血凝实验实验报告

血凝实验实验报告

影响血液凝固的因素

（一）实验目的：通过本实验来了解血液凝固的基本过程及了解影响血液凝固的一些因素。

（二）实验对象：家兔

（三）实验步骤：（略）

（四）实验结果：

1、观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用：实验中可见到静置杯内血液发生凝固。搅拌杯内血液不凝固，但在毛刷上见到红色的血凝块，经水冲洗后毛刷上缠绕有白色丝状物。

2、观察影响血凝的一些理化因素：如下表9-1所示。

表9-3 影响血凝的一些理化因素 实验条件

1. 加少许棉花

2. 用石蜡油均匀涂试管内壁

3. 放置37℃水浴

4. 放置冰水水浴

5. 加肝素10个单位

6. 加草酸钾2mg

（表9-3文字说明：略）

3、观察内源性及外源性凝血过程：如下表9-2所示

表9-2 内源性和外源性凝血过程的观察

试剂

1、富血小板血浆

2、少血小板血浆

3、生理盐水

4、羊肺悬液

5、0.025mol/l cacl2

血液凝固时间

（表9-2文字说明：略）

（五）讨论：

血液凝固是指血液由流动的液体状态变为不流动的冻胶状态血液凝固过程大致分为三个主要阶

段：①凝血酶原激活物形成；②凝血酶原激活成凝血酶，③纤维蛋白原转变为纤维蛋白。在凝血酶原激活物的形成过程中分有两种不同的途径：内源性凝血途径和外源性凝血途径。内源性凝血途径是由凝血因子?启动的，参与血凝的全部凝血因子都在血浆内。凝血因子?可被各种带负电荷的物质等所激活，如血管内膜暴露的胶原纤维、玻璃、陶器等。外源性凝血途径是由存在于血管外组织中的凝血因子ⅲ所启动的，其余参与的凝血因子也在血管内。凝血因子ⅲ在脑、肺、胎盘组织含量很丰富。

不管是内源性凝血途径或外源性凝血途径，他们最后的是使血纤维蛋白的形成而使血液发生凝固。在观察纤维蛋白原在凝血过程中作用的实验中，由于参与凝血的全部凝血因子都在血浆中，因此其凝血过程是属于内源性凝血。由于玻璃和毛刷表面都带有负电荷，后者可激活凝血因子?，启动内源性凝血过程。凝血到最后阶段时，在凝血酶的

作用下，把纤维蛋白原水解成血纤维蛋白；形成的纤维蛋白不断地交叉成网状结构，把血液中的所有血细胞网凝血时间 50’’ 8’15’’ 2’15’’

6’45’’ 不凝 不凝 试管1 0.2 ml 0.2 ml

0.2 ml 2’15’’ 试管2 0.2 ml 0.2 ml

0.2 ml 3’45’’ 试管3 0.2 ml 0.2 ml

0.2 ml 45’’

罗于其中，从而使血液发生凝固。静置杯中的血液，由于发生了上述的血液凝固过程，所形成的纤维蛋白没有被破坏，所以杯中血液凝固。而搅拌过的杯内血液，虽也发生血液凝固过程，但所形成的纤维蛋白却不断缠绕到毛刷上，当杯内血液的纤维蛋白原全部水解掉后，形成的纤维蛋白也全部缠绕在毛刷上，这时血纤维只能网罗毛刷附近的一些血细胞，在毛刷上见有血凝块。经水漂洗后，血细胞被冲走，毛刷上剩下的是白色细丝状的纤维蛋白。搅拌后的杯内血液因纤维蛋白原全部被耗尽，无法再形成纤维蛋白，则搅拌后的杯内血液不发生凝固。由此可见，血液凝固的过程实际上是纤维蛋

白形成的过程，任何一个步骤被破坏，就不会引起血液凝固。

在血液凝固的两个过程中，它们是有所不同的。两者的主要区别如下表9-3所示： 表9-3

内源性和外源性凝血的主要区别

区别点

启动的凝血因子

ｘ因子的激活

参与凝血的凝血因子

凝血过程

凝血时间 内源性凝血 ? 需要?因子复合物

数量多，且全部在血管中 复杂 慢、约数分钟 外源性凝血 ⅲ 需要ⅲ因子复合物 数量少，ⅲ因子在血管外，其余在血管内 简单 快、约几十秒钟

由上可知，外源性凝血比内源性凝血所需的时间短。在实验结果表9-2中，第1、2试管都是由血小板、生理盐水和cacl2溶液组成的，参与

凝血的凝血因子都在血浆中，故其凝血过程为内源性凝血。而第3试管是由血小板、羊肺悬液和cacl2溶液组成。在第3试管中含有羊肺悬液，其内含有丰富的第ⅲ凝血因子。显然第3试管发生的血液凝固过程主要是外源性凝血途径。因此第3试管凝血时间最快。在第1、2试管中虽然所含成分相同，但血小板含量不一样，第1试管血小板含量高于第2试管。血小板对血液凝固具有促进作用，表现为：①血小板的质膜上吸附有许多凝血因子，如纤维蛋白原、因子v、因子xi等。②其α颗粒中也含有许多凝血因子以及血小板因子。③血小板因子为血液凝固过程提供磷脂表面，其激活后能加速血凝；同时其能对一些血凝因子具有保护作用，免受抗凝血酶ⅲ和肝素的破坏。可见，第1试管内因含有丰富的血小板，故其凝血时间比第2试管快。

血液凝固受许多因素的影响，如凝血因子的质和量、各种理化因素等。

棉花给血液凝固提供一个粗糙表面，容易使血小板发生粘着、聚集，然后发生解体，释放许多凝血因子和血小板因子；另外，棉花含许多带负电荷植物纤维，也能激活凝血因子?，启动内源性凝血途径。因此放有棉花的试管内血液凝固加快。试管内壁涂上一层石蜡油时，由于石蜡油表面光滑，不易引起血小板粘着，即不易使血小板发挥促进凝血的作用。另外石蜡油为绝缘体，其把试管表面所带的负电荷覆盖，不利于凝血因子?的激活，因此血液凝固变慢。

血液凝固实际上是一系列蛋白酶的水解过程。参与血液凝固的凝血因子大多数是蛋白质酶原，其水解后变成有活性的蛋白质酶，如因子ii、因子xi、因子xii等（因子vii是有活性的）。这些蛋白质酶具有酶随温度升高催化活性加强的特性，也具有蛋白质受热变性的特点。当温度低时，蛋白质酶的活性下降，而当温度升高到42～45℃以上时，由于蛋白质发生变性，蛋白质的空间结构

被破坏，从而使蛋白质功能受损，蛋白质酶的活性下降或失活。因此，把血液放入37℃水浴时血液凝固的时间就比放入冰冻水浴时所需时间短。

体内重要的抗凝物质是抗凝血酶ⅲ和肝素。抗凝血酶ⅲ与凝血酶等多种凝血因子的活性中心------丝氨酸残基结合，使这些凝血因子的活性受到抑制或失活，从而达到抗凝作用。肝素则主要通过与血浆中的一些抗凝蛋白，如抗凝血酶ⅲ结合，加强后者的抗凝作用。此外，肝素还能使血管内壁细胞释放凝血抑制物和纤溶酶原激活物，增强纤溶作用。因此在试管内

放入肝素时血液不会发生凝固。

血凝过程中，ca是重要的凝血因子，其参与了血液凝固的许多环节，当血液中没有ca2+时血液就不会发生凝固。在试管内放有草酸钾时，由于草酸钾与血液中的ca2+发生化学

2+反应，生成草酸钙沉淀，使血液中没有ca，故血液不会发生凝固。

（六）结论：

通过本实验可知：①血液凝固过程可分为三个互相联系的主要阶段，任何一个阶段被破坏，凝血过程就终止，而血液凝固的过程实际上是纤维蛋白形成的过程。②根据凝血酶原激活物形成的途径不同，可把血液凝固分为内源性和外源性两条凝血途径，内源性凝血途径所消耗的时间比外源性凝血途径长。③血小板在血液凝固过程中具有发挥促进作用。④血液凝固除受凝血因子的质和量影响外，还受接触面、温度等理化因素的影响。血液接触面粗糙、适当加温能加速血凝，而血中加肝素等抗凝剂、以及除去血中游离钙离子等可延缓血液凝固。 2+篇二：血凝血凝抑制试验总结

1、 如果是马上要做实验，先把实验所需的抗原、标准阳性血清、阴性血清、待检血清取出

回温，如果待检血清已冷藏，可取出放入37℃恒温培养箱中回温，待血清析出后取出（时间大约看具体情况而定）。

2、 试验准备阶段：

a准备好清洗干净的血清离心管（要有刻度装血液）。

b采血：注射器内先加入一半体积的阿氏液（防止血液凝集，当所需红细胞较多时，加入注射器量程一半的阿氏液，当所需红细胞较少时，加入1.5

ml～2 ml的阿氏液）。

c 1%红细胞悬液的制备

采集至少3只spf（无特定病原体）公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积的阿氏液混合，用ph 7.2、0.01 mol/l pbs液洗涤3次，每次去掉上层的清液后加入少量pbs用注射器反复抽吸使之混匀，再加至所要刻度，放入离心。每次均以1000 r/min离心10 min，洗涤后用pbs配成体积分数为1%的红细胞悬液，4℃保存备用（实际pbs液用1%的生理盐水代替）。

d所需1%红细胞悬液的体积 ≥ 4 hau+1 ml（本例中为30 ml+1 ml=31 ml），否则配置的1%红细胞悬液不够用（理论计算为30.1 ml，取31 ml以防万一）。

e阿氏液（alsevers）制备

葡萄糖 2.05 g

柠檬酸钠 0.80 g

柠檬酸 0.055g

氯化钠 0.42 g

加蒸馏水至100 ml，散热溶解后调ph值至6.1, 69 kpa高压灭菌15 min，4℃保存备用。

3、 血凝试验

目的：检测试验所用的标准抗原的血凝滴度，如检测结果血凝滴度为210 = 1024，表示标准抗原稀释1024倍仍能与红细胞发生凝集反应。

注意：

一瓶新的未使用的抗原（禽流感或新城疫为粉状），需要加入（用注射器）2ml的稀释液（0.9%生理盐水，一般瓶身上有标注加入的体积2ml）

a反应板要同时做三排（每排12孔），原因：根据三排的多数结果来确定血凝滴度。例如：

10999三个结果为：2、2、2，则本次试验标准抗原血凝滴度为2。

b加入1%的红细胞悬液后放到微量震荡器上震荡混合1min，室温20℃～25℃下静置40 min，放4℃静置60 min。当pbs对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。

4、 4 hau抗原

例如：标准抗原血凝滴度为210 = 1024，则4 hau抗原=（1：210）/4 = 1：256，稀释时，将1 ml的抗原加入到255 ml的pbs中即为4

hau。

5、 计算配置4 hau所需稀释液体积v和标准抗原体积x

假设：待检血清100份 每排12个孔（实际只需要11孔，但多计算一些，以防不够）

每孔加入25 ul 4 hau抗原体积 = 25

ul×12×100 = 30000 ul = 30 ml

设标准抗原体积为 x

则有： 1 ：256 = x ：30000

标准抗原体积 x = 3000 / 256 = 117.1875

ul =0.117 ml

稀 释 液体积 v = 30 - 0.117 = 29.883

ml

但实际量取时稀释液体积直接用30ml计算，因为0.117 ml数量很小，可以忽略不计。

6、 血凝抑制试验

a红细胞在使用过程中应经常摇匀。

b加入1%的红细胞悬液后放到微量震荡器上震荡混合1min，室温20℃～25℃下静置40 min，若环境温度过高，放4℃静置60 min。当pbs对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。

7、 结果判定