饲料中让大鼠自动摄取,此法简单方便,但由于动物饮水和饲料的摄取量不同,不能保证给准确药量;后者是将溶于水或悬浮于载体的诱癌剂通过特制的灌胃针头给大鼠灌胃,此法能准确掌握给药量,但强制性操作和定时给药会对动物造成一定程度的机械性损伤和心理上的影响。

注射法也是一种常用的方法,可将诱癌剂溶于可溶性液体中或悬浮于载体中,通过各种部位注射给药,其中腹腔注射最常见,可根据诱癌剂的不同选择单次大剂量注射或多次小剂量注射。

诱发性大鼠肝癌的诱癌方法很多,致癌化合物可单一应用也可联合应用。

该模型特点为起病隐匿、病程较长,肿瘤多为弥漫结节型,诱导周期长,常需3～5月甚至1～2年。

在诱癌过程中动物的死亡率相对较高。

但由于诱发因素和条件可人为控制,诱发率远高于自然发病率,故在肝癌实验研究中优于自发瘤,多用于肝癌病因学、发生学、发病机理、遗传及生物学方面的研究。

张嘉宁[2]报道用DENA诱导大鼠肝癌模型具有与人肝癌相似的影响学表现,适合肝癌影像学研究。

应用DENA诱发的大鼠肝癌,其在经历肝炎、肝硬化的基础上形成,与人肝癌的发生过程相似,对人类临床治疗将起到指导作用,也是较理想的适合影像学和分子生物学研究的动物模型。

三、移植性肝癌动物模型　移植性肝癌模型是指用肝癌组织或细胞(源于动物或人)移植到动物体内(肝脏、肝外组织或器官)或非肝脏来源的恶性肿瘤如乳腺癌等移植到动物的肝脏所形成的肝癌动物模型。

瘤源可以是自发的、诱发的、切除的人肝癌标本或肝病细胞株。

根据受体动物不同移植性肝癌模型可分为正常动物移植性肝癌模型和免疫缺陷动物移植性肝癌模型。

前者受体动物多为小鼠和大鼠,后者受体动物多为裸鼠、裸大鼠。

可将肿瘤移植于肝脏内,也可植入皮下、腹腔等部位。

对于正常动物移植性肝癌模型,目前应用较多的为自发性肝外-肝同种移植性大鼠肝癌模型。

该模型采用Walker-256瘤株(来源于大鼠自发性乳腺癌,AFP阴性,具有部分肉瘤性质,将其植入肝内能较好地模拟人肝癌的膨胀性和浸润性生长方式),通过不同途径移植入大鼠的肝脏,从而形成大鼠移植性肝癌模型。

实验动物一般选用雄性Wistar大鼠,也有用SD雄性大鼠[3]。

国内研究已经证实,将Walker-256瘤株移植肝脏后,在瘤体直径小于3mm时主要由门静脉供血,直径大于3mm时主要由肝动脉供血,由于其血供特点和生长行为与人类肝癌相似,故该模型广泛应用于肝癌介入等实验室治疗、影像学诊断及侵袭和转移等方面的研究。

目前国内多采用瘤块肝包膜下移植的方法制作该模型,但操作相对复杂。

李琦等[4]和邵成伟等[5]采用Walker-256细胞浆肝内注射建立大鼠移植型肝癌模型,简便、周期短、成功率高。

常用的免疫缺陷动物移植性肝癌模型有人—裸小鼠异种移植肝癌模型、人—裸大鼠异种移植肝癌模型、人肝癌裸鼠皮下-肝原位移值瘤模型。

裸小鼠、裸大鼠为无胸腺、缺乏T淋巴细胞的无毛鼠。

不同的鼠龄对移植性肿瘤及其转移的影响不同,主要与不同龄鼠NK细胞活性不同有关。

移植在年幼或新生裸鼠体内的肿瘤比移植在成年的裸鼠更易生长和形成转移。

不少学者报道,在幼年裸鼠(3周龄)体内表现为明显侵袭和高度自发性或实验性转移的肿瘤,在成年鼠(6～8周龄)体内,往往呈局限性生长或低转移。

利用裸鼠进行异种移植有较高的移植成功率,潜伏期短,但大部分转移率低。

根据原位移植理论建立起来的人癌瘤原位移植模型克服了这一缺陷,它不仅维持了原有瘤组织的结构,而且还保持了人体瘤的绝大部分生物学特性,特别是转移特性,在宿主体内能以类似于患者体内的方式显示其恶性行为[6]。

Sun等[7]建立的裸小鼠人肝癌原位转移模型LCI-D20,自发转移率达100%且转移早。

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肿瘤动物模型构建实验技术

肿瘤动物模型构建实验技术

肿瘤动物模型的建立可以：（1）评价抗肿瘤免疫治疗的疗效；（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；（3）为肿瘤转移研究提供更好的研究平台；（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。

实验方法：诱发性肿瘤动物模型实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。

实验材料：肿瘤细胞小鼠试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺实验步骤一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。

除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。

2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1.5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。

3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。

4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。

5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。

（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。

（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。

肝癌动物模型建立的方法

肝癌动物模型建立的方法

#综 述#肝癌动物模型建立的方法徐玉音,陈 莉收稿日期:2010-06-17基金项目:南通市科技局应用研究项目(2009060)作者单位:南通大学医学院病理教研室,南通 226001作者简介:徐玉音,女,在读硕士研究生。

E-m ai:l xuyuyi n27@yahoo .cn陈 莉,女,教授,硕士生导师,通讯作者。

E -m ai :l b l 1@ntu 摘要:肝细胞癌是一种常见的恶性肿瘤,尽管近年来采用分子生物学技术研究肝癌的发生,但仍缺乏对肝癌发病机制的确切认识。

随着人们对肝癌动物模型研究的不断深入,逐渐建立了自发型、诱发性、移植性及转基因动物肝癌模型。

因为这些模型很好地模拟了人类肝癌,可以用于肝癌的生理、细胞和分子等发病机制方面的研究,也可用于肝癌治疗药物的筛选以及基因治疗的探索。

本文讨论一些有条件地、选择性诱导肝癌模型的情况,重点关注与人类肝癌关系最密切的肝癌动物模型,并对动物模型的临床应用进展进行简要介绍。

关键词:肝肿瘤;动物模型;转基因;转基因动物中图分类号:R 73517;R-33 文献标识码:A 文章编号:1001-7399(2011)02-0405-05人类疾病动物模型是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料,可分为自发瘤模型、诱发模型、移植模型和转基因动物模型等。

实验动物模型与其模拟的人类肿瘤在分子、组织学以及生物学特性方面有许多共同性,可以用于肿瘤发病机制研究、肿瘤治疗药物的筛选以及肿瘤的基因治疗。

本文对肝癌动物模型的建立及其临床应用进展予以综述,以供研究者根据各自研究的目的、实验室的条件等在建立合适的肝癌动物模型时参考。

1 自发性肝癌动物模型自发性肝癌动物模型是指实验动物未经任何有意识的人工处理,在自然状况下所发生的肝癌。

实验动物多选用近交系小鼠,由于实验动物种属、品系的不同,肿瘤发生类型和发病率有很大差异。

14月龄以上的C3H f 系雄鼠、C3H 系雄鼠和C3H e 雄鼠的发生率分别为72%、85%和80%[1]。

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。

一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。

2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。

3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。

二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。

2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。

三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。

（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。

2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。

3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。

注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。

为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。

常用实验动物肝癌模型研究进展

常用实验动物肝癌模型研究进展

常用实验动物肝癌模型研究进展李晓娟;白云峰;崔智;高蓉;鲍龙涛;李瑞生【摘要】Animal models of liver cancer are an important platform and method for research of etiopathogenesis and mechanism of liver cancer, and it is important to establish animal models of liver cancer to serve liver cancer research. Establishing better animal models of liver cancer can provide experimental and theoretical references for studies of pathogenesis, diagnosis and treatment of liver cancer.%肝癌动物模型是研究肝癌发病病因和机理的重要平台和手段,在肝癌研究过程中,肝癌动物模型的建立起着非常重要的作用,建立和提供良好的肝癌动物模型为今后进一步研究肝癌的致病机理,指导临床肝癌的诊断和治疗提供理论参考.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2012(022)004【总页数】5页(P73-77)【关键词】动物;实验;肝肿瘤;模型,动物【作者】李晓娟;白云峰;崔智;高蓉;鲍龙涛;李瑞生【作者单位】解放军第302医院实验技术研究保障中心,北京100039;解放军第302医院实验技术研究保障中心,北京100039;解放军总医院肿瘤内科,北京100853;解放军第302医院实验技术研究保障中心,北京100039;解放军第302医院实验技术研究保障中心,北京100039;解放军第302医院实验技术研究保障中心,北京100039【正文语种】中文【中图分类】R33我国是肝癌(HCC)发病率较高的国家之一，近20年来肝癌的病死率呈上升趋势，已成为我国第2位恶性肿瘤［1］，也是世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤之一。