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玉米赤霉烯酮ELISA快速检测试剂盒操作说明书1、简介本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附ELISA原理快速定量检测谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮（ZearaLenone,ZEN）。
谷物/饲料的前处理包括：提取、过滤、稀释，处理时间大约为20-40分钟。
本试剂盒的检测限为：10 ppb；谷物/饲料中ZEN的回收率≥80%；批内、批间变异系数<15% 。
2、试剂盒组成A. 24/48/96孔ZEN酶标板: 3/6/12条×8孔B. 20×浓缩洗涤液：25mL (用蒸馏水稀释20倍使用) 1瓶C. ZEN抗体: 3/6/12mL 1瓶(红盖)D. 酶标二抗：3/6/12 mL 1瓶(绿盖)E. 显色液：3/6/12 mL 1瓶(蓝盖)F. 终止液:3/6 mL 1瓶(黄盖)G. ZEN标准品:1.5/2mL/瓶（0、30、60、200、500ppb）各1瓶H. 操作说明书1份注意：标准品含有低浓度ZEN、终止液含2 N H2SO4，需小心取用；勿在有效期外使用本试剂盒。
3、贮存条件与有效期2-8℃避光贮存，忌0℃以下冻存，有效期见试剂盒内盖。
4、样品处理程序●实验准备：配制60%甲醇水溶液（v/v，60:40）和20%甲醇水溶液（v/v，20:80）。
注意：请精确配制上述溶液，以免影响检测的准确性。
●称取5 g 具有代表性的粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。
●将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3分钟后，用whatman 1号滤纸过滤，收集滤液。
●取滤液2mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。
注意：某些样品待检液(如花生等)久置影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品提取后请即时检测。
若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8℃避光保存。
试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温（20-25℃）进行温度平衡。
农 技 推 广农业开发与装备 2018年第10期摘要：温暖潮湿季节，玉米及其他饲料极易发霉变质并产生霉菌毒素，猪的玉米赤霉烯酮中毒（ZEN毒素）主要是由于猪采食感染了禾谷镰刀菌的玉米、小麦等饲料或饲料原料引起的。
临床可引起猪生长发育缓慢、繁殖性能下降以及饲料报酬降低，给养殖场造成严重的经济损失。
霉菌毒素的污染不仅给动物带来危害，而且会通过食物链直接或间接传入人体，对人类健康造成了潜在的威胁。
通过对其致病机理、流行病学调查情况、临床症状的研究，提出治疗方法和防治措施。
关键词：玉米赤霉烯酮；中毒机理；临床症状；防治措施0 引言霉菌毒素是某些霉菌产生的有毒次级代谢产物，普遍存在于粮食中，引起粮食腐败变质从而降低其营养价值，霉菌毒素可在谷物田间生长、收获、加工、仓储及运输过程产生。
据国际粮农组织（FAO）预测，全球约有25%的粮食作物会不同程度地受到霉菌产生的霉菌毒素的影响，从而降低或丧失其使用价值。
截止目前，已鉴定出来的霉菌毒素有300多种，受其危害程度的影响，目前的研究主要集中在以下6种：黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、呕吐毒素、T-2毒素及伏马毒素。
玉米赤霉烯酮毒素（Zearalenone，以下简称ZEN）由于有类似雌激素的作用，从而其污染状况和对动物的危害程度备受国内外科研工作者的关注。
1 玉米赤霉烯酮的定义及性质ZEN是由镰刀菌产生的一种类雌激素样霉菌毒素，通常由禾谷镰刀菌产生，三线镰刀菌、木贼镰刀菌、雪腐镰刀菌、粉红镰刀菌等真菌也能产生。
主要污染玉米、大麦、高粱、大米和小米等，大豆及其制品中也可以被检测到，但以玉米的检出率和含量最高。
纯ZEN是一种白色的结晶，不溶于水，能溶于碱性溶液、乙醚、乙醇、甲苯等，熔点为164～165℃。
耐热性较强，120℃下加热未见分解。
因此在对被污染的农产品进行进一步的加工过程中，很难随着加工工艺的改变而受到降解，从而会在动物和动物制品中一直存在下去。
玉米赤霉烯酮降解的研究进展熊凯华;程波财;胡威;汪孟娟;叶若松;魏华【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2010(025)001【摘要】真菌毒素广泛存在于世界各地的谷物及其副产物当中.玉米赤霉烯酮(Zearalenone)作为镰刀霉毒素的代表,是影响食物安全的重要因素之一.传统的毒素清除方法包物理和化学方法.物理方法能部分清除毒素,但易破坏食物的营养物质,化学方法随着化学试剂的添加会引入不确定的危害因素.生物降解作为目前的研究热点,可在温和条件下微生物将毒素转化为无毒产物.报道了物理、化学和生物方法清除玉米赤霉烯酮的研究进展,重点对生物降解进行了综述.【总页数】5页(P138-142)【作者】熊凯华;程波财;胡威;汪孟娟;叶若松;魏华【作者单位】食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047;食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047;中南大学资源加工与生物工程学院,长沙,410083;食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047;食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047;食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047;食品科学与技术国家重点实验室,南昌,330047【正文语种】中文【中图分类】Q-1【相关文献】1.玉米赤霉烯酮生物脱毒与降解的研究进展 [J], 刘盼;蔡俊2.玉米赤霉烯酮生物降解研究进展 [J], 史競;汪洋;鞠星;宾石玉;张晓琳3.玉米赤霉烯酮的毒性及生物降解研究进展 [J], 蔡雨函;胡延春;赵黑成;张莎莎;谭辉4.玉米赤霉烯酮对猪的毒性作用及其生物降解研究进展 [J], 陈继发;张佳鑫;曲湘勇;彭豫东5.复合益生菌和霉菌毒素降解酶对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的同步降解 [J], 王晓敏;常娟;王平;尹清强;杨明凡;朱群;胡骁飞;王全亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
玉米粉中玉米赤霉烯酮检测的固相萃取方法（Copure®224多功能净化柱）玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)是一种由镰刀菌产生的非甾体类真菌毒素，常存在于受镰刀菌污染的谷物中(小麦、玉米、燕麦和大麦等)；玉米赤霉烯酮是一种常见的饲料霉菌毒素，是世界范围内污染农作物最严重的霉菌毒素之一。
当畜禽采食了被玉米赤霉烯酮污染的饲料后，会产生肿瘤、雌激素和免疫抑制作用等不利影响，通过动物性食品危及人类的健康，因此精准快速地检测饲料及饲料原料和食品中玉米赤霉烯酮含量，对于保证食品安全具有重要的意义。
逗点生物采用最新自主研发的Copure®224多功能净化柱，建立玉米粉中玉米赤霉烯酮的检测方法。
该方法两个水平（8ng/g，16ng/g）的加标回收率均在90-100%之间，RSD 小于10%，操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有回收率高和脱色除杂效果好的优势，能够作为玉米粉中玉米赤霉烯酮检测的参考方法。
本方法适用于粮食和粮食制品，酒类，酱油、醋、酱及酱制品，大豆、油菜籽、食用植物油中玉米赤霉烯酮的测定。
参照《GB5009.209-2016食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮的测定》。
一、样品前处理1.1样品提取（1）称取5g样品，加入1g氯化钠，再加入20mL乙腈-水溶液（9+1）混合均匀。
（2）涡旋15min后，6000r/min离心5min，取上清液，待净化用。
1.2样品净化（1）向玻璃试管中加入10mL样品提取液。
（2）将净化柱橡胶头从试管顶端插入试管中，并向下压净化柱至试管底端。
（3）将净化柱上部净化后的样品提取液取出至样品瓶或EP管中。
（4）取5mL净化提取液，氮气吹干，用1mL初始流动相复溶，涡旋30s溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜，上机分析。
二、仪器条件仪器设备：UltiMate3000（Thermo Fisher Scientific），配FLD检测器色谱柱：Agilent ZORBAX C18(4.6mm×250mm，5μm)流动相：A：乙腈B：去离子水C：甲醇流动相梯度：表1流动相洗脱程序时间A（%）B（%）C（%）0.00524085.00524088.00955011.00955013.005240817.0052408流速：1.0mL/min柱温：室温进样体积：50.0 L检测波长：激发波长274nm，发射波长440nm检测器：荧光检测器（FLD）三、实验结果表2玉米粉中玉米赤霉烯酮加标回收实验结果检测项目加标水平（ng/g）Copure®224国外A品牌国内B品牌回收率R/%RSD/%回收率R/%RSD/%回收率R/%RSD/%玉米赤霉烯酮895.5 6.298.4 6.0145 5.1 1690.1 6.892.1 6.5125 5.7①②③④图1不同品牌多功能净化柱处理样品后的脱色效果图（①玉米粉提取液-未净化处理②Copure®224-净化处理③国外A品牌-净化处理④国内B品牌-净化处理）从图1中可知，经过Copure®224净化处理后，提取液中色素被明显吸附；Copure®224的脱色效果明显，其脱色能力与国外A品牌和国内B 品牌相近。
玉米赤霉烯酮的遗传毒性研究进展李荣芳;邬静;袁莉芸;伍勇;袁慧【期刊名称】《上海畜牧兽医通讯》【年(卷),期】2009(000)006【摘要】@@ 玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEA),又称F-2毒素,具有雌激素样作用,是一种常见的环境内分泌干扰物(environmental endocrine disruptors,EED),是由镰刀菌产生的一种霉菌毒素.它广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦等谷类作物和奶类品中,且繁殖快,代谢产物多,残留时间长,给畜牧业带来很大的危害.ZEA具有很强的细胞毒性,对机体的各种脏器具有明显的毒害作用.本文就ZEA的遗传毒性作用机制方面的研究状况进行综述,包括引起染色体变异,诱导DNA损伤与氧化损害,引起基因突变,此外,也有文献报道ZEA可以影响细胞间缝隙连接作用.【总页数】2页(P26-27)【作者】李荣芳;邬静;袁莉芸;伍勇;袁慧【作者单位】湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128【正文语种】中文【相关文献】1.玉米赤霉烯酮毒性及其脱毒方法研究进展 [J], 时从来;李金贵2.饲料中玉米赤霉烯酮的污染状况及其毒性研究进展 [J], 张天姝3.玉米赤霉烯酮对母猪的繁殖毒性研究进展 [J], 吴峰洋; 杨新宇; 栗金丽; 陈宝江4.玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇对动物毒性的研究进展 [J], 周建川;史东辉;计成5.中药缓解玉米赤霉烯酮毒性研究进展 [J], 康俊港;李杨;姜国均;刘明超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
附件13食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法(KJ201913)1.范围本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法。
本标准适用玉米、小麦及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定。
第一法比色法2.原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条中检测线（T线）上的抗原结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线（T线）与控制线（C线）颜色深浅的比较，对样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定。
3.试剂及材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1.试剂3.1.1.乙腈。
3.1.2.甲醇+水（7+3，体积比）。
3.1.3.稀释缓冲液（胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置）。
3.2.参考物质玉米赤霉烯酮的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。
表1 玉米赤霉烯酮参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注：或等同可溯源物质。
3.3.标准溶液的配制3.3.1.标准储备液：称取适量标准品，用乙腈（3.1.1）溶解，配制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。
﹣18 ℃避光保存，有效期6个月。
3.3.2.标准工作液：准确量取标准储备液（100 μg/mL）（3.3.1）100 μL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 μ稀/mL的玉米赤霉烯酮标准工作液，2 ℃～8 ℃避光保存，有效期1个月。
3.4.材料玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为玉米、小麦及其碾磨加工品。
4.仪器和设备4.1.移液器：100 μL、200 μL、1 mL和5 mL。
4.2.旋涡混合器。
4.3.离心机。
4.4.电子天平：感量为0.01 g。
5.环境条件环境温度：20 ℃～30 ℃。
空气相对湿度：最佳测定湿度45 %～65 %。
2019年第2期（总第259期） 试验研究1一种玉米赤霉烯酮免疫磁珠分离富集试剂盒的研制刘玉梅①① 王兆芹①① 贾芳芳①① 万宇平①① 杜美红② 张 瑜①① 冯月君①① 张 颖①① 何方洋①①*（①北京勤邦生物技术有限公司 北京 102206 ②北京市理化分析测试中心③北京市食品安全免疫快速检测工程技术研究中心）摘要 通过玉米赤霉烯酮与对苯二胺反应，制备出玉米赤霉烯酮免疫磁珠分离富集试剂盒，试剂盒对样品中玉米赤霉烯酮的捕获量为50ng/ml ，与玉米赤霉烯酮结构或者功能相似的竞争药物：黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、T-2毒素、赭曲霉毒素A 、展青霉素等5种药物进行特异性反应时，均无交叉反应。
关键词 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 免疫磁珠分离富集试剂盒中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2019)02-0001-03玉米赤霉烯酮(Zearalenone ，ZEN)为一种白色结晶，又称F-2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物。
ZEN 主要污染玉米、高粱、小麦、大麦等粮谷类作物及其制品。
受到ZEN 污染的乳制品、肉制品等动物源性食品，会对动物及人类造成危害，主要表现在影响和破坏生长发育及生殖系统方面，人畜误食含有该毒素的食物后，会引起雌性激素中毒症，造成生殖系统的严重损伤。
此外，ZEN 及其衍生物对肝脏系统，免疫系统均有很大的危害，并且有引发肿瘤的可能性[1-2]。
目前大多数国家对食品、谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮含量都有十分严格的规定。
例如澳大利亚规定谷物中玉米赤霉烯酮的含量不能超过0.05mg/kg ；意大利规定在谷物和谷类产品中玉米赤霉烯酮的含量不能超过0.1mg/kg ；而在法国，植物油和谷类当中玉米赤霉烯酮的含量必须低于0.2mg/kg 。
中国则规定配合饲料、玉米中的玉米赤霉烯酮含量不得超过500ng/g 。
玉米赤霉烯酮的分析测定一般采用薄层色谱法(TLC)、酶联吸附免疫法(ELISA)和高效液相色谱法(HPLC)[3-9]。
玉米赤霉烯酮正离子模式玉米赤霉烯酮（zearenone），属于一种植物雌激素分子类的细菌代谢产物，具有雌激素活性，因此，被称作是天然的植物雌激素。
其在植物中是一种天然存在的化合物，在人体内能够模拟雌激素的功能，和人体内的雌激素非常相似，具有雌性化作用。
因此在农业和食品工业中备受关注。
然而，在现实生活中，作为一种潜在的食品污染物质，人们日益关注着它的检测与控制。
玉米赤霉烯酮的检测在食品、水产、动物产品等众多的领域都有一定的限制，因此，建立快速、可靠的玉米赤霉烯酮检测方法就显得尤为重要。
现在，越来越多的研究者探索了基于电离技术的质谱方法，如液相串联质谱（LC-MS/MS）技术，作为检测玉米赤霉烯酮的最有效方法之一。
在这种情况下，玉米赤霉烯酮正离子模式成为了关于玉米赤霉烯酮检测的一种非常重要的质谱分析技术。
该技术是将玉米赤霉烯酮与正离子试剂反应得到玉米赤霉烯酮正离子，再使用质谱进行分析的一种技术。
玉米赤霉烯酮正离子模式的检测原理是，在正离子模式中，离子源将气态分子变成离子，而质谱就是采用质量过滤器来筛选出不同质量的离子，从而可以检测到目标物质。
对于检测玉米赤霉烯酮这种极微量存在的物质来说，玉米赤霉烯酮正离子模式能够有效提高检测的灵敏度，保证检测结果的准确性。
除此之外，玉米赤霉烯酮正离子模式还具有许多其他的优点。
比如，它可以避免因样品数量太少而导致检测结果不准确的问题，同时为了保证数据的准确性，还可以设置一些外部标准物质进行校正。
但是，玉米赤霉烯酮正离子模式也不是完美无缺的，它也存在一些限制。
首先，它只能检测一种化合物，而对于多种化合物的检测，需要结合其他的质谱技术来完成。
其次，检测的灵敏度依赖于其他一些因素，如离子化反应、离子源和质谱仪的参数等。
在实际应用中，玉米赤霉烯酮正离子模式已经被广泛应用于食品、水产、动物产品等多个领域的检测中。
它的精度、准确性和灵敏度都得到了广泛的认可。
实践证明，玉米赤霉烯酮正离子模式无疑是当前一种最可靠的玉米赤霉烯酮检测方法之一。
