薄层色谱基础知识及斑点异常
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硫酸阿米卡星薄层色谱法无斑点的原因硫酸阿米卡星薄层色谱法(TLC)是一种常用的分离和分析方法。
当进行TLC分析时,有时我们会遇到没有斑点出现的情况,这可能是由多种原因引起的。
下面我将详细讨论可能导致TLC无斑点的原因。
1.样品问题:样品的纯度、浓度和溶解度可能会影响斑点的形成。
如果样品的浓度太低或溶解度不足,可能导致斑点无法形成或非常微弱,以至于无法识别。
此外,样品的杂质含量也可能影响斑点的出现,特别是存在与待分析的目标化合物相似的杂质。
解决方法:增加样品的浓度或选择更适合的溶剂来溶解样品,以改善斑点的形成。
可以尝试使用不同的溶剂系统,或对样品进行前处理以去除杂质。
2.薄层板问题:薄层板的品质也可能影响斑点的形成。
如果薄层板的吸附性能不足或表面存在污染物,可能导致样品在薄层板上无法稳定地扩散和分离。
解决方法:确保使用优质的薄层板,并避免不必要的接触和污染。
在使用薄层板之前,可以进行预处理,例如活化处理或选择一个更适合样品的薄层板。
3.涂层方法问题:涂布试剂的均匀性和涂布方式也可能是没有斑点的原因。
如果涂布试剂在薄层板上没有均匀分布或涂布方法不正确,可能导致斑点无法形成。
解决方法:确保涂布试剂均匀地涂布在薄层板上,可以通过均匀地喷涂或使用涂布器等专门工具来实现。
还可以尝试不同的涂布试剂和不同的涂布方法,以找到最适合的组合。
4.发展条件问题:发展条件的选择和优化也是影响斑点形成的关键因素。
如果发展剂的组成或浓度不适合待分析样品,或者发展时间过短或过长,可能导致斑点无法出现或无法清晰分离。
解决方法:仔细选择合适的发展剂和浓度,并进行优化。
对于发展时间,可以尝试不同的时间范围,以找到合适的条件。
5.环境因素问题:环境因素也可能对TLC结果产生影响。
例如,温度和湿度的变化可能导致发展剂的挥发速率发生变化,从而影响斑点的形成。
解决方法:在进行TLC实验时,尽量让环境条件保持稳定。
控制温度和湿度,并避免其他因素对实验产生干扰。
薄层色谱法薄层色谱法是将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描仪进行扫描,用于鉴别、检查或含量测定。
注意事项⏹样品的预处理。
⏹样品及对照药材和供试品及对照药材溶液制备应量化操作,目的是使样品的色谱与对照药材的色谱更有可比性。
⏹定量点样(除了鉴别有无,还可粗略进行量化评价)⏹在有条件的情况下,设化学对照品的同时设对照药材。
⏹注意环境条件对样品色谱行为的影响。
一、薄层板普通薄层板:硅胶G、H,硅胶GF254,聚酰胺薄膜等市售薄层板(商品预制板)高效薄层板自制薄层板:铺板用的匀浆不宜过稠或过稀:过稠,板容易出现拖动或停顿造成的层纹;过稀,水蒸发后,板表面较粗糙。
匀浆配比一般是硅胶G:水=1:2~3,硅胶G:羧甲基纤维素钠:水=1:2。
研磨匀浆的时间,根据经验来定,与空气湿度有关,一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断,越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外,也影响板涂层的厚度,进一步影响上样量。
涂层薄,点样易过载;涂层厚,显色不那么明显。
目前实验室使用的薄层板规格:10cm×10cm,10cm×20cm或20cm×20cm注意事项1、薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟后,置干燥器中备用。
最好随用随制,放入干燥器中保存仅作为使用前的一种过渡。
2、聚酰胺薄膜不需活化。
3、如在存放期间被空气中杂质污染,使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗,110℃活化30分钟后,置干燥器中备用。
4、使用前检查其均匀度,在反射光及透射光下检视,表面应均匀、平整、光滑、无麻点、无气泡、无破损及污染。
二、点样1、点样器:专用毛细管、半自动或自动点样器械、薄层用微升注射器等。
2、点样:要求在洁净干燥的环境下点样。
尽量用小的点样管。
如果有足够的耐性,最好只用1微升的点样管。
这样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。
薄层色谱过程中出现斑点异常的原因及克服方法1. 斑点异常的原因:
(1)样品量过多、含杂质、挥发性差或不稳定,结果受到干扰产生错误;
(2)试剂的纯度不够高,或色谱材料存在损伤等引起的污染;
(3)分离结果与溶剂不匹配或溶剂挥发不均,导致斑点分裂或扩散;
(4)操作者的技术不熟练或条件不恰当,导致不同程度的误差。
2. 克服方法:
(1)减少样品量,使其达到适宜的含量范围;
(2)切换试剂,提高纯度,处理杂质或污染物;
(3)调整溶剂,使其与分析物相互匹配,或者调整溶剂的挥发性使得斑点均匀分布;
(4)加强技术培训,加强操作技能的掌握;或者升级设备或者设施,提高分离技术等;
(5)对于无法根治的问题,可以通过对每一个斑点的分析,明确有目的地进行重复试验和调整实验方案。