豆粕脲酶活性相关资料

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豆粕脲酶活性相关资料

尿素酶活性与抗胰蛋白酶之间关系，Wright(1981)
脲酶活性测定的局限性
局限性
尿酶活性没有负值，它对任何过熟豆粕的最低值为零；对于加热过度的豆粕尿酶测定值不是一个可靠的指标。
解决办法：
利用蛋白质溶解度去评价。原理是：加热使游离氨基酸与其它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了蛋白质的溶解度。一般要求蛋白质溶解度（0.2%KOH溶液）应在70%～85%之间。PS＞85% 时，表示加热不足，PS＜70%时则表示加热过度
PH增值法（续）
操作方法
准确称取0.400g样品2份，分别置于两支比色管中，一只比色管中加入20ml磷酸缓冲液，作为空白试验（A管），另一只比色管中加入20ml尿素缓冲液（B管）。盖塞混匀，在 30℃恒温水浴中准确保持30min。在此期间，每隔5min摇匀一次。取出后立即加入饱和氯化汞溶液2～3滴，在冷水中冷却，5min内测定溶液的PH值。
另取比色管做空白试验，加入10ml尿素缓冲液，10ml0.1 mol/l盐酸。称取与上述试样量相当的试样，迅速加入比色管中，
立即盖好比色管并剧烈摇动，在30±0.5℃恒温水浴上准确保持30min，冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
滴定法（续）
仪器与器皿 pH计恒温水浴比色管 10ml移液管
滴定法（续）
试剂
尿素：分析纯尿素缓冲液：4.45g磷氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并
稀释至1000ml，再将30g尿素溶于此缓冲液中。 0.1mol/l盐酸 0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
标定方法：取基准邻苯二甲酸氢钾0.6g，溶于50ml水中，加热至沸，加入2～3滴酚酞指示剂，用配制的氢氧化钠标准溶液滴定至呈粉红色30s不退色为终点。以下列公式计算浓度：

大豆制品中脲酶活性的测定

大豆制品中脲酶活性的测定
制作人：刘力、李亚杰
背景
大豆制品中含有大量抗营养因子，影响到动物的正常生长发育。其中最主要的是胰蛋白酶抑制因子，不耐热，但在点击添加标题生产加工过程中，过度的加热在灭活抗营养因子的同时，导致蛋白质变性，特别是赖氨酸、精氨酸和胱氨酸等严重点击添加标题变性，大大降低了大豆制品的消化率和生物学价值。抗胰蛋白酶活性是直接反映大豆制品中抗营养因子水平及加热程度的可靠指标，但由于该法费时、所用试剂昂贵，在生点击添加标题产上不适用。而脲酶活性与抗胰蛋白酶活性呈高度正相关，方法较简便、快速、经济，国内外常用脲酶活性作为检验点击添加标题大豆制品加热程度和抗营养因子水平的判断指标。
注意事项
若样品粗脂肪含量高于点击添加标题 10%，则应先进行不加热的脱脂处理后，在测定脲酶活性；点击添加标题称量样品时，一定要将样品混合均匀，否则会造成试验误差；点击添加标题试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防止时间影响。点击添加标题
问题
反应时间（30min ）对脲酶活性是否有影响？点击添加标题
仪器设备
粉碎机：粉碎时应不生强热，如球点击添加标题磨机。
点击添加标题点击添加标题
点击添加标题
测定步骤
样品中脲酶活性的测定：称取0.2 g（准确至0.0001 g）样品（如果活性很
高，可称取0.05 g试样）玻璃试管中，加10 mL尿素缓冲液，立即盖好试管盖剧烈振摇后，马上置于30±0.5 ℃水浴锅内，准确计30 min±10 s。取下点击添加标题后立即加入10 mL盐酸（0.1 mol/L），振摇后迅速冷却至20℃，将试管内容物全部转入50 mL烧杯中，用20 mL蒸馏水冲洗数次，以0.1 mL的氢氧化钠标准滴定溶液用酸度计滴定至 pH 4.70。记录氢氧化钠标准滴定溶液消耗量。点击添加标题如果选用指示剂，试管中内容物全部移入250 mL锥形瓶中，滴加8~10滴混合指示剂，以0.1 mol/L氢氧化钠标准滴定溶液滴定至蓝绿色，记录氢氧化点击添加标题钠滴定溶液消耗量。空白测定：称取样品后立即加入10 mL盐酸溶液，之后不加。

脲酶活性和氢氧化钾溶解度对豆粕热加工的影响

2.1、试剂：
稀硫酸0.2N；尿素-酚红试剂：将1.2g酚红溶解于30ml0.2N 的氢氧化钠中，用蒸馏水稀释到约300ml；再加入90g尿素并溶解，用蒸馏水稀释到2升；最后加入14ml1.0N的硫酸（或70ml0.2N的硫酸），用蒸馏水稀释到3升。溶液应具明亮的琥珀色。

2.2、测定步骤：
3、大豆加热处理对蛋白溶解度的影响：
生产实践中，蛋白溶解度的测定值范围一般在60%～90%。对于幼畜日粮，蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，蛋白溶解度低于 65%，几乎可以肯定豆粕加热过度。近年来由于豆粕加工技术的改进，蛋白溶解度有增高的趋势。鉴定豆粕过熟的方法是在0.2%KOH溶液中测定豆粕的蛋白溶解度。此方法在近十年来被认为是评估大豆加工过度与加工不足的最佳方法。其原理是：加热使游离AA与其它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了CP的溶解。高温能使还原性碳水化合物，如葡萄糖与Lys的游离氨基酸起作用，即美拉德反应。其结果使 Lys分子成为不能被利用，因而使蛋白质的消化率降低。蛋白质分子中的其它AA，如精氨酸、组氨酸和色氨酸也受热过度的影响，还原性化合物也包括酮与醛。感观上美拉德反应的产物呈现棕色，故又称棕色反应。
豆粕 SoonSoon 泰国阿根廷美国印度 1 印度 2

AMEn 2553 2406 2344 2381 2164 2087
5
蛋白 48.58 47.37 46.21 45.99 45.55 44.16
水分 11.13 10.16 10.61 10.66 10.44 10.14
脂肪 2.55 0.92 2.12 2.63 1.36 1.35
脲酶活性和氢氧化钾溶解度对豆粕热加工的影响

大豆制品脲酶活性测定.

（5）计算 UA=pH(B管)-pH(A管)
2、滴定法（1）原理：将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨，用过量的盐酸溶液中和氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。
（2）脲酶活性定义在30℃和pH＝7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素后，所释放的氨态氮的毫克数。
（3）方法：粉碎→称取0.05±0.001g→放入试管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变红时间→5 min后取出试管，摇匀继续观察
空白试验：不加尿素，其他同上。品质判定：如果溶液为明显的粉红色，则认为该大豆制品脲酶活性超标，为不合格产品。 •0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）； •1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
高温、高湿、高压，粒度小，时间长脲酶活性低。但是，加工过度，一些氨基酸会被破坏。所以脲酶活性过高（豆制品过生）或过低（豆制品过熟）都表明豆制品质量较差。
三、测定原理：脲酶活性测定实际上是在一定条件下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试样、每分钟分解尿素所产生的氨的量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
此时溶液应具有明亮的琥珀色；（过段时间溶液会变为深橘红色，可滴入稀硫酸溶液搅拌之，直至溶液再次变为琥珀色）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（3）方法：将一满匙样品放入表面皿中，摊平，将以调好的尿素-酚红试剂滴入表面皿中的样品上，直至完全浸湿，停留5min，观察样品的颜色反应。如果红斑面积多于20%，则认为该样品脲酶活性超标，为不合格产品。

发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研(精)

发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。

用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。

关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。

发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。

这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。

发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。

大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。

这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。

本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。

1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。

豆粕原料检验指标

呈黄色或浅黄色粉状,色泽一致，有发酵固有气味，无发酵、霉变、结块、虫蛀及异味异嗅
水分：≤10.0%
粗蛋白：≥50.0%
粗灰分：≤6.0%
0.02≤脲酶≤0.3
75%≤蛋白溶解度≤85%
粗蛋白
粗灰分
尿酶
蛋白溶解度
水分
不符合基本要求
水分：＞12.0%
粗蛋白：＜50.0%
粗灰分：＞7.0%
脲酶：≥0.4或≤0.02
豆粕原料检验指标
去
皮
豆
粕
一级
二级
大豆去皮后经浸提或预压浸提所得
无豆皮或含量极少，呈黄色或浅黄色不规则碎片，色泽一致无发酵、霉变、结块、虫蛀及异味异嗅
水分：≤13.0%
粗蛋白：≥48%
粗灰分：≤5.0%
0.02≤脲酶活性≤0.3
70%≤蛋白溶解度≤85%
皮重：≤1.0%
水分：≤13.0%
粗蛋白：≥46%
蛋白溶解度：≤70
粗蛋白：≥43.0%
粗灰分：≤7.0%
0.02≤脲酶≤0.3
75%≤蛋白溶解度≤85%
粗蛋白
粗灰分
尿酶
蛋白溶解度
水分
不符合基本要求
水分：＞14.0%
粗蛋白：＜42.0%
粗灰分：＞8.0%
脲酶：≥0.4或≤0.02
蛋白溶解度：≤70.0%或≥85.0%
发酵豆粕
利用有益微生物发酵后的豆粕
粗灰分：≤5.0%
0.02≤脲酶活性≤0.3
70%≤蛋白溶解度≤85%
皮重：≤1.0%
粗蛋白
粗灰分
脲酶活性
蛋白溶解度
皮重
水分
不符合基本要求
水分：＞14.0%

发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研(精)

关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。

这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。

这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。

本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。

1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。

饲料用大豆粕国家标准

饲料用大豆粕国家标准一、主题内容与适用范围本标准规定了饲料用大豆粕的质量指标及分级标准。

本标准适用于以大豆为原料以预压—浸提或浸提法取油后所得饲料用大豆粕。

二、引用标准GB 5490-5539 粮食、油料及植物油检验GB 6432-6439 饲料粗蛋白、粗脂肪、粗纤维等项测定方法GB 8622 大豆制品中尿素酶的活性测定三、感官性状本品呈浅黄褐色或淡黄色不规则的碎片状，色泽一致，无发酵、霉变、结块、虫蛀及异味异嗅。

四、水分水分含量不得超过13.0%五、夹杂物不得掺入饲料用大豆粕以外的物质，若加入抗氧化剂、防霉剂等添加剂时，应做相应的说明。

六、质量指标及分级标准1.以粗蛋白质、粗纤维、粗灰分为质量控制指标，按含量分为三级，见下表。

表1 配合饲料、浓缩饲料和预混合料产量(万吨)年份配合饲料浓缩饲料预混合料1990 3122 50.82 21.011999 5600 1000 1603.三项质量指标必须全部符合相应等级的规定。

4.二级饲料用大豆粕为中等质量标准，低于三级者为等外品。

七、脲酶活性允许指标1.脲酶活性定义为在30?5?和pH值等于7的条件下，每分钟每克大豆粕分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。

2.饲料用大豆粕的脲酶活性不得超过0.4。

八、检验1.水分、粗蛋白质、粗纤维、粗灰分的检验，按照GB6432-6439的有关规定执行。

2.脲酶活性的检验按GB 8622执行。

九、卫生标准应符合中华人民共和国有关饲料卫生标准的规定。

十、包装、运输和储存饲料用大豆粕的包装、运输和储存，必须符合保质、保量、运输安全和分类，分级储存的要求，严防污染。

中华人民共和国农业部1998-10-11批准，1989-09-01实施。

豆粕尿素酶活性的测定

豆粕中尿素酶活性的测定（PH差值法）1.参考标准无1.适用范围适用于用PH增值法测定豆粕中脲酶活性的方法。

2.原理豆粕中的脲酶可以使用尿素分解产生氨，使体系中pH增加，用pH计测定pH 变化，以判断脲酶活性。

3.仪器和工具4.1粉碎机4.2可调节温度的恒温水浴锅4.3酸度计：精确至0.014.4碘瓶：50ml4.5天平：感量0.01g4.6天平：感量0.1g4.7秒表4.试剂5.1磷酸二氢钾（KH2PO4）5.2磷酸氢二钾（K2HPO4）5.3 50%磷酸二氢钾溶液5.4 50%磷酸氢二钾溶液5.5 尿素[CO(NH2)2 ]5.6 pH7.00磷酸缓冲液：用天平（4.6）称取磷酸二氢钾（5.1）17.1g溶于100ml蒸馏水，再称取烘干的磷酸氢二钾(5.2)21.7g于100ml蒸馏水，将这两种溶液的混合液共配制5000ml。

并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量50%磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。

5.7 pH7.00尿素缓冲液：用天平（4.6）称取尿素（5.5）150.0g，溶于5000ml磷酸缓冲液（5.6）中。

并用酸度计(4.3)调节pH值，pH小于7.00时，加入少量50%磷酸氢二钾溶液（5.4），当pH大于7.00时，加入少量磷酸二氢钾溶液(5.3)，最终使得缓冲液的pH为7.00(±0.01)。

5.操作步骤用粉碎机（4.1）粉碎样品，用天平（4.5）分别称取三份样品约0.80g（±0.02g）的样品于3个50ml的碘瓶（4.4）中，其中两个加40ml尿素缓冲液（5.7），另一个加入40ml磷酸缓冲液(5.6)（空白），塞上塞子，摇匀后放入30℃（±1℃）的恒温水浴锅中，用秒表(4.7)准确计时，每10分钟摇匀一次，反应30分钟后，在5分钟内用酸度计(4.3)测定pH值。

大豆制品尿素酶活性测定的影响因素

在豆粕中含有一种酶叫尿素酶，是豆粕中含它
有的几种天然酶类之一，在许多高等植物中都含有
尿素酶，特别是胡芦科和豆科植物中含量很高。判断豆粕加热程度的主要指标是尿素酶活性，尿素酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，而
１６结果表述．
１样品，分别称取０１、．０ｇ．０ｇ０２、
０４、．０ｇ０８．０ｇ０６、．０ｇ五组试样于三角瓶内，每组
３０仿工业实验磨，０８ｍｍ筛网；ＦＤ１０配．ＪＳ一
＊收稿日期：０２０ — ２２１－４８
匀。置于（０． ℃）３ ±０５空气摇床中，计时。隔５ｍｎｉ放人第二个与此相同的三角瓶做平行试验。
１４３称取试样０２０，入另一三角瓶中，．．．００ｇ放加１ＯｍＬ磷酸缓冲液，好橡胶塞，匀，为空白试塞摇作验，与前一个三角瓶间隔５ｍｉ于同一空气摇床ｎ置中。隔５ｍｉｎ放入第二个与此相同的三角瓶做空白
平行试验。
高。因此，尿酶活性用来作为豆粕加热是否偏生的
间接估测指标，有重要意义。具本文分别从样品称样量、粉碎后样品放置时间、粉碎粒度三方面，研究其在豆粕尿素酶活性测定上
的影响。１材料与方法
・
４・６
粮油仓储科技通讯２１（）０２４

脲酶活性

随着膨化技术在饲料工业中推广普及，越来越多的饲料生产商在配方中使用膨化大豆粉，与其它蛋白资源一样，大豆的适度熟化非常重要，熟化程度低会含抗胰蛋白酶等营养抑制因子，熟化度过高又会导致氨基酸利用率低。

判断膨化大豆粉是否合格的主要指标是脲酶活性。

脲酶活性是指：在30±5℃和PH值等于7的条件下，每分钟每克膨化大豆分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。

脲酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，并且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此，尿酶活性用来作为膨化大豆加热是否合适的间接估测指标。

脲酶活性没有负值，最低为0。

在我国现行的国标推荐值为0.3，在美国一般认为以不超过0.2为宜，并且针对日粮中有尿素的反刍动物而言不得超过0.12，当然对于家禽和猪0.3或稍高都可以接受。

国内很多大企业一般均采用0.2。

实验室定量测定脲酶活性的方法较复杂，有滴定法和pH增值法两种，已有研究表明两者对同一样品测得的数值也不相等。

目前国内绝大部分企业都采用快速而简单的简易判定方法定性地估测脲酶活性，一般来说，主要有如下两种方法。

一.液态法1.原理：大豆制品中的脲酶可使尿素分解成氨，会使酚红指示剂改变颜色。

2.试剂2.1尿素:GB696，分析纯。

2.2酚红指示剂2.2.1称取0.1g酚红，加1.43mL0.1mol/L氢氧化钠溶液，在研钵中研磨以促溶解；2.2.2转移至250mL定量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀备用。

3.操作方法3.1取0.2g粉末样品，置于25mL比色管中。

3.2加0.02g尿素，加酚红指示剂2滴，再加水20mL，充分摇匀15s。

3.3记录粉红色出现时间，并根据时间判断尿酶活性，颜色出现时间应少于15min。

颜色出现时间脲酶活性1min 极强1～5min 强5～15min 稍有15min 无同时作空白对照试验。

样品空白(不加尿素)及试剂空白(不加样品)，只有上述空白正常时，即酚红指示剂不改变颜色，试验结果才是可靠的。

大豆中脲酶活性的测定

5.计算
溶液PH值与试剂空白PH值之差即为脲酶活性，公式如下:
UA=B-A B——B管的PH值 A——A管的PH值
滴定法
a.原理: 将粉碎的大豆制品与中性的尿酸缓冲液混合，在30℃保持30min，尿酸酶催化尿素产生氨，用过量的盐酸中和氨，再用氢氧化钠溶液回滴。酶的活性用1克分析材料在30℃下1min 产生氨态氮的毫克数表示。（mgN/g）
e.结果计算
UA＝14×C(V0-V)/(30×m) C——氢氧化钾标准溶液浓度, mol/L； V0——空白试验消耗氢氧化钾的体积, ml； V——测定试验消耗的氢氧化钾的体积, ml； m——试验质量, g。
比色法
原理: 向含有EDTA二钠盐的PH=7的缓冲液的分析悬浮液中加入尿素溶液，在30℃ 下保温5min，加入磷钨酸终止酶作用并沉淀蛋白质。产生的氨在次溴酸钠和麝香草酚作用下形成蓝色的靛麝香草酚，借以比色。
快速测定方法2
在培养皿上放入少量的豆饼粕, 在样品上滴入少量指示剂并搅拌, 将其平铺于培养皿中, 放置5min后观察结果。无任何红点出现, 再放置25min仍然无红点出现, 说明豆粕过熟；有少量红点出现, 说明脲酶活性较低, 豆粕可用；样品表面有25％被红点覆盖, 豆粕可用；样品表面有50％被红点覆盖, 应慎用；样品表面有75％－100％被红点覆盖, 脲酶活性过高, 豆粕过生, 不可用；
2.实验仪器与器皿
PH计，带玻璃的电极，甘汞电极，恒温水浴，50ml试管
3.试剂
磷酸缓冲液: 称取3.403克磷酸二氢钾，溶于100ml的水中。再称取4.335克的磷酸氢二钾，溶于100ml的水中，合并两者并配制成1000ml，用酸或者碱调节PH=7。

大豆制品脲酶活性测定解读

样品粉碎：至少60%通过400微米试验筛。（4）操作步骤准确称取0.400±0.00lg样品2份，分别置于2支试管中。一支试管加入 20mL磷酸缓冲液，作为空白试验（A 管），另一支加入20mL尿素缓冲液（B管）。
盖塞混匀，在30℃恒温水浴中准确保持30min。在此期间，每隔5min 摇匀一次。取出立即在流水中冷却， 5min内测定溶液pH值。
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品，最好将其稍微粉碎，亦不可太细，否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。
（二）定量法 1、 pH增值法（1）原理：脲酶水解尿素产生氨，使溶液的 pH值升高，通过测定样品溶液的pH 值和空白的pH值之差来计算脲酶的活性。脲酶活性定义为：在30℃和 pH=7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素后所释放的氨态氮的毫升数。
高温、高湿、高压，粒度小，时间长脲酶活性低。但是，加工过度，一些氨基酸会被豆制品质量较差。
三、测定原理：脲酶活性测定实际上是在一定条件下(pH=7.0，T=30℃)，测定每克试样、每分钟分解尿素所产生的氨的量。
脲酶 NH2CONH2→→2NH3↑+CO2
（5）计算 UA=pH(B管)-pH(A管)
2、滴定法（1）原理：将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解产生氨，用过量的盐酸溶液中和氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。
（2）脲酶活性定义在30℃和pH＝7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素后，所释放的氨态氮的毫克数。
（3）方法：粉碎→称取0.05±0.001g→放入试管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变红时间→5 min后取出试管，摇匀继续观察

农业畜牧--豆粕质量与尿酶活性和蛋白溶解度(PDF 25页)

豆粕质量与尿酶活性和蛋白溶解度UREASE ACTIVITY AND PROTEIN SOLUBILITY INDICATORS FOR SOYBEAN MEAL QUALITY沈慧乐教授，美国大豆协会杨秀文副教授，北京奶牛研究所引言大豆蛋白是家禽日粮中最为重要的，也是质量最好的植物蛋白饲料，除蛋氨酸略缺乏外，其它各种氨基酸都接近理想平衡。

如同其它蛋白质饲料一样，豆粕质量受各种营养素含量的影响，如能量、蛋白质、纤维素和氨基酸等，例如普通豆粕与去皮豆粕间在以上指标方面就有很大的差别（见表1）。

去皮豆粕由于纤维素含量低而有较高的能量水平。

但是蛋白质水平高的豆粕不一定保证低纤维和高能量水平，例如某些未去皮中国豆粕的蛋白质含量可高达48%甚至50%，而仍然含有6%至7%的纤维素。

因此高蛋白水平豆粕的代谢能水平仍然可能因纤维素含量高而下降，尚未见到这些高蛋白质“高纤维素”豆粕的代谢能测定值。

但一般可以估计：在去皮豆粕纤维素正常含量3.5%以上时，每增加1%纤维素使每公斤猪饲料的代谢能下降32至42大卡，而每公斤禽饲料则下降将近60大卡。

另一方面，豆粕质量在很大程度上受加工方面问题的影响而使它的氨基酸含量和氨基酸消化率以致于能量受到影响。

本文主要讨论由加工不足或加热过度所引起的豆粕质量变异以及对生产性能的影响，同时介绍目前可行的鉴定豆粕质量的方法—尿酶活性（pH 变化值）与0.2%氢氧化钾蛋白溶解度，并加以评估。

生大豆——胰蛋白酶抑制因子与尿酶众所周知，豆粕必须经过适度热加工以破坏大豆中所含的数种抗营养物质。

其中对畜禽影响最大者为胰蛋白酶抑制因子（Trypsin Inhibitor），有幸的是这些抗营养因子在加热后都会遭到破坏。

适度加热是豆粕加工的关键，因为加热不足或过度都会降低豆粕的营养价值。

来自w ww .3722.cn 中国最大资料库下载表1 普通豆粕与去皮豆粕的主要营养指标(NRC,1994) 营养素普通豆粕去皮豆粕干物质(%) 89 90 禽代谢能(千卡/公斤)2230 2440 蛋白质(%) 44.0 48.5 纤维素(%) 7.0 3.9 赖氨酸(%)2.693.02NRC 家禽营养需要(1994)。

脲酶活性与氢氧化钾溶解度对豆粕热加工的影响

未经蒸煮的豆粕相比，雏鸡的增重都有显著的提高。加热过度仅
Lys消化率下降的原因，一方面是由于部分Lys被破坏，两一方面由于未破坏Lys的消化率也降低所致。豆粕加热过度降低了Lys的利用率，因而使家禽的生产性能下降，额外补充Lys能起到一定的补偿作用。
7、测定办法在生产中应用的评价
7.1、推荐的豆粕判定指标 ✓ Lys≥2.85%（88%干物质基础）；Ash≤7.5%，不溶于酸的灰分
脲酶活性与蛋白溶解度是评定豆粕质量的两个常用指标。其中脲酶是用以鉴定豆粕加热程度是否足以破坏其中大部分抗营养因子的一个指标，由于它无负值，所以，对加热过度的豆粕意义不大。而蛋白溶解度则可区别加热过度的严重程度，同时它也可以鉴别生大豆或加热不足的豆粕，但不够灵敏。因此，我们建议在采购豆粕时两个指标都要测定。
5、脲酶测定值与蛋白溶解度对豆粕质量的评估
脲酶测定值不能恰当地反映加热过度对豆粕质量的影响。脲酶指标却因无负值而停留在0.00，因此不能反映出豆粕营养价值的受损程度。
用豆粕在高压蒸煮前的脲酶PH变化值为0.03，在高压加热5min后降至0.02，加热 10min，甚至80min，脲酶值都保持为0.00，而在0.2%KOH溶液中的蛋白溶解度却从高压蒸煮前的86%稳定的下降，在80min时达到40.8%。
豆粕。
3、大豆加热处理对蛋白溶解度的影响：
生产实践中，蛋白溶解度的测定值范围一般在60%～90%。对于幼畜日粮，蛋白溶解度低于70%的豆粕营养价值已受到破坏，蛋白溶解度低于 65%，几乎可以肯定豆粕加热过度。近年来由于豆粕加工技术的改进，蛋白溶解度有增高的趋势。
鉴定豆粕过熟的方法是在0.2%KOH溶液中测定豆粕的蛋白溶解度。此方法在近十年来被认为是评估大豆加工过度与加工不足的最佳方法。其原理是：加热使游离AA与其它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了CP的溶解。高温能使还原性碳水化合物，如葡萄糖与Lys的游离氨基酸起作用，即美拉德反应。其结果使 Lys分子成为不能被利用，因而使蛋白质的消化率降低。蛋白质分子中的其它AA，如精氨酸、组氨酸和色氨酸也受热过度的影响，还原性化合物也包括酮与醛。感观上美拉德反应的产物呈现棕色，故又称棕色反应。

大豆制品脲酶活性测定 PPT

磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶于此缓冲溶液中，
（4）注意事项： • 1.粉碎样品时，不应产生大量热，
否则会影响结果判定； • 2.称量样品时，一定要将样品混合
均匀，否则会造成试验误差； • 3.试样和空白试验同时操作，过程
要迅速，防止时间影响。
2、尿素酚红法（1）原理：酚红指示剂在pH 6.4-8.2
时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶可将尿素水解产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红样品占所有样品的比例来判断脲酶活性的大小。
（2）仪器和试剂： • 粉碎机：粉碎时不产生强烈发热 • 分析天平：感量0.01g • 25ml纳式比色管 • 恒温水浴锅 • 0.1%酚红指示剂：0.1g苯酚红溶于
100ml 95%乙醇溶液 • 结晶尿素：分析纯
（3）方法：
粉碎→称取0.05±0.001g→放入试管→加入尿素0.2g、指示剂5滴→加蒸馏水25mL→摇动10s→立即置于 30±0.5℃水浴锅→计时观察溶液变红时间→5 min后取出试管，摇匀继续观察
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
空白试验：不加尿素，其他同上。
品质判定：如果溶液为明显的粉红色，则认为该大豆制品脲酶活性超标，为不合格产品。
•0-1min变红，活性非常强（＞ 1.0）；
•1-2min变红，活性大概0.5-1.0； • 2-5min变红，活性大概0.3-0.5。
（4）注意事项： • 1.对于样品较粗、具有大块状的样品，
最好将其稍微粉碎，亦不可太细，否则不容易观察； • 2.样品一定要铺平，容易观察； • 3.溶液保质期为3个月，最好1个月内用完； • 4.此方法容易受颗粒度影响。

豆粕中尿酶活性测定

豆粕中酶活性测定尿酶(Urease)：生大豆中含不等量尿酶，尿酶本身无营养意义，但是它与抗胰蛋白酶含量接近，而且遇热失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此以尿酶活性用作豆粕加工适宜度的简单估测指标。

但是加工适宜度不仅取决于畜种、年龄和畜禽阶段，也取决于大豆品种及储存状况。

严寒损伤的大豆储存6个月以上，则抗胰蛋白酶含量会增加，但是未受损伤的大豆就没有这种现象。

附录A大豆制品中尿素酶活性测定方法GB/T 8622-1988A.1 适用范围本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿酶活性的测定。

本法可确认大豆的湿热处理程度。

A.2 定义本标准所指尿素酶活性定义如下：在(30±0.5)℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。

A.3 原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。

用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。

A.4 仪器设备A.4.1 样品筛：孔径200mm;A.4.2 酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置;A.4.3 恒温水浴：可控温(30±0.5)℃;A.4.4 试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子;A.4.5 精密计时器;A.4.6 粉碎机：粉碎时应不生强热(例如球磨机)A.4.7 分析天平：感量0.0001g;A.4.8 移液管：10mL。

A.5 试剂和溶液A.5.1 尿素：分析纯;A.5.2 磷酸氢二钠：分析纯;A.5.3 磷酸二氢钾：分析纯;A.5.4 尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0)：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。

A.5.5 盐酸：分析纯，c(HCL)=0.1mol/L溶液;A.5.6 氢氧化钠：分析纯，c(NaOH)=0.1mol/L标准溶液。

A.6 试样的制备用粉碎机将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛。

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另取比色管做空白试验，加入10ml尿素缓冲液，10ml0.1 mol/l盐酸。称取与上述试样量相当的试样，迅速加入比色管中，
立即盖好比色管并剧烈摇动，在30±0.5℃恒温水浴上准确保持30min，冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
大豆中脲酶活性测定
为什么要测定脲酶？
脲酶毒性
一般脲酶并没有毒性作用，但在一定温度和pH值条件下，生大豆的脲酶遇水迅速将含氮化合物分解成氨，引起氨中毒。大豆中的抗营养因子：胰蛋白酶抑制剂最重要
评估胰蛋白酶抑制剂活性
大豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂抑制动物的生长和引起胰腺肥大。而直接测定大豆饼粕中的胰蛋白酶抑制剂的活性比较困难、耗时。脲酶和胰蛋白酶抑制剂在加热时有相近的速率变性，并且脲酶对热的抵抗力比胰蛋白酶抑制剂强，又易于测定，所以常用脲酶活性指标来判断大豆饼粕加热的程度和估计大豆饼粕中胰蛋白酶抑制剂是否已经被破坏。
M＝m/(V×0.2042) 式中：m：邻苯二甲酸氢钾质量，g；
V：消耗氢氧化钠体积，ml。
滴定法（续）
操作方法
称取0.2000g试样，转入比色管中，加入10ml尿素缓冲液，立即盖好盖子并剧烈摇动。置于30±0.5℃恒温水浴上准确保持30min后立即加入10ml0.1mol/l盐酸，迅速冷却到20℃，将比色管内容物全部转入烧杯，用水冲洗比色管2～3次，立即用标准氢氧化钠溶液滴定至PH＝4.7。
我国《饲料用大豆》标准（GB1038489）规定：“饲料用大豆需加热后使用，尿素酶活性不得超过0.4”。台湾省标准为
0.02～0.3△pH 。
脲酶的测定方法
比色法滴定法 PH增值法快速检测法
比色法
实验原理
向含有EDTA二钠盐的PH=7的缓冲液的分析悬浮液中加入尿酸溶液，在30℃下保温5min，加入磷钨酸终止酶作用并沉淀蛋白质。产生的氨在次溴酸钠和麝香草酚作用下形成蓝色的靛麝香草酚，借以比色。
生产实践中人们常将脲酶活性和蛋白质溶解度结合起来评价
大豆饼粕的品质，用脲酶活性反映大豆饼粕是否过生，用蛋白质溶解度反映大豆饼粕是否受热过度。
适宜的脲酶活性值
大多数美国的测定表明：为破坏抗营养物质尿酶值应在0.20或以下。美国饲料工业协会建议的尿酶值为0.05-0.20。反刍家畜的日粮中往往加有尿素，因而过高的尿酶值有可能导致氨中毒。因此，在美国，反刍动物饲养者对豆粕尿酶值的要求是≤0.20。在欧洲则认为0.5是可接受的尿酶值（Deschrifver，1977）。
PH增值ห้องสมุดไป่ตู้（续）
操作方法
准确称取0.400g样品2份，分别置于两支比色管中，一只比色管中加入20ml磷酸缓冲液，作为空白试验（A管），另一只比色管中加入20ml尿素缓冲液（B管）。盖塞混匀，在 30℃恒温水浴中准确保持30min。在此期间，每隔5min摇匀一次。取出后立即加入饱和氯化汞溶液2～3滴，在冷水中冷却，5min内测定溶液的PH值。
通常10分钟以上不显粉红色的大豆饼粕其脲酶活性丧失。
尿素酶活性与抗胰蛋白酶之间关系，Wright(1981)
脲酶活性测定的局限性
局限性
尿酶活性没有负值，它对任何过熟豆粕的最低值为零；对于加热过度的豆粕尿酶测定值不是一个可靠的指标。
解决办法：
利用蛋白质溶解度去评价。原理是：加热使游离氨基酸与其它化合物的基团形成不能为消化酶所打开的分子间和分子内的结合键，因而降低了蛋白质的溶解度。一般要求蛋白质溶解度（0.2%KOH溶液）应在70%～85%之间。PS＞85% 时，表示加热不足，PS＜70%时则表示加热过度
滴定法（续）
仪器与器皿 pH计恒温水浴比色管 10ml移液管
滴定法（续）
试剂
尿素：分析纯尿素缓冲液：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并
稀释至1000ml，再将30g尿素溶于此缓冲液中。 0.1mol/l盐酸 0.1mol/l氢氧化钠标准溶液
标定方法：取基准邻苯二甲酸氢钾0.6g，溶于50ml水中，加热至沸，加入2～3滴酚酞指示剂，用配制的氢氧化钠标准溶液滴定至呈粉红色30s不退色为终点。以下列公式计算浓度：
滴定法
结果计算
14×C（V0－V）尿素酶活性＝
30×m C——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L； V0——空白试验消耗氢氧化钠的体积， ml； V——测定试验消耗的氢氧化钠的体积，ml； m——试验质量，g。
快速测定方法
酚红法
称取0.2克的样品于试管中，加入0.2克的尿素，再加入2滴酚红指示剂及20ml蒸馏水，摇动10 分钟，观察溶液的颜色。 1分钟内呈粉红色，脲酶活性很强； 1-5分钟呈粉红色，脲酶活性强； 5-15分钟呈粉红色，活性有点强； 15-30无色，没有活性。
PH增值法
原理
用样品溶液PH值与试剂空白的PH值差计算尿素酶的活性。
仪器与器皿
PH计、恒温水浴、比色管
试剂
磷酸缓冲液：取3.403g磷酸二氢钾溶于100ml水中，取 4.335g磷酸氢二钾溶于100ml水中，合并上述两种溶液并配制成1000ml，用酸溶液或碱溶液调至PH＝7。
尿素缓冲液：取15g尿素，溶于500ml磷酸缓冲液中，调解pH＝7。为了防止霉菌滋生，可以加入5ml甲苯作为防腐剂。
计算
溶液PH值（A）与试剂空白pH（B）值差为尿素酶活性，计算如下：
尿素酶活性＝B－A
PH增值法（续）
注意事项：
应提前一天浸泡电极，保持电极清洁。有时样品中的可溶性物质附着在电极上，
可以降低测定准确度，操作时要快速果断。
滴定法
原理
将粉碎的大豆与中性尿素缓冲液混合，在30±0.5℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨，用过量盐酸中和氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。酶的活性用1g分析材料在30±0.5℃下1分钟产生的氨态氮的毫克数来表示。

豆粕脲酶活性相关资料

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