人肝癌组织裸鼠移植瘤模型建立及其应用

裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立的开题报告【开题报告题目】裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立【研究背景】肝癌是常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康。

目前，肝癌可通过手术、化疗、放疗等综合治疗。

然而，由于肝癌细胞的异质性和基因突变等因素，导致治疗效果仍不尽如人意。

因此，开展肝癌治疗的研究非常必要，尤其是建立一种有效的肝癌耐药模型。

【研究目的】本研究旨在建立一种裸鼠人肝癌原位移植耐药模型，以此用于开展肝癌治疗药物的筛选和耐药机制的研究。

【研究内容】本研究主要包括以下内容：1.采用原位移植方法建立裸鼠肝癌模型，采用人肝癌细胞原位移植至裸鼠肝脏；2.通过连续药物选压，筛选出耐药肝癌细胞株；3.建立肝癌细胞原位移植耐药模型，并研究耐药机制；4.对耐药肝癌细胞株进行化学治疗药物筛选。

【研究方法】本研究采用原位移植法建立模型，连续药物选压筛选出耐药肝癌细胞株。

建立肝癌细胞原位移植耐药模型，并通过实时荧光定量PCR、Western blotting等手段进行耐药机制研究。

在耐药肝癌细胞株中，筛选可逆转耐药的化学治疗药物。

【研究意义】本研究将建立一种裸鼠肝癌原位移植耐药模型，以此作为研究肝癌治疗药物的筛选平台和耐药机制研究的手段。

通过研究耐药机制，并对耐药肝癌细胞株进行化学治疗药物筛选，有望为肝癌的治疗提供有力的参考和帮助。

【研究进展】目前，已通过原位移植法建立裸鼠人肝癌模型，连续药物选压成功筛选出耐药肝癌细胞株，正在进行建立耐药模型，并研究耐药机制的工作。

【研究预期成果】本研究预期能够建立一种裸鼠肝癌原位移植耐药模型，并研究耐药机制。

在此基础上，筛选出可逆转耐药的化学治疗药物，为肝癌的治疗提供新的思路和方法。

【研究周期和预算】本研究周期为2年，预算总共10万元。

包括实验室耗材费、动物实验费、仪器设备购置和维护费、研究人员工资和报酬等。

关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察【摘要】目的建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型。

方法采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块，建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个。

观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率，常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况。

电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2（COX-2）。

结果胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％（16/16），淋巴结广泛转移率为87.5%（14/16），肝转移发生率为75.0％（12/16），腹腔积液形成率为12.5%（2/16）。

结论原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，具有人胃癌的生物学活性。

【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠Abstract： Objective To develop a nude mouse model of human gastric cancer that can mimic its natural human biologic activities. Methods Human gastric cancer cell line SGC-7901 was cultured in nude mice repeatedly for 5 generations to get the subcutaneous solid tumor， which was then emulsified and orthotopicly inplanted into the anterior wall of the stomach in 16 nude mice. The tumor growth characters， tumor-take rate and metastatic rate were studied grossly， the transplanted tumor and its lymphatic and hepatic metastases， after routine H-E staining; the ultrastructures， by electron microscopy; and COX-2， by immunohistochemical method． Results The tumor-take rate was 100％（16/16）， the rates of metastasis to lymph nodes and liver were 87.5％（14/16） and 75.0％（12/16） respectively， the rate of ascites formation was 12.5%（2/16）. Conclusion The model of human stomach cancer established is qualified， exhibiting natural growth characters and biological activities.Key words: stomach neoplasms; orthotopic thansplantation; disease model; nude mouse既往胃癌动物模型的建立多采用皮下接种方式，虽然这种移植方式简单易行，肿瘤的生长情况也便于观察，且在一定程度上也近似地模拟了原有肿瘤的形态学、生物学及生物化学特性；然而接种于裸小鼠皮下组织毕竟属于异位移植，脱离了其起源组织器官的微环境，因此在实验中移植瘤的某些行为常不同于患者原发恶性肿瘤的生物学行为。

《人绒癌裸鼠原位移植瘤模型、转移瘤模型的构建及二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响》篇一一、引言人绒癌是一种常见的恶性肿瘤，其发生和转移给临床治疗带来了巨大的挑战。

为了更好地研究人绒癌的生物学特性和治疗策略，建立有效的动物模型至关重要。

裸鼠作为实验动物，因其生理构造与人类相似，成为建立人绒癌移植瘤模型的首选动物。

本文旨在探讨人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建方法，并分析二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响。

二、人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型的构建1. 实验材料与方法（1）细胞株：选用人绒癌细胞株。

（2）裸鼠：选取健康的裸鼠作为实验动物。

（3）建模方法：通过将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，构建原位移植瘤模型及转移瘤模型。

2. 模型构建过程（1）原位移植瘤模型构建：将人绒癌细胞注射到裸鼠子宫内，待肿瘤生长至一定大小后，进行相关指标的检测。

（2）转移瘤模型构建：通过静脉注射、腹腔注射等方式，将人绒癌细胞注射到裸鼠体内，待肿瘤发生转移后，观察并记录转移情况。

三、二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长的影响1. 实验材料与方法（1）二氢杨梅素：购买高质量的二氢杨梅素。

（2）实验分组：将裸鼠随机分为实验组和对照组，实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗。

（3）观察指标：观察并记录两组裸鼠的转移瘤生长情况。

2. 实验结果与分析（1）实验组裸鼠给予二氢杨梅素治疗后，转移瘤生长速度明显减缓，肿瘤体积较对照组小。

（2）通过病理学检查发现，实验组裸鼠的肿瘤细胞凋亡率较高，表明二氢杨梅素具有抑制肿瘤细胞生长的作用。

（3）进一步分析发现，二氢杨梅素可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径，发挥抗肿瘤作用。

四、结论本文成功构建了人绒癌裸鼠原位移植瘤模型及转移瘤模型，为研究人绒癌的生物学特性和治疗策略提供了有效的动物模型。

此外，研究发现二氢杨梅素对裸鼠转移瘤生长具有明显的抑制作用，可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等途径发挥抗肿瘤效果。

裸鼠模型在肿瘤治疗研究中的应用近年来，肿瘤治疗研究一直是医学界的热门话题。

而其中一个被广泛应用的模型就是裸鼠模型。

该模型是一种没有免疫系统的小鼠，其所患种类繁多的人类癌症与人体癌症的生理和生化特征高度一致。

因此，裸鼠模型被视为一种可靠的人类癌症模型，在肿瘤治疗研究中得到越来越广泛的应用。

一、裸鼠模型有助于肿瘤药物筛选和剂量的选择裸鼠模型的特点是没有免疫系统，因此可以有效地模拟人类癌症患者对化疗药物的反应。

研究人员可以将不同类型的人类肿瘤细胞种植到裸鼠的体内，然后观察不同药物的疗效以及适应性。

这种方法可以帮助筛选出最有效的化疗药物，并确定最佳的剂量方法，以降低剂量过大或过小的患者药物副作用和治疗效果不佳的风险。

二、裸鼠模型可以用于研究免疫药物的作用机制裸鼠模型的另一个重要特点是它们缺乏免疫系统。

因此，在研究免疫药物的作用机制时，其免疫抑制作用可以被完全消除。

这些免疫药物通常用于治疗肿瘤细胞免疫逃逸的疾病。

研究人员可以在裸鼠体内种植癌细胞，并给予不同的免疫药物处理，以便研究药物在治疗肿瘤免疫逃逸方面的作用和机制，为开发更加有效的肿瘤免疫疗法提供理论基础。

三、裸鼠模型可以模拟人类癌症的药物耐受性药物耐受性是肿瘤治疗中的一个重要问题。

但是直接在人体内进行研究很难获得满意的结果，因为某些药物在实验室中表现出的耐受性可能与实际情况不同。

通过使用裸鼠模型，可以准确地模拟人类癌症的耐受性情况，并研究这些药物的各种机制。

这种方法可以帮助人们更好地了解药物耐受性的机制，促进新药物的开发，改善现有的肿瘤治疗方法。

四、裸鼠模型可以进行肿瘤的转移研究在许多情况下，治疗肿瘤并不仅仅是消灭原发肿瘤，还需要防止肿瘤进行转移。

而裸鼠模型在这个方面有很大的应用潜力，尤其是在研究转移性肿瘤时。

研究人员可以通过种植具有转移潜力的细胞系，观察肿瘤转移的过程和机制，并测试不同的治疗方案，以便开发更加有效的肿瘤转移治疗方法。

五、裸鼠模型可以用于研究基因治疗基因治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，其作用机制涉及基因转导、表达、调控和重组等方面。

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立实验具体步骤及方法先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤组织再接种于裸鼠肝内，建立肝原位移植瘤模型（间接肝原位移植瘤模型），并将其与直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型作比较。

一、间接肝原位移植瘤模型的制备1. 用新鲜的肝癌外科手术切除标本（来自长海医院，患者为1名47岁男性，病理诊断：肝左叶肝细胞癌，粗梁型，Ⅱ级），在Hanks液中，去除坏死组织和非癌组织后切成1～2 mm3小块。

2. 取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤长到直径约1 cm时切取肿瘤，在Hanks液中，去除坏死组织后切成1～2 mm3小块，裸鼠用戊巴比妥钠腹腔麻醉后，行左上腹横切口，暴露肝脏。

3. 取上述2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头植入裸鼠肝右叶深部实质内，全层关腹。

二、直接肝原位移植瘤模型的制备1. 同一例新鲜肝癌手术切除标本，处理方法同皮下移植，裸鼠处理同间接肝原位移植，取2块瘤组织，在离体40 min内用粗针头直接植入裸鼠肝右叶深部实质内。

2. 皮下移植瘤模型和腹腔内移植瘤模型的制备。

三、病理检查和相关指标检测1. 解剖和组织学检查（1）所有裸鼠接种后，分组分笼饲养，自由进食，每天观察1～2次。

（2）当裸鼠处于全身衰竭状态时处死并作大体解剖，对接种瘤和转移瘤分别进行观察、测量，记录肿瘤侵袭和转移情况，重要器官（主要为肝和肺）经10%中性甲醛固定后，常规石蜡制片，光学显微镜检查。

2. 周围血甲胎蛋白(AFP)检测处死前，均采用摘眼球采血的方法获得血液，用生化法检测AFP的分泌量。

3. 瘤细胞DNA含量分析留取部分移植瘤标本采用流式细胞术进行DNA含量分析。

注意事项目前，肝癌的复发和转移仍然是其术后长期存活的主要障碍。

为了研究肿瘤的转移机制，建立接近于人体的肿瘤动物模型显得尤为重要。

人胃癌完整组织块裸鼠原位种植高转移模型的建立实验具体步骤及方法人胃腺癌SGC27901 细胞株，裸鼠皮下注射(2x106/L 细胞悬液) ，成瘤后反复传代形成实体瘤，以第6 代瘤源为组织材料，打开腹腔，通过生物胶粘贴法用OB 医用生物胶将瘤块粘贴在裸鼠胃壁胃大弯血管分布稠密处；待荷瘤鼠出现衰竭体征濒临死亡时处死解剖检查。

一、皮下种植瘤模型的建立和传代BALB/c nu/nu 裸鼠24 只，雄性，6 周龄，体质量18～20 g，SPF 级条件下饲养。

人胃腺癌细胞株SGC-27901，2x106/L 细胞悬液裸鼠皮下注射，成瘤后反复传代形成实体瘤，本组瘤源为第6代。

二、人胃癌组织块裸鼠原位种植模型的建立1. 实验动物术前禁食12 h，氯胺酮50 mg/kg 腹腔麻醉，常规消毒，选择左侧正中旁切口进腹，暴露胃壁，在胃大弯处近胃窦旁用1 mL无菌空针头划破胃壁浆肌层，用无齿镊将破损处向内推压，使局部胃壁形成凹龛，植入1 块瘤组织块，并在瘤表面滴上1 滴OB 生物胶(由广州白云医用胶公司提供) ，使其覆盖瘤组织表面, 约40 s 凝固后将胃壁回纳入腹腔，0 号丝线缝合腹膜及皮肤，关腹。

2. 整个过程严格遵循无菌操作。

3. 所有模型动物无麻醉意外，SPF 级饲养。

4. 术后1 周内，死亡2 只。

5. 定时观察所有裸鼠全身状况、运动情况、腹部体征。

6. 当荷瘤鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭体征时，脱颈椎处死解剖，取原位瘤体、肿大淋巴结、胸腹腔内脏器、收取腹水。

7. 所取标本以10% 甲醛固定，石蜡包埋、切片，H-E 染色，作组织病理学检查。

8. 实体瘤细胞染色体鉴定。

注意事项体外实验虽然能在一定程度上反映胃癌细胞的运动能力和侵袭能力，但是不能完全替代体内胃癌转移的器官环境及转移效果，因此体内移植模型成为肿瘤实验研究的主要方法。

以往多是皮下移植，但可能因皮下纤维包膜的包绕致转移较少。

近年研究表明，肿瘤细胞株原位种植裸鼠体内不能完全表达肿瘤的生物学特性，而完整组织块原位移植可显著提高转移率。

裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立是一种重要的疾病模型，它可以为肝癌治疗研究提供有力的实验支持。

本文将对裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法、优点、应用以及未来发展进行详细的探讨。

一、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立方法1.1 细胞培养：选择合适的肝癌细胞系进行体外培养，确保细胞状态正常、细胞活性强。

1.2 细胞检测：检测细胞的纯度、细胞数目、细胞的拓扑形态、基因表达差异等，以保证肝癌细胞的最佳种植状况。

1.3 裸鼠荷瘤：通过注射细胞的方式给裸鼠诱发肝癌，注射前需要消毒裸鼠的皮肤及手术器械，减少致病菌的感染；肝癌细胞的注射部位可以是裸鼠体表组织、皮下或者肌肉内部。

1.4 实验监测：在瘤细胞注入裸鼠后，要检测裸鼠的体温、体重、食欲等生理指标，观察种植瘤的生长状态；待瘤体体积足够大时进行实验，通过静脉注入药物、瘤组织取材等方式进行肝癌治疗药物研究。

二、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的优点2.1 模型来源稳定：使用人肝癌细胞系进行裸鼠皮下肝癌模型建立，不同于动物体内自然发生的肝癌，因此可以控制稳定来源，有利于肝癌治疗药物的研究。

2.2 生理指标齐全：裸鼠作为模型动物，具有生物学模拟度高、生活习性简单、繁殖周期短等特点，且实验性调节饲养和环境等因素更为容易，因此比较适合进行肝癌相关实验研究。

2.3 操作方便：裸鼠皮下肝癌模型建立起来比较简单，易于进行肝癌治疗药物研究，而且与其他模型动物相比，裸鼠实验后的数据质量也能更好地保证。

三、裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌治疗研究中的应用3.1 新药筛选：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型可以用于新药筛选，通过对不同的治疗手段处理，以期找到最有效的肝癌治疗方式。

3.2 治疗机制研究：通过裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型的建立，开展治疗机制的研究，从生物学角度解析肝癌的治疗机制，为临床诊断和治疗提供科学依据。

3.3 评估药物的毒副作用：裸鼠皮下人肝癌种植瘤模型在肝癌药物毒副作用评估中起着重要作用，有助于肝癌药物研发单位减少不必要的药物开发风险，提高药物研发效率。