【高中生物】细胞培养一般方法

细胞培养方法
细胞培养是生物学实验中常用的一种技术手段，它可以提供大量的细胞用于实验研究。

正确的细胞培养方法对于细胞的生长、增殖和实验结果的准确性都至关重要。

下面将介绍一些常用的细胞培养方法及注意事项。

首先，准备培养基。

培养基是细胞生长所必需的营养物质和生长因子的混合物。

常用的培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据不同细胞类型的要求选择适当的培养基。

在制备培养基时，需要注意无菌操作，避免细菌和真菌的污染。

其次，处理细胞。

从细胞库中取出细胞后，需要进行细胞的处理和传代。

处理细胞时，要注意细胞的密度和活性，避免细胞凝集和死亡。

传代时，要根据细胞的生长状态和密度进行适当的稀释，以保证细胞的健康生长。

接着，进行细胞的接种和培养。

将处理好的细胞按照一定的比例接种到预先涂有培养基的培养皿中，然后将培养皿放入培养箱中进行培养。

在培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态，及时更换培养基，避免细胞过度生长或死亡。

最后，进行实验。

当细胞达到所需的数量和状态后，就可以进行相关的实验。

在实验过程中，需要注意培养皿的无菌操作，避免细菌和真菌的污染。

同时，要注意细胞的处理和操作方法，避免对细胞造成损伤。

总之，正确的细胞培养方法对于细胞的生长和实验结果至关重要。

只有严格遵守操作规程，做好无菌操作，才能得到可靠的实验结果。

希望本文介绍的细胞培养方法能够对大家有所帮助。

动物细胞培养[高中生物]　1.阐明动物细胞培养的条件和过程。

2.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。

一、动物细胞培养的条件和过程1．动物细胞工程常用技术(1)常用技术：动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等。

(2)基础：动物细胞培养。

2．动物细胞培养(1)概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。

(2)培养条件①营养a．合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。

b．天然成分：血清。

c．培养液：即液体培养基。

②无菌、无毒的环境a．对培养液和所有培养用具进行灭菌处理。

b．在无菌环境下进行操作。

c．培养液需定期更换，以清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。

③温度、pH和渗透压a．温度：以36.5 ℃±0.5 ℃为宜。

b．pH：以pH为7.2～7.4为宜。

c．适宜的渗透压。

④气体环境a．O2作用：细胞代谢所必需的。

b．CO2主要作用：维持培养液的pH。

c．气体组合：95%空气＋5%CO2。

(3)培养过程②过程(4)相关概念①细胞贴壁：悬液中分散的细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上。

②接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。

③原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。

④传代培养：分瓶后的细胞培养。

判断正误(1)动物细胞培养体现了动物细胞的全能性( )(2)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞( )(3)悬浮培养的细胞直接用离心法收集，贴壁细胞需要用胰蛋白酶等处理后再用离心法收集( ) (4)动物细胞培养时，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH( )答案　(1)×　(2)×　(3)√　(4)√探讨点　动物细胞培养1．动物细胞培养的原理是细胞增殖。

2．幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞与分化程度高的细胞比较，哪些细胞更易于培养？为什么？提示　幼龄动物的细胞和分化程度低的细胞更易培养，原因是这些细胞分裂能力强。

第1课时动物细胞培养新课标核心素养1.概述动物细胞培养需要的基本条件。

2.简述动物细胞培养的基本操作过程。

3.说出干细胞的分类及作用。

1.生命观念：构建动物细胞培养的流程图，认同动物细胞培养是动物细胞工程的基础。

2.社会责任：理性客观地分析干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险。

知识点(一)动物细胞培养的条件1．概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。

2．条件(1)营养条件①常用培养基的类型：液体培养基。

②成分：糖类、氨基酸、无机盐、维生素、血清等。

(2)无菌无毒的环境①需要对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。

②培养液还需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。

(3)温度、pH和渗透压①哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5_℃为宜。

②多数动物细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。

③渗透压也是动物细胞培养过程中需要考虑的一个重要环境参数。

(4)气体环境：动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2①O2是细胞代谢所必需的。

②CO2的主要作用是维持培养液的pH。

(1)动物细胞培养是一个在适宜的条件下，细胞增殖和分化的过程(×)(2)将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基(√)(3)在进行细胞培养时，通常采用培养皿或打开培养瓶盖的方式以获取新陈代谢所必需的O2(×)(4)将动物细胞置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养(×)1．(生命观念)为什么探究动物细胞培养时，要在培养基中加入血清、血浆等天然成分？提示：血清和血浆中含有多种维持细胞正常代谢和生长的物质，如蛋白质、氨基酸、未知的促生长因子等，人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚。

2．(科学思维)动物细胞培养需要控制什么样的气体环境？各自起什么作用？提示：95%空气加5%CO2。

动物细胞培养必备知识·素养奠基一、动物细胞培养概念从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。

二、动物细胞培养的条件1。

营养条件:(1)合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成。

（2)天然成分：血清等.（3）一般使用液体培养基,即培养液。

2。

无菌、无毒的环境：(1）培养液和培养用具灭菌处理。

(2）无菌环境下操作.（3）培养液定期更换的目的：清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。

3。

温度、pH和渗透压:(1)适宜的温度：哺乳动物多以36。

5±0。

5℃为宜。

(2）适宜的pH:多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。

(3)适宜的渗透压。

动物细胞培养能否体现动物体细胞的全能性？说明你的理由。

提示:不能。

动物细胞培养只是细胞的增殖，没有体现细胞的全能性。

4.气体环境：95％空气和5%CO2。

（1)O2作用：细胞代谢所必需的。

(2）CO2的主要作用：维持培养液的pH。

三、动物细胞培养的过程填一填：基于动物细胞培养的过程，完成下面的问题:（1)过程①处理方法有:机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法.(2）过程②为原代培养,培养的动物细胞有两类:①悬浮在培养液中生长增殖;②贴附于某些基质表面生长增殖。

(3）进行过程③时,悬浮培养的细胞直接用离心法收集;贴壁细胞需要使用胰蛋白酶等处理，然后用离心法收集.（4)过程③为传代培养，进行过程③的原因主要有:细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏和接触抑制等。

四、干细胞培养及其应用1。

干细胞分布：早期胚胎、骨髓和脐带等。

2.种类：胚胎干细胞和成体干细胞。

3.判一判：基于干细胞的类型和应用,判断下列说法的正误。

(1)胚胎干细胞和成体干细胞都具有形成机体的所有组织和器官,甚至个体的潜能. (×)提示:成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。

实验室细胞培养的一般步骤细胞培养是一项重要的实验室技术，广泛应用于生命科学研究以及医药产业中。

下面将为您介绍一般的细胞培养步骤，希望能为您提供一些指导意义。

第一步：制备培养基细胞培养的第一步是制备适合细胞生长的培养基。

培养基通常包括营养物质、氨基酸、维生素、生长因子等，可以为细胞提供足够的养分和环境条件。

根据不同的细胞类型和实验目的，制备不同种类和浓度的培养基。

第二步：分离细胞在细胞培养之前，需要将细胞从组织、器官或已有培养物中分离出来。

通常采用酶消化、机械剪切或离心等方法来分离细胞。

分离后，细胞可以在培养基中生长和繁殖。

第三步：细胞接种将分离出的细胞接种到含有培养基的培养皿或培养瓶中。

接种密度要适当，不宜过稀或过密。

同时，需要将培养基中的氧气和二氧化碳平衡，通常使用CO2培养箱来提供适宜的气体环境。

第四步：细胞培养经过接种后，细胞开始在培养基中生长和分裂。

在培养过程中，需要控制细胞的温度、湿度和pH值，保持适宜的生长条件。

此外，定期更换新鲜的培养基可以提供足够的营养物质，维持细胞的正常生长。

第五步：细胞检测和观察细胞培养的过程中，需要定期对细胞进行检测和观察。

包括细胞数量的计数、形态的观察和生长曲线的绘制等。

通过这些检测和观察，可以了解细胞的健康状态、增殖速率以及其他相关参数。

第六步：细胞应用或冻存根据研究或实验的需要，可以选择将细胞用于进一步的实验、传代培养或冻存保存。

冻存细胞需要使用适当的冻存液，将细胞缓慢冷冻并存放在液氮罐中，以便长期保存。

细胞培养是一项需要耐心和细心的工作，每一步都需要严格控制条件和遵循操作规范。

只有如此，才能获得可靠的实验结果和高质量的细胞培养。

希望本文能为您提供参考，更好地开展细胞培养工作。

高中生物教案分享：动物细胞培养实验中的细胞数量计数方法为了深入理解动物细胞的结构和功能，许多生物学教师会在其课程中让学生参与动物细胞培养实验。

在此过程中，培养物中的细胞通常是需要计数的一个重要参数，以便进行后续的研究。

本文旨在分享在动物细胞培养实验中计数细胞数量的几种方法，并讨论这些方法的优缺点以及适用范围。

一、视觉计数法视觉计数法是最基础的细胞计数方法之一，它通过显微镜直接数出视野中的细胞数量。

这个方法简单易懂，不需要任何特殊设备，对于初学者来说是非常有吸引力的。

但是，这种方法的缺点也是显而易见的：视觉计数法的准确性非常依赖于实验者的经验和技术水平。

因为在视觉计数法中，实验者不仅需要能辨认出真正的细胞，还要能够判断细胞是否已经被计算过，以及必须像数色块一样覆盖所有的视野，这在实践中是非常困难的。

视觉计数法适合于初学者或对于数量要求不高的实验。

二、伽玛计数法伽玛计数器是一种流量细胞计数器，是一种通过流体力学原理统计流体中粒子数量的仪器。

在这个方法中，培养物通过一个流通的计数器，在计数器中加入一个丙酮和伽玛线的混合剂，伽玛线能够捕获到细胞中的核物质，通过对不同颗粒刺激伽玛线发射的特殊方式计数细胞。

伽玛计数器的优点是速度非常快，准确度非常高，适合于需要准确计数的实验。

然而，伽玛计数器也有其缺点：首先是需要耗费较高的成本；对设备的严格要求会对实验产生一定的限制。

三、明胶滤膜计数法明胶滤膜计数法是一种将培养物滤过一种特殊的纱布或滤膜，将滤膜放在载玻片上，通过染色或直接计数的方法计算细胞数量的方法。

这种方法的优点是比视觉计数法更加准确，也比伽玛计数法便宜，因此，很多实验室通常都会采用这种方法。

明胶滤膜计数法的缺点也是显而易见的：它需要大量时间和劳动力，而且不适用于所有类型的细胞。

由于某些不适合培养的细胞无法在滤膜上形成群集，就无法计算细胞的数量。

四、显微图像分析法显微图像分析法是最新的一种计数细胞数量的技术。

细胞一细胞培养（一）原代培养○1胰蛋白酶消化法1.将组织块用PBS清洗3遍，去除表面血污，移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3（糊状）后用PBS清洗三遍（洗至PBS澄清透明）2.吸去PBS液，将组织块移入15ml离心管中，加入组织块两倍体积预热至37℃的0.25%含EDTA的胰蛋白酶，在37℃水浴中作用20分钟，每隔五分钟摇晃一下3.加入两倍体积的含血清的培养基终止消化，将消化后的组织块用细胞筛过滤，取过滤液于离心管中，1000r/min离心5分钟4.离心后吸去上清液，加入5ml含10%胎牛血清和1%双抗的培养基，轻轻吹打混匀，细胞计数，调至约5×105个/ml，每个培养皿（6㎝培养皿）加入5ml含细胞的培养基，上下左右移动混匀5.放入37℃，5%CO2的培养箱中培养6.24h后，观察细胞贴壁情况，更换培养基，继续培养，2-3天更换一次培养基7.代细胞融合率达80%-90%时进行传代培养○2组织块法1. 将组织块用PBS清洗3遍，去除表面血污，移入新的培养皿中用弯头剪剪至1mm3（糊状）后用PBS清洗三遍（洗至PBS澄清透明）2.将组织块转移至培养皿中，每个组织块保持一定间距3.向培养皿中缓慢加入培养基至刚好没过组织块，小心放入37℃，5%CO2的培养箱中培养4.24h后，观察贴壁情况，并补加新培养基仪器：6㎝培养皿、弯头剪、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM （高糖）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液（双抗）（二）传代培养○1贴壁细胞1.先将含10%血清和1%双抗的培养基、0.25%EDTA-胰蛋白酶在37℃水浴锅中预热20min2.观察细胞融合率是否达到80%-90%3.将所需用品放入紫外照射30min的超净工作台中，物品放入前需用75%酒精擦拭或放入后立即用酒精擦拭4.吸去培养基，加入PBS冲洗两遍，洗去残留培养基，加入胰蛋白酶至刚好覆盖培养皿底 （6㎝培养皿约1ml），放入培养箱中消化0.5-2分钟5.加入两倍体积的含血清的培养基终止消化，轻轻吹打混匀，吸入离心管中，1000r/min离心5min6.离心后，小心吸去上清夜，加入5ml培养基轻轻吹打混匀，血细胞计数，调至5×105个/ml7.每个6㎝培养皿加入5ml含细胞的培养基，放入37℃，5%CO2培养箱中继续培养○2悬浮细胞1.将培养皿中的培养基吸至离心管中，1000r/min离心5分钟2.离心后吸去上清液，加入5ml培养基，轻轻吹打混匀，血细胞计数，调至5×105个/ml3.每个6㎝培养皿加入5ml含细胞的培养基，放入37℃，5%CO2培养箱中继续培养仪器：6㎝培养皿、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM （高糖）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液（双抗）（三）细胞冻存○1贴壁细胞冻存1.配置细胞冻存液2.吸去培养基，加入0.25%EDTA-胰蛋白酶刚好覆盖培养皿底，放入培养箱中消化0.5-2min3.消化后的细胞，转移至离心管中，1000r/min离心5min4．离心后，加入细胞冻存液与细胞混匀，细胞计数，调至5×106个/ml5.每个冻存管加入1.5ml，将冻存管放入程序性降温盒，-80℃过夜，转移至液氮中；若无程序性降温盒，则将冻存细胞依次放置4℃1h，-20℃2h，-80℃过夜，再转移至液氮中○2悬浮细胞冻存1.配置细胞冻存液2.将细胞转移至离心管中，1000r/min离心5min3．离心后，加入细胞冻存液与细胞混匀，细胞计数，调至5×106个/ml4.每个冻存管加入1.5ml，将冻存管放入程序性降温盒，-80℃过夜，转移至液氮中；若无程序性降温盒，则将冻存细胞依次放置4℃1h，-20℃2h，-80℃过夜，再转移至液氮中仪器：15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、倒置显微镜、程序性降温盒、液氮罐试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM（高糖）培养基、胎牛血清、二甲基亚砜（四）细胞复苏1.将冻存的细胞从液氮中小心取出，快速在37℃水浴锅中摇晃解冻，一般在1min内完成，若离水浴锅较远可将细胞放置在干冰上2.将冻存管内液体转移至离心管中，1000r/min离心5min3.去除上清液，加入培养基，轻轻吹打混匀，细胞计数，调至5×105个/ml4.每个6㎝培养皿加入5ml复苏后的细胞，放入37℃，5%CO2培养箱中培养仪器：6㎝培养皿、15ml离心管、50ml离心管、5ml移液枪、1ml移液枪、5ml枪头、1ml枪头、废液瓶、酒精棉球、离心机、水浴锅、倒置显微镜、细胞培养箱试剂：PBS缓冲液、0.25%EDTA-胰蛋白酶、DMEM （高糖）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素混合液（双抗）。