抗生素微生物效价测定法中一剂量法及二剂量法计算公式的推导

抗生素微生物效价测量实验的研究抗生素微生物效价测量实验的研究一、实验简介：抗生素微生物效价检定法是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。

此方法恰好与临床应用的要求相符合，能够确定抗生素的医疗价值，虽然随着仪器分析的发展，部分抗生素含量测定被物理、化学方法所代替，但微生物效价检定法仍然作为抗生素含量测定的经典方法之一被各国药典所采用。

抗生素微生物效价测定法可分为稀释法、比浊法和渗透法三类[1]，通常稀释法用于测定药物的MIC，各国药典均未收载该方法。

除中国药典外，《USP》23 版第六增补版，《BP》1998，《EP》1997第三版，《日抗基》1998均收载了比浊法，其优点是采用液体培养基，无扩散因素的影响。

试验过程短于渗透法。

轩书堂[2]也曾用比浊法测定过泰乐星效价，但该法要求仪器设备较高，且菌种容易污染，故一直未被中国药典所采用。

《日本药局方》虽然收载了该方法，但几乎没有机构使用。

渗透法也称扩散法，其中管碟扩散法即管碟法是国内外最常用的方法。

中、美、英、日和欧洲药典均收载了该方法。

管碟法是利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将抗生素稀释液加入已放置含有高度敏感性的试验菌培养基的小管内，经培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，形成一定浓度的球型区，产生透明的抑菌圈。

通过测量抑菌圈的大小可进行效价计算。

管碟法分为一剂量法，二剂量法，三剂量法三种。

一剂量法是用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，以换算出效价。

该方法较为繁琐，目前除《日抗基》1998及《USP》23 版收载外，其他药典均未收载，而《中国药典》自1997年版后已经淘汰了该方法。

基于抗生素对微生物作用所产生的抑菌圈的大小是随着抗生素剂量的变化而变化，是可以测量的，二剂量法采用标准品与供试品对比试验的平行线原理，实验设计出其浓度与反应的直线关系。

抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。

生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。

抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。

稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。

这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。

所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。

由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。

比浊法原理及操作大致与稀释法相同。

比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。

这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。

这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。

扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。

经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。

用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。

链霉素的效价测定抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。

抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。

测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。

除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。

第一法管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。

菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。

用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。

临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。

藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。

大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。

抗生素微生物检定(22)法的快速计算
郑永安
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】1992(7)4
【摘要】抗生素的效价测定目前各国药典均采用微生物检定法。

由于微生物检定
法是以微生物体为工具,不可避免地存在着一定的生物差异性,影响结果的精确度。

因此,必须借助生物统计方法来减低生物差异对检定结果的影响,并用它来控制实验
误差的允许范围,使生物检定结果也能达到一定的精确程度。

为此各国药典附录都
收载有生物检定统计法,并规定了其可信限率;中国药典1985年版也收载了生物检
定统计法,但仅要求抗生素效价测定要进行可靠性测验,而没有明确规定其可信限率。

【总页数】3页(P41-43)
【关键词】抗蓖素;微生物;检定;计算
【作者】郑永安
【作者单位】陕西省药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R978.1
【相关文献】
1.抗生素微生物检定(2·2)法的快速汁算 [J], 郑永安
2.影响抗生素微生物检定法(管碟法)测定准确性的常见原因分析 [J], 常艳;姚尚辰;
胡昌勤
3.管碟法对抗生素药品效价的微生物检定 [J], 王新霞;宋雪玲
4.抗生素微生物检定二剂量管碟法常用菌种培养的研究 [J], 李婧;杜娟;陈征
5.高效液相色谱-荧光检测法与抗生素微生物检定法测定那西肽预混剂含量的比较研究 [J], 林仙军;周芷锦;王彬
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二剂量法效价计算公式
二剂量法效价计算公式是一种常用的疫苗效价计算方法。

该方法基于疫苗接种后对病原体的免疫反应程度，通过对疫苗接种组和对照组的抗体滴度进行比较，得出疫苗的效价。

其计算公式为：
[疫苗效价]= [对照组抗体滴度] / [疫苗接种组抗体滴度] ×[疫苗接种剂量比例]
其中，对照组抗体滴度表示未接种疫苗的动物或人群中抗体的滴度，疫苗接种组抗体滴度表示接种疫苗后动物或人群中抗体的滴度，疫苗接种剂量比例表示疫苗接种组和对照组接种疫苗的剂量之比。

二剂量法效价计算公式的应用范围较广，适用于多种疫苗的效价计算，例如流感疫苗、狂犬疫苗、百日咳疫苗等。

但需要注意的是，该方法仅能用于相同疫苗批次的效价比较，不同批次的疫苗计算效价时需要重新建立标准曲线。

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抗生素生物效价测定[参考]抗生素生物效价测定是用来测定抗生素杀菌或抑制菌落生长能力的一种方法。

该方法通过对一定菌种进行抗生素浓度递减系列的稀释，然后观察菌落生长情况来测定抗生素的生物效价。

测定结果可以确定出单位药物中所含抗菌物质的含量，并且通过该结果可以明确指导抗生素的使用。

抗生素生物效价测试的操作步骤如下：实验仪器:清洁平板、无菌匙、无菌棉签、培养皿、移液器、蒸气灭菌器、执卡器、点斑枪。

试验材料:抗生素标准品（如青霉素）、待检物（例如新的抗生素类别）、接种菌种、琼脂片。

操作步骤:1.准备琼脂平板，把琼脂熔化后加入相应的接种菌液并充分混合,倒入无菌平板中，等待琼脂凝固。

2.将待检物或标准品分别通过滴定法配制成一系列浓度递减的抗生素溶液,分别置于移液器或执卡器中。

3.在琼脂平板上均匀涂上少量接种菌液,用无菌点斑枪在琼脂平板上进行不同抗生素浓度的斑点法, 每个浓度上进行三个重复点斑法,保证试验的可靠性和精确度,同时在控制组和空板上也进行斑点法，以和实验组对比。

4.在施抗生素后，将琼脂平板放入恒温器中进行培养。

观察24小时后菌落生长的情况并记录下来。

5.统计不同浓度下的抗生素和菌落生长的比率，画出不同浓度与生长抑制之间的关系曲线。

6.计算抗生素的生物效价，通常以最低有效抑制浓度（MIC）为单位。

其计算公式如下：生物效价=标准品浓度/待检样品浓度。

7.将实验结果与临床使用常规剂量比较，如得出实验效价与常剂相近或更高，则证明该抗生素是有效的。

反之，如果效价较低，则应进一步测试，或对该抗生素进行结构修饰或改进。

抗生素生物效价测定是非常重要的实验手段，它可以确定抗生素的药效值并为临床用药提供科学依据。

在新药物的研发和临床实践中，抗生素生物效价测定是不可或缺的方法，也是提高治疗效果和减少药物滥用的重要手段。

所得计算公式。

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斜率一 , 抑菌圈直径之差、一斜率一吕抑菌圈直径之差。

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不亩翁 , 一 , 行渝一留斜率抑菌圈直径平方之差 , 兀公式 , 主要是斜率部分不同 , , 斜率 , 恰是斜测定法中一剂量法和二剂量法的计算公式率的倒数体现于座标图上由于将抗生素轴上所得的标准曲线与习轴上所得的曲线 , , 并与以往的一些推导相比较绍了斜率导最小二平方法。

, 加以讨论 , 介浓度的对数置于 , 的计算公式及其简化公式的推惯上使抗生素浓度置于用直线方程十其斜率必然不同前者的值将是后者的倒数。

本文承卫生部药品生物制品所郑昌亮同志审阅特此 , 来推导所得的一 , 感谢。

剂量法计算公式与上海药检所用回归直线方程一。

推导所得完全相同但推张绪敏参考资料抗菌素微生物效价测定法 , , 导过程明显简化二剂量法的推导方式与以往用氏扩散动力学方程来推导的相同由于二 , 人民卫生剂量法可以消去斜率与截距的影响得的计算公式与以往的完全相同。

, 因而所按本文的推导方式推导过程 , 可将一剂量法和二剂量法的推导 , 统一于同一直线方程下来进行。

简化了整个抗菌素效价的生物检定抗菌素讲演集人民卫生出版社上海化工学院等抗菌素的生物效价测定法抗菌素生产工艺学上海市药品检验所药理组抗菌素微生物检定标准曲线法计算方法的参考资料江苏省药品检验所抗菌素检验与药品生物检 , , 出版社郑昌亮 , , , , , 小结定法杨纪坷数理统计方法在医学科学中的应用上海科技出版社 , , , 本文用一元线性回归法推导抗生素效价废水处理技术在抗生素工业中的应用顾其详邵沈霖垦上海医药设计院林上海制药三厂 , 本文概述抗生素工业废水的特性废水生化处理的基本原理的进展 , 、介绍抗生素研究参考。

、生产及环境保护工作的同志们操作条件和装置以及简要回顾国 , 同时 , 列举国外抗生素废水处理设 , 施的部分实例或试验结果一、抗生素工业废水的内容和特性、外抗生素废水净化技术的研究情况供从事抗生素生产由发酵和提取精制等过程。