食品中亚硝酸盐测定实验

食品中亚硝酸盐的测定实验报告参考文献一、教材类参考文献1. 食品分析这本书超有用的。

它详细介绍了食品分析的基本原理、方法和技术。

在亚硝酸盐测定方面，它给出了经典的测定方法，比如格里斯试剂比色法的原理和详细操作步骤，包括试剂的配制、样品的预处理等。

这些内容就像是我们做实验的指南，让我们能够一步一步地准确进行亚硝酸盐的测定。

2. 食品化学实验指导也是个宝。

它有专门针对亚硝酸盐测定实验的部分，除了讲述实验方法，还会对实验结果可能出现的偏差进行分析，像如果样品中存在某些干扰物质会对测定结果产生怎样的影响，以及如何去排除这些干扰。

这对于我们理解实验的准确性和可靠性很有帮助。

二、学术期刊类参考文献1. 食品科学杂志上有不少关于亚硝酸盐测定的研究论文。

有一篇论文专门研究了不同食品基质中亚硝酸盐测定的优化方法。

它通过对比多种传统测定方法在不同食品中的应用，发现了一些可以提高测定效率和准确性的小窍门，比如说在测定肉类食品中亚硝酸盐时，调整样品提取液的pH值可以更好地提取亚硝酸盐，从而提高测定的准确性。

2. 在分析化学期刊上也能找到相关的内容。

有研究人员发表了关于新型传感器用于亚硝酸盐测定的文章。

这种新型传感器相比传统方法具有更高的灵敏度和选择性，能够快速准确地测定食品中的亚硝酸盐含量。

它的原理是基于某种特殊的化学反应，然后通过传感器将化学信号转化为电信号进行检测。

这为我们了解亚硝酸盐测定的前沿技术提供了很好的素材。

三、网络资源类参考文献1. 一些专业的食品检测网站也有很有用的信息。

比如“食品伙伴网”，上面有很多关于食品中亚硝酸盐测定的资料。

有一些是一线检测人员分享的实际操作经验，比如在测定腌制蔬菜中亚硝酸盐时，如何避免蔬菜本身的色素对测定结果的干扰。

还有一些是对不同测定方法的讨论，大家可以在上面交流各自的看法和遇到的问题。

2. 一些高校的食品专业实验室网站也不容错过。

它们会上传自己实验室做亚硝酸盐测定实验的报告和相关资料。

实验二食品中亚硝酸盐含量的测定一、实验目的1. 了解亚硝酸盐的危害，掌握测定食品中亚硝酸盐含量的方法。

2. 掌握色谱法和分光光度法的原理和操作方法，学会利用这两种方法测定食品中亚硝酸盐的含量。

二、实验原理1. 亚硝酸盐的危害亚硝酸盐是一种常见的致癌物质，它在在一定条件下可以转化为亚硝胺，而亚硝胺是一种强致癌物。

人体摄入过量的亚硝酸盐会导致亚硝胺的形成，从而增加患癌症的风险。

2. 色谱法测定亚硝酸盐含量色谱法测定亚硝酸盐含量的原理是利用反相色谱分离亚硝酸盐，并通过紫外检测器检测样品中亚硝酸盐的含量。

具体步骤如下：（1）样品制备：将待测样品加入水中，同时加入明矾和硫酸铜，使亚硝酸盐被还原为亚硝酸钠。

（2）色谱柱处理：用反相色谱柱，在样品进样口处注入样品，经过一定的进样残留时间后，以一定的流速进行柱洗脱。

柱洗脱时，先用无机盐水拉平基线，再用有机溶剂进行洗脱。

（3）检测：用紫外检测器检测亚硝酸盐的吸光度，从而得到亚硝酸盐的含量。

分光光度法测定亚硝酸盐含量的原理是利用亚硝酸盐和硫酸铁（Ⅱ）发生化学反应，在一定的酸性条件下生成的重氮化合物与磺基苯二胺反应，生成紫色产物，其最大吸收波长为540 nm。

具体步骤如下：（2）反应：加入磺基苯二胺后，放置反应10-30min，其间温度保持在5℃-25℃之间。

（3）检测：利用分光光度计测定紫色产物在540nm处的吸光度，计算出亚硝酸盐的含量。

三、实验步骤1. 应注意的问题（1）亚硝酸钠充分还原后，一定要在酸性环境下进行测定。

（2）在反应中要控制好温度，以保证反应的准确性。

（3）样品应尽量少受光照，以防止光照影响样品的含量。

2. 实验器材和试剂（1）色谱仪、分光光度计（2）无水乙醇、对乙酰胺、对乙酰苯胺等试剂（3）标准亚硝酸钠（4）食品样品（2）色谱柱处理：将反相柱的一端用具有无机盐的水洗涤，并用有机溶剂过渡洗脱，直到出现白色较少的沉淀为止，这表明柱已达到欧拉。

（1）样品准备：取适量待测样品，加入约150mL的水中，用硫酸酸化使亚硝酸盐转化为硝酸盐，加入对乙酰苯胺拌匀，静置10min。

食品中亚硝酸盐测定盐酸荼乙二胺法实验实验4食品中亚硝酸盐测定（盐酸茶乙二胺法） A文稿归稿存档 DQS583-OLUI129一、实验原理制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。

同时亚硝酸盐也是一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。

由于蛋白质代谢产物中仲胺基与亚硝酸反应能够生成具有很强毒性和致癌性的亚硝胺，因此，亚硝酸盐的使用量及在制品中的残留量均应按标准执行。

亚硝酸盐的测定方法主要是重氮偶合比色法，此外可与荧光胺偶合，测定其荧光吸收强度，或衍生后用气相色谱法测定。

H样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸2—蔡乙二胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。

其颜色的深度与样品种亚硝酸含量成正比，故可比色测定。

二、试剂和器材①饱和硼砂溶液：5g硼酸钠溶于lOOmL热的重蒸水中，冷却备用。

②亚铁鼠化钾溶液：称取106g亚铁鼠化钾溶于水，并稀释至lOOOmLo③乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌，加30mL冰醋酸溶于水，并稀释至lOOOmLo④果蔬抽提液：溶解50g氯化汞和50g氯化锁于lOOOmL重蒸水中，用浓盐酸调整到pH值为lo⑤氢氧化铝乳液：溶解125呂硫酸铝于lOOOmL重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀。

用蒸懈水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钞!溶液检验不发生浑浊。

取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄襁糊状，捣拌均匀备用。

©0. 4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%的盐酸溶液中，闭关保存。

⑦0.2%盐酸蔡乙二胺溶液：称取0.2g盐酸蔡乙二胺，溶于100mL重蒸水中。

⑧亚硝酸钠标准溶液（5微克每毫升）：精确称取0. 1000g亚硝酸钱，以重蒸水定容到500mLo再吸取此溶液25mL,以重蒸水定容到lOOOmL,此工作液每毫升含亚硝酸钠5微克。

【精品】实验二食品中亚硝酸盐的测定实验目的1.掌握食品中亚硝酸盐的含量测定方法；2.了解亚硝酸盐的成因及在食品中的危害；3.掌握实验的操作技能及注意事项，培养实验技能和实验思维能力。

实验原理亚硝酸盐是一种常用食品添加剂，也是一种常见的食品污染物。

亚硝酸盐的成因主要有两种：一是自然形成，青菜等植物胺类代谢产物及肉类组织蛋白质经肠道细菌的作用生成亚硝基化合物，这类亚硝酸盐可进一步转化成亚硝酸盐，由此导致食品中亚硝酸盐的形成；二是人为加入，如肉制品、蔬菜等。

亚硝酸盐在食品中的危害主要表现为：亚硝酸盐通过化学反应转化成一氧化二氮，促进肠胃癌的形成；同时还可造成血红蛋白亚硝化而引发急性毒性反应，对人体健康具有很大的危害。

几乎所有亚硝酸盐含量的测定方法包括两部分：第一步是还原亚硝酸盐成亚氨基化合物；第二步是利用二恶英-4-芬偶氮苯作为指示剂进行比色测定。

化学反应式如下：亚硝酸盐+硫代硫酸钠+硫酸=亚硝基化合物亚硝基化合物+二恶英-4-芬偶氮苯=偶氮酸盐+亚氨基化合物实验步骤1.标准品制备：取称量好的硝酸钠按1mg/mL加水稀释，得到10μg/mL 的硝酸钠溶液。

2. 亚硝酸盐制备：从肉类中取10g样品，加30mL水，磨碎，加10mL氢氧化钠溶液，放在98℃水浴中反应40min，加入醋酸后重新磨碎，加水定容至100mL，制备出亚硝酸盐样品。

3.比色测定：将相应量的亚硝酸盐溶液按反应比例加入隔去氧气的办法文件中，加入矫正模板溶液，比色盘上即可读出相应的亚硝酸盐含量。

注意事项1.实验规范操作，全程佩戴手套；2. 值班人员将危险品管理好，不得离开实验室；3. 处理废弃液体和药品时，应按实验室的有关规定进行处理；4. 处理时不得将有关物品渗出实验室；5. 在实验过程中如有异常情况，则应立即停止实验并向老师汇报。

实验结果与分析实验结果一般用亚硝酸盐含量来表示，读出数据后，根据前面所述的计算公式计算出样品中的亚硝酸盐含量，若样品完全操作正确，计算后应得到0.03mg/kg的测定结果，若样品含量偏高，则需重新制备亚硝酸盐溶液并仔细操作。

实验二食品（腊肠）中亚硝酸盐的测定一、实验原理与目的目的要求：熟悉亚硝酸盐的化学性质和分离方法。

掌握其定性、定量分析方法。

1知识目标：掌握腊肠中亚硝酸盐含量的测定原理及方法。

技能目标：能对腊肠中的亚硝酸盐含量进行测定。

2、（1）亚硝酸盐作用硝酸盐和亚硝酸盐是食品添加剂中的发色剂（也称护色剂），添加后，硝酸盐在亚硝基化菌的作用下还原成亚硝酸盐，并在肌肉中乳酸的作用下生成亚硝酸。

亚硝酸不稳定，极易分解产生亚硝基，生成的亚硝基会很快与肌红蛋白反应生成鲜艳的、亮红色的亚硝基肌红蛋白，亚硝基肌红蛋白遇热后，放出巯基（-SH）,变成了具有鲜红色的亚硝基血色原，从而赋予食品鲜艳的红色。

另外，亚硝酸盐对抑制微生物增殖有一定作用，与食盐并用，可增加对细菌的抑制作用。

亚硝酸盐摄入量过多会对人体产生毒害作用。

过多地摄入亚硝酸盐会引起正常血红蛋白转变为高铁血红蛋白，而失去携氧功能，导致组织缺氧，引起肠原性青紫症。

（2）测定原理亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，样品经处理、沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化以后，再与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，在538 nm波长处测定吸光度，与标准比较定量。

二、试剂与材料（亚硝酸盐的测定（依据GB/T 5009.33-2010）1、检测原料：红肠、腊肠、榨菜、咸菜2、试剂：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。

水为GB/T 6682-2008规定的二级水或去离子水。

①亚铁氰化钾溶液（106 g/L）:称取106.0 g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000 mL。

②乙酸锌溶液（220 g/L ）：称取220.0 g乙酸锌，先加30 mL冰醋酸溶解，用水稀释至1000 mL。

③饱和硼砂溶液（50 g/L ）：称取5.0 g硼酸钠，溶于100 mL热水中，冷却后备用。

④对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL20%（V/V ）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存⑤盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）:称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶于100 mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

一、实训目的本次实训旨在通过实验操作，使学生掌握亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在食品中的存在形式及其对人体健康的影响，提高学生的实验技能和数据分析能力。

二、实训时间2023年10月25日三、实训地点化学实验室四、实训仪器与试剂1. 仪器：- 高速离心机- 分光光度计- 电子天平- 磁力搅拌器- 容量瓶（100mL、50mL）- 试管- 移液管（1mL、10mL）2. 试剂：- 亚硝酸钠标准溶液- 对氨基苯磺酸溶液- N-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液- 硫酸溶液- 氨水- 食品样品五、实验原理亚硝酸盐在食品中主要存在于腌制肉类、鱼类等加工食品中，其含量对人体健康有重要影响。

本实验采用比色法测定食品中亚硝酸盐的含量。

其原理是：在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成的重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成紫红色偶氮染料，通过测定吸光度，可以计算出亚硝酸盐的含量。

六、实验步骤1. 样品处理：- 称取适量的食品样品，加入适量的硫酸溶液，用高速离心机离心分离。

- 取上清液备用。

2. 标准曲线的绘制：- 取一系列不同浓度的亚硝酸钠标准溶液，按照实验步骤进行操作。

- 测定吸光度，以亚硝酸钠浓度（mg/L）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定：- 按照实验步骤，对处理后的样品进行测定。

- 测定吸光度。

4. 结果计算：- 根据标准曲线，计算出样品中亚硝酸盐的含量。

七、实验结果与分析1. 标准曲线：- 通过绘制标准曲线，得出线性回归方程：y = 0.0486x + 0.0013，R² =0.9969。

2. 样品测定结果：- 根据实验结果，样品中亚硝酸盐的含量为2.5mg/kg。

3. 结果分析：- 本次实验中，样品中亚硝酸盐的含量略高于国家标准限值（1mg/kg），说明该食品样品中亚硝酸盐含量较高，消费者在食用时应注意。

八、实验总结1. 通过本次实训，我们掌握了亚硝酸盐的测定方法，了解了亚硝酸盐在食品中的存在形式及其对人体健康的影响。

实验室食品中亚硝酸盐的测定盐酸蔡乙二胺法亚硝酸盐测1范围本标准规定了食品中亚硝酸盐的测定方法。

适用于食品中亚硝酸盐的测定。

亚硝酸盐方法检出限为Img/kg。

2原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸蔡乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。

3试剂3.1亚铁氟化钾溶液:称取106.Og亚铁氟化钾[KFe(CN)6・3比0],用水溶解,并稀释至IoOon1.1.。

3.2乙酸锌溶液：称取220.Og乙酸锌[Zn(CHsCOO)2、2⅛0],加30m1.冰乙酸溶于水，并稀释至1000m1.o3.3饱和硼砂溶液：称取5.Og硼酸钠(Na2BQ7∙IOH2O),溶于IOOm1.热水中，冷却后备用。

3.4对氨基苯磺酸溶液(4g∕1.):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于IOOnI1.20%盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

3.5盐酸蔡乙二胺溶液(2g∕1.)：称取0.2g盐酸蔡乙二胺，溶解于IOOm1.水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

3.6亚硝酸钠标准溶液：准确称取0∙IOOOg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入50OnI1.容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于200Ug的亚硝酸钠。

3.7亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.OOm1.,置于20OnI1.容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.Oug亚硝酸钠。

4仪器4.1小型绞肉机。

4.2分光光度计。

5分析步骤5.1试样处理称取5.Og经绞碎混匀的试样，置于50m1.烧杯中，加12.5m1.硼砂饱和液，搅拌均匀，以70。

C左右的水约300m1.将试样洗入50Om1.容量瓶中，于沸水浴中加热15min,取出后冷却至室温，然后一面转动，一面加入5m1.亚铁氟化钾溶液，摇匀，再加入5m1.乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

加水至刻度，摇匀，放置0.5h,除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30m1.,滤液备用。

食物中亚硝酸盐含量的测定
亚硝酸盐是一类无机化合物的总称，主要指亚硝酸钠，为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。

硝酸盐和亚硝酸盐广泛存在于人类环境中，是自然界中最普遍的含氮化合物。

以下是一些测定食物中亚硝酸盐含量的方法：
1. 分光光度法：这是一种常用的分析方法，基于亚硝酸盐在特定波长下的吸光度来定量。

将食物样品与化学试剂反应，形成一种有色化合物，然后通过分光光度计测量其吸光度，并与标准曲线进行比较，从而确定亚硝酸盐的含量。

2. 离子色谱法：这是一种分离和分析离子的技术，可用于测定亚硝酸盐。

食物样品经过前处理后，通过离子色谱仪进行分离和检测，根据保留时间和峰面积来定量亚硝酸盐的含量。

3. 气相色谱法：该方法适用于分析挥发性化合物，如亚硝酸盐。

食物样品经过衍生化处理，将亚硝酸盐转化为易挥发的衍生物，然后通过气相色谱仪进行分离和检测。

4. 酶联免疫吸附法：这是一种基于抗体-抗原相互作用的分析方法。

使用特异性的亚硝酸盐抗体与食物样品中的亚硝酸盐结合，然后通过酶标抗体或显色底物进行检测。

无论选择哪种方法，都需要根据具体的实验条件和要求进行适当的样品前处理，以去除干扰物质并提取出亚硝酸盐。

同时，应该使用标准物质进行校准和质量控制，确保测量结果的准确性和可靠性。

这些方法通常需要专业的实验室设备和技术，因此如果你需要测定食物中亚硝酸盐的含量，建议咨询专业实验室或相关机构。

食品中亚硝酸盐的测定分光光度法1、提取：称取5g（精确至0.01g）制成匀浆的试样置于50ml烧杯中，加12.5饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300ml将试样洗入500 ml容量瓶中，于沸水浴加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

2、提取液净化：在振荡上述提取液时加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5ml乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30ml，滤液备用。

3、测定：吸取上述40.0ml上述滤液于50ml带塞比色管中，另取0.00 ml，0.20 ml，O.40 ml，0.60 ml，0.80 ml，1.00 ml，1.50 ml，2.00 ml，2.50 ml亚硝酸钠标准使用液分别置于50 ml带塞比色管中。

于标准管与试样管中分别加入 2 ml对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3～5min后各加入 1 ml盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，摇匀，静置15min，用2cm比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。

同时做试剂空白。

4、计算：式中：X：—试样中亚硝酸钠的含量(mg/Kg)A：—测定用样液中亚硝酸钠的质量（μg）m：—试样质量（g）V2：—测定用样液体积（ml）V1：—试样处理液总体积（ml）结果保留两位有效数字。

此方法的最低检出限为1mg/kgx =A×1000m× V2/ V1×1000食品中亚硫酸盐盐酸副玫瑰苯胺法1试剂1.1 四氯汞钠吸收液：称取13.6g氯化高汞及6.0g氯化钠，溶于水中并稀释至1000mL，放置过夜，过滤后备用。

1.2 氨基磺酸铵溶液(12g/L)。

1.3 甲醛溶液(2g/L)：吸取0.55mL无聚合沉淀的甲醛(36%)，加水稀释至100mL，混匀。

1.4 淀粉指示液：称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100mL沸水中，随加随搅拌，煮沸，放冷备用，此溶液临用时现配。

一、实验目的1. 了解亚硝酸盐的检测原理和方法。

2. 掌握利用比色法检测食品中亚硝酸盐含量的操作步骤。

3. 学会分析实验结果，判断食品中亚硝酸盐的污染程度。

二、实验原理亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成的重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成紫红色偶氮化合物。

该化合物在540nm波长处有最大吸收，通过测定吸光度值，可以计算出食品中亚硝酸盐的含量。

三、实验材料与仪器1. 材料：亚硝酸钠标准溶液、对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、乙酸、样品（如腌肉、鱼制品等）。

2. 仪器：分光光度计、移液管、容量瓶、试管、烧杯、滴定管、玻璃棒等。

四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）准确移取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL亚硝酸钠标准溶液于6只试管中，分别加入2.0mL盐酸，振荡混匀。

（2）加入0.5mL对氨基苯磺酸溶液，振荡混匀，放置10分钟。

（3）加入0.5mLN-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液，振荡混匀，放置15分钟。

（4）以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度值。

（5）以吸光度值为纵坐标，亚硝酸钠浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 样品中亚硝酸盐含量的测定（1）准确称取样品2.0g，加入10mL蒸馏水，振荡混匀。

（2）准确移取5.0mL样品溶液于试管中，按照标准曲线绘制步骤进行操作。

（3）以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度值。

（4）根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以吸光度值为纵坐标，亚硝酸钠浓度为横坐标，绘制标准曲线。

计算线性回归方程：y = 0.0064x + 0.0011，R² = 0.9989。

2. 样品中亚硝酸盐含量的测定根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐含量。

假设样品中亚硝酸盐含量为x，代入线性回归方程得：x = (吸光度值 - 0.0011) / 0.0064六、实验结论通过本次实验，我们掌握了亚硝酸盐的检测原理和操作步骤，能够准确测定食品中亚硝酸盐的含量。

实验二食品中亚硝酸盐的测定一、实验目的与要求掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，于最大吸收波长538 nm下测吸光度值A, 与标准系列比较定量。

三、实验仪器及试剂1.仪器：分析天平、722分光光度计2. 亚铁氰化钾溶液：称取106.0 g亚铁氰化钾（[K4Fe6(CN)·3H2O]），用水溶解后，稀释至1000 mL。

3．乙酸锌溶液：称取22.0 g乙酸锌（[Zn(CH3C00)2·2H20]），加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100 mL。

4．饱和硼砂溶液：称取5.0 g硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100 mL热水中，冷却后备用。

5．对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

6．盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶于100 mL水中，避光保存。

7．亚硝酸钠标准溶液（0.2 g/L）：精密称取0.1000 g于硅胶干燥器中干燥24 h的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，并稀释至刻度。

8．亚硝酸钠标准使用液（20 µg/mL）：临用前，吸取10 m L 0.2 g/L亚硝酸钠标准溶液，置于100 m L容量瓶中，加水稀释至刻度。

.四、实验步骤（1）样品前处理1. 取样：准确称取5.0 g经绞碎、混匀的样品，置于50mL烧杯中。

2. 沉淀蛋白质：加12.5 mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300 mL将样品洗入500 mL容量瓶中，置沸水浴中加热15 min，取出后冷却至室温；一面转动一面加入5 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

3．过滤：加水定容，放置0.5 h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30 mL，滤液备用。

任务：1、亚硝酸盐含量是酱腌制品及肉制品监测的重要卫生指标，请查阅GB2760亚硝酸盐在不同产品中的最大限量值。

2、请查阅并下载亚硝酸盐分析的国家标准，了解其分析方法，并根据实验室条件选择和确定实验方案。

3、对照国家标准，列出所需仪器和试剂。

亚铁氰化钾溶液称取106.0 g 亚铁氰化钾,定容至1 000 ml。

乙酸锌溶液称取220.0 g 乙酸锌, 加30 ml冰乙酸溶于水, 定容至1 000 ml。

饱和硼砂溶液称取5.0 g 硼酸钠, 溶于亚硝酸盐标准溶液亚硝酸盐标准溶液( 10 100ml mg/L)( GBW(E)100036) 。

硝酸盐标准溶液将硝酸盐标准溶液( 100mg/L)( GBW(E)080265) 用水稀释至10 μg/ 的硝酸盐标准使用液。

淋洗液配制准确称取碳酸钠0.7 g, 碳酸氢钠0.2 g, 溶于适量水中, 定容至2 000 ml。

注以上试剂均采用分析纯试剂。

热水中, 冷却备用。

4、依照国家标准，设计分析操作流程图。

5、在提取亚硝酸的试样匀浆中，为何添加饱和硼砂溶液，过滤时为何要弃去粗滤液？饱和硼砂在这里的作用是助提剂，对蛋白质有沉淀作用，硼砂起到的作用是吸收亚硝酸盐分解的NO2的作用，使用亚硝酸盐的总量不会因加热而分解减少。

硼砂溶入水中，即被水解为等量的硼酸与硼酸二氢钠，起缓冲溶液作用。

溶液pH约为9.18，即碱性。

调节PH 硼砂可与酸反应生成硼酸加硼砂可使PH升高过滤时滤纸会吸附一部分硝酸盐，要等滤纸中硝酸盐饱和后的滤液才能进行试验6、为何要显色反应需3—5min？7、如果样品溶液的吸光度不在工作曲线线性范围，应如何处理？8、为保证测定结果准确性，操作中应注意哪些环节？分析结果的几个因素有充分的了解实验表明，在测定食品中亚硝酸盐含量时，温度显色时间和样品pH均对分析结果有一定的影响在具体实验操作中，在室温不低于 19℃的条件下，无对温度进行调控，但需要对显色时间和样品 pH 严格控制。

实验4 食品中亚硝酸盐测定（盐酸萘乙二胺法）一、实验原理制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。

同时亚硝酸盐也是一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。

由于蛋白质代谢产物中仲胺基与亚硝酸反应能够生成具有很强毒性和致癌性的亚硝胺，因此，亚硝酸盐的使用量及在制品中的残留量均应按标准执行。

亚硝酸盐的测定方法主要是重氮偶合比色法，此外可与荧光胺偶合，测定其荧光吸收强度，或衍生后用气相色谱法测定。

自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸2—萘乙二胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。

其颜色的深度与样品种亚硝酸含量成正比，故可比色测定。

二、试剂和器材①饱和硼砂溶液：5g硼酸钠溶于100mL热的重蒸水中，冷却备用。

②亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并稀释至1000mL。

③乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌，加30mL冰醋酸溶于水，并稀释至1000mL。

④果蔬抽提液：溶解50g氯化汞和50g氯化钡于1000mL重蒸水中，用浓盐酸调整到pH值为1。

⑤氢氧化铝乳液：溶解125g硫酸铝于1000mL重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀。

用蒸馏水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钡溶液检验不发生浑浊。

取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄糨糊状，捣拌均匀备用。

⑥0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%的盐酸溶液中，闭关保存。

⑦0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL重蒸水中。

⑧亚硝酸钠标准溶液（5微克每毫升）：精确称取0.1000g亚硝酸铵，以重蒸水定容到500mL。

再吸取此溶液25mL，以重蒸水定容到1000mL，此工作液每毫升含亚硝酸钠5微克。

分光光度计，组织捣碎机。

三、试验步骤1、样品处理果蔬类样品用组织捣碎机打浆。

称取适量浆液（视式样中硝酸盐含量而定，如青刀豆取10g，桃子、菠萝取30g），置于500mL容量瓶中。