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金丝桃苷对HL7702细胞氧化损伤的保护作用及机制

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。 近年来 ， 饮酒导致的酒精性肝病发生率日
成为威胁 我 国 国 民 生 命 健 康 的 一 项 严 峻 渐升高 ， 社会问题 。 寻找来源于天然产物的抗氧化活性成 分预防酒精性肝损伤具有重要意义 。 ， ） 金丝桃苷 （ 属于黄酮苷类化 ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｉ ｄ ｅ Ｈ ｙ ｐ ｙ ｐ 合物 ， 苷元为槲皮素 ， 糖基为吡喃半乳糖 。 广泛存 在于藤黄科 、 杜鹃花科 、 金丝桃科和桔梗科等植物 中。自１ 国内外学者对其提取 ９ ６ ０ 年被发现以来 ， 制备工艺及药理作用进行了广泛的研究 氧化
· 再将给药孔 １ ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ 金 丝 桃 苷 预 作 用 １ｈ， －１ ·Ｌ 乙 醇 作 用 ２ 加入 １ 加入 ０ ０ ｍｍ ｏ ｌ ４ ｈ 后，
密度接种于 ６ 孔 细 胞 培 养 板 中 ， 培养１ 对 ２ｈ 后 ， 照孔仅加入 新 鲜 的 含 体 积 分 数 １ ０％ 胎 牛 血 清 培 · 养液 ， 给药孔加入 １ ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ 金丝桃苷预作用 · 再将给药孔加入１ １ｈ， ０ ０ ｍｍ ｏ ｌ Ｌ－１ 乙 醇 作 用
－１
置倒置相差显微镜下观察细胞形态并拍照 。 ２ ４ｈ， ２ ． ４ 生化指标检测 ２ ． ４ ． １ Ｒ Ｏ Ｓ 水平检测
DOI:10.14066/21-1349/r.2013.09.009
第３ ０卷 第９期 ２ ０ １ ３年９月
沈 阳 药 科 大 学 学 报 Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｓ ｈ ｅ ｎ ａ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｇ ｙ
－１
· 再将给药孔 １ ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ－１ 金 丝 桃 苷 预 作 用 １ｈ， －１ · 加入 １ 严格按照 ０ ０ｍｍ ｏ ｌ Ｌ 乙醇作用２ ４ｈ 后 ， 检测 Ｇ 说明书操作 ， Ｓ Ｈ 含量 。 ２ ． ５ 线粒体膜电位观察 采用罗丹明染色法测定金丝桃苷对线粒体膜 向细胞培 养 电位的保护作用 。 药物作用 ２ ４ｈ 后 ， 液 中加入ｒ ｈ ｏ ｄ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ １ ２ ３ 染色液 １ｍ Ｌ， ３ ７ ℃ 避光 染色 ３ 荧光显微镜下观察线粒体膜电位 ０ｍ ｉ ｎ后， 改变 。 ２ ． ６ Ｐ Ｉ染色 药物 作 用 ２ 向细胞中加入 Ｐ ４ｈ 后 ， Ｉ染 液 荧光显微镜下观 １ｍ Ｌ， ４ ℃避光染色３ ０ｍ ｉ ｎ 后， 察细胞凋亡程度 。 ２ ． ７ 免疫印迹实验 将金丝桃苷处理过的细胞用细胞裂解液在冰
第９期
李 盈等 ： 金丝桃苷对 Ｈ Ｌ ７ ７ ０ ２ 细胞氧化损伤的保护作用及机制
７ １ ９
取处于对数 生 长 期 的 ＨＬ 以每孔 ７ ７ ０ ２ 细 胞， ５ －１ 。 １×１ ０ ｍ Ｌ 密度 接 种 于 ９ ６孔培养板 分别加 入不同浓度的乙醇作用 ６、 每孔 １ ２、 ２ ４和４ ８ｈ 后 ，
Ｖ ｏ ｌ ． ３ ０ Ｎ ｏ ． ９ Ｓ ｅ ２ ０ １ ３ ． ７ １ ８ ｐ． ｐ
（ ） 文章编号 ： １ ０ ０ ６ ２ ８ ５ ８ ２ ０ １ ３ ０ ９ ０ ７ １ ８ ０ ６ － － －
金丝桃苷对 Ｈ Ｌ ， 白鑫宇１， 杨晓峰１， 李建春１＊
［ ３］ ［ ２］
。 其抗
及保肝作 用
［ ４］
近 年 来 受 到 重 视， 前期的研
究工作中发现菟丝子水提物对人正常肝细胞 作者对 ＨＬ ７ ７ ０ ２ 氧化 损 伤 保 护 作 用 显 著 。 因 此 ， 菟丝子的主要有效成分金丝桃苷进行抗氧化作用 研究 ， 并探讨作用机制 。
１ 仪器与材料
二氧化 碳 培 养 箱 （ 美国 Ｎ ｕ Ａ ｉ ｒ Ｐ ｌ ｍ ｏ ｕ ｔ ｈ公 ｙ ， 司） 酶联 免 疫 分 析 仪 （ 澳大利亚 Ｔ ｅ ｃ ａ ｎ Ｓ ａ ｌ ｚ ｂ ｕ ｒ ｇ ， 公司 ） 倒置显微镜和荧光显微镜（ 德国 Ｌ ｅ ｉ ｃ ａ
５ 将 １×１ 加入 ０ ｍ Ｌ－１ 细胞接种于 ９ ６ 孔板中 ，
上清 加 入 ２× 的 上 样 缓 冲 液 ， 在沸水浴中加热 使蛋白质变性 ， 采用 Ｂ ５ｍ ｉ ｎ ｉ ｏ ａ ｄ 蛋白浓度测 定 －Ｒ 液测定样品中蛋 白 浓 度 ， 并调整各样品的浓度相 同 。 利用 Ｓ 转移到硝酸纤维素膜 Ｄ Ｓ Ｐ ＡＧ Ｅ 电泳 ， － 上， 质 量 分 数 ５％ 脱 脂 奶 封 闭 ２ｈ， 再 与 一 抗４ ℃ 孵育过夜 ， 辣根过 氧 化 物 酶 标 记 的 二 抗 室 温 孵 育 曝光 。 １ｈ， Ｅ Ｃ Ｌ 发光液发光 ， ２ ． ８ 统计学分析 统计分析 采用 ｓ ｉ ｍ ａ ｓ ｔ ａ ｔ ３ ． ５ 软件进行处理 ， ｇ 珚± 结果采用均值 ± 标 准 差 （ 表 示， 采用单因素 ｘ ｓ） ， 方差 分 析 （ Ｏ ｎ ｅ ａ Ａ ｎ ａ ｌ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ ｃ ｅ Ｏ ｎ ｅ －Ｗ － ｙ ｙ ， ） ， 评价整 体 性 差 异 为 有 Ｗ ａ ＡＮＯＶＡ Ｐ ０ ． ０ ５ ＜ ｙ 显著性差异 。
－１ ， · ， 离心 １ 取 浴上裂解 ６ ０ｍ ｉ ｎ １ ２ ０ ０ ０ｒ ｍ ｉ ｎ ０ｍ ｉ ｎ
培养 ６、 １ ２、 ２ ４和４ ８ｈ。 ＭＴ Ｔ 法测细胞存活抑制 ” 率， 方法同 “ 条。 ２ ． １ ２ ． ３ 细胞形态学变化
５ － １ 取对数生长的 Ｈ 以每孔１ Ｌ ７ ７ ０ ２细胞， × １ ０ ｍ Ｌ
· 加入质量分数为 ５ｇ 继续培养 ４ Ｌ－１ ＭＴ Ｔ ２ ５μ Ｌ，
· 再加入 １ 收集 用１ｈ， ０ ０ｍｍ ｏ ｌ Ｌ－１ 乙醇作用 ２ ４ｈ， 。 细胞并悬浮 然 后 加 入 质 量 分 数 ２ ０％ 三 氯 乙 酸 １ ０ ０μ Ｌ和 质 量 分 数 ６％ 的 硫 代 巴 比 妥 酸 溶 液 于８ ０ ． ５ｍ Ｌ， ５ ℃条件下作用３ ０ｍ ｉ ｎ进行衍生 化 。 离心 ， 上清转 移 至 ＨＰ 进样２ Ｌ Ｃ 进 样 瓶 中， ０ ， 。 进行色谱分 析 最 后 以 标 准 溶 液 绘 制 Ｌ ＭＤ Ａ μ 标准曲线并进行定量分析 。 含量检测 ２ ． ４ ． ４ 谷胱甘肽 （ Ｇ Ｓ Ｈ）
９ ０％ 的 乙 醇 代 谢 肝 脏 是 人 主 要 的 解 毒 器 官 ， 在肝脏中进行 。 乙醇代谢过程会使机体产生大量 的自 由 基 ， 造 成 严 重 肝 细 胞 损 伤， 导致酒精性肝 病
［ １］
， 恒温 水 浴 箱 、 Ｎ ｕ ｓ ｓ ｌ ｏ ｃ ｈ 公司 ） ５ ４ １ ７ Ｒ 小型台式高 ， 速离心机 （ 德国 Ｅ ｅ ｎ ｄ ｏ ｒ ｆ公司 ） Ｄ ＹＹ ２ 稳压 稳 － ｐ ｐ 流电 泳 仪 、 Ｄ ＹＹ ８ Ａ 蛋 白 质 电 泳 仪、 Ｄ ＹＹ － Ⅲ２ －Ⅲ 。 北京六一仪器厂 ） ４ ０ Ｂ 电泳槽 （ 金丝桃苷 （ 纯度质量分数 ≥９ 上海优纯生 ７％ ， ， ， 物） 美国 Ｇ 谷氨 Ｒ ＰＭ Ｉ １ ６ ４ ０ 培养液 （ ｉ ｂ ｃ ｏ公 司） － 酰胺 、 胰 蛋 白 酶、 青 霉 素、 链 霉 素、 ＭＴ Ｔ、 ＤＭＳ Ｏ、 （ ， 美国 Ｓ 乙醇 （ 分析级 ， 天津康科德科 Ｐ Ｉ ｉ ｍ ａ公司 ） ｇ ， ， 技有限公司 ） 南京建成生物试剂 ） 细 Ｓ Ｏ Ｄ 试剂盒 （ 胞裂解液 、 溴酚蓝和 Ｅ 碧云天生物技术 Ｃ Ｌ 试剂盒 （ ， 、 、 、 研究所 ） Ｂ ｃ ｌ ２ Ｂ ａ ｘ ｃ ｔ ｏ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｅ ｃ ｃ ａ ｓ ａ ｓ ｅ ３ 多克隆 － ｙ ｐ 兔抗抗体及辣根过氧化酶羊抗兔二抗 （ 美国 Ｓ ａ ｎ ｔ ａ 。 Ｃ ｒ ｕ ｚ Ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ公司 ） 人 正 常 肝 细 胞 系 ＨＬ 美国 Ｔ ７ ７ ０ ２（ ｅ Ｃ ｕ ｌ － ｙ ｐ ） 。 、 、 公司 在湿 度 饱 和 温 度 ｔ ｕ ｒ ｅ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ３ ７ ℃ 体积分数 ５％ Ｃ 将 ＨＬ Ｏ ７ ７ ０ ２细胞置于 ２ 条 件 下， · 含有体积分数 １ ０％ 胎牛血清 、 ２ｍｍ ｏ ｌ Ｌ－１ 谷氨酰 · · 胺、 １ ０ ０Ｕ ｍ Ｌ－１ 青霉素 、 １ ０ ０ｇ Ｌ－１ 链霉素的 Ｒ Ｐ － 。 培养液中培养细胞 Ｍ Ｉ １ ６ ４ ０ －
（ ） 沈阳药科大学 生命科学与生物制药学院 ， 辽宁 沈阳 １ 山东万杰医学院 医学系 ， 山东 淄博 ２ １． １ ０ ０ １ ６； ２． ５ ５ ２ １ ３ 摘要 ：目的 研究金丝桃苷对人正常肝细胞 ＨＬ ７ ７ ０ ２氧 化 损 伤 的 保 护 作 用 及 作 用 机 制。 方 法 采 用 、 利用相关试剂盒检测 Ｒ 乙醇诱导建立氧化损 伤 模 型 ， ＭＴ Ｔ 法 检 测 细 胞 存 活 率， Ｏ Ｓ Ｓ Ｏ Ｄ、 ＭＤ Ａ、 以及 Ｗ Ｇ Ｓ Ｈ 水平 ， ｒ ｈ ｏ ｄ ａ ｍ ｉ ｎ ｅ １ ２ ３ 染色考察线粒体膜电 位 的 变 化 ， Ｐ Ｉ染 色 检 测 细 胞 凋 亡 程 度 ， ｅ ｓ ｔ － · ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ评价线粒体途径相关蛋白表达 。 结果 确 定 １ ０ ０ ｍｍ ｏ ｌ Ｌ－１ 乙 醇 为 适 宜 浓 度 建 立 氧 化 损 伤 · 形态学观察发现细胞变圆并悬浮于培 养 液 中 ， 模型 ， Ｐ Ｉ染 色 显 示 细 胞 发 生 凋 亡 。１ ０ ０μ ｍ ｏ ｌ Ｌ－１ 金 丝桃苷能够降低乙醇诱导的 ＨＬ 提高 Ｓ 使促凋亡蛋白 ７ ７ ０ ２ 细胞 中 ＭＤ Ａ 的 产 生， Ｏ Ｄ 活 力。同 时， 、 （ ） 、 细胞色素 ｃ 增加抗凋亡蛋白 Ｂ Ｂ ａ ｘ ｃ ｔ ｏ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｅ ｃ ｃ ａ ｓ ａ ｓ ｅ ３蛋 白 表 达 降 低， ｃ ｌ ２蛋 白 表 达。结 论 － ｙ ｐ 其作用机制可能与抑制线粒体途径凋亡相关 。 金丝桃苷可以保护乙醇诱导的肝细胞氧化损伤 ， 关键词 ：金丝桃苷 ；ＨＬ ７ ７ ０ ２；氧化损伤 ；乙醇 中图分类号 ： Ｒ ９ ６ 文献标志码 ：Ａ
２ 方法
２ ． １ 乙醇对细胞生长抑制实验

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金丝桃苷药理作用研究进展

金丝桃苷药理作用研究进展

金丝桃苷药理作用研究进展金丝桃是一种常见且受欢迎的观赏植物，被广泛栽种在亚洲、欧洲和美洲等地。

除此之外，金丝桃还被用于传统草药中，具有诸多药理作用。

本文将讨论其主要有效成分之一的金丝桃苷的药理作用研究进展。

金丝桃苷的化学性质和应用金丝桃苷，俗称石楠药，是一种四羟甲基芸香苷的二糖苷，其化学式为C34H40O21。

金丝桃苷自24世纪90年代就被用作肝损伤、肾脏疾病、心血管疾病等解毒药物治疗草药，其生产源主要是金丝桃的根和茎。

金丝桃苷具有抗氧化作用，能减少自由基的产生，保护人体细胞免受氧化损伤。

此外，它还被认为具有降低胆固醇、改善肝功能、减轻肝脏对某些药物的毒性作用等多种作用，因此被广泛应用于医药、保健品及化妆品等领域。

金丝桃苷的药理作用1.抗肿瘤作用金丝桃苷作为植物源化合物，是一种有效的抗肿瘤药物。

已有多项研究显示，它可以通过多种不同的途径对癌细胞产生细胞毒性和细胞趋化性。

其中一项实验表明金丝桃苷能够抑制人乳腺癌细胞的生长和扩散，并能减少转移或扩散到周围组织的机会。

2.保护肝脏作用金丝桃苷可以通过减少脂质过氧化、降低细胞膜的不稳定性以及抗炎等多种作用，减轻肝损伤的程度，保护健康肝细胞。

此外，金丝桃苷对于脂肪肝的治疗也有一定的作用，可以减少肝脏内部的脂肪含量。

3.降低血糖作用研究表明，金丝桃苷还具有一定的降糖作用。

它可以通过激活胰岛素的合成和分泌来增加体内胰岛素的含量，从而促进葡萄糖的代谢，降低血糖水平。

对于糖尿病的患者而言，这一作用尤为重要。

4.辅助降脂作用金丝桃苷还能协助降低胆固醇和甘油三酯的水平，从而起到降脂的作用。

这种作用可能与其抑制胆固醇的合成和促进胆固醇的排出有关。

5.改善皮肤色素沉淀金丝桃苷对美白、淡化色素斑等功效具有显著的表现。

它可以调节黑色素的合成，减少黑色素的沉淀，并促进黑色素的分解，从而使皮肤更加白皙、光滑。

金丝桃苷的安全性和副作用尽管金丝桃苷具有多种有效的药理作用，但其安全性和副作用问题一直备受关注。

菟丝子的生物活性与临床应用研究进展

菟丝子的生物活性与临床应用研究进展

菟丝子的生物活性与临床应用研究进展摘要：菟丝子是常用的补益中药，具有补阳益阴、固精缩尿、明目止泻的功效，临床应用广泛。

就菟丝子近年来的药理作用及临床应用研究等作一综述。

关键词：菟丝子；药理作用；临床应用菟丝子是旋花科、菟丝子属植物菟丝子的干燥成熟种子，始载于《神农本草经》，又称菟丝实、龙须子、黄丝、黄藤子、豆寄生、吐丝子、无娘藤米米、萝湾了，维吾尔语名称为艾普提莫[1]。

是常用的补益中药，具有补阳益阴、固精缩尿、明目止泻的功效[2]。

菟丝子主要含黄酮类、糖苷、氨基酸及微量元素，还有胆甾醇、芸苔甾醇、谷甾醇、豆甾醇及三萜酸类、生物碱、香豆素、鞣酸等化学成分。

菟丝子主要产于河北、陕西、山东、山西、黑龙江、江苏、新疆、吉林等地。

2000年版《中国药典》收载为旋花科植物菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子[3]。

本文就近年来对菟丝子生物活性和临床应用研究作一综述，为其进一步的开发应用提供参考。

1 药理作用1.1 菟丝子总黄酮的药理作用谢雁鸣等[4]通过UMA-106-01成骨细胞株进行成骨细胞培养，观察ALP活性和3H-TdR掺入的情况，结果发现菟丝子总黄酮ALP活性高于对照组(P＜0.001)，显示菟丝子总黄酮对成骨细胞活性的促进作用。

王晓敏等[5]通过实验证明，菟丝子黄酮能上调去势雌性大鼠血清雌激素水平(P＜0.01)，提高其主动脉平滑肌细胞早期凋亡率(P＜0.01)。

郭澄等[6]利用酶联检测仪检测其对ICR小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子(TNF)的影响，结果发现菟丝子黄酮对TNF有明显的抑制作用，可显著降低小鼠的TNF水平，提示菟丝子可能具有抗癌症恶病质的作用。

柯江维等[7]研究发现菟丝子黄酮能促进下丘脑-垂体促性腺功能，提高垂体对促性腺释放激素的反应性，促进卵泡发育，对血浆LH水平虽无明显影响，但能增强卵巢HCG/H受体数目与功能，可明显增加幼年雄鼠睾丸及附睾质量。

中药单体及有效部位的神经保护作用机制研究进展

中药单体及有效部位的神经保护作用机制研究进展

中药单体及有效部位的神经保护作用机制研究进展摘要:从清除自由基、对抗谷氨酸毒性、抑制胞内Ca^2＋超载和NO生成、干预细胞凋亡、拟雌激素作用等诸方面，综述中药单体和有效部位的神经保护作用机制研究进展.关键词:中药单体有效部位神经保护作用机制Advances in the Mechanistic Study on Neuroprotective Actions of the Monomers and Active Components from Chinese Traditional MedicinesAbstract:Advances in the mechanistic study on neuroprotective actions of monomers and active components from Chinese traditional medicines were reviewed, which included free radical scavenging, resistance against glutamate-induced excitotoxicity, inhibition of cellular Ca^2＋ overload and NO production, intervention in cell apoptosis and estrogen-like activity.Key words:Chinese traditional medicine; Monomer; Active component; Neuroprotective; Mechanism of action在缺血、缺氧条件下，大脑神经组织会发生一系列的缺血瀑布级联反应，如自由基的大量释放、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸损伤、炎性过程及凋亡等，它们发生在不同的时段，彼此交叉，相互联系。

缺血性脑卒中的神经保护则是对级联反应的各个环节加以影响和控制，对受到损伤的神经组织予以积极保护或修复，避免相邻正常的神经组织进一步受到损伤，挽救损伤的神经组织，并使之恢复或部分恢复原有功能。

金丝桃苷药理作用研究进展(精)

金丝桃苷药理作用研究进展(精)

金丝桃苷药理作用研究进展[ 11-05-11 10:37:00 ] 作者：李敏芳李慧王学美编辑：studa20【关键词】金丝桃苷；药理作用；综述金丝桃苷(Hyp)属于黄酮醇苷类化合物,拉丁名为Hyperoside,英文名为Hyperin,异名为田基黄苷、海棠因,结构为槲皮素-3-半乳糖苷(结构式如图1)。

其存在于植物之中,如贯叶连翘、菟丝子、山楂、吴茱萸等,它对循环系统、神经系统、消化系统、免疫系统等具有调节活性,已引起业界越来越多的关注。

笔者现对Hyp的药理作用及含有该成分的中药材进行综述,为进一步研究Hyp提供参考。

1 药理作用1.1 对心肌缺血的保护作用1.1.1 降低凋亡率心肌细胞的凋亡是缺血性心肌细胞损伤的重要形式之一,心肌缺血是心肌细胞凋亡过程中的诱导者,再灌注具有加速心肌细胞凋亡的作用。

李氏等[1-2]研究发现,Hyp降低缺氧-再给氧引起心肌细胞的凋亡,显微镜下观察经Hyp处理的缺氧-再给氧细胞形态无明显损伤改变,仅见部分细胞肿胀或轻度拉网。

四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)及流式细胞术结果均显示,Hyp可降低心肌细胞凋亡率；Hyp 25、50 mg/kg心肌缺血再灌注导致的细胞凋亡的抑制率分别为31.4%和67.9%。

对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧6 h,再给氧24 h引起的细胞凋亡,经Hyp处理,细胞凋亡率下降,并呈剂量依赖型；体内及体外实验均表明,Hyp能减轻心肌缺血缺氧时的细胞凋亡,从而发挥心肌保护作用。

1.1.2 抑制乳酸脱氢酶的释放因体外培养的心肌细胞受损时细胞内的乳酸脱氢酶(LDH)外漏,故可用培养液中LDH的含量作为判断心肌损伤程度的指标。

阿霉素为一种抗肿瘤药物,具有心脏毒性,徐氏等[3]利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观察到Hyp 12.5 μg/mL对阿霉素所致的心肌细胞损伤有保护作用,使培养液中LDH的含量下降；体外培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤也导致培养液中LDH含量增高,50、12.5 μg/mL Hyp可降低培养液中LDH的含量,对缺氧再给氧所致的心肌细胞损伤有保护作用；Hyp对丝裂霉素所致的心肌细胞LDH释放增多有抑制作用,对此损伤有保护作用。