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动物医学生化实验《实验四 SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS–PAGE)》课件一实验目的1.掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）的基本原理和操作方法。
2学习蛋白质分离纯化和鉴定方法。
2.了解SDS-PAGE技术在动物医学研究中的应用。
二、实验原理SD-PAGE是蛋白质分离纯化和鉴定的一种常用方法，它利用蛋白质分子量大小的不同，在电场作用下，通过聚丙烯酰胺凝胶进行分离。
1. SDS的作用SDS是一阴离子表面活性剂，可以与蛋白质结合，使蛋白质分子解折叠并带负电荷。
由于SDS与蛋白质的结合比例与蛋白质分子量成正比，因此SDS可以使不同蛋白质分子带相同的电密度，从而消除蛋白质分子本身电荷差异对电泳的影响。
2. 聚丙烯酰胺凝胶的作用聚丙烯酰胺凝胶是一种多孔性物质，其孔径大小可以根据丙烯酰胺和交联剂的浓度进行调节。
蛋白质分在电场作用下通过凝胶，根据其分子量大小不同，在凝胶中迁移速度也不同，从而实现蛋白质的分离。
3. 电泳原理在电场作用下，带负电荷的蛋白质分子在凝胶中向正极迁移，分子小的蛋白质迁移速度快，分子量大的蛋白质迁移速度慢，最终在凝胶中形成不同的蛋白质条带。
三、实验材料1.试剂：o SDS（十二烷基硫酸钠）o Tris（三羟甲基氨基甲烷）o甘氨酸o丙烯酰胺o交联剂（N,N’-亚甲基双丙烯酰胺）o TEMED（N,N,N’,N’-四甲基乙二胺）o过硫酸铵（APS）o考马斯亮蓝R-250o乙醇o醋酸o水o蛋白质样品2.仪器：o电泳槽o电源o微量移液器o烧杯o量筒o试管o培养皿o电泳仪o凝胶成像仪o其他实验室常用仪器四、实验步骤1. 凝胶的制备(1)制备分离胶* 根据需要分离的蛋白质分子量范围，选择合适的丙烯酰胺浓度。
o将丙烯酰胺、交联剂、Tris缓冲液、SDS、TEMED和APS混合，充分搅拌均匀。
o将混合液倒入电泳槽中，蒸馏水覆盖，静置使其聚合。
(2)制备浓缩胶：o将丙烯酰胺、交联剂、Tris缓冲液、SDS、TEMED和APS混合，充分搅拌均匀。
