食品中亚硝酸盐测定的实验方案

食品与生物工程学院《食品检验学实验》综合性实验教学指导方案实验课程名称：食品检验学实验综合性实验名称：食品中亚硝酸盐的测定(盐酸萘乙二胺法) 1、实验目的1)明确测定亚硝酸盐含量的意义，通过样品中亚硝酸盐含量的测定，评定该食品是否符合国家“食品添加剂”使用卫生标准。

2）掌握用比色法测定亚硝酸盐含量的原理和测定方法。

2．知识综合点与实验原理样品的前处理，（取样、称样、样液的制备等），样液的发色，721分光光度计的使用，标准曲线的制作，含量的计算。

亚硝酸盐在弱酸性条件下，能与芳香族胺，如对氨基苯磺胺，起重氮化反应，生成重氮盐，此重氮盐遇偶合试剂如盐萘乙二胺，则生成紫红色偶氮染料．此染料颜色深度与试液中亚硝酸盐的含量成正比，然后与标准比较定量．3．实验内容与课时安排比色法测定肉制品中亚硝酸盐的含量，4学时4．实验主要仪器与试剂主要仪器：组织捣碎机，分光光度计，水浴锅，500ml、50ml容量瓶，400ml烧杯，250ml三角瓶，吸管，玻璃漏斗等主要试剂：蛋白质沉淀剂：乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液，硼砂饱和溶液，发色试剂（0.4%对氨基苯磺酸溶液，0.2%盐酸萘乙二氦溶液），亚硝酸钠标准溶液(5µgNaN0／ml)25．实验步骤与方法测定方法：样品中亚硝酸盐的提取：(1)称取经捣碎混合均匀的样品5．0克，于50ml烧杯中，加入硼砂饱和溶液12．5ml，用玻棒搅和．(2)以70℃左右的蒸馏水约300ml，将上述样品全部洗入500ml容量瓶中．（3置沸水浴中，加热15分钟。

(4)取出，一面转动，一面滴加5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀再滴加5ml乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

(5)冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度．摇匀，放置片刻(约10分钟)。

（6)撇去上层脂肪，清液用干滤纸过滤于250ml锥形瓶中。

(7)弃去初滤液，并洗锥形瓶2—3次，然后收集清彻滤液作为试液。

亚硝酸钠标准曲线的绘制：(1)取洗涤干净的50ml纳氏比色管(或50ml容量瓶)6支(2)用5ml吸管分别准确吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、量0、1、2、3、4、5、7.5、10.0、2.50ml亚硝酸钠标准溶液于比色管内(相当NaN0212.5μg)。

实验?? 肉制品中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺法）??? 一、目的与要求：1.熟练掌握样品制备、提取的基本操作技能。

2.明确与掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的基本原理及操作方法。

??? 二、原理：样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与盐酸萘乙二氨偶合形成紫红色染料，此“染料”颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，其最大吸收波长为538nm ,可以测定吸光度并与标准比较定量。

反应式如下：见教材P3161．重氮化反应：2．偶合反应：三、样品、试剂与仪器样品：品名：厂家：试剂：1.蛋白质沉淀剂（公用）（1）饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。

(2) 亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至100毫升。

乙酸锌溶液：称取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰乙酸，溶于水定容50mL。

2.显色剂（1）0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。

100ml/4组（）0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升重蒸馏水中，避光保存。

100ml/4组3.亚硝酸钠标准原液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。

4.亚硝酸钠标准使用液(5μg NaNO2/ml)：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加重蒸馏水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5μg亚硝酸钠。

亚硝酸钠标准原液由教师提供。

5.1：4盐酸配制显色剂1用，每4组100ml。

仪器：1. 小型绞肉机。

2. 721分光光度计。

3．25ml比色管每组7支?? ?四、操作方法：1.样品处理：称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升干洁的小烧杯中，加入12.5毫升饱和硼砂溶液，以玻璃棒搅拌均匀，以70℃左右的重蒸馏水约300毫升分数次将样品全部洗入500毫升容量瓶中。

蔬菜中亚硝酸盐含量测定实验方案烹饪蔬菜在不同保存条件下的亚硝酸盐含量变化一、实验原理蔬菜样品经磨碎后，样品中的亚硝酸盐可被饱和硼砂溶液提取至溶液中；弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮盐，再与盐酸萘乙二胺偶合成红色染料，于538nm处测定吸光度，亚硝酸盐含量与溶液吸光度成正比。

二、仪器和试剂仪器1、分光光度计2、分析天平3、搅拌机4、振荡机5、电热恒温水浴锅6、烧杯、移液管、容量瓶等试剂1、饱和硼砂溶液（50g/L）称取10.0g硼酸钠（Na2B4O7·10H2O），溶于200mL热水，冷却后备用；2、亚铁氰化钾溶液（0.25mol/L）称取26.5g亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O），溶于水，定容至250mL; 3、乙酸锌溶液（1mol/L）称取55.0g乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）加7.5mL冰醋酸（CH3COOH）4、对氨基苯磺酸（0.4%）称取0.4ｇ对氨基苯磺酸（C6H7NO3S），溶于100 mL 20 %（体积比）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

5、盐酸萘乙胺溶液（0.2%）称取0.2 g 盐酸萘乙二胺（C12H14N2·2HCl），溶于100 mL 水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

6、亚硝酸钠标准储备液（200 μg /mL）称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠（预先在干燥器中放置24h以上），加水溶解移入500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，储于棕色瓶，冰箱中保存。

7、亚硝酸钠标准使用液（10μg /mL）吸取储备液5.00mL于100mL容量瓶中，定容，临用时配制。

8、粉末状活性炭。

三、测定步骤1、样品前处理烹煮后的白菜暴露在空气中冷却30分钟，模拟一般家庭进食情况，随后把样品分成3分。

对照组暴露在空气中常温保存；实验组A 置于冰箱中4℃下保存；实验组B用保鲜膜密封于常温下保存。

【精品】实验二食品中亚硝酸盐的测定实验目的1.掌握食品中亚硝酸盐的含量测定方法；2.了解亚硝酸盐的成因及在食品中的危害；3.掌握实验的操作技能及注意事项，培养实验技能和实验思维能力。

实验原理亚硝酸盐是一种常用食品添加剂，也是一种常见的食品污染物。

亚硝酸盐的成因主要有两种：一是自然形成，青菜等植物胺类代谢产物及肉类组织蛋白质经肠道细菌的作用生成亚硝基化合物，这类亚硝酸盐可进一步转化成亚硝酸盐，由此导致食品中亚硝酸盐的形成；二是人为加入，如肉制品、蔬菜等。

亚硝酸盐在食品中的危害主要表现为：亚硝酸盐通过化学反应转化成一氧化二氮，促进肠胃癌的形成；同时还可造成血红蛋白亚硝化而引发急性毒性反应，对人体健康具有很大的危害。

几乎所有亚硝酸盐含量的测定方法包括两部分：第一步是还原亚硝酸盐成亚氨基化合物；第二步是利用二恶英-4-芬偶氮苯作为指示剂进行比色测定。

化学反应式如下：亚硝酸盐+硫代硫酸钠+硫酸=亚硝基化合物亚硝基化合物+二恶英-4-芬偶氮苯=偶氮酸盐+亚氨基化合物实验步骤1.标准品制备：取称量好的硝酸钠按1mg/mL加水稀释，得到10μg/mL 的硝酸钠溶液。

2. 亚硝酸盐制备：从肉类中取10g样品，加30mL水，磨碎，加10mL氢氧化钠溶液，放在98℃水浴中反应40min，加入醋酸后重新磨碎，加水定容至100mL，制备出亚硝酸盐样品。

3.比色测定：将相应量的亚硝酸盐溶液按反应比例加入隔去氧气的办法文件中，加入矫正模板溶液，比色盘上即可读出相应的亚硝酸盐含量。

注意事项1.实验规范操作，全程佩戴手套；2. 值班人员将危险品管理好，不得离开实验室；3. 处理废弃液体和药品时，应按实验室的有关规定进行处理；4. 处理时不得将有关物品渗出实验室；5. 在实验过程中如有异常情况，则应立即停止实验并向老师汇报。

实验结果与分析实验结果一般用亚硝酸盐含量来表示，读出数据后，根据前面所述的计算公式计算出样品中的亚硝酸盐含量，若样品完全操作正确，计算后应得到0.03mg/kg的测定结果，若样品含量偏高，则需重新制备亚硝酸盐溶液并仔细操作。

食物中亚硝酸盐含量的测定
亚硝酸盐是一类无机化合物的总称，主要指亚硝酸钠，为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。

硝酸盐和亚硝酸盐广泛存在于人类环境中，是自然界中最普遍的含氮化合物。

以下是一些测定食物中亚硝酸盐含量的方法：
1. 分光光度法：这是一种常用的分析方法，基于亚硝酸盐在特定波长下的吸光度来定量。

将食物样品与化学试剂反应，形成一种有色化合物，然后通过分光光度计测量其吸光度，并与标准曲线进行比较，从而确定亚硝酸盐的含量。

2. 离子色谱法：这是一种分离和分析离子的技术，可用于测定亚硝酸盐。

食物样品经过前处理后，通过离子色谱仪进行分离和检测，根据保留时间和峰面积来定量亚硝酸盐的含量。

3. 气相色谱法：该方法适用于分析挥发性化合物，如亚硝酸盐。

食物样品经过衍生化处理，将亚硝酸盐转化为易挥发的衍生物，然后通过气相色谱仪进行分离和检测。

4. 酶联免疫吸附法：这是一种基于抗体-抗原相互作用的分析方法。

使用特异性的亚硝酸盐抗体与食物样品中的亚硝酸盐结合，然后通过酶标抗体或显色底物进行检测。

无论选择哪种方法，都需要根据具体的实验条件和要求进行适当的样品前处理，以去除干扰物质并提取出亚硝酸盐。

同时，应该使用标准物质进行校准和质量控制，确保测量结果的准确性和可靠性。

这些方法通常需要专业的实验室设备和技术，因此如果你需要测定食物中亚硝酸盐的含量，建议咨询专业实验室或相关机构。

一、实验目的本实验旨在学习亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在食品中的存在及其对人体健康的影响。

通过实验，掌握亚硝酸盐的提取、分离和定量分析方法，提高对食品中亚硝酸盐含量的检测能力。

二、实验原理亚硝酸盐（NO2-）是一种常见的食品添加剂，广泛应用于肉制品的加工中，具有发色、防腐和抗微生物作用。

然而，过量的亚硝酸盐摄入对人体健康有害，可能导致急性中毒、慢性疾病甚至癌症。

因此，对食品中亚硝酸盐含量的检测具有重要意义。

本实验采用盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐含量。

该方法基于亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮化反应，生成重氮盐，再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐偶合形成玫瑰红色染料。

通过比色法测定染料的吸光度，可以计算出样品中亚硝酸盐的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 火腿肠样品- 试剂：对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、亚硝酸钠标准溶液等- 仪器：酸度计、分光光度计、离心机、移液器、容量瓶、试管等2. 实验步骤：1. 样品处理：将火腿肠样品剪碎，称取适量，加入蒸馏水溶解，搅拌均匀。

2. 提取：将样品溶液用酸度计调至pH 2.0，加入适量的亚铁氰化钾和乙酸锌，充分混合，静置30分钟，使蛋白质沉淀。

3. 分离：将上层清液转移至离心管中，离心分离蛋白质沉淀。

4. 测定：取一定量的上层清液，加入对氨基苯磺酸和N-1-萘基乙二胺盐酸盐，充分混合，静置15分钟，使染料形成。

5. 比色：用分光光度计测定染料的吸光度，与标准曲线比较，计算出样品中亚硝酸盐的含量。

四、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据亚硝酸钠标准溶液的浓度和吸光度，绘制标准曲线。

2. 样品测定：对火腿肠样品进行测定，得到样品中亚硝酸盐的吸光度。

3. 结果计算：根据标准曲线和样品吸光度，计算出样品中亚硝酸盐的含量。

五、实验讨论1. 实验过程中，酸度对亚硝酸盐的测定结果有较大影响。

实验过程中应严格控制酸度，确保测定结果的准确性。

2. 亚铁氰化钾和乙酸锌在实验中起到沉淀蛋白质和除去脂肪的作用，提高实验的灵敏度。

食物中的亚硝酸盐含量测定实验亚硝酸盐是一种普遍存在于食物中的化学物质，它具有一定的危害性。

过量的亚硝酸盐摄入可引起健康问题，如致癌作用和对血液循环系统的不良影响。

因此，了解食物中的亚硝酸盐含量对我们的健康至关重要。

本文将详细介绍一种简单有效的食物中亚硝酸盐含量测定实验方法。

实验材料：- 油酸银试剂：用浓硝酸和两滴稀硝酸混合制成的10%油酸银溶液。

- 食物样品：如蔬菜、肉类或加工制品等。

- 高纯水：用于制备试剂和稀释样品。

实验步骤：1. 样品制备：将所需食物样品洗净，去皮并切成小块。

取适量的食物样品（约10克）放入容器中备用。

2. 制备油酸银试剂：在实验室条件下，取适量的浓硝酸（约1ml），加入两滴稀硝酸，并充分混合。

得到的溶液即为10%油酸银试剂。

3. 样品处理：将预先准备好的食物样品置于容器中，加入适量的高纯水（约50ml），然后加入足量的油酸银试剂（约2ml）。

4. 摇晃溶液：将容器封闭，并轻轻地摇晃溶液，使油酸银试剂充分与样品接触，反应1分钟。

5. 过滤液处理：使用滤纸或滤膜将溶液过滤，以去除残留的食物固体颗粒。

6. 比色测定：将过滤后的溶液放入比色皿中，然后使用紫外-可见分光光度计测量其吸光度。

数据处理与结果分析：根据所得的吸光度值，可以通过制定标准曲线来计算食物样品中的亚硝酸盐含量。

标准曲线通常由不同浓度的亚硝酸钠溶液制成。

通过比较食物样品的吸光度值与标准曲线上的相应吸光度值，可以确定食物中的亚硝酸盐含量。

实验注意事项：1. 实验操作时请佩戴适当的实验室防护设备，如手套和护目镜。

2. 使用实验室用具时要注意安全，如锥形瓶和滤纸。

3. 进行比色测定时，确保比色皿干净，并且避免空气中的尘埃进入溶液。

结论：通过本实验，我们可以有效地测定食物中的亚硝酸盐含量。

这有助于我们评估食物的安全性，并采取相应的措施来减少亚硝酸盐的摄入。

同时，本实验方法简单易行，可以在实验室或家庭环境中进行，为亚硝酸盐的监测提供了一种可行的方法。

亚硝酸盐的测定方案1. 引言亚硝酸盐是一种重要的无机化合物，广泛应用于工业生产和环境监测等领域。

准确测定亚硝酸盐的含量对于评估水体、食品和环境等样品的安全与质量具有重要意义。

本文将介绍一种常用的亚硝酸盐测定方案。

2. 实验方法2.1 材料准备以下是实验所需的材料：•1% 硝酸银溶液•10% 氯化铁(III) 溶液•蒸馏水•待测样品溶液2.2 样品处理2.2.1 标准曲线制备1.取一系列容量瓶，分别加入适量的亚硝酸钠溶液，浓度分别为0.1mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L。

2.分别向每个容量瓶中加入等量的氯化铁(III) 溶液和硝酸银溶液，使得样品的体积相同。

3.用蒸馏水稀释每个容量瓶的溶液至刻度线，摇匀使其均匀混合。

2.2.2 待测样品处理1.取一定体积的待测样品溶液。

2.分别向每个待测样品中加入等量的氯化铁(III) 溶液和硝酸银溶液。

3.用蒸馏水稀释样品溶液至刻度线，摇匀使其均匀混合。

2.3 测定方法2.3.1 标准曲线法1.将标准曲线样品溶液依次吸入比色皿中，使用比色皿时应安装红外线滤光片来过滤杂散光。

2.使用分光光度计测量样品的吸光度，记录吸光度值。

3.制备标准曲线：以纵坐标为吸光度值，横坐标为亚硝酸钠的浓度，绘制标准曲线。

2.3.2 待测样品测定1.将待测样品溶液吸入比色皿中。

2.使用分光光度计测量样品的吸光度。

3.根据标准曲线计算出待测样品中亚硝酸盐的浓度。

3. 结果分析根据标准曲线和待测样品的吸光度值，可以通过插值法计算出待测样品中亚硝酸盐的浓度。

通过该测定方案，可以准确、快速地测定亚硝酸盐的含量。

4. 实验注意事项•操作时需要佩戴个人防护设备，如实验手套和安全眼镜。

•实验中使用的溶液应注意安全，避免直接接触皮肤或吸入气体。

•实验室中应保持清洁，实验器材应定期清洗和消毒。

•实验过程中应注意准确记录各步骤和实验结果。

5. 结论该测定方案适用于准确测定亚硝酸盐的含量。

实验4食品中亚硝酸盐测定（盐酸萘乙二胺法）一、实验原理制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。

同时亚硝酸盐也是一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。

由于蛋白质代谢产物中仲胺基与亚硝酸反应能够生成具有很强毒性和致癌性的亚硝胺，因此，亚硝酸盐的使用量及在制品中的残留量均应按标准执行。

亚硝酸盐的测定方法主要是重氮偶合比色法，此外可与荧光胺偶合，测定其荧光吸收强度，或衍生后用气相色谱法测定。

自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸2—萘乙二胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。

其颜色的深度与样品种亚硝酸含量成正比，故可比色测定。

二、试剂和器材①饱和硼砂溶液：5g硼酸钠溶于100mL热的重蒸水中，冷却备用。

②亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并稀释至1000mL。

③乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌，加30mL冰醋酸溶于水，并稀释至1000mL。

④果蔬抽提液：溶解50g氯化汞和50g氯化钡于1000mL重蒸水中，用浓盐酸调整到pH值为1。

⑤氢氧化铝乳液：溶解125g硫酸铝于1000mL重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀。

用蒸馏水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钡溶液检验不发生浑浊。

取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄糨糊状，捣拌均匀备用。

⑥0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%的盐酸溶液中，闭关保存。

⑦0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL重蒸水中。

⑧亚硝酸钠标准溶液（5微克每毫升）：精确称取0.1000g亚硝酸铵，以重蒸水定容到500mL。

再吸取此溶液25mL，以重蒸水定容到1000mL，此工作液每毫升含亚硝酸钠5微克。

分光光度计，组织捣碎机。

三、试验步骤1、样品处理果蔬类样品用组织捣碎机打浆。

称取适量浆液（视式样中硝酸盐含量而定，如青刀豆取10g，桃子、菠萝取30g），置于500mL容量瓶中。

实验报告：午餐肉中亚硝酸盐含量的测定一、实验内容用盐酸萘乙二胺法测定午餐肉中亚硝酸盐的含量。

二、实验目的与要求（1）熟悉掌握样品制备，提取的基本操作技能；（2）进一步学习并熟练地掌握分光光度计的使用方法和技能；（3）学习盐酸萘乙酸二胺比色法测定亚硝酸盐的原理及操作要点。

三、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对安吉苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为550nm，可测定吸光度并标准比较定量分析。

四、试剂1、亚铁氰化钾溶液：称取106克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至1000毫升。

2、乙酸锌溶液：称取220克乙酸锌[Zn(CH2C00)2·2H20]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。

3、饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。

4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。

5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。

6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。

7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。

五、仪器小型绞肉机、分光光度计、25ml闭塞管六、操作方法1、样品处理：称取2.5克经绞碎混匀的样品，置于50毫升烧杯中，加入6.3毫升硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约150毫升将样品全部洗入250毫升容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入2.5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2.5毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤弃去初滤液20毫升，滤液备用。

一、实验目的1. 了解亚硝酸盐的检测原理和方法。

2. 掌握利用比色法检测食品中亚硝酸盐含量的操作步骤。

3. 学会分析实验结果，判断食品中亚硝酸盐的污染程度。

二、实验原理亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成的重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成紫红色偶氮化合物。

该化合物在540nm波长处有最大吸收，通过测定吸光度值，可以计算出食品中亚硝酸盐的含量。

三、实验材料与仪器1. 材料：亚硝酸钠标准溶液、对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、乙酸、样品（如腌肉、鱼制品等）。

2. 仪器：分光光度计、移液管、容量瓶、试管、烧杯、滴定管、玻璃棒等。

四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）准确移取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL亚硝酸钠标准溶液于6只试管中，分别加入2.0mL盐酸，振荡混匀。

（2）加入0.5mL对氨基苯磺酸溶液，振荡混匀，放置10分钟。

（3）加入0.5mLN-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液，振荡混匀，放置15分钟。

（4）以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度值。

（5）以吸光度值为纵坐标，亚硝酸钠浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 样品中亚硝酸盐含量的测定（1）准确称取样品2.0g，加入10mL蒸馏水，振荡混匀。

（2）准确移取5.0mL样品溶液于试管中，按照标准曲线绘制步骤进行操作。

（3）以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度值。

（4）根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以吸光度值为纵坐标，亚硝酸钠浓度为横坐标，绘制标准曲线。

计算线性回归方程：y = 0.0064x + 0.0011，R² = 0.9989。

2. 样品中亚硝酸盐含量的测定根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐含量。

假设样品中亚硝酸盐含量为x，代入线性回归方程得：x = (吸光度值 - 0.0011) / 0.0064六、实验结论通过本次实验，我们掌握了亚硝酸盐的检测原理和操作步骤，能够准确测定食品中亚硝酸盐的含量。

实验一 亚硝酸盐含量的测定一. 目的了解肉制品中亚硝酸盐测定方法和原理。

二. 原理亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮反应，生成重氮化合物，再与萘基盐酸二氨基乙烯偶联成紫红色的偶氮染料，颜色的深浅与亚硝酸根含量成正比关系，可直接比色测定。

反应式如下：H 2N +2H ++NO 2_S O 3H N +N S O 3H +2H 2O N + N SO 3H +NHCH 2NH 3.2HCLHO 3S N N NHCH 2CH 2NH 3三. 操作方法1.亚硝酸钠标准曲线的绘制 以吸管分别精确吸取亚硝酸钠标准溶液(5ug/ml) 0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml(分别含2.5、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0ug 亚硝酸钠)于一组50ml 容量瓶中，加入0.4%对氨基苯磺酸溶液2ml ，静置3~5min 后，加入0.2%萘基盐酸二氨基乙烯2ml ，并用重蒸水定容，摇匀。

静置15min 后，用分光光度计在540nm波长处测定光密度，以蒸馏水作同样的处理为空白。

以测得的各比色液的光密度与相应的亚硝酸浓度作曲线。

2.肉制品（红烤肉除外）中亚硝酸盐的抽提称取经搅拌混合均匀的试样10.00g 于50ml 的烧杯中，加入硼砂饱和溶液12.5ml, 用玻璃棒搅和，以70℃左右的重蒸水约150ml 将其洗入250ml 的容量瓶中，置沸水浴中加热15min ，取出，一边转动，一边滴加2.5ml 硫酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

冷却到室温，用重蒸水定容，放置片刻，撇去上层脂肪，清液用滤纸过滤，滤液必须清澈，留作亚硝酸盐的测定。

3.亚硝酸盐的测定取40ml 试样滤液于50ml 容量瓶中，加入0.4%的对氨基苯磺酸溶液2ml ，静置3~5min后，加入0.2%的萘基盐酸二氨基乙烯溶液2ml，并用重蒸水定容，摇匀，静置15min。

并作对空白试验。

比色如前，记录光密度，从标准曲线上查得相应的亚硝酸钠的浓度(ug/ml)计算试样中亚硝酸盐的含量(以亚硝酸钠计)四.计算1C××10001000肉制品中亚硝酸盐含量(mg/kg)=40 1W××50250式中C------ (3)中测得的亚硝酸钠浓度(ug/ml)W ------试样重量(g)有实验可得，比色液的光密度与相应的亚硝酸浓度的标准曲线为：y=0.7341x+0.0126；实验测得样品光密度为0.045，所以实验样品中亚硝酸钠浓度为C=（0.045-0.0126）/0.7341=0.044(ug/ml)；所以肉制品中亚硝酸盐含量M=0.044/（10×0.8/250）=1.375(mg/kg).五结果分析1、根据添加剂使用标准GB2760-2007可知，在火腿肠中亚硝酸钠的残留量不得超过30mg/kg,本实验测得产品中亚硝酸钠含量为1.375(mg/kg).产品中亚硝酸盐的使用符合国家标准。

实验十 食品中亚硝酸盐含量的检测1.实验目的掌握盐酸萘乙二胺法检测肉制品中食品添加剂——亚硝酸盐的基本操作技术。

2.实验原理在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色化合物，颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比，其最大吸收波长为538nm ，可测定吸光度并与标准比较定量。

2HCl+NaNO 2+H 2N3H重氮化H 3SO-Cl----+NaCl 2H +2O2HCl .H 2NH 2CH 2+--N-Cl N3H偶合CHN 2CH 2NH 2H .2HCl N -H 3SON +HCl盐酸萘乙二胺紫红色3.仪器、试剂及材料3.1仪器50mL 小烧杯，752型分光光度计，250mL 容量瓶，1mL 移液管，25mL 具塞试管，洗耳球 3.2试剂（1）饱和硼砂溶液：溶解5g 硼酸钠于100mL 热水中，冷却后备用。

（2）硫酸锌溶液：溶解30g 硫酸锌于100mL 水中。

（3）对氨基苯磺酸溶液（0.4%）：溶解0.4g 对氨基苯磺酸于100mL20%盐酸中，避光保存。

（4）盐酸奈乙二胺溶液（0.2%）：溶解0.2g 盐酸奈乙二胺于100mL 水中，避光保存。

（5）亚硝酸钠标准溶液：精确称取0.1000g 亚硝酸钠（硅胶干燥中干燥24小时），加水溶解，移入500mL 容量瓶，并稀释至刻度，混匀，临用前吸取5.00mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，此溶液每毫升相当5μg 亚硝酸钠。

（6）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g 亚铁氰化钾于100mL 容量瓶中定容。

3.3材料火腿肠4.实验步骤4.1亚硝酸钠的提取4.2 测定试剂按照表1进行添加表1 各试剂添加顺序滤液20 0.4%对氨基苯磺酸1 1 1 1 1 1 混匀3~5min 0.2%盐酸奈乙二胺0.50.50.5 0.5 0.50.5补水至25mL数据处理公式与方法：1000250201000A X ⨯⨯⨯=mX ——样品中的亚硝酸盐的含量，mg/kg ；A ——测定用滤液中亚硝酸钠的含量，μg ； m ——样品的质量，g ；20/250——测定用样液体积mL/试样处理液总体积mL 。

实验二食品中亚硝酸盐的测定一、实验目的与要求掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，于最大吸收波长538 nm下测吸光度值A, 与标准系列比较定量。

三、实验仪器及试剂1.仪器：分析天平、722分光光度计2. 亚铁氰化钾溶液：称取106.0 g亚铁氰化钾（[K4Fe6(CN)·3H2O]），用水溶解后，稀释至1000 mL。

3．乙酸锌溶液：称取22.0 g乙酸锌（[Zn(CH3C00)2·2H20]），加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100 mL。

4．饱和硼砂溶液：称取5.0 g硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100 mL热水中，冷却后备用。

5．对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

6．盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶于100 mL水中，避光保存。

7．亚硝酸钠标准溶液（0.2 g/L）：精密称取0.1000 g于硅胶干燥器中干燥24 h的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，并稀释至刻度。

8．亚硝酸钠标准使用液（20 µg/mL）：临用前，吸取10 m L 0.2 g/L亚硝酸钠标准溶液，置于100 m L容量瓶中，加水稀释至刻度。

.四、实验步骤（1）样品前处理1. 取样：准确称取5.0 g经绞碎、混匀的样品，置于50mL烧杯中。

2. 沉淀蛋白质：加12.5 mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300 mL将样品洗入500 mL容量瓶中，置沸水浴中加热15 min，取出后冷却至室温；一面转动一面加入5 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

3．过滤：加水定容，放置0.5 h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30 mL，滤液备用。

食品中亚硝酸盐的测定实验报告一、实验目的实验旨在通过化学方法测定食品中亚硝酸盐的含量，以了解食品的安全性，保障公众健康。

亚硝酸盐是一种常见的食品添加剂，适量添加有助于保持食品的色泽和口感，但过量添加或使用不当可能导致人体健康问题。

因此，准确测定食品中亚硝酸盐的含量非常重要。

二、实验原理亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定。

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,外标法测得亚硝酸盐含量。

三、试剂（一）、试剂配制（以下试剂均为实验室协助配置）1、亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取106.0g亚铁氰化钾,用水溶解,并稀释至1000mL。

2、乙酸锌溶液(220g/L):称取220.0g乙酸锌,先加30mL冰乙酸溶解,用水稀释至1000mL。

3、饱和硼砂溶液(50g/L):称取5.0g硼酸钠,溶于100mL热水中,冷却后备用。

4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100mL20%盐酸中,混匀,置棕色瓶中,避光保存。

5、盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100mL水中,混匀,置棕色瓶中,避光保存。

（二）、标准溶液配置1、亚硝酸钠标准溶液(200μg/mL,以亚硝酸钠计):准确称取0.1000g于110 ℃~120 ℃干燥恒重的亚硝酸钠,加水溶解,移入500mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。

2、亚硝酸钠标准使用液(5.0μg/mL):临用前,吸取2.50mL亚硝酸钠标准溶液,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度。

说明：其中亚硝酸钠标准溶液为实验室配置，同学们需要自行配置亚硝酸钠标准使用液。

四、仪器和设备1、天平:感量为0.1mg和1mg2、分光光度计3、滤纸4、100mL容量瓶1个5、200mL容量瓶1个6、带塞50mL比色管8根（其中6管做标曲，1管是牛奶样品，1管是样品）7、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）五、实验步骤1、样品预处理：液体乳样品:称取试样90g(精确至0.001g),置于250mL具塞锥形瓶中,加12.5mL饱和硼砂溶液,加入70 ℃左右的水约60mL,混匀,于沸水浴中加热15min,取出置冷水浴中冷却,并放置至室温。

任务：1、亚硝酸盐含量是酱腌制品及肉制品监测的重要卫生指标，请查阅GB2760亚硝酸盐在不同产品中的最大限量值。

2、请查阅并下载亚硝酸盐分析的国家标准，了解其分析方法，并根据实验室条件选择和确定实验方案。

3、对照国家标准，列出所需仪器和试剂。

亚铁氰化钾溶液称取106.0 g 亚铁氰化钾,定容至1 000 ml。

乙酸锌溶液称取220.0 g 乙酸锌, 加30 ml冰乙酸溶于水, 定容至1 000 ml。

饱和硼砂溶液称取5.0 g 硼酸钠, 溶于亚硝酸盐标准溶液亚硝酸盐标准溶液( 10 100ml mg/L)( GBW(E)100036) 。

硝酸盐标准溶液将硝酸盐标准溶液( 100mg/L)( GBW(E)080265) 用水稀释至10 μg/ 的硝酸盐标准使用液。

淋洗液配制准确称取碳酸钠0.7 g, 碳酸氢钠0.2 g, 溶于适量水中, 定容至2 000 ml。

注以上试剂均采用分析纯试剂。

热水中, 冷却备用。

4、依照国家标准，设计分析操作流程图。

5、在提取亚硝酸的试样匀浆中，为何添加饱和硼砂溶液，过滤时为何要弃去粗滤液？饱和硼砂在这里的作用是助提剂，对蛋白质有沉淀作用，硼砂起到的作用是吸收亚硝酸盐分解的NO2的作用，使用亚硝酸盐的总量不会因加热而分解减少。

硼砂溶入水中，即被水解为等量的硼酸与硼酸二氢钠，起缓冲溶液作用。

溶液pH约为9.18，即碱性。

调节PH 硼砂可与酸反应生成硼酸加硼砂可使PH升高过滤时滤纸会吸附一部分硝酸盐，要等滤纸中硝酸盐饱和后的滤液才能进行试验6、为何要显色反应需3—5min？7、如果样品溶液的吸光度不在工作曲线线性范围，应如何处理？8、为保证测定结果准确性，操作中应注意哪些环节？分析结果的几个因素有充分的了解实验表明，在测定食品中亚硝酸盐含量时，温度显色时间和样品pH均对分析结果有一定的影响在具体实验操作中，在室温不低于 19℃的条件下，无对温度进行调控，但需要对显色时间和样品 pH 严格控制。