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丙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒（PCR-荧光法）说明书【产品名称】通用名：丙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒（PCR-荧光法）英文名：PCR-Fluorescence Detection Kit for Hepatitis C Virus RNA汉语拼音：Bingxing Ganyan Bingdu Hesuan Dingliang Ceding Shijihe （PCR -Yingguang fa）【包装规格】 32人份/盒【预期用途】本试剂盒用于丙型肝炎的辅助诊断及疗程监控。
【原理和应用】本试剂盒利用一对丙型肝炎病毒（HCV）的特异性引物，一条特异性荧光探针，采用逆转录酶、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、四种单体核苷酸（dNTPs）等成分，并应用RT-PCR 技术实现对HCV RNA保守基因的扩增，同时通过外标的方法实现对血清或血浆中的丙型肝炎病毒进行定量检测。
本试剂盒可作为丙型肝炎的辅助诊断及疗程监控。
【试剂盒组成】*【储存条件及有效期】裂解液为黄色液体，保存于4℃；其他试剂目测为透明液体，保存于-20℃，不宜反复冻融，使用前应在室温下完全融化，并充分振荡混匀后稍事离心；所有试剂应避光保存；有效期十二个月。
【自备物品】1. 自备试剂（分析纯）氯仿、异丙醇（-20℃预冷）、75%乙醇（用不含Rnase和Dnase的水配制，-20℃预冷）2. 自备仪器高速台式冷冻离心机、移液枪、一次性耗材（无酶吸头、离心管、手套、帽子等）、专用工作服、工作鞋、办公用品等。
【适用仪器】PE-5700，PE-7000，PE-7300，PE-7700，Icycler定量荧光PCR仪【样本要求】1. 样本种类：血清或血浆血清以新鲜采集分离为好，采血6小时内必须分离、收集血清，并将血清转移至一次性使用无RNA酶的无菌微量离心管中。
血浆不能用肝素作抗凝剂。
2. 样本储存：待测样本在2-8℃保存不应超过24hr，-20℃保存不应超过三个月，-70℃以下可长期保存。
丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测标准操作规程（PCR-荧光探针法）1.目的：规范HCV-RNA（PCR）检测操作流程，保证检测结果的准确性。
2.应用范围：HCV-RNA荧光定量检测。
3.职责:3.1 文件编写：实验室技术员。
3.2 文件审核：实验室主管。
3.3 文件审批：实验室主任。
3.4 执行：PCR实验室所有工作人员。
4. 参考文献：4.1 中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书。
4.2 中山大学达安基因股份有限公司核酸扩增荧光检测系统DA7600型使用说明书。
5.内容：5.1 检测方法：PCR-荧光探针法5.2 实验原理：用一对丙型肝炎病毒特异性引物和一条丙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以逆转录液、逆转录酶、PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Taq酶）、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，先将RNA逆转录成cDNA，再通过PCR体外扩增法，即高温变性、低温退火、适温延伸进行DNA扩增，并对PCR全过程进行实时监测,从而检测丙型肝炎病毒RNA。
主要用于HCV病毒感染的辅助诊断及其疗效监测的标准。
5.3 性能参数：5.3.1精密度：检测下限为1.0x103copies/ml。
5.3.2 线性范围：1.0x103～1.0x108copies/ml。
5.4 标本采集：5.4.1 使用标本类型：血清。
5.4.2 标本采集：由合作单位按照以下要求进行采集，采集后及时分离出血清在2～8℃条件下保存。
用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入无菌的干燥玻璃管，室温（22～25℃）放置30～60 min，全血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500 rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1.5ml灭菌离心管。
5.4.3 标本保存和运送：分离后的血清在2～8℃条件下保存应不超过72小时，-20℃可保存1个月，要长期保存的需分装后储存于-70℃。
丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）说明书【产品名称】通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）【包装规格】条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。
【预期用途】本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。
丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。
HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。
【检验原理】本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。
检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。
然后，混合物再毛细效应下向上层析。
如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。
这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。
无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。
【主要组成成分】丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。
羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维；缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠；25ul吸管检测记录表各组份的包装数量如下：说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。
检验时另需准备样本收集容器和计时器。
丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）说明书96人份试剂盒（可单分拆开）国药准字S1******* 本试剂盒采用EIA法检测丙型肝炎抗体，适用于血清或血浆标本。
所用抗原为合成多肽及基因工程抗原。
具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点。
对肝炎的诊断、献血员的筛选等有重大意义。
【测定原理】采用EIA间接测定法，在预包被有丙肝抗原的反应孔内加入待测标本，若标本中有抗HCV，则可在微孔板表面形成抗原-抗体复合体，再与酶标抗人IgG结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，经显色系统显色后，根据OD 值判定有无HCV抗体的存在。
【使用方法】1. 每次试验设阴性、阳性对照各两孔、分别加入阴、阳性对照血清100µl，再设一孔空白对照，加样品稀释液100µl。
其余孔加入100µl样品稀释液，再加待测血清10µl。
充分混匀后，置37℃温育30分钟。
弃去孔内样品，扣干。
2. 用洗涤液注满每孔（至少300µl洗涤液/孔），勿溢出，静置5秒钟后扣干，重复5次。
3. 每孔加酶结合物100µl（空白对照孔除外），置37℃温育20分钟，同上法洗反应板5次。
4. 每孔加显色剂A液、B液各50µl，轻轻振荡后，37℃避光静置10分钟。
5. 每孔加入终止液50µl终止反应，以空白调零，在酶标仪中读取各孔O D450。
【结果判断】1. 阳性对照平均值大于1.2，实验结果有效。
2. 实验设计要求阳性、阴性对照OD值之差应大于1.2，否则本次实验无效。
3. 若阴性对照读数小于0.050时，按0.050计算。
4. 临界值（Cut off value）=阴性对照平均值+0.1。
5. 测试标本的计算值小于Cut off value则为HCV抗体阴性。
6. 测试标本的计算值等于或大于Cut off value则为HCV抗体阳性。
【注意事项】1. 从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡20分钟再进行测试。
丙型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒说明书Elecsys Anti-HCV100 人份【名称】通用名：丙型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒英文名：Elecsys Anti-HCV汉语拼音：Bing xing gan yan bing du kang ti dian hua xue fa guang jian ce shi ji he【使用目的】Elecsys Anti-HCV是定性检测人血清或血浆中丙型肝炎病毒抗体的体外诊断检测方法。
通过丙肝抗体检测方法获得的结果单独用于或合并其它检测方法（如：HCV－RNA）一起检测丙型肝炎病毒的感染，还可用于鉴别被丙型肝炎病毒感染的血液和血制品。
电化学发光免疫测定方法“ECLIA”用于罗氏Elecsys2010免疫测定分析仪。
【摘要】丙型肝炎病毒，在1989年首次鉴定出1。
输液后感染是引起丙型肝炎病毒感染最重要的途径。
同时丙型肝炎是世界上存在最普遍的一种获得性非甲型和非乙型肝炎。
丙型肝炎病毒感染导致慢性肝炎和肝硬化，同时与原发性肝细胞癌的发展相关2。
常见的肝外症状包括混合型冷球蛋白血症和其它的类风湿性疾病3。
丙型肝炎病毒是一种具有胞膜的，单链的RNA病毒，该病毒是Flaviviridae家族中独立的一类。
这个基因组由9.5kb(碱基对)组成，它编码一条含有3000个氨基酸的结构多肽和非结构区域4。
和其它的RNA病毒一样，丙型肝炎病毒基因组由于突变的结果表现出明显的异质性。
突变主要发生在病毒的复制过程中。
在世界上，清楚的发现至少存在11种基因型和多种亚型和病毒变异株5。
特异的基因型感染可以引起严重的疾病和治疗反应6.7。
丙型肝炎最初是通过污染的血液和血制品感染，人体中有很低浓度的抗体分泌8。
【检测原理】夹心法。
总的检测时间：18分钟。
•第一步孵育：加入40ul样本，加入含有生物素标记的HCV抗原试剂60ul，加入含有用钌复合物标记的HCV抗原试剂60ul，反应后形成夹心复合物。
毒核酸定量的检测。
2.适用范围：2.1适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。
2.2适合仪器：LightCycler480型核酸扩增荧光检测仪2.3方法原理：采用PCR方法结合荧光探针的扩增技术2.4样品要求：血清3.职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。
4.试剂来源：深圳凯杰公司HCV RNA荧光PCR检测试剂盒。
5.质控物：阴性、阳性对照及阳性参控品系列均来源于试剂盒6.标准操作：6.1 试剂准备（在试剂准备区操作）6.1.1将试剂盒及其它所需试剂置室温解冻，完全融解后混匀。
6.1.2根据当次实验标本量，取出相应试剂（1管=28ul反应液+2ul Enzyme Mix）总的需求量于一管中（其余随即放回原温度保存），如所需要的管数为n (n=标本数+1管阴性对照+1管阳性对照+1管临界阳性对照+4管阳性参控品)（定性检测无需做阳性参控品），取PCR反应管转移至样本制备区。
6.2.实验前准备步骤：6.2.1所需试剂置室温平衡，裂解液和洗液1如出絮状沉淀，37℃温浴至沉淀完全消失。
6.2.2在洗液1中加入16ml无水乙醇，做好标记,室温保存,使用前摇匀。
6.2.3在洗液2中加入23ml无水乙醇，做好标记,室温保存,使用前摇匀。
6.2.4将310ul的洗脱液加入含有310ug的Carrier RNA中,充分混匀,分装,-20℃储存.不要反复冻融3次.6.2.5裂解液工作液的制备混合后2-8℃稳定保存48小时,裂解液工作液必须每次实验前新鲜配制裂解液工作液制备表6.2.6将1.4ml蛋白酶溶解液加入蛋白酶冻干粉试剂瓶中,混匀至完全溶解,避免有泡沫,2-8℃保存.6.3样本制备及加样（在标本制备区操作）6.2.1取n个1.5ml的灭菌离心管（n=样本数＋1管阴性对照+1管强阳性对照＋1管临界阳性对照），做好标记。
6.2.2分别加入25ul蛋白酶溶液.6.2.3分别加入待测样本,阴性对照,强阳性对照,临界阳性对照各200ul6.2.4加200ul新鲜配制的裂解液工作液盖上盖子,振荡15秒,混匀(不可把蛋白酶溶液加入到裂解液中).6.2.5 56℃温浴15min,瞬时离心,去除盖上液滴.6.2.6加入250ul无水乙醇,盖上盖子,振荡15s,室温静置5min. ,瞬时离心,去除盖上液滴.(室温超过25℃,无水乙醇要预冷.)6.2.7将n个纯化柱放入收集管中,将6.2.7的液体移入到纯化柱中,盖上盖子,6000g 离心1min,倒掉废液.6.2.8打开纯化柱的盖子,加入500ul洗液1, 6000g离心1min,倒掉废液.6.2.9打开纯化柱的盖子,加入500ul洗液2, 6000g离心1min,倒掉废液.6.2.10打开纯化柱的盖子,加入500ul无水乙醇, 6000g离心1min,倒掉废液.将纯化柱放入新的收集管中.6.2.11 20000g高速离心3min,除去乙醇.6.2.12将纯化柱放入干净的1.5ml离心管中,开盖,56℃温浴3min,以除去残留液体.6.2.13将纯化柱放入另一个干净1.5ml离心管中,加入60ul洗脱液(加到膜中央).盖上盖子,室温静置5min.20000g离心1min收集滤出液.4℃保存备用.应在2h内用于PCR扩增,或-70℃保存一个月6.2.14取20ul的6.2.13的RNA溶液及定量标准品,加入PCR反应管中.6.3 PCR扩增（在扩增区操作）6.3.1打开稳压器电源，再打开计算机电源。
PCR室丙型肝炎病毒核酸定量检测【产品名称】通用名称：丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR一荧光探针法)英文名称：Diagnostic Kit for Quantification of Hepatitis CVirus RNA(PCR-Fluorescence Probing)【包装规格】32人份／盒【预期用途】本试剂盒采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于对临床血清或血浆标本中的丙型肝炎病毒核酸RNA的定量检测，本品可用于对丙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。
【检验原理】本品系由丙型肝炎病毒特异性引物、荧光探针、以及Taq酶等成分组成，采用PCR体外扩增的方法，通过荧光信号的变化，定量检测人血清或血浆标本中的H CV RNA。
【主要组成成份】1．病毒RNA提取试剂裂解液 4ml／瓶×1 含有硫氰酸胍的溶液去抑制剂 1瓶含有去抑制剂的冻干粉末助沉剂 1瓶含有助沉剂的冻干粉末洗涤液A 14ml／瓶×1 含有硫氰酸胍的溶液洗涤液B 4ml／瓶×1 含有Tns的溶液洗脱液 1．8ml／支×2 含O．04％NaN3的纯化水(无RNase)核酸提取柱32支，包×12．核酸扩增(PCR)一荧光检测试剂RT—PCR试剂PCR主反应液 250u1／支×1 含有一对引物和 dNTP的溶液酶混合物 180u1支×1 含有Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的溶液荧光探针对照品 20u l／支×1 含有荧光探针的溶液阴性对照 250ul×1支含有0.05％NaN 3的HCVRNA阴性的混和人血清或血浆强阳性对照 250ul×1支含有约2× 1061LJ／ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA弱阳性对照 250 ul×1支含有约2×104IU ／ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品① 250 ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品② 250 ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品③ 250 ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品④ 250 ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品①～④的参数和强、弱阳性对照的定值允许范围根据批号不同而不同。
丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术,用于临床血清或血浆标本中的丙型肝炎病毒核酸的定性检测,适用于丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。
2.范围适用于丙型肝炎病毒核酸定量检测.3。
职责3。
1 操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送.3.2 专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。
3。
3 实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。
4。
原理采用荧光PCR技术,以丙型肝炎病毒基因编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针,进行一步法RT—PCR扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线,根据阈循环值(CT）实现对未知样本的检测。
另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。
5. 样本要求5.1 适用标本类型：血清5。
2 标本采集用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2 ml，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22—25℃)放置30—60min血标本可自发完全凝集析出血清,或直接使用水平离心机,1500rpm离心5min；吸取上层血清，转移至1。
5ml灭菌离心管.5.3 标本保存和运送所采集的标本可立即用于测试或长期保存于-70℃，也可保存于—20℃待测,保存期为3个月，标本应避免反复冻融.标本运送采用干冰（或者冰袋）保持低温，运输时间不应超过4天。
拒绝重度溶血样本、肝素抗凝的血浆。
6. 仪器和试剂6。
1 设备AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。
6.2 试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号：YZB/国7271-2013最低检出量:最低检出量为500 IU/ml试剂各组分见表1：表1 试剂盒组分表7。
操作步骤7.1试剂准备（试剂储存和准备区）7。
1。
1 进入试剂准备区，打开通风设备，按照消毒清洁程序擦拭实验台面，并在检验流程记录表上做相应记录。
丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（PCR-荧光探针法）（北京纳捷诊断说明书2018年）丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书【产品名称】通用名称：丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（PCR–荧光探针法）【包装规格】 48人份/盒【预期用途】本试剂盒用于体外定量测定血清样本中的丙型肝炎病毒（HCV）核酸（RNA），适用于需要进行HCV感染检测的患者和接受抗病毒治疗的丙型肝炎患者。
本试剂盒可以检测HCV 1~6型临床常见型别，主要通过对丙型肝炎患者血液中HCV RNA含量及变化情况的监测，用于评估抗病毒治疗的应答和治疗效果。
该检测不得作为患者病情评价的唯一指标，必须结合临床表现和其他实验室检测指标对患者病情进行综合评价。
本试剂盒不得用于HCV的血源筛查。
【检验原理】本试剂盒在PCR扩增管内用含磁珠的裂解液提取血清样本中HCV RNA，并在同一管中进行扩增，HCV RNA在逆转录酶作用下反转录成HCV cDNA，然后在DNA聚合酶的作用下，应用TaqMan探针技术扩增HCV cDNA并进行实时荧光定量检测。
本试剂盒校准品和质控品为含有丙型肝炎病毒的临床血清样本（已灭活）。
本试剂盒通过检测内标来监测样本中是否有PCR抑制物，避免假阴性。
【主要组成成分】丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（PCR–荧光探针法）序号产品组成主要成分规格与装量RLB 核酸提取试剂HCV裂解液（含磁珠）氢氧化钠、氯化钾、Tris碱、构象磁珠7.5ml×1瓶RWB HCV漂洗液氯化钾、乙酸钠25.0ml×1瓶1 PCR扩增试剂HCV RT-PCR 反应液引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸、镁离子0.95ml×2管2 HCV酶混合液M-MLV逆转录酶、DNA聚合酶100μl×1管3校准品HCV校准品①（1.0～3.0）×106IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管4 HCV校准品②（1.0～3.0）×105IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管5 HCV校准品③（1.0～3.0）×104IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管6 HCV校准品④（1.0～3.0）×103IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管7质控品HCV强阳性质控品（0.5～5.0）×104IU/ml HCV阳性混合血清样本（已灭活）0.35 ml×1管8 HCV弱阳性质控品（100～700）IU/ml HCV阳性混合血清样本（已灭活）0.35 ml×1管9 HCV 阴性质控品HCV阴性混合血清样本（已灭活）0.35 ml×1管10 内标HCV内标内标核酸模板60μl×1管备注：a.校准品①～④的参数和强阳、弱阳性质控品的定值存在批间差异（均在以上范围内）。
丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书【产品名称】通用名称：丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（PCR–荧光探针法）【包装规格】 48人份/盒【预期用途】本试剂盒用于体外定量测定血清样本中的丙型肝炎病毒（HCV）核酸（RNA），适用于需要进行HCV感染检测的患者和接受抗病毒治疗的丙型肝炎患者。
本试剂盒可以检测HCV 1~6型临床常见型别，主要通过对丙型肝炎患者血液中HCV RNA含量及变化情况的监测，用于评估抗病毒治疗的应答和治疗效果。
该检测不得作为患者病情评价的唯一指标，必须结合临床表现和其他实验室检测指标对患者病情进行综合评价。
本试剂盒不得用于HCV的血源筛查。
【检验原理】本试剂盒在PCR扩增管内用含磁珠的裂解液提取血清样本中HCV RNA，并在同一管中进行扩增，HCV RNA在逆转录酶作用下反转录成HCV cDNA，然后在DNA聚合酶的作用下，应用TaqMan探针技术扩增HCV cDNA并进行实时荧光定量检测。
本试剂盒校准品和质控品为含有丙型肝炎病毒的临床血清样本（已灭活）。
本试剂盒通过检测内标来监测样本中是否有PCR抑制物，避免假阴性。
【主要组成成分】丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒（PCR–荧光探针法）序号产品组成主要成分规格与装量RLB 核酸提取试剂HCV裂解液（含磁珠）氢氧化钠、氯化钾、Tris碱、构象磁珠7.5ml×1瓶RWB HCV漂洗液氯化钾、乙酸钠25.0ml×1瓶1 PCR扩增试剂HCV RT-PCR 反应液引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸、镁离子0.95ml×2管2 HCV酶混合液M-MLV逆转录酶、DNA聚合酶100μl×1管3校准品HCV校准品①（1.0～3.0）×106IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管4 HCV校准品②（1.0～3.0）×105IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管5 HCV校准品③（1.0～3.0）×104IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管6 HCV校准品④（1.0～3.0）×103IU/ml 定值HCV阳性血清样本（已灭活）0.35 ml×1管7质控品HCV强阳性质控品（0.5～5.0）×104IU/ml HCV阳性混合血清样本（已灭活）0.35 ml×1管8 HCV弱阳性质控品（100～700）IU/ml HCV阳性混合血清样本（已灭活）0.35 ml×1管9 HCV 阴性质控品HCV阴性混合血清样本（已灭活）0.35 ml×1管10 内标HCV内标内标核酸模板60μl×1管备注：a.校准品①～④的参数和强阳、弱阳性质控品的定值存在批间差异（均在以上范围内）。
详见试剂盒内的说明书附页。
b.不同批号试剂盒中的组分请勿混用！c.自备试验物品：0.2ml PCR反应管、离心机、各种规格的移液器及吸头、磁力架，配套使用本公司推荐的磁力架。
【储存条件及有效期】1.核酸提取试剂盒，在2～8℃条件下保存。
2.PCR扩增试剂盒，在-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（不超过3次）。
3.有效期：本试剂盒有效期12个月，请在有效期内使用。
生产日期及有效期详见标签。
4.模拟运输实验表明，运输条件不会影响产品的稳定性和有效期，但运输时间不应超过7天。
【适用仪器】适用于SLAN-96P、MX3000P/3005P和ABI7500实时荧光PCR仪。
【样本要求】1. 适用样本类型：血清。
2. 样本采集：本试剂盒适用于血清样本。
采集血清样本时，用无菌注射器采受检者2～5ml静脉血，收集于无菌干燥管（最好带分离胶），先室温放置30分钟，然后1500g水平离心3～5分钟，使血清和细胞分离，可将上清（注意勿吸入红细胞）转入无DNA酶和RNA酶的无菌离心管中备用。
3. 存放：待测样本在2～8℃保存不应超过两周；-20℃以下长期保存，应避免反复冻融，检测前恢复至室温。
4. 运输：标本运输应采用冰壶加冰或泡沫箱加冰，在冷冻和密封状态下运输。
【检验方法】（一）试剂准备（试剂准备区）1.取出各种试剂组分，室温避光放置，待其温度平衡至室温后，备用。
2.提取液的配制：含磁珠的HCV裂解液(RLB)在使用前充分混匀，按（HCV裂解液150μl/人份+HCV内标1.0μl/人份）的比例配制，充分混匀立即按150μl/孔分装到PCR扩增管中，提取液确保在PCR扩增管底部（如有粘壁提取液和磁珠，可在操作台上轻轻振荡使其落到管底）。
3.PCR扩增试剂配制：根据待测样本、HCV阴性质控品、HCV弱阳性质控品、HCV强阳性质控品及HCV校准品①～④的数量，取相应量的HCV RT-PCR反应液及HCV酶混合液，按（HCV RT-PCR反应液38.0μl/人份+HCV酶混合液2.0μl /人份）比例配制，充分混匀成PCR-Mix，即刻使用。
（二）核酸提取纯化（标本处理区）1.在已经分装提取液的PCR管内加入100μl待测样本或HCV阴性质控品、HCV弱阳性质控品、HCV强阳性质控品、HCV校准品①～④；轻轻吹打混匀2～3次；室温静置5分钟。
2.将PCR管转移至磁力架（使用本公司推荐的磁力架）上，静置3分钟，用移液器或负压装置吸弃上清液，注意勿吸走磁珠。
3.保持PCR管在磁力架上，每孔加入HCV漂洗液(RWB) 250μl，静置1分钟，用移液器或负压装置吸弃上清液，注意勿留残液。
4.用RWB重复步骤3再洗涤一次，注意PCR管底勿留残液。
（三）扩增试剂加入（标本处理区）将配制好的PCR-Mix每孔40μl悬空加入到含有核酸磁珠的PCR管中，盖好扩增管盖，颠倒轻轻弹下磁珠，使PCR-Mix与磁珠充分混匀，水平瞬时离心。
将PCR反应管转移至检测区，置于荧光定量PCR仪上进行检测。
（四）PCR扩增（检测区）1. 将PCR反应管放入扩增仪，按对应顺序设置HCV阴性质控品、HCV弱阳性质控品、HCV强阳性质控品、HCV校准品①～④及待测样本，并设置样本名称及校准品浓度。
2. 荧光PCR 扩增程序，以SLAN-96P为例设置如下(MX3000P/3005P和ABI7500程序相同)：步骤温度时间循环数1逆转录45℃15分钟1预变性95℃5分钟2变性94℃15秒50退火，延伸，荧光采集58℃45秒(采集荧光)检测通道选择：目的基因（FAM）、内标（VIC或HEX）设置完毕，保存文件，运行反应程序。
（五）结果获取1. 扩增曲线特征的描述：扩增曲线一般呈S型。
2. 基线设定：根据实验情况，应该选择荧光本底值较稳定的一段区域作为基线的设定范围。
3. 阈值设定：超过阴性质控品扩增曲线的最高点即可。
4. 结果分析：设定好基线和阈值线后，即可进行结果分析。
选择FAM通道，可以得到待测样本、质控品的检测结果；选择HEX或者VIC通道，可以得到内标的检测结果。
（注：具体设置方法请参考不同仪器的使用说明书。
）（六）参考值通过参考值的研究试验确定本试剂盒的检测下限为15IU/ml，定量限为50IU/ml，靶Ct值≤40，内标Ct≤40。
（七）实验的有效性判断1.校准品须全部为阳性，且线性相关系数|r|≥0.980。
2.阴性质控品的测定结果应为未检出且内标Ct值≤40。
3.强阳性质控品Ct值＜32，定量结果范围为（0.5～5.0）×104IU/ml；弱阳性质控品Ct值＜37，定量结果范围为（100～700）IU/ml。
以上要求必须在同次实验中满足，否则检测结果视为无效，须重新检测。
【检验结果的解释】1 若样本检测结果为50～1.0×108IU/ml，且扩增曲线呈现S型，同时样本Ct值≤40，且内标Ct值≤40，判断结果有效，可直接报告阳性及相应浓度值。
2 若样本检测结果HCV RNA＞1.0×108IU/ml，且扩增曲线呈现S型，同时样本Ct值≤40，且内标Ct值≤40，即可直接报告为HCV RNA＞1.0×108IU/ml，若需要精确定量可根据结果，将样本稀释至1.0×108IU/ml以下再复测。
3若样本检测结果为15IU/ml≤HCV RNA＜50IU/ml，同时样本Ct值≤40时，且内标Ct值≤40，则表明病毒载量低，可直接报告结果，但应注明：检测浓度仅供参考。
4若样本检测结果为HCV RNA＜15IU/ml，样本Ct值≤40，且内标Ct值≤40，则报告结果为HCV RNA浓度低于试剂盒检测下限；若内标不正常（Ct＞40或无数值），则该样本的检测结果无效，应查找并排除原因，并对此样本进行重复实验（若重复实验的检测结果仍无效，请与本公司联系）。
【检测方法的局限性】1. 本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。
2. 不合理的样本采集、转运、储存及处理过程均有可能导致错误的检测结果。
3.本试剂盒适用于血清样本的检测，其他类型样本需进行验证后方可使用，检测结果仅供参考，不能作为临床报告。
本试剂盒适用于SLAN-96P、MX3000P/3005P和ABI7500系列PCR扩增仪器，其他机型需进行对比验证后方可使用。
4. 本试剂盒检测的靶序列为丙型肝炎病毒基因，该靶序列在各毒株间都有高度保守且很稳定。
但如果在靶序列处发生基因突变，则有可能造成假阴性结果，即发生漏检。
5.HCV RNA的定量取决于样本中存在的病毒颗粒数，而这会受到样本收集方法，病人因素（如年龄，是否存在症状）和/或感染阶段等因素的影响。
【产品性能指标】1.本试剂盒检测国家标准物质，阴、阳性参考品符合率为100%。
2.定量限及最低检出限：分别对1、2、3、4型等样本进行检测，采用HCV阴性血清稀释至最低检测限浓度，本试剂盒的定量限为50IU/ml,最低检测限15IU/ml。
3.精密度：采用企业内部精密度参考品进行精密度评价，其浓度对数值的变异系数（CV，%）≤5%。
4.线性范围：采用HCV RNA定量高于1.0×108IU/ml临床样本，采用HCV阴性血清进行比例稀释，制备50～1.0×108IU/ml的线性样本进行检测。
线性范围在50～1.0×108IU/ml线性相关系数|r|≥0.9805.对不同基因型的覆盖：本试剂盒可以检测丙型肝炎病毒1~6型。
6.分析特异性：①.交叉反应：对于可能存在的检测干扰的病原体如乙型肝炎病毒（HBV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、EB病毒、人巨细胞病毒（HCMV），本试剂盒检测结果均为阴性。
