生物实验室常用试剂的配制

3.乙酸 带有刺激味的无色液体，纯乙酸在 16.7℃以下凝固， 故名冰乙酸。乙酸固定液的常用浓度是0.3~0.5%。乙酸能凝固 细胞核内的蛋白质 (核蛋白)，对染色质或染色体的固定，染色 较好。用乙酸溶液固定材料，可使细胞膨胀和防止收缩，组织 也不会硬化。它常跟乙醇、甲醛、铬酸等易引起硬变的收缩的 液体组成混合固定液，效果较好。
3.鉴定蛋白质用的双缩脲试剂 分别配制10%氢氧化钠溶液和 1%硫酸铜溶液，待用。在3毫升待测液中加入1mL10%氢氧化 钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质，会出现紫色反应。
4.鉴定脂肪的试剂 苏丹IV溶液的配制：取0.2g苏丹IV，放入 无水乙醇中，加热，使它充分溶解，成为饱和乙醇溶液。过滤 后倒迸试剂瓶内密闭保存备用。苏丹Ⅲ溶液的配制：0.1g苏丹 Ⅲ粉末加入95%乙醇100mL待全部溶解后便可使用。
(2)硼酸－生理盐水溶液 在0.75%生埋盐水中加入硼酸，使成 为饱和溶液。可用来分离脊髓灰质或脑灰质部位的神经组织。
3.用于分离神经纤维的试剂 硝酸银溶液:取0.5G硝酸银，溶 解在100mL水中即成。
4.用于分离植物根尖细胞的试剂
(1)盐酸乙醇溶液 在1份95%乙醇中徐徐加入1份浓盐酸，即 成盐酸乙醇溶液。密闭保存。
生物实验室常用试剂的配制
一、检验酸碱性的试剂
1.酚酞试液 取0.1酚酞，溶解在100mL60~90%的乙醇溶液里， 装在试剂瓶内密闭保存。酚酞试液在碱性溶液中呈红色。
2.麝香草酚酞(百里酚酞)试液 把0.1g白色的麝香草酚酞溶解在 100mL90%乙醇里制得。当pH值由9.4~10.6时，颜色为无色至 蓝色。
1.甲醛也叫福尔马林液(Fomalin)，固定材料常用5%甲醛溶 液，保存生物标本常用4一5%的，消毒常用3%的。市售的是 40%甲醛溶液，加7、9、12倍水分别稀释成5%、4%、3%甲醛

分子生物学实验室常用试剂配方：医药观察之我见2. 常用试剂配方（Prescriptions of Ordinary Reagents）（高媛）. (217)(1) PBS (217)(2) 胰酶Trypin (217)(3) Tris-NH4Cl (217)(4) Running buffer (218)(5) Washing buffer (218)(6) 湿转液 (218)(7) LB培养基 (218)(8) LB培养板 (218)PBS:PBS是磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用。

主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离，缓冲的pH值范围很广；而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。

配置方法：NaCl : 320g 优级纯Na2HPO4. 12H2O 61.44gKCl 8gKH2PO4 8g三蒸水4L烧杯溶解后用HCl调PH为7.2-7.4，细胞用需要高温灭菌，放于超净台冷却，贴上封口膜及标签。

胰酶：Trypsin 一种胰蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离。

细胞消化胰酶常用工作浓度为0.25%，PH为7.2-7.4，储存液放在-20冻存，使用液放在4度。

Tris-NH4Cl :红细胞裂解液，是一种从人，鼠及其他哺乳动物等体内烦人组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，应用低渗的原理，改变红细胞渗透压，使得红细胞胀大破裂。

配置方法：2L 体系：NH4Cl : 14.94g 溶于1800mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 5.15g 溶于200mL ddH2O3L体系NH4Cl : 22.41g 溶于2700mL ddH2O 混匀HCl调节PH为7.2-7.4 过滤Tris : 7.725g 溶于300mL ddH2ORunning buffer: 4L （5X）Tris: 60.6gGly: 288.3gSDS: 20gddH2O 3.78LWashing buffer: 4L (10X)Tris : 48.6gNaCl : 116.9gTween 20 : 40mLddH2O: 3.9L湿转液：4L (10X)Tris: 121.4gGly: 576.6gddH2O 3.57LLB液体培养基：名字来源于英语lysogeny broth 即溶菌肉汤，应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。

实验室常⽤药品试剂的配置与使⽤实验室常⽤药品试剂的制备与使⽤(⼀)认识药品规格纯度规格简写标签颜⾊级别特点(⼆)染⾊试剂的配制1.甲基绿（DNA—绿⾊）和吡罗红（RNA—红⾊）染⾊剂配制：a)A液：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏⽔中，取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏⽔中。

取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加⼊到16 mL蒸馏⽔中，置于棕⾊瓶中备⽤。

b)B液：是⼀种缓冲液，由⼄酸钠和⼄酸混合⽽成。

先取⼄酸钠16.4 g，⽤蒸馏⽔溶解⾄1000 mL备⽤；再取⼄酸12 mL，⽤蒸馏⽔稀释⾄1000 mL备⽤。

取配好的⼄酸钠溶液30 mL和稀释的⼄酸20 mL，加蒸馏⽔50 mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。

c)取A液20 mL和B液80 mL混合，就是实验中所⽤的吡罗红甲基绿染⾊剂。

应该注意的是该试剂应现⽤现配。

2.I2-KI溶液（淀粉—蓝紫⾊，蛋⽩质—黄⾊）配制：将碘化钾3g溶于蒸馏⽔中，待全部溶解后加⼊碘1g，振荡使其溶解，将此液保存在棕⾊玻璃瓶内。

3.苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ（⽊栓化、⾓质化细胞壁—红⾊，脂肪、挥发油、树脂等—红⾊或淡红⾊）配制：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ⼲粉0.1g与95%⼄醇10 mL混合，过滤后再加⼊10 mL⽢油。

4.1% 醋酸洋红染料（染⾊体—紫红⾊）配制：将洋红1 g与45% 醋酸100 mL煮沸2h 左右，并随时注意补充加⼊蒸馏⽔到原含量。

冷却后过滤，加⼊4% 铁明矾溶液1~2滴，放⼊棕⾊瓶中备⽤。

5.龙胆紫酸性染料（染⾊质—紫⾊）配制：取龙胆紫1 g，溶于少量2% 醋酸溶液中，滴加2% 醋酸溶液，直⾄溶液不呈深紫⾊为⽌。

6.卡宝染⾊剂（染⾊体—红⾊，着⾊深，保存性好）⼜名苯酚-品红染⾊剂配制：a)原液A：将3g碱性品红溶于100 mL 70% 的⼄醇中。

b)原液B：取原液A 10 mL 加⼊到90 mL 5% 苯酸⽔溶液中。

（两周内有效）c)原液C：取原液B 55 mL，加⼊6 mL福尔马林和6 mL冰醋酸。

试剂配制方法一、实验室常用储备液（1）0.5mol/L EDTA（乙二胺四乙酸）在700ml 超纯水中溶解186.1g Na2EDT A·2H2O，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。

用10mol/L NaOH调至PH8.0（约用10mol/L NaOH 50ml），补加超纯水至1L。

分装后高压蒸汽灭菌。

室温贮存。

注意：EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的PH值调至接近8.0，才会溶解。

（2）1mol/L Tri s·Cl将121.1g Tris碱溶于800ml超纯水中，用浓盐酸将PH值调至设定值。

PH值HCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml应使溶液冷却至室温后，方可最后调定PH值。

加超纯水定容至1L，分装后高压蒸汽灭菌。

如果配制的溶液呈现黄色，应予丢弃。

并使用质量更好的Tris。

Tris溶液的PH值因温度而异，温度每升高1℃，PH值大约降低0.03个单位。

（3）10mol/L 乙酸铵(NH4C2H3O2)将771g乙酸铵溶于800ml蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，用蒸馏水定容至1L，过滤除菌，室温贮存。

乙酸铵在热水中分解，含有乙酸铵的溶液不能高压蒸汽灭菌。

（4）甘油（10％，V/V）用9体积的灭菌纯水稀释1体积的分子生物学级的甘油。

用0.22μm过滤器过滤除菌。

分装成1ml每份，-20℃贮存。

（5） 10mg/ml溴化乙啶(EtBr)在20ml双蒸水中溶解0.2g溴化乙啶，磁力搅拌数小时，以确保其完全溶解。

然后用铝箔包裹容器或将溶液转移至棕色瓶中，于4℃避光保存。

注意：溴化乙啶是一种诱变剂，必须小心操作。

（6） 70％乙醇（C2H5OH）100ml70ml无水乙醇溶于30ml蒸馏水。

（7） 50×葡萄糖Glucose（150ml储备液）将54g D-葡萄糖溶于超纯水，磁力搅拌至完全溶解，并将体积调至150ml，过滤除菌，室温贮存。

（8） 10mol/L氢氧化钠（NaOH）将400g NaOH颗粒，加入到一个约含有0.9L蒸馏水的烧杯中，磁力搅拌至完全溶解。