应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体的结果比较

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丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床研究作者：于荔
来源：《中国实用医药》2009年第22期
[摘要]目的探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床研究。

方法血液筛查阴性标本450份。

质控标本459份，采用双抗原夹心法检测，了解双抗原夹心法敏感性。

结果对269份HCV抗体阳性标本进行检测，双抗原夹心法检测有3份标本未检出。

敏感性较高98.84％。

结论双抗原夹心法不需要稀释血清产品，不受类风湿因子等的干扰，具有较高的特异性；可以同时检出血清中各类抗体，特别是IgM类抗体，因此可以缩短从病毒感染到用ELISA法检出抗体之间的“窗口期”，缩短检测时间，均有重要意义。

三种不同分型方法检测丙型肝炎病毒结果比较
吴香敏
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2003(019)012
【摘要】目的:探讨用三种不同分型方法检测丙型肝炎病毒结果.方法:分别应用聚合酶链反应( PCR)产物酶切分型法(酶切法)、型特异引物分型 PCR法及血清丙型肝炎病毒( HCV)型特异性抗体酶联免疫测定法( EIA).对 120例抗- HCV阳性患者血清进行 HCV分型检测.结果:酶切法与 PCR法均成功地对 96例( 80%)进行分型,其中Ⅱ型 86例( 89.6%),Ⅲ型 8例( 8.3%),Ⅱ /Ⅲ型混合感染 2例( 2.1%),两种方法的结果完全一致. EIA法检测出型特异性抗体 78例( 65%),其中血清 1型(相当于基因Ⅰ、Ⅱ型) 68例( 87.2%),血清 2型(相当于基因Ⅲ、Ⅳ) 6例( 7.7%),血清 1、 2型双阳性 4例( 5.1%).结论: EIA法与酶切法和 PCR法的符合率达 97.0%.表明三种分型方法的结果高度一致.
【总页数】2页(P1538-1539)
【作者】吴香敏
【作者单位】南京医学院附属淮安第一医院,江苏,淮安,223300
【正文语种】中文
【中图分类】R446
【相关文献】
1.丙型肝炎病毒不同分型方法的分析及分型意义 [J], 周君霞;梁宁
2.三种不同方法检测乙型肝炎表面抗原的结果比较 [J], 赵凤华;赵子瑜;李燕妮
3.三种不同方法检测HCG的结果比较 [J], 姚瑶
4.三种不同免疫检测法对乙肝血清学标志物检测的结果比较 [J], 顾挺;苏娜
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双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的准确性对比分析【摘要】目的：探讨分析双抗原夹心法和间接法检测丙型肝炎病毒抗体的准确性。

方法：选取时间：2019年1月~2021年12月，选取对象：在无偿献血工作站抽取的血液标本1000份，对所有样本进行双抗原夹心法和间接法两种检测方式，以分析其阳性检出率以及准确性。

结果：实施不同的检测法中，与确认试剂检测出的150例对比，采用双抗原夹心法检测的敏感性为96.67%，特异性为99.41%，采用间接法检测敏感性为90.00%，特异性为98.23%；同时与间接法的阳性检出率90.00%相比较，双抗原夹心法的阳性检出率96.67%更高，且差异具体统计学意义（P＜0.05）。

结论：双抗原夹心法在丙型肝炎病毒抗体的检测中阳性检出率以及准确性更高，故在进行无偿献血以及日常丙型肝炎病毒抗体检测筛查中可运用双抗原夹心法，以避免血源的浪费，且对疾病进行及时且准确诊断，以提升患者的生活质量。

【关键词】双抗原夹心法；间接法；丙型肝炎病毒抗体；准确性分析Abstract: Objective: To investigate the accuracy of double antigen sandwich method and indirect method for detection of hepatitis C virus antibody. Methods: Selection time: January 2019 to December 2021, selection object: 1000 blood samples drawn at the unpaid blooddonation workstation, all samples were tested by double antigen sandwich method and indirect method to analyze the positive test results. rate and accuracy. Results: In the implementation ofdifferent detection methods, compared with the 150 cases detected bythe confirmation reagent, the sensitivity and specificity of thedouble-antigen sandwich method were 96.67% and 99.41%, and the sensitivity and specificity of the indirect method were 90.00% and90.00%. At the same time, compared with the positive detection rate ofthe indirect method of 90.00%, the positive detection rate of the double-antigen sandwich method was 96.67% higher, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: The double-antigen sandwich method has higher positive detection rate and accuracy in the detection of hepatitis C virus antibody. Therefore, the double-antigen sandwich method can be used in voluntary blood donation and daily hepatitis C virus antibody detection and screening to avoid the risk of infection. The waste of blood source, and the timely and accurate diagnosis of diseases to improve the quality of life of patients.【Key words】double antigen sandwich method; indirect method; hepatitis C virus antibody; accuracy analysis前言：丙型肝炎是临床常见的传染病，主要是由于丙型肝炎病毒侵犯人体细胞引起。

ELISA 测定的常用模式一测定的常用模式一------双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法测抗原 对于含多个抗原决定簇的大分子蛋白，使用双抗体夹心ELISA 模式测定相当简便，现有的商品试剂盒基本上都采用此种测定模式。

具体测定方法如下：1．首先以双抗体之一于碳酸盐缓冲液中4℃下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。

2．加入含待测物的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测抗原就会与固相上特异抗体反应而吸附于固相上。

3．加入酶标记的双抗体之二，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成双抗体与特异抗原的夹心产物。

4．加入酶底物，温育显色测定(图2—1)。

在该测定模式中，有两步温育和板孔洗涤步骤，如果将上述测定步骤2和3并为一步，即将待测样本和酶标抗体同时加入，从而仅有一步温育和洗板过程，即为通常所说的“一步法”。

最初的双抗夹心ELISA 试剂盒，均采用两步法。

后来，人们为了节省时间，简化操作步骤，试剂生产厂家逐步推出了“一步法”试剂盒。

目前在我们的临床实验室中，测定大分子抗原如HBsAg、。

FP 和hCG 等，基本上都采用一步法。

一步法相比于两步法，虽然操作简单‘但有其固有的缺陷，处理不好，对ELISA 测定结果有严重影响。

在通常的两步温育洗涤方法中，抗原抗体反应将遵循下述规律，即在第一步中加入的待测标本中抗原(Ag)浓度逐步增加时，将使固相抗体(Ab)与抗原的结合逐步达到饱和[(1)式]，这样当随后加入一定浓度的酶标抗体(Ab’)后，a 复合物的形成将直接与在第一步中形成的b 复合物相关[(2)式]，因此，待测抗原浓度的逐步增加导致了显色的逐步加深，当抗原浓度增加到一定程度时，反应显色达到平台，而呈S 形变化曲线(图2—2)。

而一步法双抗夹心ELISA 的反应曲线则为钟形曲线(图2—3)。

双抗原夹心法原理双抗原夹心法是一种常用的实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在。

它的原理是利用两种不同的抗体，一种用于捕获待检测的抗原，另一种用于检测抗原的存在。

这种方法能够提高检测的特异性和灵敏度，因此在临床诊断和实验室研究中得到广泛应用。

首先，我们来看一下双抗原夹心法的基本步骤。

首先，将一种特异性抗体固定在固相载体上，例如微孔板或磁珠表面。

然后，待检测样品被加入，如果样品中含有目标抗原，它将与固相上的抗体结合。

接着，另一种与抗原特异性的酶标记抗体被加入，它将与抗原结合形成夹心复合物。

最后，通过加入底物并测定酶的活性来检测夹心复合物的存在，从而确定样品中是否含有目标抗原。

双抗原夹心法的原理是基于两种抗体对同一抗原的特异性结合。

第一种抗体用于捕获抗原，通常被固定在固相载体上，如微孔板或磁珠表面。

这种抗体必须具有高的特异性和亲和力，以确保只捕获特定的抗原。

第二种抗体是与抗原特异性的酶标记抗体，它能够与抗原结合形成夹心复合物。

这种抗体通常被标记有酶，如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP），以便后续通过酶活性的检测来确定夹心复合物的存在。

双抗原夹心法的优势在于其高度的特异性和灵敏度。

由于需要两种抗体的结合才能形成夹心复合物，这种方法能够排除非特异性结合和干扰物质的影响，从而提高了检测的特异性。

另外，由于夹心复合物的形成需要两种抗体的结合，因此可以提高检测的灵敏度，即使样品中含量较低的抗原也能够被检测出来。

总之，双抗原夹心法是一种常用的实验技术，其原理是利用两种不同的抗体对目标抗原的特异性结合，从而提高了检测的特异性和灵敏度。

这种方法在临床诊断和实验室研究中得到广泛应用，为科研工作者和临床医生提供了一种快速、准确的检测手段。

163CH INA FO REIGN MEDIC AL TRE ATMENT 中外医疗影像与检验HBsAg的酶免疫检验方法根据反应模式分为“一步法”和“两步法”。

“一步法”是将待测样品和酶标记抗体同时加入到反应孔中进行反应,从反应开始到反应结束大约需要1个小时,而“两步法”则是先将样品加入到反应孔中,待反应结束后再加入酶标记抗体,从而使得待测样品的“捕获反应”和酶标记抗体的“酶联反应”分开进行,从反应开始到结束大约需要2个小时。

两步法较一步法相比大大延长了检测时间,降低了检测效率,不利于基层医院的广泛推广。

由于HBeAg多见于HBsAg阳性的患者血清,HBeAg 的检出是HBV在体内复制及血清具有强感染性的一个指标,血中HBsAg的滴度越高HBe Ag的检出率亦越高[1]。

HBe Ag阳性可以作为一步法测HBs Ag是否出现鈎镰效应的一个判断指标。

1 资料与方法1.1 一般资料已诊断为慢性乙肝患者的血清标本200份来自我院2010年门诊及住院病人以及肝病医院,372份血液标本来自我院2010年体检者,186份阴性对照标本来自我院门诊体检者。

1.2 试剂与仪器试剂由北京万泰生物药业有限公司提供;酶标仪KHBST——360,洗板机DNX——9620A系北京普朗新技术有限公司产品。

1.3 方法严格按照双抗体夹心“一步法”及“两步法”的操作规程进行操作。

2 结果(1)2种方法检测758份血清HBsAg结果,见表1(2)2种方法的灵敏度、特异度、假阳性率、假阴性率[2]结果(表2)3 讨论将372例体检者标本分别用一步法和两步法检测,其阳性结果和阴性结果个数及其对应标本的结果是完全吻合的;另外将其中24例阳性标本检测其HBeAg结果均为阴性。

而上述200例乙肝患者标本用一步法测出阴性的2例再进一步检测H B e A g ,发现其HBe Ag为阳性,这便是一步法因鈎镰效应引起的HBs Ag假阴性。

从上表还可以知道一步法和两步法检测的特异度和假阳性率均相同,即二者的误诊率均为零。

丙型肝炎病毒抗体的两种检测方法结果比较黄乙清【摘要】目的比较双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法与间接ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)灵敏度和特异性,为无偿献血的血液筛查提供参考依据.方法采用双抗原夹心ELISA法和间接ELISA法分别对1500份无偿献血者标本(经血液筛查抗-HCV阴性标本1416份,抗-HCV阳性标本84份)进行检测,记录标本结果与丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)的符合性,评价两种检测方法的差异.结果双抗原夹心ELISA法检测84份抗-HCV阳性标本的灵敏度为97.6%(82/84),间接ELISA法的阳性检出率为85.7%(72/84),双抗原夹心ELISA法灵敏度高于间接ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心ELISA法的特异性为100.0%(1416/1416),高于间接ELISA法的85.9%,差异有统计学意义(P<0.05).结论双抗原夹心法的灵敏度和特异性优于间接法,可降低间接ELISA法引起的假阳性,减少血液不必要浪费,同时也避免了献血者淘汰.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2016(027)023【总页数】2页(P3935-3936)【关键词】丙肝病毒抗体;双抗原夹心法;间接ELISA法;灵敏度;特异性【作者】黄乙清【作者单位】海南省血液中心检验科,海南海口 570311【正文语种】中文【中图分类】R512.6+3丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HC)感染引起的一种世界性传染病，主要通过输血和血液制品等途径传播。

为控制HCV经血液传播，要求对献血者进行抗-HCV的检测。

常用的第三代抗-HCV检测试剂，包被用抗原一般包括HCV-core、NS3、NS4和NS5抗原，特异性和灵敏度达99%[1]。

目前国内对献血者HCV感染的筛查,主要依赖间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其血清中的抗-HCV。

而间接ELISA法也存在一定的假阳性[2]，主要是由于抗-HCV ELISA试剂均采用二抗作酶结合物，由于血清中IgG含量高，故少量的非特异性吸附可造成假阳性结果，血清中类风湿因子等也可能干扰检测结果。

两种方法血液淀粉酶检测结果比较
陈欣
【期刊名称】《实用医技杂志》
【年(卷),期】2002(009)001
【摘要】目的:比较两种淀粉酶测定方法的阳性率,找出较好的测定方法.方法:对-硝基麦芽庚糖苷(4NP-G7)法与碘-淀粉比色法测定血液淀粉酶.结果:200例急性胰腺炎患者4NP G7法阳性率为83.5%,碘淀粉比色法为41.5%.结论:4NP-G7法测定血液淀粉酶在急性胰腺炎诊断中优于碘淀粉比色法.
【总页数】2页(P14-15)
【作者】陈欣
【作者单位】天津市第三中心医院,天津,300170
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11+2
【相关文献】
1.滤膜法与倾注法两种方法检测内镜消毒效果的结果比较 [J], 朱艳秋;张满;杨怀;刘玮;薛婷;牟霞
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4.两种方法对血清降钙素原水平的检测结果比较 [J], 吴亚斌
5.应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体的结果比较 [J], 王俊芳
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2024丙型肝炎病毒感染的实验室检测方法及策略丙型肝炎病毒（HCV）是一种嗜肝性RNA病毒，可引起进行性肝损害，进而可能导致肝硬化和肝细胞癌。

据世界卫生组织（WHO）统计，截至2019年全球约有5 800万人患有慢性丙型肝炎，其中仅21%的慢性丙型肝炎患者得到诊断。

为消除作为公共卫生威胁的病毒性肝炎，我国在2021年发布了《消除丙型肝炎公共卫生危害行动工作方案（2021—2030年）》，要求加大丙型肝炎检测力度，提高检测发现率，实现HCV抗体阳性者核酸检测全覆盖。

WHO在2016年发布的《2016—2021年全球卫生部门病毒性肝炎战略》中提出“到2030年消除作为主要公共卫生危害的病毒性肝炎”的目标，旨在2030年90%以上的HCV感染者得到诊断。

为早日实现该目标，近年来HCV感染检测新技术和新策略不断出现并逐步推广应用。

此外，随着直接抗病毒药物（DAA）的不断发展，大部分丙型肝炎患者可以得到治愈，简化的HCV感染检测和诊断流程可以缩短从就诊至治疗的周转时间，使丙型肝炎患者尽快得到治疗。

本文参考了国内外HCV 感染检测的最新指导文件和研究进展，对HCV感染的实验室检测方法及策略进行综述。

1HCV感染的检测标志物HCV可引起急性和慢性感染。

急性HCV感染是指在接触和感染HCV后6个月内出现HCV感染的检测标志物，按照HCV感染的自然过程，暴露于HCV后1～2周可在外周血中检测到HCV RNA，随后依次出现HCV核心抗原（HCV cAg）p22和HCV抗体。

在未接受治疗的情况下，一部分HCV感染者在感染后6个月内可自发清除HCV感染，其他感染者则转为慢性HCV感染。

HCV感染检测标志物的动态变化如图1所示。

注：a，自限性HCV感染；b，慢性HCV感染。

图1 外周血中HCV感染检测标志物的动态变化2HCV感染的实验室检测方法依据《丙型肝炎诊断（WS213—2018）》，HCV感染的实验室诊断主要依赖HCV抗体和HCV RNA检测。

应用双抗原夹心法和间接法两种方法检测丙型肝炎病毒抗体的准确性对比分析【摘要】目的：评估丙型肝炎病毒抗体检测患者实施双抗原夹心法和间接法检测的应用价值。

方法：对158例本医院实施治疗的丙型肝炎病毒抗体检测予以项目研究，选于2020年7月至2020年1月，全部患者均予以间接法、双抗原夹心法，分析两组方案的诊断准确性。

结果：（1）丙型肝炎病毒抗体检测患者确诊结果阳性59例，占比37.34%；阴性99例，占比62.66%。

间接法阳性67例，占比42.41%；阴性91例，占比57.59%。

双抗原夹心法检测阳性63例，占比39.87%；阴性95例，占比60.13%。

（2）丙型肝炎病毒抗体检测患者双抗原夹心法检测诊断结果灵敏度（94.92%）、特异度（92.93%）、准确性（93.67%）均明显高于间接法（77.97%、78.79%、78.48%），两者差异明显（P＜0.05）。

结论：丙型肝炎病毒抗体检测患者予以双抗原夹心法检测准确性相对较高。

【关键词】丙型肝炎病毒抗体检测；间接法；双抗原夹心法丙型肝炎病毒感染是一种全球性公共卫生问题，影响着数百万人的健康，准确地检测丙型肝炎病毒抗体对于早期诊断、治疗选择以及预防疫情扩散至关重要[1]。

在丙型肝炎病毒抗体检测中，双抗原夹心法和间接法是常用的两种方法，本研究针对丙型肝炎病毒抗体检测方式进行分析，讨论双抗原夹心法和间接法两种方法检测的应用价值。

1临床资料与方法1.1临床资料对2020年7月至2020年1月本医院实施治疗的丙型肝炎病毒抗体检测予以项目研究，选于138例，丙型肝炎病毒抗体检测患者年龄最高值是63岁，年龄最低值是24岁，年龄平均值经计算为（44.19±10.15）岁。

1.2方法全部患者均予以间接法、双抗原夹心法，间接法：按照说明书进行操作，步骤为：试验前处理-样本加入-一级抗体结合-洗涤-二级抗体结合-洗涤-荧光显微镜观察，判断样本中是否存在丙型肝炎病毒抗体[2]。

双抗原夹心法原理
双抗原夹心法是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗
原或抗体的存在。

其原理是利用两种特异性抗体将待检测的抗原
“夹在中间”，通过检测两种抗体的结合情况来确定待检测物质的
存在与否。

下面将详细介绍双抗原夹心法的原理及其应用。

首先，双抗原夹心法的原理是基于特异性抗体与抗原的结合反应。

在实验中，首先需要一种特异性抗体，它能够与待检测的抗原
特异性结合。

其次，还需要另一种与第一种抗体结合的抗体，这种
抗体可以与标记物质结合，如酶、放射性同位素或荧光素。

这样，
当待检测的抗原存在时，第一种抗体与其结合，再加入第二种抗体，形成“夹心”结构，最终通过检测标记物质的活性来确定抗原的存在。

双抗原夹心法的应用非常广泛。

首先，在临床诊断中，双抗原
夹心法可用于检测某些特定疾病的标志物，如肿瘤标志物、病毒抗
原等。

其次，在生物学研究中，双抗原夹心法也常用于检测蛋白质
相互作用、细胞表面受体的表达等。

此外，在食品安全领域，双抗
原夹心法也被广泛应用于检测食品中的有害物质，如农药残留、重
金属等。

总之，双抗原夹心法作为一种重要的免疫学实验技术，其原理
简单清晰，应用范围广泛。

通过合理选择特异性抗体和标记物质，
可以实现对待检测物质的高灵敏度、高特异性检测，为临床诊断、
生物学研究和食品安全监测提供了有力的工具和支持。

希望通过本
文的介绍，读者能够更加深入地了解双抗原夹心法的原理及其应用，为相关领域的研究和实践提供帮助。

丙型肝炎的不同检验方法检验对比摘要：目的：比较丙型肝炎的不同检验方法的检验效果。

方法：回顾性分析，选取本医院自2019年3月-2021年3月收治50例丙型肝炎者为研究对象，采集血清标本，先后采用磁微粒化学发光法、胶体金法、酶联免疫法检测，比较三种检验方法的检验阳性率。

结果：磁微粒化学发光法（96.00%）高于胶体金法（80.00%）、酶联免疫法（82.00%），均有显著差异（P<0.05）。

胶体金法的检验时间（0.50±0.13）h均短于酶联免疫法（4.11±0.62）h、磁微粒化学发光法（2.46±0.17）h，均有显著差异（P<0.05）。

结论：丙型肝炎者采用磁微粒化学发光法检测，更加便捷及直观，可作为首选方法，值得临床推广应用。

关键词：丙型肝炎；胶体金法；酶联免疫法；磁微粒化学发光法；应用丙型肝炎全称为丙型病毒性肝炎，是一种由丙型肝炎病毒感染所引起的病毒性肝炎。

根据流行性病学统计，全球丙型病毒性肝炎感染率约3%[1]，已呈全球性流行，可导致肝脏慢性炎症坏死，部分患者可发展为肝硬化，直接威胁患者生命健康，同时也会增加社会负担。

由于此病在潜伏期未明显异常，可见轻微的右上腹部不适，容易忽视，进而耽误了最佳治疗时机。

因此，提高丙型肝炎的早期诊断具有重要意义。

本文现将丙型肝炎的不同检验方法效果报告如下：1.资料与方法1.1一般资料本次所选50例丙型肝炎者来源于本医院自2019年3月-2021年3月收治的，男性26例，女性24例；年龄（24-67）岁，平均年龄（44.78±3.34）岁；病程（0.3-1）年，平均病程（6.16±0.35）个月。

1.2方法所有患者均抽取5ml外周静脉血，按照每分钟3000转的速度离心，取上层血清，待测。

采用胶体金法、酶联免疫法、磁微粒化学发光法检测，严格按照相关规定来操作，确保试剂的有效性。

检测人员为同一批人员，在同一实验室操作。

HCV抗原检测与HCV-RNA和HCV抗体检测的比较研究李妙羡;王香玲;吴晓康;卢洁;王小利;尹佳峰;孟昊【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2012(027)004【摘要】目的评价丙型肝炎病毒核心抗原(HCV抗原)、丙型肝炎病毒抗体(HCV 抗体)及丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)三种检测方法在丙型肝炎实验室诊断中的作用.方法 HCV抗原采用双抗体夹心法；HCV-RNA采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR),HCV抗体采用酶联免疫技术(间接法),对44例HCV抗体阳性标本进行HCV抗原和HCV-RNA检测.结果在HCV抗体阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为43.2％,HCV-RNA阳性检出率为82.5％；在HCV-RNA阳性标本中,HCV抗原阳性检出率为45.5％.结论三种丙肝标志物中,实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA是判断丙肝感染最可靠的方法而HCV抗原诊断丙肝,仍有54.5％的漏检率,其应用于临床还有距离.所以在没有条件应用实时荧光定量PCR技术检测HCV-RNA 的医院,在用HCV抗原对HCV抗体阳性标本进行确认,来判断HCV既往感染或现症感染时,应结合肝功能指标及临床表现以明确诊断.【总页数】3页(P55-57)【作者】李妙羡;王香玲;吴晓康;卢洁;王小利;尹佳峰;孟昊【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院检验科,西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院检验科,西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院检验科,西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院检验科,西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院检验科,西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院检验科,西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院检验科,西安710004【正文语种】中文【中图分类】R512.63;R446.62【相关文献】1.HCV抗原检测与HCV-RNA及HCV抗体检测的比较研究 [J], 肖征;周光2.对比HCV抗原检测与HCV-RNA和HCV抗体检测在丙肝中的检测结果 [J], 张从梅3.HCV-RNA和磁微粒法HCV抗体检测在丙肝中的应用研究 [J], 徐昕;刘丽花4.HCV-RNA和磁微粒法HCV抗体检测在丙肝中的应用研究 [J], 徐昕;刘丽花5.抗-HCV抗体检测与HCV-RNA检测在诊断丙型病毒性肝炎中的应用价值对比[J], 李春燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

ELISA_直接法与间接法的区别ELISA 可用于测定抗原 , 也可用于测定抗体 . 在这种测定方法中有三个必要的试剂1) 固相的抗菌素原或抗体，即”免疫吸附剂"(immunosorbent);(2) 酶标记的抗原或抗体，称为”结合物"(conjugate);(3) 酶反应的底物 . 根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件, 可设计出各种不类型的检测方法 .ELISA 可分类是根据抗原抗体的结合情况来分类的。

主要有以下几种类型 : (直接法也称一步法)1 双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法 , 操作步骤如下 :1) 将特异性抗体与固相载体联结 , 形成固相抗体 . 洗涤除去未结合的抗体及杂质 .2) 加受检标本 , 保温反应 .标本中的抗原与固相抗体结合 , 形成固相抗原抗体复合物 .洗涤除去其他未结合物质 .3) 加酶标抗体 , 保温反应 .固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合 . 彻底洗涤未结合的酶标抗体. 此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关.4) 加底物显色 . 固相上的酶催化底物成为有色产物 . 通过比色 , 测知标本中抗原的量 . 在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体 , 就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法 . 如抗体的来源为抗血清 , 包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物. 如应用单克隆抗体 , 一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗 , 分别用于包被固相载体和制备酶结合物 . 这种双位点夹心法具有很高的特异性 , 而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应 , 作一步检测 .在一步法测定中 , 当标本中受检抗原的含量很高时 , 过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合 , 而不再形成 "夹心复合物 ". 类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象 , 此时反应后显色的吸光值 (位于抗原过剩带上 ) 与标准曲线 ( 位于抗体过剩带上 ) 某一抗原浓度的吸光值相同( 参见 1.3.2, 图 1-4), 如按常法测读 , 所得结果将低于实际的含量 , 这种现象被称为钩状效应 (hook effect), 因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落 . 钩状效应严重时 , 反应甚至可不显色而出现假阴性结果 . 因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值 . 用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应.假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg 的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物. 但在HBsAg 的检测中应注意亚型问题 ,HBsAg 有adr,adw,ayr,ayw4 个亚型 , 虽然每种亚型均有相同的 a 决定簇的反应性 , 这也是用单抗作夹心法应注意的问题 .双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰.RF是一种自身抗体，多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现岀假阳性反应.采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了 Fc段,从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标。