酱油中苯甲酸和山梨酸含量测定
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实验十七、酱油中山梨酸、苯甲酸的测定1、目的与要求掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。
2、原理样品中的苯甲酸在酸性条件下蒸馏,馏出液剧烈氧化除去杂质,再次蒸馏后,所得苯甲酸在220nm处有最大吸收,它的吸光度与浓度的关系符合比尔定律,因此可以据此定量测定。
同时山梨酸在酸性条件下也能随水蒸汽一起蒸馏出来,可在酸性溶液中,用蒸汽蒸馏的方法将样品中的山梨酸蒸馏出来,并除去非挥发性的干扰物质。
山梨酸在弱氧化条件下氧化成丙二醛,再与硫代巴比妥酸反应,生成红色的化合物。
其颜色的深浅与山梨酸含量成正比,可以比色测定之。
3、仪器与试剂3.1 仪器3.1.1 蒸馏设备。
3.1.2 紫外可见分光光度计。
3.2 试剂3.2.1 无水硫酸钠。
3.2.2 85%正磷酸。
3.2.3 0.034mol/L重铬酸钾溶液:溶解4.9g重铬酸钾于水中,稀释到500mL。
3.2.4 2mol/L硫酸溶液:稀释66.5mL浓硫酸至500mL。
3.2.5 氢氧化钠溶液:1mol/L、0.1mol/L、0.01mol/L。
3.2.6 0.5%重铬酸钾溶液。
3.2.7 0.5%硫代巴比妥酸溶液:称取硫代巴比妥酸0.5g,加入20mL水,再加1mol/L 氢氧化钠溶液10mL,用玻璃棒搅拌使之溶解,然后加入1mol/L盐酸11mL,用水稀释至100mL,摇匀。
3.2.8 0.15mol/L硫酸:取浓硫酸1mL加入到100mL水中,并用用水稀释至120mL。
3.2.9 山梨酸标准溶液:精密称取在105℃干燥至恒量的山梨酸0.0500g用0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶解后,移入500mL容量瓶中,加0.1mol/L 氢氧化钠溶液至刻度,摇匀,每毫升含山梨酸100μg。
临用时取1mL置于50mL容量瓶中,加入0.01mol/L氢氧化钠溶液到刻度,摇匀,每毫升含山梨酸2μg。
3.2.10 苯甲酸标准溶液:准确称量经过干燥的苯钾酸0.1000g,溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中,以水定容至1000mL,每毫升溶液相当于苯甲酸0.1mg。
实验9.3 食品中防腐剂苯甲酸(钠和山梨酸(钾的测定薄层色谱法一、实验目的掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。
学会制备聚酰胺薄层板。
二、仪器吹风机层析缸玻璃板10 ×18cm 玻璃板50×80 cm 微量注射器10μL喷雾器三、试剂与试样聚酰胺粉200目乙醚可溶淀粉无水硫酸钠盐酸溶液6mol ? L-14%氯化钠酸性溶液于4%氯化风俗溶液中加入少量mol ? L-1 盐酸溶液展开剂:(1 正丁醇:氨水:无水乙醇=7:1:2(2异丙醇:氨水:无水乙醇=7:1:2显色剂:0.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液用0.1mol ? L-1氢氧化钠调至PH=8苯甲酸标准溶液:精密称取苯甲酸0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于2mg苯甲酸。
山梨酸标准溶液:精密称取山梨酸0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于2mg 山梨酸试样酱油、水果汁、果酱等四、实验步骤1、试样提取—试样溶液的制备称取 2.5g 混合均匀的试样,置于25mL 带塞量筒中,加0.5mL , 6 mol? L-1盐酸酸化,用乙醚提取两次(15mL 、10mL 每次振摇1min , 将上层乙醚提取液吸入另一25mL 带塞量筒中, 合并乙醚提取液。
用3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次,静置15min ,乙醚层通过无水硫酸钠脱水后过滤于25mL 容量瓶中。
加乙醚稀释至刻度, 摇匀。
吸取10.00mL 乙醚提取液分两次置于10mL 离心管中, 在约40℃水浴上除去乙醚, 加入0.1mL 乙醇溶解残渣,制成试样测定液备用。
2、聚酰胺粉板的制备称取 1.6g 聚酰胺粉,加4g 可溶性淀粉,加15mL 水,研磨3~5min,使其均匀即可涂10×18cm 厚度0.3mm 的薄层板两块。
涂好的薄层板置于水平大玻璃板上, 于室温干燥后, 于80℃ 干燥1h 取出,置于干燥器中保存。
食品中苯甲酸和山梨酸的检测摘要:近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。
食品安全已越来越引起广大消费者的密切关注和担忧。
目前我国每年食物中毒报告例数约2万人,但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。
食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康,还涉及相关企业的经济效益和市场空间,关系到整个食品行业的发展。
苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。
如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠,将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用,其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。
特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言,苯甲酸和苯甲酸钠的摄食是不适合的嘲。
另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。
在体外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。
苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的报道,在使用上有争议,虽仍为各国允许使用,但应用范围愈来愈窄。
日本的进口食品中就限制使用,甚至部分禁止使用,日本已停止生产。
但因价值低廉,在中国仍作为主要防腐剂使用。
山梨酸具有较低的毒性,是迄今为止国际公认的最好的防腐剂,已经成为了西方发达国家的主流防腐剂。
但事实上,现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。
由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。
1防腐剂的检测在食品工业中,作为防腐剂,不能影响人体正常的生理功能,一般说来,在正常规定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。
因此,食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。
目前,测定防腐剂的方法主要有:薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等1.1苯甲酸和山梨酸各种检测方法1.1.1高效薄层色谱法和高效液相色谱法M.Thomassin等人曾经采用高效薄层色谱法和高效液相色谱法对尼泊金酯类作过检测,实验发现高效薄层色谱法的相对标准偏差要大于高效液相色谱法,但是高效薄层色谱法对于尼泊金酯类的定量就更为快速。
HPLC法测定酱油中苯甲酸、山梨酸的含量及六省酱油样品测定结果分析张国跃;乔蓉霞;齐化元【摘要】目的:建立HPLC法测定酱油中苯甲酸、山梨酸含量的方法,分析各省添加状况.方法:采用HPLC法测定酱油中苯甲酸、山梨酸的含量.色谱柱:C18250mm×4.6mm,5-10μm;流动相:甲醇:0.02mol/L乙酸铵溶液(5:95);流速:1.0mL/min.结果:苯甲酸、山梨酸进样量分别在0.20396-3.50947μg和0.2-3.0μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系.回归方程分别为Y=3E+06X-80251,r=1;Y=5E+06X-158903,r=1;苯甲酸平均回收率为98.31%,RDS=1.43%;山梨酸平均回收率为90.26%,RDS=2.82%.结论:该测定方法简单、快速、准确,适用于大批量样品的快速分析;六省酱油中均存在不同程度添加苯甲酸、山梨酸的情况.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2011(001)008【总页数】3页(P37-38,40)【关键词】HPLC法;酱油;苯甲酸;山梨酸【作者】张国跃;乔蓉霞;齐化元【作者单位】陕西省食品药品检验所,陕西,西安,710061;陕西省食品药品检验所,陕西,西安,710061;陕西省卫生监督所,陕西,西安,710054【正文语种】中文【中图分类】R155.5酱油是我国使用最广的调味品之一,由于酱油营养丰富,适于微生物生长繁殖,为了防止酱油腐败变质,保持酱油的鲜度和良好的品质,酱油中一般都会添加防腐剂苯甲酸、山梨酸。
随着现代食品工业的发展,食品添加剂的超量和超范围使用现象十分严重,对食品添加剂的检测也越来越受到人们的重视。
本实验用高效液相色谱法同时测定酱油中苯甲酸、山梨酸的含量,方法简便、快捷,适用于大批量样品的快速检测。
本次试验共收集到六个省份共计180批样品(每省30批),测定结果表明,六个省份酱油中均有不同程度添加苯甲酸、山梨酸的情况。
高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量摘要:【目的】用高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。
柱(150× mm,5μm,phenomenex)为色谱柱;【方法】以Hyperclone BDS C18检测波长215~230nm,进样量10μL,流动相:甲醇:L?乙酸铵(35:65),流量min,柱温30℃【结果】:食醋中的苯甲酸钠含量为mol,酱油中的苯甲酸钠含量为mol,未见则出山梨酸钾。
【结论】:高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点,所以数据准确,用外标法计算结果操作简单,计算方便,得出样品中苯甲酸钠的含量。
关键词:高效液相色谱法外标法苯甲酸钠山梨酸钾一、前言苯甲酸钠,化学式:C6H5O2Na,是苯甲酸的钠盐,苯甲酸钠是很常用的防腐剂,有防止变质,延长保质期的效果。
山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾,是山梨酸的钾盐,也是防腐剂。
本实验采用高效液相色谱法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定,方法简便快速,实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。
苯甲酸结构式:山梨酸钾结构式:二、实验目的和实验原理.实验目的:(1)了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理,以及初步掌握其操作技能;(2)学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线定量方法;(3)掌握RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的测定方法;.实验原理:将样品加热去除其中的二氧化碳和乙醇,用(1+1)氨水调pH值近中性,过滤后进高效液相色谱仪,进行反相色谱C18柱分离后,根据保留时间和峰面积进行定性定量分析。
三、仪器与试剂及试剂处理. 仪器:高效液相色谱仪【高压输液泵LC-6A,检测器SPD-10A,保温箱CPD-10AS,进样阀7725I】;电子天平;纯水仪;离心机;超声波清洗机。
.试剂:(1)色谱甲醇经滤膜μm过滤;(2)(1+1)氨水:氨水与水等体积混合;(3)乙酸铵溶液L:称取乙酸铵,加水溶解并定容至1000ml,经过(μm)过滤;(4)碳酸氢钠溶液20g/L:称取2g碳酸氢钠(优纯级),加水至100ml,振荡溶解;(5)苯甲酸钠标准储备液:准确称取苯甲酸钠,加碳酸氢钠溶液(20g/L)5ml,加热溶解,移入100ml容量瓶中,加水定容至刻度。
分析检测超高效液相色谱法测定调味酱中的苯甲酸和山梨酸+杨宇郝迪萩I黑龙江省农垦科学院测试化验中心M立了超高效液相色谱快速测定调味酱中苯甲酸、山梨酸的方法。
样品以亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质。
使用C18色谱柱,流动相为0.02m o l/L乙酸铵-甲醇(95:5, v/v),梯度洗脱,用二极管阵列检测器在波长240m n处检测,流速为0.35m L/m in。
结果表明,苯甲酸、山梨酸在5m in内可以很好的分离,加标回收率在96.00-99.30%之间,相对标准偏差(R S D)在0.53-1.39%之间。
该法简单、灵敏,适用于调味酱中苯甲酸和山梨酸的检测。
调味酱是我国人民日常生活中使用的产品,由于其中含有丰富的营养成分,在长期储存中极易变质,在大规模工业生产中,企业为防止其变质,会在其加工过程中常加入苯甲酸和山梨酸等防腐剂。
但是食用含有过量苯甲酸和山梨酸的食品会严重影响人体健康。
本实验的目的是建立一种超高效液相色谱法测定调味酱中的苯甲酸和山梨酸的方法,用于快速检测苯甲酸和山梨酸在调味酱中的含量°材料与方法材料与试剂。
苯甲酸标准品、山梨酸标准品:纯度99%;甲醇(色谱纯);乙酸按(色谱纯);超纯水;10%亚铁氰化钾;22%乙酸锌。
仪器与设备。
超高效液相色谱仪:Waters UPLC :配有紫外检测器;涡旋振荡器;高速冷冻离心机。
标准工作曲线H制。
准确称取0_1 g(精确至0.0001 g )苯甲酸和山梨酸标准品于100 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配成1.0mg/mL的标准储备液。
分别移取浓度为1.0m g/m L的苯甲酸和山梨酸标准储备液0.20m L、0.5m L、lm L、2m L、5m L,至lO O m L容量瓶中,用水稀释成浓度分另丨』为2.〇u g/m L、5.〇M g/m L、lO.O u g/m L、20.0 M g/m L、50.0 M g/m L的混合标准工作溶液。
实验一、酱油中苯甲酸的测定GB5009. 28 — 2016 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定一、实验目的1熟悉并能熟练使用高效液相色谱仪;2了解并掌握高效液相色谱法测定食品中的苯甲酸含量的方法与原理;二、仪器基本原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
三、仪器和试剂1.仪器:高效液相色谱仪-安捷伦1100、离心机(转速>8000r/min)、超声波水浴振荡器、旋涡混合器、PH计、分析天平(感量为0.001g和0.0001g)、水相微孔滤膜(0.22μm);2.试剂(除特别说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定一级水):氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌、甲醇(色谱纯)、乙酸铵(色谱纯)、苯甲酸钠(≥99%)3.试剂配制3.1氨水溶液( 1+99 ):取氨水 1mL ,加到 99mL 水中,混匀。
3.2亚铁氰化钾溶液( 92g / L ):称取 106g 亚铁氰化钾,加入适量水溶解,用水定容至 1000mL 。
3. 3 乙酸锌溶液( 183g / L ):称取 220g 乙酸锌溶于少量水中,加入 30 mL 冰乙酸,用水定容至 1000mL 。
3. 4 乙酸铵溶液( 20 mmol/ L ):称取 1.54g 乙酸铵,加入适量水溶解,用水定容至1000 mL,经0. 22 μ m 水相微孔滤膜过滤后备用。
3.5甲酸 - 乙酸铵溶液( 2mmol/ L 甲酸 +20mmol / L 乙酸铵):称取 1.54g 乙酸铵,加入适量水溶解,再加入75.2μL甲酸,用水定容至1000mL,经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。
高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量HPLC in soy sauce and vingar sodium benzoate potassium sorber content学生:XXXX 学号:XXXX 班级:XXXX 指导老师:XXXXXX摘要:[目的]用高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。
【方法】采用RP-HPLC法以Hyperclone BDS C18 柱(150×4.60 nm,5um,phenomenex)为色谱柱;流动相:甲醇:0.02mol/l 乙醇胺(20 :80);柱温25℃,流速0.8mol/min ,检测波长230nm,进样量(标准进样量:2.5 ,5 ,7.5 ,10 ,15 ul ;样品进样量:5 ul)。
【结果】:酱油中的苯甲酸钠含浓度为0.0794ug/ul;山梨酸钾为0.2798ug/ul;醋中未出现山梨酸钾、苯甲酸钠Abstract: [purpose] with high-performance liquid chromatography (HPLC) in soy sauce and vinegar and sodium benzoate sorbic acid potassium content.【methods 】the RP-HPLC method with Hyperclone BDS using C18 column (150 x 4.60 nm, 5 um, phenomenex) for chromatographic column; Mobile phase: methanol: 0.02 mol/l ethanol amine (20:80); The column temperature 25 ℃, velocity 0.8 mol/min, detected wavelength 230 nm, into the sample weight (standard sample quantity: 2.5, 5, 10, 15, 7.5; the samples into the sample weight ul: 5 ul). 【results 】:Sodium benzoate in soy sauce with theconcentration of 0.0794ug/ul was 0.2798ug/ul; potassium sorbate; sorbic acid potassium, no sodium benzoate in vinegar 结论:高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点,所以数据准确,用外标法计算结果操作简单,计算方便,得出样品中苯甲酸钠的含量。
酱油中苯甲酸和山梨酸含量测定摘要:目的:采用碱溶液反相萃取—高效液相色谱法(HPLC)测定酱油中苯甲酸和山梨酸。
方法:以国标萃取法为基础,再对其用碱溶液进行反萃取的方法,对酱油样品进行前处理,通过加内标物的方法提高实验的精确度。
结果:苯甲酸和山梨酸的线性回归相关指数都大于0.99、最小检出限(LOD)都低于0.1ppm,加标回收率皆大于84%,相对偏差皆小于16%。
结论:该方法灵敏、可靠,可用于酱油中苯甲酸和山梨酸的快速定量检测。
关键词:反相萃取;高效液相色谱法;酱油;苯甲酸;山梨酸酱油是我国传统的、富有特色的、使用最广的、味道鲜美的调味品,它赋予食品以适当的色、香、味,具有杀菌治病、调味之功用。
由于酱油营养丰富,适于微生物生长繁殖,而微生物又是到处不在无孔不入,所以细菌、霉菌和酵母之类微生物的侵袭通常是导致酱油败坏的主要因素。
为了保藏酱油,防止酱油腐败变质,保持酱油的鲜度和良好的品质,达到其对保质期的要求,酱油中一般都使用食品常用防腐剂—苯甲酸和山梨酸,但过多防腐剂会严重损害人体健康,国家对防腐剂的使用有严格限量规定,因而检测酱油中防腐剂的含量具有重要意义。
目前酱油中苯甲酸和山梨酸的测定方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法,其中高效液相色谱法因其仪器精确度高,在苯甲酸和山梨酸的检测中最常用。
对于酱油的前处理国标是对其先进行酸化,再通过乙醚进行萃取,除此之外还有其他诸多方法,如对粘度比较大的进行固相萃取、通过加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液沉淀蛋白质、脂肪并过滤后进行测定、还有就是本文所用的对国标处理后的样品进行碱溶液反相萃取。
这样可以大大的减少样品中的杂质,从而减少了杂质峰对高效液相色谱检测的影响。
另外本文所采用的内标法的处理方法是一个创新之举,避免了外标法测定时前处理萃取不完全以及其他处理过程带来的损失从而大大的提高了检测的准确度。
1 实验部分1.1 溶液配制乙酸铵溶液( 0. 02 mol /L) : 准确称取乙酸铵1. 542 g, 用水溶解, 定容至1 000 mL, 经0. 45Lm 膜过滤。
MMFSCNG0153 食品 山梨酸 苯甲酸 气相色谱法 高效液相色谱法 薄层色谱法MM_FS_CNG_0153食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法1.适用范围本方法适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸、苯甲酸含量的测定。
最低检出浓度:气相色谱法最低检出量为1μg,用于色谱分析的样品为1g 时,最低检出浓度为1mg/kg。
方法一:气相色谱法2.原理概要样品酸化后,用乙醚提取山梨酸、苯甲酸,用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量。
3.主要仪器和试剂3.1.主要试剂乙醚(不含过氧化物)、石油醚(沸程30~60℃)、盐酸、无水硫酸钠、盐酸(1+1)。
氯化钠酸性溶液(40g/L):于氯化钠溶液(40g/L)中加少量盐酸(1+1)酸化。
山梨酸、苯甲酸标准溶液:准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g,置于100mL 容量瓶中,用石油醚-乙醚(3+1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于2.0mg 山梨酸或苯甲酸。
山梨酸、苯甲酸标准使用液:吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液,以石油醚-乙醚(3+1)混合溶剂稀释至每毫升相当于50,100,150,200,250mg 山梨酸或苯甲酸。
3.2.仪器气相色谱仪:具有氢火焰离子化检测器。
4.过程简述4.1.样品提取称取2.50g 事先混合均匀的样品,置于25mL 带塞量筒中,加0.5mL 盐酸(1+1)酸化,用15,10mL 乙醚提取两次,每次振摇1min,将上层乙醚提取液吸入另一个25mL 带塞量筒中。
合并乙醚提取液。
用3mL 氯化钠酸性溶液(40g/L)洗涤两次,静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL 容量瓶中。
加乙醚至刻度,混匀。
准确吸取5mL 乙醚提取液于5mL 带塞刻度试管中,置40℃水浴上挥干,加入2mL 石油醚-乙醚(3+1)混合溶剂溶解残渣,备用。
4.2.色谱参考条件色谱柱:玻璃柱,内径3mm,长2m,内装涂以5%(m /m ) DEGS+1%(m /m ) H 3PO 4固定液的60~80目Chromosorb WAW。
食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的测定专业:食品科学与工程教育姓名:蒋翠莲学号:20105494 指导老师:白绮摘要:[目的]用高效液相色谱法测酱油和食醋中山梨酸钾和苯甲酸钠的含量。
【方法】采用RP-HPLC法以C-18不锈钢柱(150mm)为色谱柱;流动相:甲醇:乙酸铵溶液(0.02mol/L)=5:95;柱温30℃;流速1.0mol/min ;检测波长230nm;进样量(标准进样量:2.5 ,5 ,7.5 ,10 ,15 ,20ul;样品进样量:5 ul)。
【结果】酱油中的山梨酸钾含浓度为0.069mg/ml;苯甲酸钠为0.0146mg/ml;醋中的山梨酸钾为0.00141mg/ml苯甲酸钠为0.00155mg/ml。
结论:高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点 所以数据准确 用外标法计算结果操作简单 计算方便 得出样品中苯甲酸钠的含量。
关键词:高效液相色谱法苯甲酸钠山梨酸钾前言:苯甲酸钠,化学式:C6H5O2Na,是苯甲酸的钠盐,苯甲酸钠是很常用的防腐剂,有防止变质,延长保质期的效果。
山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾,是山梨酸的钾盐,也是防腐剂。
本实验采用RP-HPLC法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定,方法简便,快速,实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。
1 实验部分1.1实验目的了解高效液相色谱仪基本结构和使用原理,操作过程。
学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线测定方法。
学习RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的含量的测定方法。
1.2 仪器与试剂LC-6A/10A 高效液相色谱处理系统:由日本岛津公司提供;Milli-Q超纯水处理器;HS6150D型超声波处理器;2XZ-1型旋片真空泵,由浙江黄岩求精真空泵厂制造。
甲醇:HPLC,500ml,由Guangdong Ghuanghua Sol-Techco,Led提供;氨水:AR,500ml,由成都市科龙化工厂提供;碳酸氢钠(优级纯)纯度99.5%,500g 由成都市科龙化工厂提供;苯甲酸钠:AR 纯度99.5%,250g 由成都科龙化工厂提供;山梨酸钾:AR 纯度98.0%,由成都市科隆化工厂提供。
酱油中苯甲酸和山梨酸含量测定
摘要:目的:采用碱溶液反相萃取—高效液相色谱法(HPLC)测定酱油中苯甲酸和山梨酸。
方法:以国标萃取法为基础,再对其用碱溶液进行反萃取的方法,对酱油样品进行前处理,通过加内标物的方法提高实验的精确度。
结果:苯甲酸和山梨酸的线性回归相关指数都大于0.99、最小检出限(LOD)都低于0.1ppm,加标回收率皆大于84%,相对偏差皆小于16%。
结论:该方法灵敏、可靠,可用于酱油中苯甲酸和山梨酸的快速定量检测。
关键词:反相萃取;高效液相色谱法;酱油;苯甲酸;山梨酸
酱油是我国传统的、富有特色的、使用最广的、味道鲜美的调味品,它赋予食品以适当的色、香、味,具有杀菌治病、调味之功用。
由于酱油营养丰富,适于微生物生长繁殖,而微生物又是到处不在无孔不入,所以细菌、霉菌和酵母之类微生物的侵袭通常是导致酱油败坏的主要因素。
为了保藏酱油,防止酱油腐败变质,保持酱油的鲜度和良好的品质,达到其对保质期的要求,酱油中一般都使用食品常用防腐剂—苯甲酸和山梨酸,但过多防腐剂会严重损害人体健康,国家对防腐剂的使用有严格限量规定,因而检测酱油中防腐剂的含量具有重要意义。
目前酱油中苯甲酸和山梨酸的测定方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法,其中高效液相色谱法因其仪器精确度高,在苯甲酸和山梨酸的检测中最常用。
对于酱油的前处理国标是对其先进行酸化,再通过乙醚进行萃取,除此之外还有其他诸多方法,如对粘度比较大的进行固相萃取、通过加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液沉淀蛋白质、脂肪并过滤后进行测定、还有就是本文所用的对国标处理后的样品进行碱溶液反相萃取。
这样可以大大的减少样品中的杂质,从而减少了杂质峰对高效液相色谱检测的影响。
另外本文所采用的内标法的处理方法是一个创新之举,避免了外标法测定时前处理萃取不完全以及其他处理过程带来的损失从而大大的提高了检测的准确度。
1 实验部分
1.1 溶液配制
乙酸铵溶液( 0. 02 mol /L) : 准确称取乙酸铵1. 542 g, 用水溶解, 定容至1 000 mL, 经0. 45Lm 膜过滤。
苯甲酸、山梨酸、肉桂酸储备液(1000lg/ml):准确称取100mg苯甲酸、山梨酸对照品,50mg肉桂酸标准品与3个不同的50ml小烧杯中,加甲醇溶解后,转移到对应的100ml、100ml、50ml的容量瓶中,苯甲酸、山梨酸对照品加水稀释至刻度,肉桂酸标准品加甲醇稀释至刻度。
置于4℃冰箱中。
苯甲酸、山梨酸混合溶液的标准溶液:用移液管分别移取苯甲酸储备液和山梨酸储备液各2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于5个不同的100ml容量瓶中,再分别向个容量瓶中加5ml肉桂酸储备液,然后加超纯水稀释至刻度,由此得到20ppm、40ppm、60ppm、80ppm、100ppm的苯甲酸和山梨酸混合溶液的一系列标准溶液,其中每份苯甲酸、山梨酸混合溶液标准溶液中均含内标物肉桂酸50ppm。
1.2 样品的制备
1.2.1 乙醚萃取
称取1g左右(精确至0.0001g)酱油样品与25ml带塞锥形瓶中,加2.5ml 100ppm肉桂酸标液,0.25ml 的0.1mol/l盐酸溶液混均,加乙醚9ml,超声一分钟,静置分层,用针筒吸取乙醚萃取液至10ml大试管中。
1.2.2 碱液反萃取
向乙醚萃取液试管中加1ml的0.1mol/l的氢氧化钠溶液反萃取1分钟,静置分层,乙醚层尽量吸去,将氢氧化钠萃取液试管加入40℃水浴中10分钟挥去残留乙醚,将溶液5ml容量瓶中,加水稀释至刻度,使用前测定ph(ph需大于3,否则会损坏色谱柱),过0.45lm水系滤膜2次,供液相色谱仪分析。
1.3 色谱条件
色谱柱(vensuilXBP-C18,250nm*4.0㎜*5μm)
流动相:甲醇/乙酸铵(30:70)
柱温:25℃
流速:1.0ml/min
苯甲酸检测波长223nm、山梨酸检测波长254nm、二者共存检测波长225nm.
2 结果与讨论
2.1 紫外检测器波长选定
由检测结果可知二者共存检测波长大概在225nm处
2.2 线性范围与检出限
分别用移液管分别移取苯甲酸储备液和山梨酸储备液各2ml、4ml、6ml、8ml、10ml于5个不同的100ml 容量瓶中,再分别向个容量瓶中加5ml肉桂酸储备液,然后加超纯水稀释至刻度,由此得到20ppm、40ppm、60ppm、80ppm、100ppm的苯甲酸和山梨酸混合溶液的一系列标准溶液,其中每份苯甲酸、山梨酸混合溶液标准溶液中均含内标物肉桂酸50ppm。
依次进样、记录峰面积,以两种物质的峰面积分别除以肉桂酸峰面积对两种标准溶液的浓度除以肉桂酸浓度进行一元线性回归,以及外标法所以要用的峰面积浓度标准曲线见图3、4。
苯甲酸与山梨酸的线性关系良好(见图 1,2),线性范围,回归方程、相关指数R2 、由检出结果信噪比推算出检测线见图5,6见表1、2。
图 1 图 2
表 1
图 3 图 4
组分 回归方程 相关指数 检出限(ppm ) 苯甲酸 y=0.9456x+0.0067 0.9969 0.1 山梨酸 y=0.9922x+0.12 0.9995 0.1
表 2
图 5 0.2ppm 图 6 0.1ppm
2.3 检出结果,加标回收率,精确度 第一次测量 内标法:
未加标 1.0083g
峰面积 Ax/As Cx/Cs Cx/ppm
含量μg/g
苯甲酸
65983.2
1.0681 1.0587 5
2.94 262.52 山梨酸 7317
3.7
1.1845 1.0666 53.33 264.46 内标物肉桂酸
61775.8
加标1.0384g (内含40μg/mL 苯甲酸山梨酸混合液)
苯甲酸 85010.8
1.8642 1.9006 95.03 山梨酸 93895.1
2.0590 1.9480 97.40 内标物肉桂酸
45602.5
加标回收率: W 苯=(95.03-52.94)/40 *100%=105.2%
W 山=(97.4-53.33)/40 *100%=110.2%
组分 回归方程 相关指数 检出限(ppm) 苯甲酸 y=6894.1x+30364 0.9947 0.1 山梨酸 y=7226.3+53059 0.9976 0.1
外标法:
Cx/ppm 苯甲酸 5.17 山梨酸 2.78
第二次测量
内标法:
未加标 1.0295g
峰面积Ax/As Cx/Cs Cx/ppm 含量μg/g 苯甲酸
303867
.5
1.0364 1.0252 51.26
248.9
6
山梨酸
325751
.1
1.1110 0.9988 49.94 24
2.54 内标物肉桂酸
293194
.6
加标 1.0466g (内含40μg/mL 苯甲酸山梨酸混合液)苯甲酸
437982
.7
1.6782 1.7038 85.19 山梨酸
491666
.3
1.8839 1.7777 88.88 内标物肉桂酸
260988
.3
加标回收率:W苯=(85.19-51.26)/40 *100%=84.83%
W山=(88.88-49.94)/40 *100%=97.35%
外标法:
Cx/ppm
苯甲酸39.67
山梨酸37.74
2.4 讨论
对比内标法的结果和外标法的结果,可看出内标法显然优于外标法,酱油样品的前处理对外标法检测影响很大,但对于内标法,则没有太大的影响,因为酱油的处理中苯甲酸和山梨酸损失的同时内标物肉桂酸也在损失,抵消了处理过程中由于损失带来的误差,但是同时对于内标物的选取则是最大的难点。
通过方法学的考察,证明该方法线性良好、灵敏度高、准确性好、精密度高,苯甲酸和山梨酸的线性回归相干指数都大于0.99、最小检出限都低于0.1ppm加标回收皆大于84%。
可见该方法灵敏、可靠,可用于酱油中苯甲酸和山梨酸的定量检测。