叶绿体色素提取与分离实验

叶绿体色素的提取分离、理化性质实验报告第一部分提取与分离一实验目的学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法二实验原理叶绿体是进行光合作用的细胞器。

叶绿体中的叶绿体a(C55H72O5N4Mg)、叶绿素b(C55H72O6N4Mg)、胡萝卜素(C40H56)和叶黄素(C40H56O2)与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。

这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。

提取液可用薄层色谱法加以分离与鉴别。

薄层色谱分析法是将吸附剂均匀的涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层做固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂做流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。

流动相通过毛细管作用由下而上的逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱附、再吸附、再脱附……的过程。

由于吸附剂的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。

三实验材料与试剂1 新鲜的菠菜叶片2 体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，体积比)3 天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸四实验步骤(一)色素提取液的制备1 取新鲜叶片4至5片(2g左右)，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入研钵中。

2 研钵中加入少量碳酸钙粉末，加2至3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加10至15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。

提取液应避光保存。

(二)叶绿体色素的分离1 取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘约1cm处用毛细管划线，风干后再划第二次，重复操作3至4次。

2 在干洁的层析缸中加入适量的展开剂，高度约0.5cm，将硅胶预制板带有色素的一端放下，使其浸入展开剂中(但不要使待测样品浸入展开剂中)。

生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告实验目的：1. 学习叶绿体中色素的提取和分离的方法；2. 观察叶绿体中不同色素的吸收光谱。

实验原理：叶绿体是植物细胞中的特殊细胞器，其中含有多种色素，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。

这些色素能够吸收不同波长的光线，并转化为化学能以参与光合作用。

本实验利用溶剂提取和色谱柱分离的方法，将叶绿体中的色素提取出来，并通过紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。

实验步骤：1. 取一片鲜叶（最好选择深绿色的叶片）切碎，加入适量的乙醇或醋酸乙酯中浸泡，使叶绿体释放出色素。

注意保持容器密封以避免光照。

2. 将浸泡片刻半小时，使叶绿体彻底释放色素。

3. 将叶绿体悬液过滤，收集含有色素的过滤液。

4. 取一支色谱柱，填充色谱吸附剂（如硅胶），再用无色溶剂（如正己烷）预洗一次。

5. 将收集到的含色素液体加入色谱柱中，用无色溶剂洗脱，收集不同色素的洗脱液。

6. 用紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。

实验结果：根据实验数据得到不同色素的吸收光谱曲线，可观察到叶绿素 a 在400-500 nm波长范围内有最大吸收峰，叶绿素 b 在450-550 nm波长范围内有最大吸收峰，类胡萝卜素在500-600 nm波长范围内有最大吸收峰。

根据吸收光谱的不同，可以推测各色素在光合作用中的吸收波长和参与的反应。

实验结论：通过该实验，我们成功地提取和分离了叶绿体中的色素，并观察到不同色素的吸收光谱。

这些实验结果可以帮助我们深入了解植物光合作用的机制，以及不同色素在光合作用中的作用。

同时，该实验也展示了提取和分离生物样品中化学物质的基本实验技巧和原理。

《叶绿体色素的提取和分离》实验报告
叶绿体是植物细胞中的一种细胞质器，主要功能是光合作用。

叶绿体包括一系列色素，其中最重要的是叶绿素。

在本实验中，我们将提取和分离叶绿体色素，以便进一步分析其
结构和功能。

实验步骤：
1. 从新鲜的叶子中剪下片段，用无菌蒸馏水洗涤。

2. 用离心机将叶片离心，离心速度为1000 rpm，时间为5分钟。

3. 将上清液取出并过滤，过滤剂为细孔过滤纸。

5. 将上清液取出，并用1ml无菌蒸馏水洗涤叶绿体色素。

7. 取出上清液，将其光度值调至0.4-0.6。

（400nm处）
8. 将上述上清液转入紫外吸收仪中，观察叶绿素的吸收曲线。

实验结果：
实验得出的叶绿体色素提取液中，吸收最强的波长为680nm和430nm。

这对应着叶绿
体和类胡萝卜素的吸收峰。

实验得到的叶绿体色素移液后，需要经过离心的过程，这样可去除混杂物质，获得更
为纯净的叶绿素。

通过以上实验，我们成功地提取和分离了叶绿体色素。

叶绿素是植物所特有的，它起
到了光合作用的关键作用。

实验中的提取和分离方法，可以为进一步的分析叶绿素的结构
和功能提供帮助。

叶绿体中色素的提取和分离方案一【实验原理】（1）叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以，可以通过研磨法用丙酮提取叶绿体中的色素(若无丙酮亦可用酒精代替)。

（2）纸层析法：层析液（在60℃～90℃下分馏出来20份石油醚+ 2份丙酮+ 1份苯混合而成）是一种脂溶性很强的有机溶剂。

叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同(溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。

)这样，几分钟之后，叶绿体中的色素就在扩散过程中分解开来。

所以，可以用纸层析法分离出叶绿体中的色素。

【实验器材】新鲜的绿色菠菜叶片，干燥的定性滤纸，烧杯，研钵，小玻璃漏斗，脱脂棉，载玻片，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺，量筒，天平。

丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。

【实验过程】（一）提取绿色叶片中的色素：1、用天平称取5g绿色的叶片，用剪刀剪碎，放入研钵中；2、向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入5ml丙酮。

由于丙酮具有一定的毒性并且很容易挥发。

为了尽量少的吸入丙酮，可以将一片滤纸盖在研钵上，纸的中心穿一个洞，将杵棒套入洞口进行研磨。

※为什么要加入少许少许二氧化硅和碳酸钙？加入二氧化硅是为了研磨的更充分；加入少许碳酸钙是为了保护叶绿体中的色素，为是由于碳酸钙可以中和液泡破裂后释放出的有机酸，调节液体的PH，防止或避免色素被破坏。

※为什么要加入丙酮？丙酮是有机溶剂可以使色素溶解其中，作为色素的溶剂。

3、将研磨液迅速倒入小玻璃漏斗中进行过滤（漏斗基部放一小团脱脂棉）。

将滤液收集到一个小试管中，及时用塞将试管口塞紧。

（以防止滤液中的丙酮挥发）※是否可以用滤纸来代替脱脂棉？不可以，滤纸对光合色素具有较强的吸附能力，使滤液的色素分子减少。

（二）制备滤纸条：取一块预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成长6cm、宽1cm的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。

※在剪裁定性滤纸时，尽量注意双手不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸，影响色素在纸条上的扩散。

生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告实验目的：1. 学习叶绿体色素的提取和分离方法。

2. 了解叶绿体中色素的组成和结构。

实验原理：叶绿体是植物和藻类细胞中含有叶绿素的细胞器。

叶绿体中有多种不同类型的色素，包括叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素等。

这些色素通过吸收太阳光能量进行光合作用。

提取叶绿体中的色素可以使用酒精提取法。

酒精可以溶解叶绿体膜，使色素溶解到酒精中。

然后，使用色谱技术可以将不同类型的色素分离出来。

实验材料：1. 鲜叶样品2. 酒精3. 氯仿4. 丙酮实验步骤：1. 将鲜叶样品切碎并置于研钵中。

2. 加入足够量的酒精，用研钵研磨混合，直到叶碎细胞完全破裂。

3. 使用滤纸过滤混合物，得到澄清的叶绿体提取物。

4. 将叶绿体提取物转移到试管中，加入少量氯仿。

5. 等待一段时间，观察到叶绿体提取物分为两个层次：上层为酒精层，下层为氯仿层。

6. 使用滴管将上层的酒精取出，置于干燥的容器中保存。

7. 将下层的氯仿层转移至另一个试管中。

8. 加入适量的丙酮，轻轻摇匀，观察色素在丙酮中溶解。

9. 使用滤纸过滤丙酮溶液，得到单一色素溶液。

实验结果：从叶绿体提取物中分离出不同类型的色素，如叶绿素a、叶绿素b等。

通过色素的溶解性质和色谱技术，可以将这些色素分离出来。

实验总结：通过本次实验，我们学习了叶绿体中色素的提取和分离方法。

了解了叶绿体中的色素组成和结构。

同时，也掌握了使用色谱技术进行色素分离的基本步骤。

这对于进一步研究叶绿体的功能和光合作用具有重要意义。

叶绿体色素的提取、分离、理化性质和含量测定实验一、叶绿体色素的提取、分离1.实验名称叶绿体色素的提取、分离实验2.实验原理叶绿体中色素与内囊体膜结合成为色素蛋白复合体。

这些色素不溶于水，而溶于有机溶剂，可用乙醇等有机溶剂提取。

提取液用薄层色谱法加以分离和鉴别。

本实验采用酒精提取。

层析法原理： K=Cs/Cm。

3.实验试剂与材料新鲜菠菜叶体积分数百分之九十五的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂（石油醚：丙酮：苯=7:5:1）天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸4.实验步骤1．叶绿体色素的提取（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4~5片（2g左右），洗净，擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。

（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2~3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10ml 95%乙醇，暗处放置3~5min，上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。

2.色素分离：取硅胶预制板一个，用毛细管吸取提取液，在板短边据下端1厘米处划一细线，待干后再次划线，重复3,4次。

在层析缸中加入层析液，高度0.5厘米，将预制板放入层析液中进行层析。

改好缸盖。

待色素较好分离后，取出硅胶预制板，迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。

5.实验结果与分析滤纸条上出现4条色素带，从上到下依次是：橙黄色胡萝卜素（最快）黄色叶黄素蓝绿色叶绿素a（最多）黄绿色叶绿素b（最慢）二.理化性质1.实验目的验证叶绿素的理化性质。

2.实验原理叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。

叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。