血红蛋白检测试剂盒(比色法)

体外诊断试剂临床评价报告产品名称：血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）标本类型：全血EDTA-Na抗凝标本(参比与考核一致)方案版本：V1.0方案日期：2020年02月08日试验时间：2020年03月至2020年03月试验地点：*****医院产品注册申请人（盖章）：*****有限公司注册申请联系人：*****注册申请联系人电话：*****报告版本：V1.0报告日期：2020年03月22日保密声明本报告中所包含的所有信息的所有权归*****有限公司。

因此，仅提供给研究者和监督管理部门等相关的医疗机构审阅。

在未得到申办者书面批准的情况下，严禁将任何信息告知与本研究无关的第三方。

研究摘要目的：评价*****有限公司生产的血红蛋白检测试剂盒（SLS-Hb法）用于检测人体样本中血红蛋白的含量时，其诊断检测能力与已上市的同类试剂盒无差异。

方法：本次临床试验采用同步盲法对比试验。

结果：*****医院共检测110例受试者样本，按方案剔除标准共剔除样本1例，其中1例为线性范围外标本，0例为离群值标本，剔除率为0.91%，最终纳入分析109例，其中男性59例，女性50例，平均年龄39.77±14.18岁。

本次临床试验结果的Pearson相关系数接近1，说明两种试剂的相关关系越密切。

回归方程的截距（a）的95%CI包括0，斜率（b）接近1，说明两种试剂的一致性比较好。

根据说明书中对准确度允许偏差的标准，医学决定水平处偏倚均在允许偏差范围内。

考核试剂与参比试剂检测浓度的差值Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度差值为0.1798±2.3020g/L（均值±标准差），两种试剂检测浓度差值的均值±1.96SD范围在-4.3322g/L到4.6918g/L之间。

超出置信区间的百分比为：2.75%。

考核试剂与参比试剂检测浓度比值的Bland-Altman散点图显示：两种试剂检测浓度比值为1.0018±0.0167（均值±标准差），两种试剂检测浓度比值的均值±1.96SD范围在0.9690到1.0346之间。

血红蛋白检测方法
血红蛋白需要抽血进行实验室检查，常用到的测定方法就是血细胞分析仪比色法。

血红蛋白是红细胞的主要组成部分，也是红细胞内运输氧气的特殊蛋白质，其承担着向机体内各个器官、组织输送氧气、运出二氧化碳的功能。

同时，血红蛋白也是让血液呈现出红色的主要蛋白质，主要是珠蛋白和血红素两个成分组成。

血红蛋白与红细胞的检测价值相似，血红蛋白的升高和降低可参考红细胞升高与降低的临床意义。

血红蛋白在人体血液中广泛存在，因此测定血红蛋白指数需要抽血进行实验室检测，因为是色素蛋白，所以临床常用到的测定方法就是比色法。

通过血细胞分析仪，就能够自动分析出血红蛋白的浓度。

男性血红蛋白计数为120-160g/L，女性血红蛋白计数为110-150g/L、新生儿血红蛋白计数为170-200g/L。

《血红蛋白含量测定》实验综述报告血红蛋白是由珠蛋白、亚铁血红素等组成，作为红细胞内的一种机能蛋白，在生物体内起到传输氧气、传递电子等功能，与氧和能量代谢有关的重要活动。

在临床上出现各类贫血、白血病及心脏病等症状常与血红蛋白异常有关，因此，人体血液中和尿液的血红蛋白含量的测定是临床检测的一个重要内容。

通常用血红蛋白内的珠蛋白和亚铁血红素在血液中的总浓度来表示。

血红蛋白成分的评价应用范围较广，其涉及动物学、医学、体育学、生物工程学等领域。

目前，随着检验技术的飞速发展和医疗器械的不断改进，目前，血红蛋白含量检测方法主要有比重法、比色法721分光光度仪法、光电比色、电流阻抗法、胶体金法溶血测试条等6个不同方法测定。

1 比重法比重法是血红蛋白测定的最原始的方法，在血库或大量的献血员采血时为了节约时间，看是否贫血，在硫酸铜溶液中加入一滴于溶液中，通过其浮力方法是否大于排开水的重量如果沉入杯底，可以献血，血滴漂浮为贫血。

通过血滴在水中的比重变化来观察人体是否贫血，此方法是基于对血滴重量和在水中浮力进行测量，通过肉眼观察，粗略估计而得出的。

是依据阿基米德原理，血红蛋白是由各种亚铁血红素等构成的，血红蛋白内珠蛋白和亚铁血红素的量多少，直接影响血红蛋白含量多少，因此通过血红蛋白比重法可推算出是否贫血。

该方法不需要特定的设备，操作简单，但准确度低，没有准确的文字描述，不适合推广。

只用于一般体检且对受试者体能状况有一定的要求，故对体质较弱的人群不要采用。

2 血红蛋白目测比色法血红蛋白目测比色法是对比重法的替代，此测定器材包括两个部分，一个是比色管，一个是参照比色槽。

取0.1mol/L稀盐酸溶液2-3滴加于比色管中，再加20ul血液于比色管中，混匀、静置15分钟，不断加蒸馏水于亮光处与比色槽颜色相对照一样，液体的高度即可读取刻度即血红蛋白含量。

由于指定颜色与刻度存在对应关系，进而可以推算出受试者的血红蛋白浓度。

比色法的优点是受试者可以准确知道血红蛋白含量。

血红蛋白测定实验报告实验目的：本实验旨在通过测定血液中的血红蛋白浓度，了解血液的营养状况，评估身体的健康状况。

实验原理：血红蛋白是红细胞内的主要蛋白质，它含有铁元素，能与氧结合形成氧合血红蛋白，负责运输氧气到全身各个组织。

测定血红蛋白浓度是评估贫血程度的一种常用方法。

本实验采用西林法测定血红蛋白浓度。

西林法是一种经典的测定血红蛋白浓度的方法，它利用了草酸亚铁与血红蛋白的特异性反应，生成淡紫色的铁蓝衍生物。

通过比色法测定溶液的吸光度，再根据标准曲线计算出血红蛋白浓度。

实验材料和设备：1. 血红蛋白测定试剂盒2. 安全眼镜和手套3. 量筒、试管、移液管等常见实验器具4. 分光光度计实验步骤：1. 将血液样本放置于离心管中，以3000转/分钟的速度离心10分钟，获取上清血浆。

2. 根据试剂盒说明书，将血浆与试剂按比例混合，并搅拌均匀。

3. 将混合液转移至试管中，并在光度计中测量吸光度值，记录下各个浓度的吸光度值。

4. 绘制标准曲线，将吸光度值作为横坐标，血红蛋白浓度作为纵坐标，绘制出吸光度-浓度曲线。

5. 测量待测样本的吸光度，并根据标准曲线计算出血红蛋白浓度。

实验结果：根据实验中测量的吸光度值和标准曲线，计算出待测样本的血红蛋白浓度为X g/L。

实验讨论：通过本实验测定的血红蛋白浓度，可以初步判断一个人的贫血程度。

同时，血红蛋白浓度还可以用于监测治疗效果，评估疾病的恢复情况。

然而，血红蛋白浓度只是评估身体健康的一个指标，综合考虑其他因素，如红细胞计数和红细胞压积等，才能全面了解一个人的血液情况。

实验结论：通过血红蛋白测定实验，测得待测样本的血红蛋白浓度为X g/L，初步判断其贫血程度为（正常/轻/中/重）。

但需要结合其他指标综合判断。

血红蛋白测定实验一、实验目的与任务了解XF—1B型（或Hb—2000型）血红蛋白仪的使用方法，掌握血红蛋白的测定技术。

有训练运动员在较好训练效果的影响下血红蛋白正常值高于正常成年人，因此，血红蛋白的测定是评定训练效果的重要指标。

二、原理测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色，光电比色法，沙利氏比色法（间接比色法）。

我们现在实验室用的是XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪。

此仪器是采用氰化高铁法，应用光电比色的原理测定血红蛋白值的，其原理是：将全血样品20ul注入5ml氰化高铁血红蛋白稀释液内（亦称文—齐氏液），作251倍稀释，溶化红细胞释出血红蛋白。

稀释剂将血红蛋白先转变成高铁血红蛋白，再转化为氰化高铁血红蛋白。

然后，再用XF—1B 型（或Hb—2000型）Hb仪比色法直接测定显示浓度数，不需任何换算（每次测定只需5秒钟）。

三、实验器材XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪、一次性血细胞吸管（刻度10～20ul）、采血针、75%酒精、消毒棉球、培养皿、烧杯、可调加液器、试管架、血红蛋白测定试剂（文—齐氏液）、氰化高铁血红蛋白标准液。

四、实验步骤1、插上电源，打开血红蛋白仪电源开关，按动进样开关，重复三次吸入蒸馏水，并通电预热20～30分钟。

观察显示是否为“零”。

（按出Hb仪器左下角“测试—定标”按键，使之处于“测试”状态。

）2、取试管一支，加入Hb测定试剂（文—齐氏液）5ml，放在试管架上备用。

3、采血、比色：先消毒，再用采血针在耳垂或无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用血细胞吸管取血液20ul（注意：吸管内不可有气泡，否则需重新采血）。

擦去吸管外血液后，轻轻吹入测定管底部，并回吸数次洗净吸管，然后充分混合均匀。

待5分钟后，置Hb仪上比色。

4、记录：直接读数，记录下来。

Hb值通常以每100 ml血液中含Hb若干克来表示。

（g/ml）。

本仪器采用国际单位制（g/L），可直接显示Hb值（g/L）。

总蛋白试剂盒（双缩脲比色法）标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中的总蛋白含量。

2. 适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测人血清或血浆中的总蛋白含量。

3. 职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总蛋白试剂盒采用的是双缩脲比色法。

5. 原理蛋白质中的肽键在碱性条件下，与铜离子反应生成紫红色络合物，并且引起550nm 处吸光度的上升。

由于反应所产生的化合物在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 550nm 处吸光度的变化值与样本中总蛋白的含量成正比。

紫红色络合物蛋白质中的肽键碱性条件−−−→−++2u C6. 仪器AU5811自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：测定：酒石酸钾钠≥5g/L试剂：硫酸铜≥2g/L 、碘化钾≥1g/L 、NaOH ≥30g/L校准品：白蛋白 （含量见瓶签）7.3 试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。

校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。

8. 标准品和质量控制8.1 校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

蔗糖溶血检测试剂盒(比色法)简介：红细胞(Red blood cell ，RBC)也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，脊椎动物体内通过RBC 运送氧气，RBC 同时还具有免疫功能。

在贫血检查中，可通过蔗糖水溶血试验来检测红细胞膜的缺陷，尤其适用于检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH)。

该症为获得性红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血，常在睡眠时加重，可伴发性血红蛋白尿和全血细胞减少。

Leagene 蔗糖溶血检测试剂盒(比色法)采用光电比色法，是利用含蔗糖溶液的低离子强度孵育红细胞，可大大促进补体与红细胞膜的结合，使对补体敏感的红细胞膜上形成小孔，蔗糖水进入红细胞内引起红细胞膜破裂，使PNH 对补体敏感的红细胞溶血。

该试剂盒主要用于检测人、动物血液的红细胞膜的缺陷，尤其用于鉴定阵发性睡眠性血红蛋白尿症，用光电比色法求出溶血百分比。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 生理盐水2、 蒸馏水或去离子水3、 与患者同血型的正常新鲜血清4、 水浴锅操作步骤(仅供参考)：1、 制备红细胞悬液：取抗凝血，经生理盐水洗涤，用PNH NaCl buffer 重新悬浮红细胞。

2、 制备蔗糖盐工作液：按蔗糖盐溶液：去离子水，即为蔗糖盐工作液。

3、 按下表进行操作：编号 名称TC0255 50T Storage试剂(A): PNH NaCl buffer 10ml RT 试剂(B): 蔗糖盐溶液 10ml -20℃ 试剂(C): Alkaline buffer 2×30mlRT使用说明书1份加入物(ml)1 234 蔗糖盐工作液0.90.95 0.95—50%红细胞悬液0.05 0.05 —0.05待测血清0.05 —0.05 —Alkaline buffer ——0.954、室温孵育，分别加入生理盐水，低速离心，取上清。

铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)简介：铁是人体必需微量元素，总含量约为3270mg 。

铁分布较广，有67.6%的铁作为血红蛋白分子的辅基分布于血红蛋白中，参与铁的运输。

Leagene 铁检测试剂盒(亚铁嗪比色法)再被还原剂还原为Fe 2+，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，通过分光光度计检测562nm 处吸光度值，适用于检测血清、血浆、组织等样品中的铁含量。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 (选做)制备样品：① 浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于Fe 的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于Fe 的检测。

高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的Fe ，可以使用ddH 2O 稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。

④(选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的Fe 含量。

2、 制备铁标准工作液。

配制好以后，4℃避光保存3个月有效。

3、 Fe 检测：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥试管或者一次性无菌聚乙烯离心管，按下表操作。

编号 名称TC1016 50T Storage试剂(A): 铁标准(100μg/ml) 1ml 4℃ 避光 试剂(C): Fe Assay buffer 60ml 4℃ 试剂(D): 亚铁嗪显色液 3ml 4℃ 避光 试剂(E): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份加入物 空白管 标准管 测定管 ddH 2O/ml 0.45 — — 铁标准(2μg/ml)/ml — 0.45 — 待测样品/ml——0.45Fe Assay buffer/ml 1.2 1.2 1.2混匀，于562nm处，以空白管调零，读取测定管吸光度(即血清空白)。

亚铁嗪显色液/ml 0.05 0.05 0.054、混匀，室温静置，分光光度计562nm处检测，以空白管调零，比色杯光径0.5cm，再次读取各管吸光度，1h内比色完毕。

一、实验目的1. 掌握血红蛋白测定的原理和方法。

2. 了解血红蛋白在临床医学中的应用。

3. 培养实验操作技能，提高实验数据分析能力。

二、实验原理血红蛋白（Hemoglobin，Hb）是红细胞内的一种含铁蛋白质，具有携带氧气和二氧化碳的功能。

血红蛋白的测定方法主要包括比色法、直接测定法和血浆游离血红蛋白测定法等。

本实验采用比色法测定血红蛋白含量。

三、实验材料与仪器1. 试剂：血红蛋白标准液、邻甲联苯胺溶液、双氧水、醋酸溶液、蒸馏水、生理盐水等。

2. 仪器：分光光度计、微量移液器、试管、离心机、移液管等。

四、实验方法与步骤1. 标准曲线绘制（1）取一系列试管，分别加入不同浓度的血红蛋白标准液，加入蒸馏水至一定体积。

（2）向各试管中加入适量的邻甲联苯胺溶液和双氧水，混匀。

（3）室温放置10分钟后，用分光光度计在波长540 nm处测定吸光度。

（4）以血红蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 血红蛋白含量测定（1）取一定量的待测血液，加入适量的生理盐水，混匀。

（2）离心分离血浆，取上层血浆至试管中。

（3）按照标准曲线绘制方法，测定血浆的吸光度。

（4）根据标准曲线，计算待测血液中的血红蛋白含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制根据实验数据，绘制标准曲线如下：```血红蛋白浓度（g/L）| 吸光度-------------------|--------0.0 | 0.0000.2 | 0.1500.4 | 0.3000.6 | 0.4500.8 | 0.6001.0 | 0.750```2. 血红蛋白含量测定根据标准曲线，计算待测血液中的血红蛋白含量为X g/L。

六、实验讨论1. 本实验采用比色法测定血红蛋白含量，该方法操作简便、快速，准确度较高。

2. 实验过程中，应注意防止血红蛋白污染，确保实验结果的准确性。

3. 血红蛋白含量测定在临床医学中具有重要意义，可用于诊断贫血、溶血性贫血等疾病。

血红蛋白的测定方法主要有以下几种：
1.比色法：这是临床上最广泛使用的方法，包括目视比色和光电比色两类。

其中，氰化高铁血红蛋白法（HiCN）具有操作简单、显色快、结果稳定可靠等优点，为国际
血液学标准化委员会（ICSH）推荐的国际标准参考方法。

原理是血液中除硫化血红蛋
白（SHb）外的各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，再和CN-结合生成
稳定的棕红色复合物-氰化高铁血红蛋白，其在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定该处的吸光度，经换算即可得到每升血液中的血红蛋白浓度。

2.测铁法：原理为测定血中铁含量，再按100g血红蛋白含0.347g铁的公式换算出血红蛋白含量。

此法虽然精确，但方法复杂、费时，不可能常规使用，仅用以校正其他方法所得的结果。

3.测氧法：先测定血液结合氧的能力，再按1g血红蛋白能结合1.34ml氧的公式计算出血红蛋白含量。

此法不仅繁杂费时，而且不能测定所有失去结合氧功能的血红蛋白，所以测定结果偏低而不准确。

此法已趋于被淘汰。

4.比重法：把血液滴入系列硫酸铜液瓶中，视血滴的悬浮或沉降，决定血液的比重，再由此推算出血红蛋白含量。

因此法准确性差，现已废弃。

5.特定的测定试纸法：适用于工矿、农村等基层单位使用，但准确性差。

请注意，在进行血红蛋白测定时，应根据具体情况选择合适的方法，并遵循专业人员的指导。

如有任何疑问或不适，请及时就医并咨询专业医生的意见。

（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。

然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。

（3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2)3.使用沙里氏血红蛋白计测定沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。

（1）沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。

比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。

为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。

（2）具体测定方法如下：①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。

②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。

③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。

操作时勿产生气泡,以免影响比色。

用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。

④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。

⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。

用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。

⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。

比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。

换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。

[注意事项]1.取血前要做好充分的消毒。

2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。

血红蛋白的测定——沙利氏比色法测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色法，光电比色法，沙利氏(Sahli) 目视比色法（间接比色法）。

Sahli氏目视比色法虽然精确度较差，但方法简便快速。

【目的】了解Hb测定方法，练习测定Hb含量的沙利氏比色法，理解Hb测定原理。

【原理】血液与盐酸作用后，释放出血红蛋白，Hb被酸化后变为褐色的盐酸高铁血红蛋白，与标准色柱相比，便可测出其含量。

【器材与试剂】（1）沙利氏血红蛋白计一套吸管为一厚壁毛细玻璃管，其上有10微升和20微升两个刻度，上端接一橡皮吸管。

比色架内有标准色柱。

测定管上有两种刻度，从下往上，一侧有2—24的刻度，表示100m1血液中所含血红蛋白克数，以g/dl 表示；另一侧有20—160的刻度，表示100ml 血液中血红蛋白的百分数。

国产的血红蛋白计是以每100ml血液含14.5g血红蛋白为100％而设制。

（2）0.1M盐酸（3）75%酒精棉球、干棉球、采血针、蒸馏水【步骤】（1）将测定管和吸管依次用自来水、９５％酒精洗净，干燥备用。

（2）向测定管内加入0.1M盐酸5-6滴，约加到管下端刻度“2”为止。

（3）采血、比色：先消毒无名指尖，再用采血针在无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用吸管取血液20ul。

擦去吸管外血液后，轻轻加入测定管底部，并回吸数次以洗出吸管中的血液。

轻轻振动比色管，使血液与盐酸充分混合。

（4）静置10min，待血液变成褐色后，缓缓滴加蒸馏水，每加1滴，用细玻璃棒搅动一次，直到颜色与标准色柱完全相同为止。

液柱凹面所指的刻度数，即为每百毫升血液中血红蛋白的克数，用g/dl或g％表示。

实验四血红蛋白的测定1．本次实验的目的和要求了解和练习沙利氏比色法测定血红蛋白含量。

2．实验内容或原理血液加入稀盐酸后，血红蛋白转化成不易变色的棕色的高铁血红蛋白，可与标准比色板进行比色，从而测得血红蛋白含量。

3．需用的仪器或试剂等人或动物。

沙利氏血红蛋白计、酒精棉球、０.１mol/L盐酸、蒸馏水等。

4．实验步骤（1）先检查血红蛋白计的测定管和吸血管是否清洁，如不清洁则依次用自来水、蒸馏水(３次)、９５％酒精(２次)和乙醚(１～２次)清洗。

（2）将０.１mol/L盐酸加入测定管中至刻度“２”或“１０％”处。

（3）用酒精棉球消毒采血部位，以采血针采血，用吸血管插入流出的血滴深处，吸血至刻度２０ul处，拭净外壁，将血液立即吹入测定管的盐酸中。

反复吸吹，使吸血管中血液全部进入盐酸液中(避免起气泡)。

混匀，１０min后，逐滴加入蒸馏水使液体颜色变浅，边加边混匀并与标准比色板比较，至二者颜色相同止。

（4）读出测定管内液体凹面最低处的刻度，即为每１００mL血液中血红蛋白的克数。

另一方面刻度表示百分率，可参照血红蛋白计的说明换成克数以核对读数。

实验五红细胞脆性的测定、1．本次实验的目的和要求测定红细胞膜对不同低渗溶液的渗透抵抗力．亦即测定正常动物红细胞的渗透脆性。

了解红细胞沉降率并掌握其测定方法。

了解红细胞凝集现象，并掌握测定血型的方法。

2．实验内容或原理内容：实验室可完成红细胞脆性实验，血红蛋白含量检测的实验内容。

做到改变某些因素时的检测内容，结合实验理解红细胞脆性的概念，分析论证产生的结果。

原理：（1）通过实验了解正常的红细胞悬于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞失去内部液体而皱缩，反之，置于低渗溶液内则水分进入红细胞，使红细胞两面凹陷的圆盘型变为球型，如继续膨大，即发生破裂溶解，形成溶血。

（2）红细胞膜含有凝集原，血浆内含有凝集素。

当相应的凝集原和凝集寨相互作用时，就产生红细胞的凝集现象。

3．需用的仪器或试剂等电子天平、水浴箱、电子称、低速离心机、微量移液器、标准枪架等。

血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法）适用范围：该试剂用于定量测定人血浆中游离血红蛋白的含量。

1. 产品型号/规格及其划分说明1.1试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml ×12. 性能指标1、试剂空白试剂空白吸光度值≤0.18。

2、线性区间测量范围[0.025，0.400] g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。

3、准确度回收率90%～110%4、分析灵敏度血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。

5、精密度a）重复性变异系数≤10%。

b）批间差连续三批血浆游离血红蛋白试剂盒测定同份血浆样本，其测定值的批间差≤10%。

【包装规格】试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml×1【主要组成成分】R1：TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/LR2：4-氨基安替比林 5mmol/LR3：过氧化氢3.0%【产品性能指标】1. 试剂空白吸光度值≤0.18。

2. 线性区间测量范围[0.025，0.400 ]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。

3. 重复性：变异系数≤10%。

4. 准确度：4.1 型式检验：回收率90%～110%4.2 出厂检验：检测控质控品，结果在靶值±2SD范围内。

5. 灵敏度：血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。

”变更为“产品技术要求1. 产品型号/ 规格及其划分说明1.1 试剂 1（R1）：100ml×1，试剂 2（R2）：100ml×1，试剂 3（R3）：10ml ×1校准品：2ml×1（选配）；质控品：2ml×1（选配）1.2 组成成份：试剂 1（R1） TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/L试剂 2（R2） 4-氨基安替比林 5mmol/L试剂 3（R3）过氧化氢 3.0%校准品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白 0.100g/L（目标浓度）质控品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白0.146 g -0.236g/L 。

血红蛋白是一种色素蛋白，可以用比色法测定。

血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。

1 ) 氰化高铁血红蛋白 ( HiCN )测定法：血液中除了 SHb 以外，其他各种血红蛋白均可被试剂转化、生成 HiCN，其最大的吸收峰为 540nm 波长，可经比色测定。

此法为国际血液学标准化委员会 ( ICSH )推荐的国际标准参考方法，操作简单，显色快且结果稳定医`学教育网搜集整理；但本法试剂中 KCN 有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊， HbCO 转化较慢。

2 ) 十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白 ( SLS-Hb )法：除 SHb 外，血液中各种 Hb 均可与低浓度十二烷基月桂酰硫酸钠 ( SLS )作用，生成 SLS-Hb 棕红色化合物。

SLS-Hb 最大吸收波峰 538nm ，波谷 500nm ，肩峰 560nm. 由于摩尔消光系数尚未最后确认，因此不能用吸光度“A”值直接计算血红蛋白浓度。

本法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，且无公害。

但 SDS 质量差异较大，并且 SDS 可破坏白细胞，不适合进行白细胞计数的血液分析仪使用。

3 )叠氮高铁血红蛋白( HiN3 ) 测定法：与 HiCN 法相似，但仍然有公害问题。

4 ) 碱羟血红蛋白 ( AHD 575nm ) 测定法：试剂简单、不含有毒试剂、呈色稳定，但由于其吸收峰在 575nm ，限制了此法在血液分析仪的使用。

5 )溴代十六烷基三甲胺 ( CTAB ) 血红蛋白测定法：该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，可同时进行白细胞计数，可用于血细胞分析仪自动检测 Hb 和白细胞。

缺点是对 Hb测定结果的准确度和精密度较低。

近年来，多参数血细胞分析仪的应用，使 Hb 测定逐步以仪器法取代手工法，其优点是操作简单、快速，同时可以获得多项红细胞的参数，血液分析仪法测定血红蛋白的原理与手工法原理相似，多采用 HiCN 法，但由于各型号仪器使用的溶血剂不同，形成 Hb 的衍生物不同医`学教育网搜集整理。

游离血红蛋白检测试剂盒(邻-甲联苯胺比色法)简介：血红蛋白(Hemoglobin ，Hb 或HGB)是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是能使血液呈红色的蛋白。

血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。

Hb 在氧含量高的区域，容易与氧结合；在氧含量低的区域，又容易与氧分离。

血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。

血管溶血时，血浆游离血红蛋白(free hemoglobin)浓度增高。

游离血红蛋白检测试剂盒(邻-甲联苯胺比色法)(Free Hemoglobin Colorimetric Assay Kit 检测原理是血红蛋白中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，可在氧化剂的作用下催化邻-甲联苯胺(O-tolidine)产生蓝色产物，吸收峰。

在酸性条件下产物呈黄色，吸收峰，产物黄色越深，说明FHB 含量越高，反之则越低，通过分光光度比色法测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出血浆游离血红蛋白含量水平。

该试剂盒主要用于血浆样本，亦可用于细胞或组织的裂解液或匀浆液等样品中游离血红蛋白含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 恒温箱2、 96孔板、酶标仪或分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液：取O-tolidine 恢复至室温后，溶解于FHB Assay buffer ，即为显色工作液。

配制好的显色工作液-20℃保存，一般1月内用完。

② 配制标准品工作液：取出Hb(1mg/ml)恢复至室温，加入ddH 2O ，即为标准品工编号 名称TC0201 100T Storage试剂(A): FHB Assay buffer 30ml 4℃ 避光 试剂(B): O-tolidine 2支 RT 试剂(C): Acid Assay buffer 100μl ×2 RT 试剂(D): Hb(1mg/ml) 10μl ×2-20℃ 使用说明书1份作液(100μg/ml)。

血红蛋白测定原理
血红蛋白测定的原理是基于光学吸收的原理。

血红蛋白是一种带有呈红色的铁质血红素的蛋白质，它主要存在于红细胞中，负责携带氧气到人体各个组织。

测定血红蛋白的方法主要是利用血红蛋白对某一特定波长的光的吸收来间接测定血红蛋白的浓度。

在测定过程中，首先需要将一定量的血样置于特定的测试仪器或试剂盒中。

这些测试仪器或试剂盒里通常都含有某个特定波长的光源。

光源照射到血液中的血红蛋白上后，血红蛋白吸收特定波长的光而产生吸收峰。

然后，利用光学仪器测量样品通过时的光强度和未通过时的光强度之间的差异，即吸光度。

由于血红蛋白的浓度与其吸光度存在一定的关系，因此可以通过测量吸光度的程度来计算血红蛋白的浓度。

一般情况下，仪器或试剂盒内部都设有标准曲线，通过测量吸光度与已知浓度的标准溶液之间的关系，可以将样品的吸光度值与对应的血红蛋白浓度进行对照，从而得到样本中血红蛋白的浓度。

血红蛋白测定方法的选择主要取决于实验室设备的可用性和测试时间的要求。

常用的方法包括光电比色法、封闭波长法和血红蛋白电泳法等。

这些方法各自有其特点和适用范围，但都是基于血红蛋白吸光度特性的测定原理。