培养基的配制
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实验室常用培养基的配制方法在实验室中,培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础,正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
不同的微生物对营养物质的需求有所不同,因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基,并掌握正确的配制方法。
接下来,我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。
一、LB 培养基(LuriaBertani 培养基)LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基,其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配制 1L 的 LB 培养基,所需材料如下:胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤:1、称取上述成分,将其放入一个干净的 1L 烧杯中。
2、加入约800ml 的去离子水,用玻璃棒搅拌,直至溶质完全溶解。
3、用去离子水将溶液定容至 1L。
4、调节 pH 值至 70(通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节)。
5、将培养基分装到锥形瓶中,每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。
6、盖上瓶塞,用报纸或牛皮纸包扎瓶口。
7、放入高压灭菌锅中,在 121℃下灭菌 20 分钟。
二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基,适用于多种细菌的培养。
配制 1L 该培养基,需要准备以下材料:牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下:1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,放入干净的烧杯中。
2、加入适量的去离子水,搅拌溶解。
3、定容至 1L,搅拌均匀。
4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。
5、分装、包扎、灭菌,方法同上。
三、马铃薯葡萄糖培养基(PDA 培养基)PDA 培养基常用于培养真菌,尤其是霉菌。
配制 1L 的 PDA 培养基,材料如下:马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程:1、将马铃薯去皮,切成小块,称取 200g,放入锅中,加入约1000ml 去离子水,煮沸 20 30 分钟,直到马铃薯块变软。
培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基:乳糖=5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数,使分装装量为1.0g,分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下,把准备好的无菌培养基用无菌注射器(规格为5ml)分装到各管制瓶中,每瓶分装5ml,然后加塞,轧盖。
8.2.3阴性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养,作为阴性对照。
8.2.4阳性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支分装有培养基的管制瓶,其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液,另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液,作为阳性对照。
培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基:乳糖=5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数,使分装装量为1.0g,分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下,把准备好的无菌培养基用无菌注射器(规格为5ml)分装到各管制瓶中,每瓶分装5ml,然后加塞,轧盖。
8.2.3阴性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养,作为阴性对照。
8.2.4阳性对照:在模拟分装过程的前、中、后段,随机抽取10支分装有培养基的管制瓶,其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液,另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液,作为阳性对照。
培养基的配制:由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应>3000瓶,每瓶灌装5ml,每批至少配制18L-19L培养基)。
1. LB培养基:10 g/L胰蛋白胨(进口),5 g/L酵母提取物(进口),10 g/L NaCl。
若配制固体培养基,加入15 g琼脂粉;
2. YPD培养基:22 g/L的一水合葡萄糖,20 g/L胰蛋白胨(进口),10 g/L酵母提取物(进口)。
若配制固体培养基,加入20 g琼脂粉;
3. SC-Ura培养基:22 g/L含一水合葡萄糖,6.7 g/L YNB(无氨基酸酵母氮源),1.224g/L 氨基酸粉末(除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的),配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。
4. YPX 培养基:蛋白胨,20 g/L;酵母粉,10 g/L;木糖,20 g/L或50 g/L。
5. YPD+G418:G418:1ml/L
Leu(亮氨酸)0.38 g/L,
Ura(尿嘧啶)0.076 g/L,
100xHis(组氨酸)7.6g/L,加入10mL/L
100xTrp(色氨酸)7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde(鸟嘌呤)7.6g/L 加入10mL/L
100xLys(赖氨酸)7.6g/L 加入10mL/L
100xMet(甲硫氨酸、蛋氨酸)7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。
若配制固体培养基,加入20 g琼脂粉;
全部氨基酸:。
1、PDA培养基(用于分离、培养植物内生真菌):马铃薯(去皮)200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。
用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 µ g/ml,用于抑制细菌的生长。
2、NA培养基(用于分离、培养植物内生细菌):牛肉膏3g,蛋白胨5g,葡萄糖2.5g,琼脂粉15g,蒸馏水1000ml,pH 7.0。
用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50µg/ml,用于抑制真菌生长。
115℃,20min 灭菌。
3、LB培养基:胰蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;4、DSM1培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,胰蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;5、DSM2培养基:磷酸三钾26.631 g(pH=7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,细菌学蛋白胨10 g,葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0;6、Msgg培养基:磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0),MOPs 100 mmoL/L(pH7.0),MgCl2 2 mmoL/L,CaCl2 700 mmoL/L,MnCl2 50 µM,FeCl3 50 µM,ZnCl2 1 µM,VB1 2 µM,甘油0.5 %,谷氨酸0.5 %,色氨酸50 µg/mL,苯丙氨酸50 µg/mL,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。
7、N%NA培养基:牛肉膏3.0 g,细菌学蛋白胨10 g,NaCl 5 g,琼脂粉N*10 g,8、BGM1培养基:牛肉膏3 g,胰蛋白胨10 g,NaCl 5 g,磷酸三钾26.631 g(pH7.0),二水柠檬酸三钠9.999 g,硫酸镁0.2465 g,硫酸铵19.821 g,葡萄糖1 g,蒸馏水1000 mL,pH 7.0。
培养基的配制
1、大量元素母液的配制:依次称量所需药品的用量分别放入一个烧杯,加少量蒸馏水彻底溶解后依次混合,最后用蒸馏水定容。
贴好标签保存于冰箱中。
2、微量元素母液的配制:由于微量元素称取量很小,为避免误差可适当增加母液的量。
依次称量所需药品的用量分别放入一个烧杯,加少量蒸馏水彻底溶解后依次混合,最后用蒸馏水定容。
贴好标签保存于冰箱中。
3、铁盐母液的配制:把FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别置于450ML蒸馏水中,加热并不断搅拌使之溶解(可用磁力搅拌器搅拌),然后将两种溶液混合,调PH值到5.5,加蒸馏水到最终容积1L,置于棕色细口瓶中,用力振荡1~2min,避光保存
4、有机母液的配制:由于称取量很小,为避免误差可适当增加母液的量。
依次称量所需药品的用量分别放入一个烧杯,加少量蒸馏水彻底溶解后依次混合,最后用蒸馏水定容。
贴好标签保存于冰箱中。
激素母液配制:每种激素必须单独配制成母液,浓度为0.1mg/ml,0.5mg/ml,1.0mg/ml,激素浓度的表示方法多种,ppm(mg/L)、mol/L、mg/ml,用时根据需要取用。
由于多数激素难溶于水,它们的配法如下:生长素类: IAA,IBA, 2,4-D用适量无水乙醇或1M NaOH 彻底溶解后,再缓慢加入水定容到一定浓度。
α-NAA可用1M NaOH彻底溶解后,再加水定溶到一定浓度。
细胞分裂素类:KT和6-BA先溶于少量1M NaOH中,再加水定容。
反式玉米素先溶于适量1M NaOH中,再加水至一定浓度。
赤霉素类:GA3先溶于适量无水乙醇中,再加水定容到一定浓度。
培养基的配制过程1.材料准备:配制培养基需要准备一系列的材料,包括溶液、固体成分和试剂。
常见的溶液成分有蛋白胨、蔗糖、葡萄糖、酵母提取物等。
固体成分通常包括琼脂、琼脂糖或者琼脂葡萄糖。
试剂则包括酸碱试剂、染色剂等。
2.秤重和称量:根据配方,使用准确的天平将所需的材料进行称量。
确保称量的准确性,以避免配制出来的培养基浓度不合适。
3.溶解固体成分:将固体成分加入适量的蒸馏水中,并通过搅拌等方法将其充分溶解。
4.调整pH值:测定溶液的pH值,并根据实验需求进行调整。
通常使用盐酸或氢氧化钠进行酸碱调节。
5.添加其他成分:根据实验需求,将其他需要的溶液成分添加到培养基中。
比如,添加抗生素、试剂等。
6.蒸馏水补足体积:根据所需体积,使用蒸馏水补足培养基的总体积。
在此过程中,需使用一种无菌的容器。
7.烧瓶或培养皿灭菌:将配制好的培养基倒入烧瓶或培养皿中,并进行灭菌处理。
灭菌的方法包括高压灭菌器、滤过消毒器、微波炉等。
8.装瓶和标记:将灭菌好的培养基倒入培养瓶中,并进行标记。
标记应包括培养基的配制日期、配方、pH值等重要信息。
在配制培养基的过程中,需要注意以下几个关键点:1.保持无菌:在配制培养基的过程中,需要使用无菌的材料和操作台,以避免杂菌的污染。
同时,注意避免培养基与外界环境接触,以防止污染。
2.准确称量:为了确保培养基的配制浓度准确,需要使用准确的天平进行称量。
避免因称量不准确而导致培养基浓度上下起伏,影响到微生物的生长。
3.pH值调节:培养基的pH值对微生物的生长有重要影响,因此在配制培养基时,需要测定pH值,并根据实验需求进行调节。
4.灭菌处理:在配制好的培养基倒入培养瓶中之前,必须进行灭菌处理,以杀灭可能存在的微生物。
灭菌方法有多种,可以根据实验需求和设备条件选择适当的灭菌方法。
总结起来,培养基的配制过程需要准备材料、秤重和称量、溶解固体成分、调整pH值、补足体积、灭菌处理、装瓶和标记等步骤。
在配制过程中需要注意无菌、准确称量、pH值调节和灭菌处理等关键点。
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备:首先,需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外,还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂:按照配方中的比例,准确地称取所需的试剂。
在称量过程中,应注意保持实验环境的清洁,并使用洁净的称量工具,以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂:将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中,可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后,应检查溶液的透明度和均匀性,确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值:根据具体的培养基配方,使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液,并经过搅拌均匀,逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中,应注意避免过度调节,以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒:将配制好的培养基加热至沸腾,保持沸腾状态持续5-10分钟,以达到消毒的目的。
在加热过程中,应注意避免溢出和烧焦,同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却:将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度,通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中,应避免引入环境中的微生物污染,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存:将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中,并密封保存。
在分装过程中,要注意避免试剂接触到外界空气,以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁,操作过程要注意无菌操作,以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中,应准确称取试剂的质量,并按照配方中的比例进行配比,以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时,应充分搅拌均匀,确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时,应注意控制加热时间和温度,以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中,要避免污染和细菌的侵入,可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行,并尽快密封保存,避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
常见培养基的配制操作方法和注意事项一、培养基的配制方法:1.准备所需材料:培养基主要由基础成分和添加剂组成,根据不同需求,可以选择不同的成分配制培养基。
常见的基础成分包括碳源、氮源、矿物质盐和特定生长因子等,添加剂包括琼脂、酵母浸泡液等。
2.称量和溶解:根据配方比例,准确称量各个成分并分别溶解在适量的蒸馏水中,可以加温以加快溶解速度。
3.调整pH值:通常需要调整培养基的pH值,使用盐酸或氢氧化钠等酸碱调节剂,逐滴加入直至达到指定的pH值,一般为7.0-7.44.加入琼脂:在溶解各个成分的培养基溶液冷却至约50℃时,加入适量的琼脂,并充分搅拌溶解。
最后通过高温高压灭菌,使培养基凝固。
二、培养基配制的注意事项:1.材料和器皿的消毒:操作前需预先进行灭菌处理,如使用高温高压灭菌器、自闭式消毒法或紫外线照射等方法,以确保培养基的无菌性。
2.避免污染:在操作过程中应尽量避免培养基的污染,如使用干净的器皿和工具,并注意操作环境卫生。
3.精确称量:根据配方比例准确称量各个成分,尤其是微量元素等特定剂量的添加剂。
4.pH值调节:在调整培养基的pH值时,应逐滴添加酸碱调节剂,并反复检测和调整,以确保达到设定的pH值。
5.良好的溶解和混合:搅拌培养基溶液时应充分混合,以确保各个成分均匀分布。
6.温度控制:培养基配制过程中需要注意温度控制,避免溶液过热或过冷,影响琼脂的溶解或培养基的凝固。
7.灭菌处理:配制好的培养基需要通过高温高压灭菌或过滤灭菌进行处理,以保证培养基的无菌性。
8.存储条件:灭菌后的培养基应放置在低温、干燥和避光的环境中保存,并注意严格控制培养基的有效期。
总结:培养基的配制方法包括准备材料、称量和溶解、调整pH值、加入琼脂和灭菌处理等步骤。
在操作过程中需要注意材料和器皿的消毒、避免污染、精确称量、pH值调节、良好的溶解和混合、温度控制、灭菌处理和存储条件等方面的注意事项。
通过严格控制操作环境和工艺要求,可以确保培养基的质量和无菌性。
培养基配方及配置
一般来说,培养基的配方包含基础培养基、添加剂和调节剂。
基础培养基是指提供生物体基本生长必需的基本成分,包括能源物质、有机和无机原料、氮源、矿质元素和缓冲物质等。
常用的基础培养基有
LB培养基、MS培养基等。
添加剂是指用于满足特定实验需求的成分,如抗生素、抗菌剂、激素、维生素等。
添加剂的种类和浓度根据实验目的的不同而有所差异。
调节剂是指用于调节培养基pH值、渗透压、表面张力等物理化学性
质的成分,如缓冲液、pH调节剂等。
以下是一个常用的细菌培养基LB的配方及配置:
1.基础培养基成分:
- 水:900ml
-蛋白胨:10g
-酵母提取物:5g
-NaCl:5g
2.添加剂:(可根据实验需求进行必要的添加)
- 抗生素(如氨苄青霉素):100μg/ml
- 抗菌剂(如氯霉素):25μg/ml
3.配制方法:
-将蛋白胨、酵母提取物和NaCl加入水中,并搅拌混合均匀。
- 将培养基溶液倒入容量瓶中,加水至1000ml,并混合均匀。
-调节pH值至7.0-7.2(一般使用缓冲液进行调节)。
-用自制滤纸过滤器滤过,将溶液分装至培养皿或试管中。
-如需添加抗生素或抗菌剂,将相应的药物加入培养基中,并充分溶解。
-培养基装瓶后可以高温高压灭菌,或使用滤器过滤进行无菌处理。
以上是一个简单的LB培养基的配方和配置流程,不同实验需要可能
会有所调整和变化。
在设计培养基配方时,需要结合具体实验目的和生物
体的特性来确定合适的成分和浓度,并注意配制和保管过程中的无菌操作,以确保培养基的质量和有效性。
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质,能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件,因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方:-蛋白胨或复合氮源:10g-酵母浸出物:5g-葡萄糖:1g-NaCl:5g-K2HPO4:2g-MgSO4:0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方:-牛心提取物:3g-高级琼脂糖:15g-葡萄糖:10g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方:-玉米浸出物:4g-高级琼脂糖:15g-酵母浸出物:1g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方:-液体LB培养基:10mL-高级琼脂糖:15g-NaCl:5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方:-羊血:50mL-肉浸出物:3g-酵母浸出物:3g-肉汤培养基:1L-红细胞素:5g-高级琼脂糖:3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方:-肉浸出物:5g-酵母浸出物:5g-NaCl:5g-蒸馏水:900mL- 加入0.1%的L-cysteine:10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项:-培养基中的成分应严格按照配方比例加入,并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感,需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整,一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中,避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方,不同的微生物有不同的需求,可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中,还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
培养基的配制方法培养基是微生物学、生物学等实验中将微生物培养的一种物质基质,它提供了微生物生长所必需的营养和环境条件。
培养基的配制方法主要包括选择基质、添加营养成分、调节pH值、灭菌和包装等步骤。
以下是一般的培养基配制方法及注意事项。
1.选择基质培养基的基质可以选择为水或含有必要营养成分的溶液。
一般情况下,使用蒸馏水或双蒸馏水作为基质是比较常见的选择。
2.添加营养成分培养基中必须添加适当的营养成分,以满足微生物的生长需求。
常用的营养成分有碳源、氮源、无机盐、维生素和生长因子等。
常用的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等,常用的氮源有氨基酸、酵母浸出物、肉浸出物等。
此外,还可以根据微生物的特殊要求增加一些其他的营养成分。
3.调节pH值pH值对于微生物的生长十分重要,大多数微生物的最适生长pH在6.5-7.5之间。
因此,培养基在配制过程中需要进行pH值的调节。
可以使用酸碱溶液(如HCl和NaOH)进行pH调节,并通过使用pH试纸或pH计监测pH值。
4.灭菌培养基的灭菌工作非常重要,它可以防止杂菌的污染。
常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌和滤过灭菌等。
高压灭菌是指将配制好的培养基放置在高压锅中,经过高温高压的处理。
干热灭菌是将配制好的培养基放置在烘箱中进行加热处理。
滤过灭菌是将培养基通过0.22um的无菌滤膜过滤,以去除微生物。
灭菌后,需要用无菌操作将培养基倒装入无菌培养器皿中。
5.包装灭菌后的培养基需要进行包装保存,以防止污染。
常用的包装方式有试管包装、琼脂平板包装和瓶装包装等。
试管包装是将培养基倒入试管中,用苏打棒打破试管口,并通过注封的方法密封试管。
琼脂平板包装是将培养基倒入无菌琼脂平板中,并使用无菌的平板封口膜密封。
瓶装包装是将培养基倒入无菌玻璃瓶中,用无菌胶塞封闭瓶口。
在配制培养基的过程中,还需要注意以下几点:1.保持操作环境无菌,使用无菌操作台、无菌器具和无菌操作方法。
2.注意各种添加物的浓度,不可过量或过少。
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法:1. LB培养基(Luria-Bertani)LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基,其配方包括:- 1% 蛋白胨(tryptone): 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉(yeast extract): 提供维生素和生长因子-1%NaCl(氯化钠):调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基(Yeast extract-Peptone-Dextrose)YPD培养基常用于酵母菌的培养,其配方包括:- 1% 酵母提取物(yeast extract): 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨(peptone): 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖(dextrose): 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中,调整pH至7.0,将混合液体加热至溶解,过滤杂质,如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基,其配方包括:-10%胎牛血清(FBS):提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液(Penicillin-Streptomycin Solution): 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺(L-Glutamine): 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法:将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中,调整pH值至7.4,混合均匀即可。
培养基的配制方法培养基的配制方法是在实验室中作为微生物培养的基础,可以提供适当的营养物质和环境条件来促进微生物的生长和繁殖。
正确的配制培养基是进行微生物实验和研究的关键步骤之一。
下面将详细介绍培养基的配制方法。
1. 准备配制培养基所需的原料和仪器:- 食品级蛋白胨粉或胨蛋白水解物:提供微生物所需的氨基酸和营养物质。
- 食品级琼脂:用于凝固培养基。
- 蔗糖或葡萄糖:提供微生物的碳源。
- 盐:提供微生物生长所需的必需离子,如钠、钾、镁等。
- pH试纸或pH计:用于调节培养基的酸碱度。
- 常温和高温灭菌器:用于灭菌培养基。
- 烧杯、容器、磁力搅拌器和称量仪器:用于容器和搅拌培养基。
2. 测量和称量:- 根据所需的培养基成分和浓度,测量所需的蛋白胨量、琼脂量、蔗糖或葡萄糖量以及盐的量。
- 将测量好的原料放入烧杯中。
3. 加入适量的水:- 加入适量的去离子水或纯净水,将配方溶解。
4. 调节酸碱度:- 使用pH试纸或pH计来检测培养基的酸碱度。
- 如果需要调节酸碱度,则可以使用盐酸或氢氧化钠等脆性酸碱溶液加入培养基中以达到目标pH值。
5. 搅拌混合:- 将培养基溶液放入磁力搅拌器中。
- 开启搅拌器并搅拌溶液直到完全混合。
6. 灭菌:- 将配制好的培养基倒入适当容器中,如烧杯或琼脂培养皿。
- 对于常见的液体培养基,使用常温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌20-30分钟。
- 对于琼脂培养基,使用高温灭菌器在121摄氏度下高压灭菌15-20分钟。
7. 倒盖和保存:- 等待培养基凝固后,盖上并标记培养基的名称、配方和配制日期。
- 将培养基保存在冰箱中或冷藏库中,在4摄氏度下保存。
总结一下,培养基的配制方法包括准备原料和仪器,测量和称量原料,加入适量的水,调节酸碱度,搅拌混合,灭菌和保存。
注意对于不同的微生物,培养基的配方可能会有所不同,需要根据具体的实验目的和需求进行调整。
正确配制培养基对于获得准确的微生物培养结果至关重要。
常用培养基配制方法:(1)基础盐培养基(MSM):(NH4)2SO42.0g,MgSO4·7H2O0.2g,CaCl2·2H2O 0.01g,FeSO4·7H2O0.001g,Na2HPO4·12H2O1.5g,KH2PO41.5g,蒸馏水1000 mL。
(2)LB培养基:蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠5g,蒸馏水1000 mL,pH7.5。
(3)高氏合成1号培养基:硝酸钾1g,磷酸氢二钾0.5g,硫酸镁0.5g,氯化钠0.5g,硫酸亚铁0.01g,可溶性淀粉20g,蒸馏水1000mL。
(4)查彼氏培养基:硝酸钠2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,蒸馏水1000mL。
(5)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20 g,蒸馏水1000mL。
将无病马铃薯洗净去皮切碎,加蒸馏水1000mL,煮沸0.5 h,纱布过滤,滤液加蒸馏水补足1000mL,再加入葡萄糖,然后分装三角瓶灭菌备用。
(6)铵察氏琼脂培养基:氯化铵2g,氯化钾0.5g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾1g,硫酸亚铁0.01g,蔗糖30g,蛋白胨0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000 mL。
(7)克氏合成1号琼脂培养基:磷酸氢二钾1g,碳酸镁0.3g,氯化钠0.2 g,硝酸钾1g,硫酸亚铁0.01g,碳酸钙0.5g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(8)葡萄糖天门冬素琼脂培养基:葡萄糖10g,天门冬素0.5g,磷酸氢二钾0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(9)葡萄糖酵母膏琼脂培养基:葡萄糖10g,酵母膏10g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(10)瓦氏肉汁琼脂培养基:蛋白胨5g,葡萄糖10g,牛肉膏10g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
(11)淀粉琼脂培养基:可溶性淀粉10g,碳酸镁1g,磷酸氢二钾0.3g,氯化钠0.5g,硝酸钠1g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。
常用培养基配方范文培养基配方是微生物学研究的基础,它们提供了养分和条件,促进微生物的生长和繁殖。
常用培养基配方有多种,以下是几个常用的配方范文。
一、莱文斯坦-鲍德尔培养基(Luria-Bertani agar)配方:成分:1.蛋白胨:10克2.酵母提取物:5克3.食盐:10克4.琼脂:15克5.蒸馏水:1000毫升6.高氯酸钠(0.1M):2毫升(pH7.2)制备方法:1.将蛋白胨、酵母提取物和食盐加入蒸馏水中,加热至溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀,再加入高氯酸钠调节pH值。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.琼脂的煮沸时间通常为15~20分钟。
二、营养琼脂培养基(Nutrient agar)配方:成分:1.蛋白胨:5克2.细胞色素:1克3.维生素B1:0.1克4.卵黄:10克5.食盐:5克6.琼脂:15克7.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、细胞色素、维生素B1、卵黄和食盐加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.煮沸时间可根据需要适当延长,但不要超过20分钟。
三、马尿素琼脂培养基(MacConkey agar)配方:成分:1.蛋白胨:17克2.硼砂:1.5克3.细胞色素:2.5克4.氯化钠:5克5.水合甲基红:0.03克6.钴绿:0.015克7.红绿二色砂:0.15克8.琼脂:13.5克9.蒸馏水:1000毫升制备方法:1.将蛋白胨、硼砂、细胞色素、氯化钠、水合甲基红、钴绿和红绿二色砂加入蒸馏水中并加热溶解。
2.加入琼脂并搅拌均匀。
3.煮沸1~2分钟,然后分装入培养皿中。
注意事项:1.注意消毒操作,以防止污染。
2.此培养基适用于选择肠道革兰氏阴性杆菌。
以上是常用的几个培养基配方范文,供参考使用。
在制备培养基时,需要注意消毒操作,以防止污染。
另外,不同微生物对培养基的要求也有所不同,可以根据实际需要进行配方的修改和优化。
培养基配制方法
培养基的配制方法是根据不同微生物的生长要求来确定的。
下面是一般的培养基配制方法:
1. 准备所需成分:根据所需的培养基成分,准备好相应的化学品和试剂,如氨基酸、糖类、盐类、维生素等。
2. 称量和溶解:按照配方中各成分的比例和浓度,称取相应的化学品,并加入适量的蒸馏水或去离子水中溶解。
3. 调节pH 值:使用pH 仪或pH 纸检测溶液的pH 值,并根据需要,用盐酸或氢氧化钠等酸碱溶液调节pH 值,使其符合要求。
4. 加热和消毒:将配制好的培养基溶液倒入试管、烧杯等容器中,并加热至沸腾,持续煮沸几分钟以杀灭其中的微生物。
5. 经冷却和灭菌:将煮沸后的培养基放置自然冷却至室温,并使用高压灭菌器或培养器进行灭菌处理,以确保培养基的无菌性。
6. 添加营养补充物:在无菌培养基冷却后,根据需要可以添加营养补充物,如血清、酵母提取物等,以满足特定微生物的生长需求。
7. 盛装分装:将配制好的培养基倒入无菌试管、琼脂瓶或平板上,根据需要冷却凝固成固体或保持为液体状态。
8. 贮存和标签:将分装好的培养基密封保存在低温冰箱或冷库中,并在容器上贴上标签,注明培养基的名称、配方、pH 值和贮存日期等信息。
以上是一般培养基的配制方法,不同类型的培养基可能还有其他特殊的步骤和要求。
在配制过程中要注意无菌操作,以确保培养基的纯净度。
实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基种类繁多,每一种培养基的配方也各有不同。
下面将介绍几种常见的培养基的配制方法。
1. Luria-Bertani (LB) 培养基:LB培养基通常用于大肠杆菌等细菌的培养。
其主要成分包括蛋白胨、酵母浸膏和食盐。
下面是LB培养基的配制方法:-将10克蛋白胨、10克酵母浸膏和10克食盐加入到1升蒸馏水中。
-用玻璃棒搅拌溶解,然后倒入培养瓶中。
-使用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
2.孟德尔培养基:孟德尔培养基常用于植物细胞培养。
其主要成分包括盐类、碳源和维生素。
下面是孟德尔培养基的配制方法:-将所需的盐类(例如硫酸镁、硝酸钾)按照指定比例称量,并加入到1升蒸馏水中。
-添加适量的碳源(例如葡萄糖或蔗糖)以提供能量。
-加入维生素溶液,通常可以购买到已配制好的维生素混合液。
-搅拌溶解后,用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
3.YPD培养基:YPD培养基可以用于酵母菌的培养。
其主要成分包括酵母提取物、葡萄糖和酵母浸膏。
下面是YPD培养基的配制方法:-将10克酵母提取物、20克葡萄糖和20克酵母浸膏加入到1升蒸馏水中。
-使用玻璃棒搅拌溶解,然后倒入培养瓶中。
-使用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
4. Brain Heart Infusion (BHI) 培养基:BHI培养基可以用于细菌和真菌的培养。
其主要成分包括脑提取物、心脏提取物、肉浸膏和葡萄糖。
-将37克BHI粉末加入到1升蒸馏水中。
-使用玻璃棒搅拌溶解,然后倒入培养瓶中。
-使用自动压力灭菌器或高压灭菌锅将培养基置于121摄氏度下高压下灭菌20分钟。
-灭菌后,培养基冷却至室温后即可使用。
培养基配方及配制方法一、培养基配方常用的培养基是复合培养基,包含有机成分和无机成分两部分。
其中,有机成分提供微生物所需的碳源、氮源和能源等,无机成分提供微生物所需的无机盐和微量元素等。
以下是一个典型的复合培养基配方:有机成分:1.蛋白胨:提供氮源和碳源;2.葡萄糖:提供碳源和能源;3.酵母提取物:提供维生素和微量元素。
无机成分:1.磷酸盐缓冲液:提供pH缓冲效果;2.硝酸盐:提供氮源和无机盐;3.氯化钠:提供无机盐;4.磷酸氢二钾:提供缓冲效果和无机盐;5.硫酸镁:提供镁离子。
二、培养基配制方法1.准备容器:使用无菌烧瓶、试管、培养皿等容器,并用高压蒸汽灭菌器进行灭菌处理。
2.称量成分:按照配方中的比例,准确称量有机成分和无机成分。
3.溶解有机成分:将蛋白胨、葡萄糖和酵母提取物分别加入适量的蒸馏水中,通过搅拌或加热溶解均匀。
4.准备无机成分溶液:将磷酸盐缓冲液、硝酸盐、氯化钠、磷酸氢二钾和硫酸镁按照配方中的比例加入适量的蒸馏水中,通过搅拌溶解均匀。
5.校正pH值:使用pH计测定培养基的pH值,如有需要,可以用盐酸或氢氧化钠调节pH值至合适的范围。
6.加入蛋白胨溶液:将溶解好的蛋白胨溶液加入无机成分溶液中,并通过搅拌均匀。
7.加入葡萄糖溶液:将溶解好的葡萄糖溶液加入已配制好的培养基中,并通过搅拌均匀。
8.加入酵母提取物:将酵母提取物溶液加入培养基中,并通过搅拌均匀。
9.调节体积:根据实验需要,可以添加蒸馏水或其他添加剂来调节培养基的体积和浓度。
10.灭菌处理:将配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌处理,保证培养基的无菌状态。
以上就是一个典型的培养基配方及配制方法的示例,只是其中的一个例子,不同的微生物可能需要不同的培养基配方和配制方法。
在实验中,根据具体的需求调整培养基的配方,确保能满足微生物的生长需求,并通过灭菌处理保证培养基的无菌状态。
146种常见培养基的配方培养基是微生物学实验中常用的一种重要实验工具,通过调配合适的培养基,可以提供微生物生长所需的营养物质,从而促进微生物菌落的繁殖和生长。
下面将介绍一些常见的培养基配方,涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
1.琼脂肉汤培养基(NB)-牛肉脱脂粉5g-酵母提取物2.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml2.大肠杆菌复合培养基(LB)-液体培养基-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g- 蒸馏水 1000ml-琼脂板-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml3. 肠杆菌选择性琼脂培养基(MacConkey琼脂培养基)-蛋白胨17g-紫胆汁盐1.5g-普鲁士蓝盐1.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml4. 脱氧胆盐琼脂培养基(Deoxycholate Agar)-脱氧胆酸钠20g-普鲁士蓝盐0.8g-蛋白胨7.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml5.阿米巴选择性琼脂培养基(KV培养基)- 鸡蛋清 20ml- 中性红溶液 12ml-NaCl0.5g-纤维素0.25g- 盐酸 1ml-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml6. 革兰氏阳性菌选择性琼脂培养基(Mannitol Salt Agar)-蔗糖10g-氯化钠75g-酵母提取物5g-麦芽提取物1g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml7. 维生素富集琼脂培养基(Burkholder's Basal Salt Medium)-NaNO31g-KCl0.5g-MgSO4·7H2O0.2g-CaCl2·2H2O0.02g-FeSO4·7H2O0.01g-琼脂14g- 蒸馏水 1000ml8. 三氯化铁琼脂培养基(Cetrimide Agar)-硫酸镁0.8g-氯化钴0.05g-氯化锌0.01g-氯化亚铁0.03g-三氯化铁0.03g-比色琼脂糖15g- 过滤蒸馏水 1000ml9. 库氏四甲基铵琼脂培养基(Chapman Agar)-高氯酸钠5g-脲7.5g-酵母提取物2g-海藻酸钠20g-紫胆汁盐0.25g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml10. 还原格兰氏琼脂培养基(Reduced Gram-negative Broth)-蛋氨酸0.5g-异亮氨酸0.5g-半胱氨酸0.5g-菜碱0.5g-胀氨酸0.5g-琼脂7g- 蒸馏水 1000ml这些是其中的一部分常见的培养基配方,涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
培养基的配制
培养基是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分
配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺,服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散
淀粉溶解:少量的冷水进粘贴
琼脂融化温度为95-97℃,加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值
用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤
滤纸或棉。
(有时可以省略)
5. 分装
一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶
静态培养时,100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml
否则,在灭菌过程中,培养基的煮沸极易污染棉塞,造成细菌污染;
如果进行瓶培养,15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装
液体培养基通常填充4-5ml,约为试管高度的1 / 4;
一般固体斜培养基为3-4ml,约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎
包装完毕后,塞好棉塞,用牛皮纸包好棉塞,防止灭菌时湿气进入,弄湿棉塞。
7. 灭菌
高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高,营养成分就会被破坏
培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜
灭菌后,需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置,使其固化成一个斜坡,约占试管长度的1 / 2。
9. 存储
中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好,置于2-8℃冰箱中保存。