中性粒细胞胞外网状陷阱(课堂PPT)

最新：中性粒细胞外陷阱在风湿性疾病中的研究迸展摘要风湿性疾病是一种影响组织和关节的炎症性疾病，其特征为严重的免疫失调。

中性粒细胞是免疫失调的关键因素，在风湿性疾病中起重要作用。

中性粒细胞外陷阱(NETS)是中性粒细胞受刺激时释放的网状结构，其作为一种新型的免疫防御机制引起了广泛关注。

现就NETS的形成、功能及其在风湿性疾病和其他疾病中的作用进行综述。

关键词中性粒细胞；中性粒细胞外陷阱；风湿性疾病中性粒细胞是维持机体内环境稳定所必需的先天性免疫的重要组成成分，是抵抗微生物感染的主要防御系统。

在急性炎症中，病原体或宿主细胞释放趋化因子，中性粒细胞能随着血液循环迅速到达感染部位，通过趋化、吞噬、脱颗粒等方式在防治病原体中发挥作用。

有研究发现了中性粒细胞的另一种杀菌机制，即通过释放由组蛋白和双链脱氧核糖核酸(dsDNA)等组成的网状结构去固定并杀死病原微生物，这个结构被称为中性粒细胞外陷阱(NETS),其产生的过程被称为NETosis[1]o研究表明，NETs产生过多和清除障碍的不平衡会导致循环和组织中NETs水平增加，并引发血管疾病，加重组织损伤[2-3]o现就NETs的形成、与风湿性疾病及其他疾病关系的研究进展方面进行综述。

1、NETS的概述Brinkmann等［1］于2004年初次发现佛波酯（PMA）刺激中性粒细胞后，细胞内膜失去完整性，会形成由浓缩DNA组成的胞外网状结构一一NETs,NETs是由中性粒细胞激活时释放的一种直径15~17nm的染色质纤维网状结构。

NETs的成分包含dsDNA、组蛋白、髓过氧化物酶（MPO）和中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）等［4-5］,DNA和组蛋白是其主要结构成分［11由于NETS释放的酶蛋白具有非特异功能，其可能导致失控的炎症反应，引起直接细胞损伤、其他促炎细胞和蛋白质募集以及诱导自身抗体产生的免疫复合物的形成，从而加重组织损伤［6-7］0研究表明,NETosis 可被微生物、促炎细胞因子［如肿瘤坏死因子（TNF）-CQ白细胞介素（I1）-81血小板、活化内皮细胞（ECs）、一氧化氮、单钠尿酸盐晶体和各种自身抗体刺激［8J o当前已知的NETS有3种形成模式：自杀性NETosis.细胞核DNA释放式NETosis.线粒体DNA被释NETosis o其中自杀式NETosis是研究最广泛的一种模式［91NETosis是一个渐进的过程，通常由活性氧（ROS）的产生导致。

·26·中性粒细胞胞外陷阱在溃疡性结肠炎中的研究进展李佳佳　浙江大学医学院附属第四医院　浙江义乌　322000摘　要：炎症性肠病（Inflammatory…bowel…disease，IBD）包括克罗恩病（Crohn′s…Disease，CD）和溃疡性结肠炎（Ulcerative…colitis，UC），其发病机理是在某些环境条件下，肠道粘膜免疫系统对遗传易感人群中肠道微生物抗原的异常免疫反应引起的肠粘膜炎症反应损害。

IBD治疗周期长且容易复发，社会医疗和患者负担沉重。

因此，研究其发病机理具有重要的临床和社会价值。

中性粒细胞（Neutrophils，NEU）是血液中最丰富的免疫细胞，是自然免疫系统必不可少的部分。

其在宿主控制感染和防御中起着至关重要的作用，并参与非感染性炎症。

NEU可以通过吞噬和/或释放中性粒细胞胞外陷阱（Neutrophil…extracerlular…trap，NETs）在身体感染过程中起着重要的防御作用，而且似乎与包括自身免疫性疾病在内的各种疾病的发生和发展有关。

本文就NET在IBD中的作用作一综述。

关键词：炎症性肠病　中性粒细胞胞外陷阱　研究进展IBD包括UC和CD，其临床表现为伴有反复的腹痛、腹泻、疲劳、粘液便血和体重减轻。

近年来，IBD的发病率在全球范围内逐渐增加，长期的UC及CD患者如果不接受规范化的治疗容易诱发结直肠癌。

活化的中性粒细胞(Polymorphonuclear…neutrophils，PMNs)可以一种网络结构被释放到细胞外部，即NET。

PMN可以通过NET 杀死病原微生物。

另外，NET与包括自身免疫性疾病（如系统性红斑狼疮、抗中性粒细胞抗体相关的血管炎等）在内的各种疾病的发生和发展有关。

1 NETs的结构及形成NETs具有独特的结构，其以直径约15-17…nm的平滑核染色质纤维作为支架。

这些纤维支架以直径约50nm的球形结构连接。

中性粒细胞（neutrophil ）又被称为中性多形核白细胞（polymorphonuclear leukocyte ），是人体内重要的免疫细胞，在先天性免疫反应中起到不可替代的作用，是抵御牙周致病菌入侵的重要因素。

当受到刺激时，中性粒细胞通过趋化活动，定向移动至感染部位并发挥吞噬作用，从而杀灭病原体。

Brinkmann 等[1]于2004年首次报道观察到由中性粒细胞产生的中性粒细胞细胞外陷阱网（neutrophil extracellular trap ，NET ）。

随后，越来越多的学者关注NET 在机体免疫防御中的作用。

近年来发现NET 在牙周炎相关的免疫反应中发挥重要作用。

本文就NET 与牙周炎相关性的研究进展进行阐述。

1 NET 与NETosisNET 是由中性粒细胞受刺激后产生的一种细胞外纤维网状结构，主要由染色质和细胞蛋白质组成。

通过电子显微镜可以观察到，NET 以直径15~17 nm 的DNA-组蛋白复合物为骨架，上面嵌有最大直径约50 nm 的球状结构，包括中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase ，NE ）、髓过氧化物酶（myeloperoxidase ，MPO ）、组织蛋白酶（cathepsin ，CTS ）G 等多种颗粒源性蛋白质，其中组蛋白通常包括H1、H2A 、H2B 、H3、H4等多[摘要] 中性粒细胞是机体防御系统的成员之一，在免疫反应中发挥着重要作用。

中性粒细胞细胞外陷阱网（NET ）是新近发现的中性粒细胞发挥作用的一种形式，除了能够诱获并杀灭病原体而发挥作用之外，还可能对机体产生直接或者间接的损伤。

NET 不仅出现在牙周组织中，还与牙周致病菌息息相关。

本文对NET 与牙周炎的相关性研究进行综述。

[关键词] 中性粒细胞细胞外陷阱网； 中性粒细胞； 牙周炎； 牙周致病菌[中图分类号] R 781.4+2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/gjkq.2020019Advances in research on the relationship of neutrophil extracellular traps to periodontitis Wang Xiaoyu, Zhu Zhaorong, Wu Yafei, Zhao Lei. (State Key Laboratory of Oral Diseases & National Clinical Research Center for Oral Diseases & Dept. of Periodontics, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, China)This study was supported by The General Program of National Natural Science Foundation of China (81970944) and Reasher and Development Project of Sichuan Province (2018SZ0161).[Abstract] Neutrophil is a member of the body’s defence system and plays an important role in immune responses. Neutrophil extracellular trap (NET) is a newly discovered form of functioning neutrophil that can trap and kill pathogens and may cause direct or indirect damage to the body. NETs not only appear in periodontal tissues but are also closely related to periodontal pathogens. This article will review related research on NETs and periodontitis.[Key words] neutrophil extracellular trap; neutrophil; periodontitis; periodontal pathogen中性粒细胞细胞外陷阱网与牙周炎的相关性研究进展王晓宇 朱昭蓉 吴亚菲 赵蕾口腔疾病研究国家重点实验室 国家口腔疾病临床医学研究中心四川大学华西口腔医院牙周病科 成都 610041[收稿日期] 2019-06-11； [修回日期] 2019-10-31[基金项目] 国家自然科学基金面上项目（81970944）；四川省重点研发项目（2018SZ0161）[作者简介] 王晓宇，硕士，Email ：****************[通信作者] 赵蕾，副教授，博士，Email ：******************·综述·开放科学（资源服务）标识码（OSID）种成分[1]。

nets染色方法
NETs染色方法是一种用于检测和观察中性粒细胞胞外陷阱（NETs）的技术。

NETs是由中性粒细胞释放的DNA网状结构，它们在感染和自身免疫性疾病中发挥重要作用。

NETs染色方法通常包括以下步骤：
1. **样本收集**：收集待检测的血液或组织样本。

2. **细胞分离**：从样本中分离中性粒细胞。

这可以通过密度梯度离心法、贴壁筛选法或磁珠分离法等方法实现。

3. **诱导NETs形成**：在分离的中性粒细胞中加入诱导剂（如佛波酯、钙离子载体或细菌产物），以刺激NETs的形成。

4. **染色**：使用特定的染色剂对NETs进行染色。

常用的染色剂包括荧光染料（如EthD-III、SYTOX Green、YOYO-1等），这些染料可以与DNA结合并发出荧光信号，从而可视化NETs的结构。

5. **观察和分析**：使用荧光显微镜或其他相关技术观察染色后的NETs。

分析NETs的数量、形态和分布情况，以及与周围细胞的相互作用。

6. **数据解读**：根据观察和分析的结果，解读NETs在疾病中的作用和意义。

需要注意的是，NETs染色方法的具体步骤和所用试剂可能因实验条件和目的而有所不同。

因此，在进行实验前，建议查阅相关的文献和资料，以了解详细的实验方案和技术要求。

2024中性粒细胞与急性胰腺炎中性粒细胞是人体血液循环中数量最多的免疫细胞，主要具有趋化性、吞噬作用、抗菌作用、脱颗粒和中性粒细胞胞外陷阱(neutrophi1extrace11u1artraps,NETs)等生物学功能,也可介导脓毒症、AP x COVID-19.自身免疫性疾病等多种疾病的炎症发作期的组织损伤。

其中AP是一种突发的、多变的胰腺局部或弥漫性的炎症性疾病，可能进展为合并严重的全身炎症反应、胰腺坏死和多器官功能衰竭的SAP,其发病机制与炎症反应和免疫应答激活息息相关。

免疫细胞介导的机体过度炎症反应是SAP发生、进展的关键。

胰腺组织中性粒细胞募集是AP发展的关键因素。

AP时，募集浸润至胰腺组织的中性粒细胞通过释放活性氧、酶、肿瘤坏死因子-造，促进腺泡细胞死亡，导致胰腺组织损伤。

本文结合笔者团队对中性粒细胞在AP发病机制中的研究及文献报道，阐述中性粒细胞活化、募集、浸润、迁移、逆向迁移和NETS在AP发生和发展中的作用，为精准靶向中性粒细胞早期治疗AP的新策略提供理论依据。

一、中性粒细胞活化、募集与AP中性粒细胞活化、募集为AP炎症损伤中同时发生的过程，在AP炎症损伤的发生、进展和消退中起着重要作用。

AP损伤早期，中性粒细胞穿过血管内皮细胞时即出现部分活化，募集至损伤胰腺组织，随后中性粒细胞表面受体与促炎信号相结合，诱导信号级联反应导致其完全活化。

而在活化的动态过程中，中性粒细胞受体与内皮细胞配体相互作用，促进中性粒细胞滚动、黏附、爬行和迁移，最终浸润至各脏器组织，介导胰腺局部组织和远隔多脏器损伤。

现有的证据显示，活化T细胞核因子3、整合素淋巴细胞功能相关抗原-1以及多种趋化因子受体或配体(CXCR2、CXC14、CXC12等)介导了AP中性粒细胞的活化募集。

多项临床研究也证实,AP患者外周血中性粒细胞早期激活标志物CD69、中性粒细胞活化标志物髓过氧化物酶(mye1operoxidase,MPO)表达均显著升高，揭示了中性粒细胞活化、募集与AP患者早期诊断、治疗和临床预后具有密切相关性。

IgG4相关性疾病(IgG4-RD)发病机制的研究进展纪宗斐【摘要】IgG4相关性疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)是以多发脏器肿大、血清IgG4升高为特点的一类自身免疫性疾病,发病机制仍不明确.病原体感染导致抗原呈递细胞表面模式识别受体激活,通过抗原呈递促进CD4+T细胞激活,分化为Th1、Th2、Treg和Tfh细胞,产生一系列T细胞因子,进一步促进B细胞活化并转化为浆细胞,产生IgG4.而巨噬细胞和Treg细胞产生的转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)和血小板源性生长因子等进一步促进了纤维化的发生.以上细胞因子和免疫细胞参与IgG4-RD发病,为今后的治疗策略提供了新的思路.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2019(046)001【总页数】6页(P114-118,142)【关键词】IgG4相关性疾病(IgG4-RD);发病机制;浆细胞【作者】纪宗斐【作者单位】复旦大学附属中山医院风湿免疫科上海200032;复旦大学风湿免疫过敏中心上海200032【正文语种】中文【中图分类】R593.2IgG4相关性疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)是以多发脏器肿大、血清IgG4升高为特点的一类自身免疫性疾病。

IgG4-RD的组织病理特点为IgG4+浆细胞浸润、席纹状纤维化和闭塞性脉管炎,可累及腺体、眼眶、鼻窦、腹膜后、胰腺、胆管、肺、肾、淋巴结,甚至血管、脑垂体等。

早在1995年Yoshida等[1]就提出了自身免疫性胰腺炎(autoimmune pancreatitis,AIP)的概念,随后陆续报道了全身其他脏器发生的类似组织病理学表现,并有部分患者以泪腺和涎腺炎为表现而被认为是米库利兹病,实则为IgG4相关的自身免疫性疾病。

Kamisawa等[2]于2003年首次引入IgG4系统性疾病概念,并于2010年更名为IgG4-RD[3]。