内毒素与真菌葡聚糖检测的临床意义精品课件

传统方法 实验方法 性质 结果判读 凝胶法 定性 肉眼观察 MB-80方法 动态比浊法 定量 准确数值，打印检测报告
时间
培养时间长
快速，1-2小时出结果
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内毒素临床相关疾病
急性 胰腺 炎 局部性细菌感 染:肺炎、胆 囊炎、烧伤合 并感染、穿孔 性腹膜炎、化 脓性胆管炎、 肝脓肿、肾盂 炎等。
内毒素血症 通常导致： 致死性感染 性休克、全 身炎症综合 症， DIC,MODS 等，病死率 极高。
甘露糖蛋白
1,6 葡聚糖 磷脂 双分 子层
1,3葡聚糖 合成酶
几丁质 麦角固醇
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(1-3)-β-D-葡聚糖特性
1 2 3
对热极为稳定， 高压121℃并不 能使其灭活。 在念珠菌和曲 霉菌细胞壁中 含量较多，对G 试验灵敏。
当真菌进入人体血 液或深部组织后， 经吞噬细胞的吞噬、 消化等处理后，(13)-β-D-葡聚糖可从 胞壁中释放出来， 从而使血液及其它 体液中含量增高。 当真菌在体内含量 减少时，机体免疫 系统可将其清除。
侵袭性真菌感染（IFI） 现状
IFI发生率不断增加
IFI感染病死率很高
IFI诊断困难及漏诊情况严重
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IFI诊断困难及漏诊情况严重
●尸检研究发现：
北京真菌感染 85例，其中生前明确真菌感染诊断者仅5例，占5.9％，漏诊率 高达94.1％。
要的指标，不仅可用于感染类别的鉴别诊断，
也可用于感染控制和病情转归的判定。内毒素 水平的检测应是一系列连续动态的检测过程。
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MB-80系统
1.系统组成：
1）仪器 MB-80主机 （MB-80(E)、MB-80(D)、MB-80(S)、MB-80(V)、MB-80(M)） 2）MB-80软件系统

➢ 1,3-β-D-葡聚糖与IgG亚型相结合检测可提高阳性预测值，有效指导 早期抗真菌药物治疗 .
N.Kondori, L.Edebo,etc. CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY,Mar.227004
例5
血浆1,3-β-D葡聚糖检测对血液病患者侵袭性 真菌感染的诊断价值
光度（显色） 法
动态显色法 终点显色法
18
G试验的基本原理
1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎的变形细胞裂解物 中的G因子，引起裂解物发生颜色变化，故称G试验。
试验反应机理图：
（1-3）b-D-Glucan TAL-RM(鲎试验非内毒素反应物 )
凝固酶原
活化G因子 凝固酶
G因子
显色寡肽
寡肽+显色基团（黄色） （光度法测定）
➢本研究收集疑为IFI的血液病患者血浆标本162例,其中化疗后患者85例,造血干细 胞移植后患者77例。 ➢按照欧洲癌症研究治疗组织及真菌研究组(EORTC/MSG)诊断标准,所有病例中有 确定诊断2例,临床诊断18例,拟诊75例,排除诊断67例。 ➢结果表明:以20 ng/m l为诊断界值,G试验的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)和 阴性预测值(NPV)分别为75%、91%、72.4%和92.4%。
真菌抗原检查
半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原 （GM)
甘露聚糖(mannan)抗原 隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验）
真菌特异的代谢产物
D-阿拉伯糖醇
真菌 DNA 的检测
10
临床诊断、拟诊的微生物学
1 合格痰标本直接镜检发现菌丝，且连续培养≥2 次分离到同种真菌

发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤
32
“G”试验
❖ 1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解 物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。
33
G试验检测评价
❖ BG 值 在 侵 袭 性 真 菌 感 染 临 床 表 现 出 现 之 前 就 已 经高于正常值
相关报道5例确诊IFI及3例临床诊断的IFI患者， 发现BG值升高出现在发热、咳嗽、胸痛等症状 和肺部CT检查发现以前 。
肺炎100%、尿路感染70-80%、腹腔感染72-84%、 烧伤85%、急性胰腺炎90%、败血症70%、急性肝 炎37-64%、暴发性肝炎58-100%、丙肝60%、胆 石症伴急性梗阻性化脓性感染85%、多器官功能 衰竭100%。
9
内毒素检测的临床应用
1
在肝胆疾病中的应用
2
在呼吸系统感染中的应用
3
内毒素和1，3-β-D-葡 聚糖检测的临床应用
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1
主要内容
来源及结构 生物学活性 检测的临床应用 检测方法及参考范围 标本采集及影响因素
2
内毒素
3
内毒素的生物学活性
1
发热反应
2
激活血管活性物质的释放
3
激活凝血和纤溶系统
4
激活补体
5
直接或间接损害肝脏
6
激活白三烯、前列腺素及单核巨噬系统
在胰腺疾病中的应用
4
在溃疡性结肠炎中的应用
5
在全身性细菌感染中的应用
6
在不明原因发热中的应用
10
内毒素检测在医院中的应用
1
在医院灭菌制剂检验中应用
2
对注射器、输液器等医疗器械的内毒素检测
3

真菌1-3-β-D葡聚糖、内毒素检测
---初步实现深部真菌感染和败血症早期诊断
检测原理︰免疫比浊法。

检测范围︰1-3-β-D葡聚糖可以检测出无菌体液中除隐球菌、接合菌以外的所有真菌感染；
内毒素可以检测无菌体液中革兰氏阴性菌可能引起的感
染。

实验特点︰早期、快速（4小时）、定量检出患者标本的真菌及革兰氏阴性菌含量。

适用标本︰血液、脑脊液、胸腹水、穿刺液和中段尿等无菌体液标本。

结果判断︰1-3-β-D葡聚糖、内毒素＜10pg/ml 阴性
10--20pg/ml 观察
＞20g/ml 阳性
临床意义︰阴性结果即标本中无真菌及革兰氏阴性菌生长；处于观察期的患者，需要再次采取标本实行检测；阳性结果标本，
推荐连续检测2次，结果皆为阳性者结合临床具有初步
诊断意义。

注意事项︰1.由于此实验要求严格的操作技术水平，为保证检测结果的准确性，需要各科室的配合，请注意无菌操作。

2.此实验需要专用的无热原试管或尿杯，各科室如需要请
到检验科领取。

3.本实验不能报告药敏结果，故建议和培养一起进行。

4.标本采取后应立即送检，推荐科室专人送检。

5.应用纤维素膜进行血液透析、使用阿莫西林/克拉维酸、
外科使用含葡聚糖的纱布、输注入白蛋白或丙球、肠道受
损导致病原菌移位的患者标本（儿科病人），易影响结果
造成假阳性，望临床科室注意；
6.为了更快、更准确的给临床发送有效的检测结果，请各
科室于每天上午10：30前将标本送于检验科，望各科室
配合，谢谢合作！
7.本科室承诺保证结果的及时报告，网络报告和电话通知
同时进行。