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南京农业大学学报2021,44(1):111-118Journal of Nanjing Agricultural University http : / /n auxb .njau. edu . cn DOI ：10.7685/jnau.202003042王小松，马磊，刘志颖，等.贵州木霉NJAU4742几丁质酶基因chi8的克隆、表达和酶学特性研究［J ］.南京农业大学学报,2021,44(1)：111-118. WANG Xiaosong,MA Lei , LIU Zhiying , et al. Cloning , expression and enzymology oharaoteristios of an endo-chitinase gene chi8 from Trichoderma guizhouense NJAU4742］ J ］. Journal of Nanjing Agricultural University,2021 ,44( 1) ：111-118.贵州木霉NJAU4742几丁质酶基因chi8的克隆、表达和酶学特性研究王小松，马磊，刘志颖，李托，朱瀚，刘东阳”，沈其荣(南京农业大学江苏省固体有机废弃物资源化高技术研究重点实验室，江苏南京210095)摘要：［目的］本研究旨在从贵州木霉(Trichoderma guizhouense NJAU4742)菌株中克隆、表达几丁质酶基因chi8并深入研究 其酶学特性，分析Chi8水解胶体几丁质的产物，为其在农业生产中的实际应用提供理论依据。
［方法］基于序列比对获取 chi8与其他几丁质酶基因的同源关系，并设计引物扩增得到完整的chi8序列，利用pET-29a 质粒和大肠杆菌BL21进行异 源表达;经镍柱纯化后并研究Chi8酶学特性;利用MALDI-TOF/MS 检测Chi8水解胶体几丁质的最终产物;基于同源建模 法构建Chi8的三维模型并与几丁六糖进行对接获取其催化相关位点信息。
太子参多糖的提取纯化及其单糖组分的鉴定作者：王慧娟乔杨晏薇娜来源：《贵州大学学报（自然科学版）》2017年第03期文章編号1000-5269（2017）03-0025-05DOI：10.15958/ki.gdxbzrb.2017.03.06摘要：目的：通过提取纯化得到太子参精制多糖，并对其单糖组成进行鉴定分析。
方法：水提醇沉后的多糖采用Sevag法除去蛋白，再经Sephadex G￣100凝胶柱层析进一步纯化，透析冻干后制得纯度较高的精制多糖。
高温强酸条件下将多糖进行水解，加入1￣苯基￣3￣甲基￣5￣吡唑啉酮（PMP）溶液衍生化后采用HPLC法分析单糖组成。
结果：精制太子参多糖的含量为82.30%，主要由葡萄糖、半乳糖、木糖、鼠李糖等单糖组成。
结论：本研究可为太子参药材质量标准的提升完善提供基础。
关键词：太子参多糖；单糖组分；柱前衍生化；高效液相色谱法中图分类号：R284.1文献标识码： A太子参是我国传统中药材，为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla （Miq.） Pax ex Pax et Hoffm. 的干燥块根。
具有益气健脾、生津润肺的功效，用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴不足、自汗口渴、肺燥干咳[1]。
随着人们对太子参研究的不断深入，其应用范围正日益扩大，原药材市场需求量逐年增加。
现代研究表明多糖是太子参的重要活性成份，太子参多糖具有降糖、降脂的作用，对小鼠的免疫功能也起到一定的作用，除此之外，有实验表明太子参多糖对东莨菪碱所致小鼠记忆障碍具有改善作用[2-7]。
本文采用水提醇沉法提取太子参中的多糖，经除蛋白、Sephadex G￣100凝胶柱纯化、透析后得到太子参精制多糖。
由于多糖成分无挥发性并缺少紫外特征吸收基团，难以用GC和HPLC进行分析检测[8]。
本文采用高温强酸水解的方法将太子参多糖水解为单糖[9]，利用PMP对其进行衍生化[10]，将衍生化产物用HPLC分析检测以确定单糖的组成，为太子参药材质控标准的提升完善提供研究基础。
·学术探讨·结合生物信息学的中药组分结构研究思路王程成1，3，封亮3，刘丹3，崔莉3，谭晓斌2，3*，贾晓斌2，3*（1．南京中医药大学，江苏南京210046；2．南京中医药大学第三临床医学院，江苏南京210028；3．江苏省中医药研究院国家中医药管理局中药释药系统重点研究室，江苏南京210028）［摘要］中医药属于复杂体系，具有整体性、系统性的特点，组分结构中药是在继承中医药特点的基础上，体现中药多组分整合作用特点的一个有序整体，是中药物质基础的新见解。
目前，传统的研究方法不足以解决中医药物质基础与药效关系，多成分、多靶点、多环节作用机制等方面问题。
生物信息学诞生于后基因组时代，涉及了系统生物学，不同层面的组学以及相应的数学、计算机科学，越来越成为人们对复杂体系，生命规律本质认识的强大工具。
生物信息学的研究思路、技术方法和丰富的数据挖掘知识结合组分结构中药理论，为发展创新组分结构中药，系统解析中医药本质，推动中医药现代化带来新契机。
［关键词］组分结构中药；生物信息学；复杂体系［收稿日期］2015-06-18［基金项目］国家自然科学基金项目（81573620）；江苏省333人才项目（BＲA2015457）；2014年江苏政府留学奖学金项目［通信作者］*谭晓斌，硕士生导师，主要从事中药药效物质基础及作用机制研究，Tel ：（025）52362115，E-mail ：njtxb @ ；*贾晓斌，博士生导师，主要从事中药药效物质基础及作用机制研究，Tel /Fax ：（025）85637809，E-mail ：jiaxiaobinpharmacy@ ［作者简介］王程成，硕士研究生，Tel ：（025）52362115Ｒesearch thoughts on structural components of Chinese medicinecombined with bioinformaticsWANG Cheng-cheng 1，3，FENG Liang 3，LIU Dan 3，CUI Li 3，TAN Xiao-bin 2，3*，JIA Xiao-bin 2，3*（1．Nanjing University of Chinese Medicine ，Nanjing 210046，China ；2．The third clinical school of medicine of Nanjing University of Chinese Medicine ，Nanjing 210028，China ；3．Key Laboratory of New Drug Delivery System of Chinese Materia Medica ，Jiangsu Provincial Academy ofChinese Medicine ，Nanjing 210028，China ）［Abstract ］Traditional Chinese medicine （TCM ）is a complex system ，featured with integrity and characteristics.Structural compo-nent TCM is a well-organized integrity of traditional Chinese medicine ，reflecting multi-component integration effect of TCM.It gives us a new view on the material basis of TCM.Currently ，conventional researching strategies are not enough to deal with the relationship be-tween material basis and efficacy ，multi-composition ，multi-targets ，and multi-section mechanism.Post-genome area gives a birth to bioinformatics ，which involves systematic biology ，different levels of omics ，corresponding mathematics and computer techniques.It in-creasingly becomes a powerful tool to understand complicated system and life essential laws.Ｒesearch ideas ，methods and knowledge of data mining technology of bioinformatics combined with the theory of structural components of Chinese medicine bring a new opportunity for developing structural components of Chinese medicine ，systematically exploring the essence of TCM and promoting the modernization of TCM.［Key words ］structural component Chinese medicine ；bioinformatics ；complex systemdoi ：10．4268/cjcmm20152235·4154·中药复方具有整体性和系统性的特征，通过君臣佐使的有机组合，协同发生功能上的改变，这种改变并非中药作用简单的线性相加，而是“整体大于部分之合”的结果。
黄酮3-羟化酶(F3H)的生物信息学分析李萍;王若曦;王欢【摘要】通过生物信息学分析方法,对已经在GenBank上注册的青稞( Hordeum vulgare)、高粱( Sorghum bicolor)、小麦( Triticum aestivum)、玉米( Zea mays)、洋葱( Allium cepa)、花烛( Anthurium andraeanum)和美丽百合( Lilium specio-sum)等7种单子叶植物的F3H核酸以及相应氨基酸序列进行研究,并对其组成成分、理化性质、信号肽、亚细胞定位、跨膜结构、蛋白质二级、三级结构、结构域以及分子进化等方面进行分析与预测. 研究结果表明,除玉米F3 H蛋白定位于过氧化物酶体外,其他植物F3 H均定位于细胞质基质内;所有植物F3 H均为不含信号肽的非分泌型蛋白,且没有跨膜区域的亲水性蛋白;α-螺旋和无规则卷曲是F3 H的主要二级结构元件,而延伸链则散布于整个蛋白中;F3H拥有一个2OG-Fell Oxy super family和一个PLNO3176 super family保守结构域;所构建的F3H系统发育进化关系与形态学上物种发育关系基本吻合.%In this paper, F3H, sequences from Hordeum vulgare, Sorghum bicolor, Triticum aestivum, Zea mays, Allium cepa, An-thurium andraeanum and Lilium speciosum, which were registered in GenBank, were analyzed and predicted by toolsof bioinformatics in the following aspects:composition, physical and chemical properties, signal peptide,protein subcellular localization, transmembrane helices in proteins, structure of protein, conserved domain and phylogeny. The results demonstrated Zea mays F3H lies in peroxisome and F3H from other plants locate in cell matrix;F3H is a non-secretory protein without signal peptide and hydrophilic protein without transmembrane area;α-helix and random coil are primary secondarystructural components of F3H and extending chain spread in the whole protein;F3H contains a conserved 2OG-Fell Oxy super family domain and a conserved PLNO3176 super family domain; F3H phylogeny is in consistent with morphological species phylogeny in general.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2015(032)006【总页数】5页(P25-29)【关键词】黄酮3-羟化酶;青稞等;生物信息学【作者】李萍;王若曦;王欢【作者单位】西南交通大学生命科学与工程学院,成都610031;西南交通大学生命科学与工程学院,成都610031;西南交通大学生命科学与工程学院,成都610031【正文语种】中文【中图分类】Q943.2类黄酮在植物的生长、发育、繁殖和对多种压力的反应上有多样的功能[1]。
Hereditas (Beijing) 2021年5月, 43(5): 459―472 收稿日期: 2020-10-10; 修回日期: 2021-03-04基金项目:国家自然科学基金项目(编号：U1903201, 31670298, 31771413, 21702100, 21907051)和教育部创新团队项目(编号：IRT_14R27)资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China (Nos. U1903201, 31670298, 31771413, 21702100, 21907051), and theProgram for Changjiang Scholars and Innovative Research Team in University from the Ministry of Education of China (No. IRT_14R27)]作者简介: 林红燕，博士，助理研究员，研究方向：药用植物天然产物化学和分子药理。
E-mail:*************.cn王煊，博士研究生，研究方向：植物分子代谢。
E-mail:*******************林红燕和王煊并列第一作者。
通讯作者:杨永华，教授，博士生导师，研究方向：分子代谢与生物技术安全。
E-mail:**************.cn DOI: 10.16288/j.yczz.20-341 网络出版时间: 2021/3/29 11:37:11URI: https:///kcms/detail/11.1913.R.20210326.0956.002.html综 述中药植物紫草天然产物的生物合成及其功能研究进展林红燕，王煊，何聪，周紫玲，杨旻恺，文钟灵，韩洪苇，陆桂华， 戚金亮，杨永华南京大学医药生物技术国家重点实验室，植物分子生物学研究所，生命科学学院，南京 210023摘要: 紫草为我国传统的重要药用植物资源，其根部代谢产生的紫红色萘醌类天然产物—紫草素及其衍生物，临床上常被用于治疗疮疡和皮肤炎症。
太子参粗多糖的提取及其除蛋白方法研究吴斌;谢勇;林秀洁;刘增斌;樊海平【摘要】Polysaccharide is one of the active ingredients extracted from radix pseudostellariae.In this study,the solid-liquidratio,temperature,extracting duration and times in crude polysaccharide extraction of radix pseudostellariae were investigated by hot water bath,using both the single-factor test and Ls (34) orthogonal test.The results showed that the optimum parameters for extraction were with the ratio of solid to liquid 1 ∶ 20,extracting temperature 100℃,reflu x extraction time 90 min and extraction for 3 times.The deproteinization effects were compared among three methods,the Sevagreagent,trichloroacetic acid,and trichloroacetic acid-butyl alcohol,and the results presented that trichloroacetic acid-butyl alcohol was the best for deproteinization,with 81.2％crued polysacchsrides and 9.93 ％protein,indicating that the deproteinization rate was 60.14 ％.%太子参多糖是太子参的有效成分之一.对太子参中粗多糖的热水浴加热提取工艺进行研究,对料液比、提取温度、提取时间、提取次数分别进行单因素试验和L9(3 4)正交试验,结果表明最佳工艺料液比1∶20,温度100℃,回流提取90 min,提取3次.用Sevage 法、三氯乙酸法、三氯乙酸-正丁醇法3种方法对太子参粗多糖去除蛋白处理效果进行比较,结果显示三氯乙酸-正丁醇法的蛋白质去除效果较好,其多糖纯度为81.2％,蛋白含量为9.93％,蛋白去除率为60.14％.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2013(028)006【总页数】4页(P589-592)【关键词】太子参;粗多糖;除蛋白【作者】吴斌;谢勇;林秀洁;刘增斌;樊海平【作者单位】福建省淡水水产研究所,福建福州 350002;福建中医药大学药学院,福建福州350122;福建中医药大学药学院,福建福州350122;福建中医药大学药学院,福建福州350122;福建省淡水水产研究所,福建福州 350002【正文语种】中文【中图分类】R28太子参Radix Pseudostellariae，又名孩儿参、童参、四叶参或米参，系石竹科多年生草本宿根植物，具有益气健脾，生津润肺，养精益气之功效，是珍贵的滋补强壮药材［1］。
不同产地太子参的iTRAQ定量蛋白质组学研究华愉教;王胜男;邹立思;刘训红;徐建亚;罗益远;刘娟秀【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2016(037)003【摘要】采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对不同产地的太子参进行定量蛋白质组学研究,探讨蛋白质组表达水平的差异.所提取的太子参蛋白质样品经FASP酶解、iTRAQ试剂标记、高pH-RPLC分离、RPLC-MS分离分析,获取的串联质谱数据通过Protein Pilot 5.0软件搜库进行蛋白质鉴定,通过蛋白质相对定量的比较寻找差异表达蛋白;再对差异蛋白质进行GO(gene ontology)、KEGG代谢通路和STRING网络通路分析.实验共鉴定出3775个蛋白质,其中3676个蛋白质具有定量信息,与传统产区相比,种植基地太子参上调差异蛋白质54个,下调差异蛋白质86个;通过生物信息学分析得到44个目标差异蛋白,主要分为9类:热休克蛋白、氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶、Rubisco大亚基结合蛋白、伴侣蛋白质、胞腔结合蛋白.结果显示,传统产区太子参中氧化还原酶和转移酶的分解代谢、碳水化合物代谢以及抗应激能力比种植基地太子参强,但热休克蛋白、异构酶、Rubisco大亚基结合蛋白、伴侣蛋白质和胞腔结合蛋白中的蛋白质折叠和抗应激能力比种植基地太子参弱,水解酶和裂解酶的分解代谢能力与种植基地太子参相差不大;ADG1和TKTA可能是调节不同产地太子参蔗糖变化的2个关键蛋白;MFP2是导致不同产地太子参脂肪酸差异的关键蛋白.本研究可为解析不同产地太子参次生代谢物差异的成因及其药材品质形成的蛋白质机制提供参考.【总页数】11页(P236-246)【作者】华愉教;王胜男;邹立思;刘训红;徐建亚;罗益远;刘娟秀【作者单位】南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023;南京中医药大学,江苏南京 210023【正文语种】中文【中图分类】O657.63【相关文献】1.贵州施秉太子参产地不同生态模式下土壤元素特征及主成分分析 [J], 王萍;张清海;刘静;黄雨杰2.不同产地太子参的质量比较研究 [J], 刘训红;谈献和;曾艳萍;董明惠;张月婵3.基于紫外-可见分光光度法的黔东南不同产地太子参中总皂苷含量测定 [J], 刘光海;吴庭柱;王文春4.6个不同产地的太子参对超氧自由基清除作用的研究 [J], 余国奠;刘峻5.年龄相关性听力减退小鼠耳蜗核iTRAQ定量蛋白质组学研究 [J], 何敬; 彭斌; 易斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
太子参药材的快速分子鉴定为建立一种简便快捷的太子参分子鉴定方法，对太子参药材及其混伪品的rDNA-ITS片段进行比对分析，找出特异性片段，设计太子参鉴别引物，并优选扩增条件，扩增产物经100×SYBR Green I染色后紫外光下观察。
结果显示，PCR 扩增反应液（包括DNA Taq聚合酶预混液5.5 μL，Tzs-2F，Tzs-2R各10 pmol，DNA模板20～80 ng，双重灭菌蒸馏水加至25 μL）经95 ℃预变性1 min，95 ℃变性5 s，56 ℃退火延伸15 s，30个循环，72 ℃后延伸30 s后，在扩增产物中加入1 μL 100×SYBR Green I混匀后于紫外光下呈绿色荧光的为太子参，混伪品无绿色荧光出现。
40 min内即可完成DNA提取、扩增等整个鉴定过程。
该方法能特异性扩增太子参DNA，紫外光下肉眼观察即可鉴定药材的真伪，且操作简捷、结果准确、利于推广，可为快速鉴定中药材的真伪提供参考。
标签：太子参；分子鉴定；特异性PCR；SYBR Green I太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostella riaheterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺的功效，用于脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱、气阴不足、肺燥干咳等症的治疗[1]。
作为药食两用品种，太子参近年来得到了广泛的开发与利用。
为牟取私利，市场上出现以淡竹叶Lophatherum gracile Brongn.、繁缕Stellaria media （L.）Cirillo、宝铎草Disporum sessile D. Don、直立百部Stemona sessilifolia （Miq.）Miq.、阔叶山麦冬Liriope platyphylla F. T. Wang & Tang、矮小山麦冬L. minor （Maxim.）Makino等植物的根或块根冒充太子参销售[2-5]。
太子参多糖对环磷酰胺所致肠道黏膜损伤小鼠SIgA、IL-2、IL-6含量的影响严胜泽;马玉芳;廖吕燕;黄一帆【摘要】试验将36只18～22 g雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、太子参多糖对照组(400 mg/kg体重)、环磷酰胺(CY)模型组、太子参多糖低、中、高剂量组(100、200、400mg/kg体重),上述各组分别灌喂蒸馏水和多糖,连续灌胃19d,第20天,除空白对照组和太子参多糖对照组小鼠腹腔注射生理盐水外,其余4组均腹腔注射CY(100 mg/kg体重),24 h处死小鼠,取十二指肠和回肠,放免法测定分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)的含量,研究太子参多糖对CY所致肠道黏膜损伤小鼠中SIgA、IL-2、IL-6分泌的影响.结果显示,与CY模型组相比,太子参多糖高、中剂量组十二指肠SIgA含量显著升高(P＜0.05),太子参多糖高剂量组回肠SIgA含量极显著升高(P＜0.01);太子参多糖高剂量组中十二指肠和回肠IL-2含量显著升高(P＜0.05),十二指肠IL-6含量极显著升高(P＜0.01),回肠IL-6含量显著升高(P＜0.05).上述结果表明太子参多糖在一定程度上能颉颃CY所致的肠道黏膜免疫损伤.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)005【总页数】6页(P1187-1192)【关键词】太子参多糖;环磷酰胺(CY);免疫调节;分泌型免疫球蛋白A(SIgA);白细胞介素-2(IL-2);白细胞介素-6(IL-6)【作者】严胜泽;马玉芳;廖吕燕;黄一帆【作者单位】福建农林大学食品科学学院,福州350002;福建农林大学,中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室,福州350002;福建农林大学,中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室,福州350002;福建农林大学,中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室,福州350002;福建农林大学,中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室,福州350002【正文语种】中文【中图分类】S853.7太子参为石竹科植物孩儿参 Pseudostellaria heterophylla (Miq.) Paxex Paxet Hoffm.的干燥块根。
ABA分解代谢及其代谢关键酶-8'-羟化酶李茜茜;汪晓峰【期刊名称】《广西植物》【年(卷),期】2009(029)003【摘要】脱落酸(ABA)在植物的生长发育和环境胁迫响应等过程中具有重要作用.ABA合成与分解代谢的动态平衡共同调控植物内源ABA水平.ABA 8′位甲基羟基化途径是高等植物内源ABA代谢的主要途径;8′-羟化酶是该代谢途径的关键酶,属于P450酶系.生物化学和基因组学研究表明,拟南芥CYP707A家族基因编码8′-羟化酶,该基因家族广泛存在于高等植物中,调控植物内源ABA代谢,介导ABA相关的生理生化过程.本文综述了ABA分解代谢的基本途径,详细概述了ABA 8′位甲基羟基化途径及该代谢途径的关键酶8′-羟化酶.同时介绍了8′-羟化酶编码基因-CYP707A家族基因的生物学特征和功能.【总页数】7页(P353-359)【作者】李茜茜;汪晓峰【作者单位】北京林业大学,生物科学与技术学院,北京,100083;北京林业大学,生物科学与技术学院,北京,100083【正文语种】中文【中图分类】Q943【相关文献】1.吗啡对大鼠肝脏蛋白质及核酸分解代谢关键酶基因表达的影响 [J], 付海英;洪敏;高琳;周航;张莲芝2.外源ABA对冬小麦越冬期呼吸代谢关键酶与糖代谢的影响 [J], 刘丽杰;苍晶;李怀伟;于晶;王兴;王健飞;黄儒;徐琛3.吗啡依赖大鼠视皮层GABA及分解代谢酶的变化 [J], 李燕斐;陈勤;徐业华;汪浩;周逸峰4.在严重烫伤大鼠中IL-1对葡萄糖分解代谢关键酶的调节作用 [J], 廖兴荣;董燕麟5.干旱胁迫下外源ABA对鼓粒期大豆产量及氮代谢关键酶活性的影响 [J], 屈春媛;张玉先;金喜军;任春元;张明聪;王孟雪;王彦宏;李菁华;郑浩宇;邹京南因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种适于ISSR分析的太子参DNA提取方法目的获得能用于中药太子参简单序列重复区间DNA标记技术等分析研究的高质量DNA。
方法以太子参为材料，采用改良CTAB法提取太子参DNA，经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测。
结果改良的CTAB法能获得高质量的太子参DNA，OD260/OD280＞1.8，蛋白质、多糖、RNA等去除较彻底，适于简单序列重复区间分析。
结论改良的CTAB法所提取太子参DNA适于简单序列重复区间分析。
标签：太子参；DNA；OD值An extraction method of genome DNA from Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm. scape for ISSR analysisWANG?Xiaoduo1??WANG?Xiaoli21.Huaxi Agricultural Bureau of Guiyang City, Guiyang 550025,China;2.Wudang Agricultural Technique Service Center of Guiyang City,Guiyang 550018,China [Abstract] Objective To extract high quality DNA from Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.for ISSR and other molecular biological analysis. Methods It was examined with ultraviolet spectrophotometer and agarose electrophoresis that the DNA was extractied by improved CTAB. Results The improved CTAB method was used to extract DNA. The purity of the extracted DNA was very high with OD260/OD280 values ＞1.8.The protein,polyhexose and RNAwere elminated completely. Conclusion The improved CTAB method was suitable for extracting DNA from Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.for ISSR analysis.[Key words] Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.;DNA;OD value简单序列重复区间（ISSR）分子标记技术具有多态性高，可重复性和稳定性好的特点[1]。
太子参分解代谢关键酶8′羟化酶基因的克隆及生物信息学分析ABA 8′羟化酶是脱落酸（abscisic acid，ABA）分解代谢中的关键酶基因之一。
采用同源检索的方法从太子参转录组数据库中获得7个ABA 8′羟化酶（abscisic acid 8′-hydroxylase）基因家族成员，对各家族成员进行转录分析组数据以及ABA 8′羟化酶关键基因ABA8ox1编码区（coding sequence，CDS）的克隆与生物信息学分析。
ABA8ox1基因CDS全长1 401 bp，编码480个氨基酸残基，等电点为8.55，相对分子质量为53 kDa，跨膜分析显示其为膜蛋白，1～21个氨基酸残基位于胞内，22～466个氨基酸残基位于胞外。
转录组数据分析及定量PCR技术共同证明ABA8ox1在块根的韧皮部及须根中有较高的表达。
多序列比对及聚类分析显示与其他植物CYP707A蛋白具有较高的同源性，且与模式植物拟南芥中ABA分解关键基因AtCYP707A1和AtCYP707A3聚为一类。
该研究为太子参块根膨大及对逆境胁迫响应的分子机制奠定基础。
标签：太子参；脱落酸；降解；ABA 8′羟化酶；表达分析[Abst ract] Abscisic acid 8′-hydroxylase was one of key enzymes genes in the metabolism of abscisic acid （ABA）. Seven menbers of abscisic acid 8′-hydroxylase were identified from Pseudostellaria heterophylla transcriptome sequencing results by using sequence homology. The expression profiles of these genes were analyzed by transcriptome data. The coding sequence of ABA8ox1 was cloned and analyzed by informational technology. The full-length cDNA of ABA8ox1 was 1 401 bp，with 480 encoded amino acids. The predicated isoelectric point （pI）and relative molecular mass （MW）were 8.55 and 53 kDa，respectively. Transmembrane structure analysis showed that there were 21 amino acids in-side and 445 amino acids out-side. High level of transcripts can detect in bark of root and fibrous root. Multi-alignment and phylogenetic analysis both show that ABA8ox1 had a high similarity with the CYP707As from other plants，especially with AtCYP707A1 and AtCYP707A3 in Arabidopsis thaliana. These results lay a foundation for molecular mechanism of tuberous root expanding and response to adversity stress.[Key words] Pseudostellariae Radix；abscisic acid；degradation；abscisic acid 8′-hydroxylase；expression analysisdoi：10.4268/cjcmm20161305自然界中许多植物具有膨大的根茎器官，在对不同环境的适应过程中具有重要作用[1]。
地黄[2]、麦冬[3]等地下膨大部分为块根，由不定根或侧根膨大形成；马铃薯[4]地下膨大部分为根茎，由匍匐茎顶端膨大形成。
植物的生长发育及形态建成受到植物内源激素系统的调控，通过控制不同激素的比例及水平来影响地上部茎叶及地下部根系的发育过程[5-6]。
研究表明，植物激素在植物块根（块茎）的发育过程中具有重要作用。
细胞分裂素（cytokinin，CTK）[7]、生长素（indole-3-acetic acid，IAA）[8]、乙烯（ethylene）[9]、脱落酸ABA[10]等激素先后被证明能促进植物块根（块茎）的膨大，而赤霉素（GA）[11]能抑制块根（块茎）的膨大。
脱落酸ABA含量随块根的发育进程呈逐渐上升趋势，可能同时具有促进和抑制作用，影响因素主要取决于ABA的浓度，作用部位与周围环境的相互作用[12]。
较高浓度的ABA有利于甘薯、地黄等植物块根的膨大[13-14]。
ABA能提高块根中淀粉合成酶的活性，增加淀粉合成，从而增加对蔗糖的需求[15]，调节中酸性磷酸化酶的活性促进蔗糖的吸收和卸载[16]，调节ATP酶的活性促进蔗糖的吸收和卸载，进而促进块根中可溶性碳水化合物的积累[17]。
脱落酸（ABA）的生物合成主要由C15直接途径及C40间接途径完成，其分解代谢以ABA 8′羟化酶为起始关键酶。
植物中脱落酸（ABA）的含量依赖于其合成途径及分解代谢路径共同作用，而且激素水平受到反馈调控机制的影响[18]。
王鹏飞等[2]证实了ABA 8′羟化酶在ABA大量合成时被激活，在ABA生物合成减弱时被抑制，对ABA的激素水平调控具有重要作用。
太子参Pseudostellariae Radix为传统中药，块根主要含有多糖、环肽、皂苷类化学成分，现代药理研究认为具有抗应激、抗疲劳以及增强免疫力的作用[19]，在临床上得到很好应用。
现今，太子参药材以人工栽培为主，在生产种植中块根能否正常膨大发育直接决定药材的品质和产量[20]。
袁婧等[21]探索了太子参块根发育的规律，发现块根在生长过程中先膨大后伸长，最后在生长105 d时获得最大生物量。
但是，在太子参块根细胞中激素（尤其是ABA）的积累及调控的分子机制尚未见报道。
为了解析脱落酸（ABA）在太子参块根膨大过程中的作用机制，本研究采用生物信息学的方法从太子参转录组数据库中鉴定ABA 8′羟化酶家族成员，分析其在太子参不同组织中的表达模式，以期寻找脱落酸分解代谢的关键基因。
1 材料1.1 样品供试材料采自贵州施秉种质圃，鉴定人为贵阳中医学院江维克教授。
采集太子参的茎、叶、块根、须根，将块根分为皮部和木质部，分别用液氮处理后置-80 ℃冰箱中保存，备用。
1.2 试剂基因克隆所需Taq DNA聚合酶、质粒载体pMD19-T、反转录酶M-MLV、RNAiso Plus试剂盒、DNase Ⅰ及DL 2 000 DNA Marker购自大连宝生物工程有限公司。
凝胶回收试剂盒购自Omega公司，大肠杆菌Escherichia coli 菌株DH5α购自上海生工生物工程有限公司。
其余试剂为进口或国产分析纯。
2 方法2.1 太子参总RNA的提取及cDNA第一链的合成取适量太子参新鲜组织置于预冷的研钵中，加液氮迅速研磨成粉末状。
参照RNAiso Plus抽提试剂盒说明书提取太子参总RNA后，加50 μL DEPC水溶解RNA，运用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性、微量核酸测定仪检测其浓度和纯度。
以RNA为模板、OligoT11（50 μmol·L-1）为引物，利用M-MLV反转录酶合成cDNA第一链。
2.2 脱落酸ABA-8′羟化酶基因的检索及全长的克隆从NCBI数据库中下载模式植物拟南芥、水稻等的ABA-8′羟化酶基因家族成员，通过构建本地Blast 的方式，从太子参转录组数据库中获得ABA-8′羟化酶基因，e为1e-30，获得的候选基因经NCBI及pfam[22]数据库比对分析后确定为ABA-8′羟化酶基因。
利用转录组数据库对ABA-8′羟化酶基因进行转录分析，筛选在太子参块根表达量较高的基因进行克隆及功能验证。
根据太子参转录组数据库中得到的ABA-8′羟化酶基因全长cDNA序列信息，设计全长cDNA引物，ABA8ox1-F：5′-ATGGTGATCATATTTGTAGCTTTG-3′，ABA8ox1-R：5′-CTATTGACTTTTGCTAAATAATTTA-3′，下划线标记为起始密码子与终止密码子。
以太子参块根cDNA为模板，进行PCR扩增，扩增条件为94 ℃5 min；94 ℃30 s，58 ℃30 s，72 ℃2 min，循环30次；72 ℃10 min。
目的片段与TaKaRa公司的pMD19-T载体相连接，转化大肠杆菌DH5α，挑选阳性克隆，送到南京金斯瑞公司测序。
2.3 脱落酸ABA-8′羟化酶基因的生物信息学分析测序结果经Genetyx软件去除载体序列，与预测基因进行序列比对。
使用ORF Finder（http：///gorf/orfig.cgi）查找开放阅读框。
采用Pfam数据库（http：///）进行结构域的预测分析，利用ExPASy数据库（http：///compute_pi/）计算蛋白质的相对分子质量与理论等电点，TargetP1.1 server（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/）分析亚细胞定位，HMM Server V2.0（http：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）进行跨膜结构域的分析。
2.4 聚类分析本研究从NCBI数据库中分别下载拟南芥Arabidopsis thaliana 的4个ABA8′羟化酶基因，AtCYP707A1（AEE84162），AtCYP707A2（AEC08210），AtCYP707A3（AED95234），AtCYP707A4（AEE76215）；水稻Oryza sativa的3个ABA8′羟化酶基因，Os08g36860（BAF23935），Os09g28390（BAF25280），Os02g47470（BAF34848）；玉米Zea mays的4个ABA8′羟化酶基因，GRMZM2G065928（ACF78881），GRMZM2G179147（ACN25205），GRMZM2G126505（ACN28537），GRMZM2G002142（ACN34951）；蓖麻Ricinus communis的4个ABA8′羟化酶基因，RCOM_1407690（EEF38770），RCOM_0813450（EEF43689），RCOM_0814150（EEF43729），RCOM_1590410（EEF52401）；杨树Populus trichocarpa的5个ABA8′羟化酶基因，POPTR_0004s14820（EEE73891），POPTR_0009s10450（EEE77492），POPTR_0004s24360（EEE87380），PtCYP707A4（EEE87808），PtCYP707A5（EEF08493）；菜豆Phaseolus vulgaris L.的3个ABA8′羟化酶基因，PvCYP707A1（ABC86558），PvCYP707A2（ABC86559），PvCYP707A3（ABC86560）以及高粱Sorghum bicolor的3个ABA8′羟化酶基因，Sb02g026600（EER99010），Sb04g030660（EES05 661），Sb07g022990（EES15128）。
