顺铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

冬凌草甲素联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞凋亡及FOXL2、Ki67表达的影响王彦秋【摘要】目的观察冬凌草甲素(ORI)联合顺铂(DDP)对宫颈癌细胞SiHa细胞凋亡的影响,并探究具体作用机制.方法培养宫颈癌SiHa细胞,分别给予冬凌草甲素(4、8、16、32、64 μg/mL)、顺铂(1、2、4、8、16 μg/mL)单独作用12、24、36、48、60、72 h,采用偶氮唑蓝(MTT)法对细胞增殖情况进行检测,筛选合适作用浓度和作用时间.将宫颈癌SiHa细胞分为4组:对照组、冬凌草甲素组、顺铂组、冬凌草甲素联合顺铂组,药物作用48 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FOXL2、Ki67 mRNA水平;采用免疫印记(WB)法检测FOXL2、Ki67蛋白水平.结果选定冬凌草甲素32 μg/mL、顺铂4μg/mL进行用药;与对照组比较,冬凌草甲素、顺铂单独及联合用药均可明显降低SiHa细胞增殖指数(P＜0.05),且联合用药效果显著优于单独用药(P＜0.05);与对照组比较,冬凌草甲素、顺铂单独及联合用药均可显著促进细胞凋亡(P＜0.05),且联合用药效果显著优于单独用药(P＜0.05);与对照组比较,单独及联合用药组SiHa细胞FOXL2 mRNA和蛋白水平均明显升高,且联合用药组显著高于单独用药组(P＜0.05);与对照组比较,单独及联合用药组Ki67 mRNA和蛋白水平均显著下降,且联合用药组显著低于单独用药组(P＜0.05).结论冬凌草甲素、顺铂联合用药可有效促进SiHa细胞凋亡,推测冬凌草甲素可能通过上调FOXL2表达,下调Ki67表达,协同促进顺铂对宫颈癌细胞的促凋亡作用.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2018(021)005【总页数】6页(P502-507)【关键词】冬凌草甲素;顺铂;宫颈癌;细胞凋亡;FOXL2;Ki67【作者】王彦秋【作者单位】河南科技大学第一附属医院妇产科,河南洛阳471003【正文语种】中文0 引言宫颈癌(Cervical cancer)是发生于女性生殖器的一种恶性肿瘤，其中85%的宫颈癌患者分布在发展中国家，严重威胁女性生命安全[1] 。

顺铂诱导肝癌细胞凋亡的实验研究细胞凋亡作为生物细胞对内外信号刺激的一种反应，在正常细胞的发育过程中精确调控细胞的死亡过程。

肿瘤的发生与正常的细胞凋亡过程被抑制，破坏了细胞增殖与凋亡之间的平衡有一定关系。

顺铂因其可抑制癌细胞的DNA复制过程，抑制癌细胞分裂，而被广泛应用于临床治疗肿瘤。

我们观察了顺铂对肝癌细胞株HepG2凋亡的诱导作用，从而探讨其作用机制。

1 材料与方法1.1、药品和试剂：RPMI-1640培养基（购自Gibco公司），胎牛血清（coring公司），顺铂（Gibco公司），Annexin-V/PI试剂（Invitrogen公司）。

倒置显微镜（尼康TS100F）流式细胞仪（Beckman Coulter公司）。

1.2 方法1.2.1 细胞系及培养：人肝癌HepG2细胞株引自大连医科大学中心实验室。

用含10%胎牛牛血清、100 u/mL 青霉素、100 mg/L 链霉素的RPMI－1640 培养液, 在37 ℃、5% CO2 条件下作常规悬浮培养，每2-3天换液传代培养。

1.2.2 细胞培养及药物处理：取对数生长期细胞，细胞用0.25%胰蛋白酶消化后,配成5×105/L的细胞悬液分别接种于24孔板中培养，24 h细胞贴壁后，弃上清。

实验组分别加入浓度为200μg/mL，100μg/mL，50μg/mL，25μg/mL，12.5μg/mL的顺铂处理细胞，对照组不加药，另设空白对照组（只有培养基，无细胞），每组设置复孔，全湿条件下，37℃、5% CO2 培养箱中培养。

1.2.3 细胞形态学观察：取对数生长期细胞, 以每孔5×105个接种于6孔板中,24 h细胞贴壁后，弃上清。

分别加入不同浓度顺铂处理细胞，每6 h于倒置显微镜下观察活体细胞形态。

1.2.4 流式细胞仪分析细胞凋亡：实验组，对照组和空白对照组细胞培养24h，48h后用0.25%胰蛋白酶消化，PBS漂洗两次，调整细胞浓度至106/mL，取100μl细胞悬液，加入5μl Annexin－V/FITC 10μl及浓度为50μg/mL的PI液10μl，室温避光孵育15分钟后，加入PBS液400μl，用流式细胞仪进行流式细胞术定量检测。

铜（Ⅱ）配合物抗癌活性研究进展金属配合物抗癌药物的研究已经成为抗肿瘤药物研究的热点之一。

越来越多的研究表明铜（Ⅱ）配合物具有较好的抗癌活性。

本文在参阅大量文献的基础上，对铜（Ⅱ）配合物的结构特征﹑和铂（Ⅱ）配合物的活性对比、与DNA的作用﹑与氨基酸的共价作用及对癌细胞的诱导凋亡作用等方面作了介绍。

标签：铜（Ⅱ）配合物；结构特征；抗癌活性；共价作用；诱导凋亡60年代末期，顺铂（cis-platin）做为抗肿瘤药物应用于临床，引导金属配合物抗癌药物研究步入了一个新领域，引起了人们对金属配合物抗肿瘤研究的重视。

近年来已证实锗、钼、钯、铜、锌等金属配合物也具有抗肿瘤活性，对金属配合物的研究已经成为抗肿瘤药物研究中的热点之一[1]。

铜是一种很重要的微量金属元素，它在人体内的含量仅次于铁和锌。

所有的动物、植物都需要靠它来生存和维持正常的生理机能。

同时铜还是机体内氧化还原体系中有着独特作用的催化剂。

目前已知铜存在于生物体内金属蛋白和金属酶的活性部位，对造血系统和中枢神经系统的发育，骨骼和结缔组织的形成以及皮肤色素的沉积等过程具有重要作用[2]。

铜作为配合物的活性中心还存在于具有生物功能的蛋白质分子中，其配合物多变的配位结构和活化小分子的催化活性，使其对生命体系有特殊的生物活性和催化作用。

而目前的研究表明：铜是生物体内正常的新陈代谢所必须的，亦是治疗许多疾病的一个主要因素。

近期研究也证实铜与肿瘤血管的形成有密切关系，因此铜配合物已成为抗肿瘤药物的研究热点。

早在1912年，德国就用一种由铜的氯化物和蛋黄素组成的混合物来治疗患有面部癌的患者。

这一治疗的成功说明铜化合物具有抗癌功能[3]。

在众多的过渡金属中，铜具有良好的配位特性，且其配合物具有良好的光裂解活性[4]，众多的研究者们开始将铜配合物作为研究对象。

本研究在参阅大量文献的基础上，结合自己的工作，从以下几方面对铜（Ⅱ）配合物抗癌活性的研究进展作了介绍。

1 铜（Ⅱ）配合物的结构特征Cu（Ⅱ）金属原子的配位多含O、N原子，Cu（Ⅱ）配位数从4～6多变，配位构型有四面体、三角双锥、八面体等。

塞来昔布对宫颈癌细胞的化疗增敏作用周自华;徐宁红;陈尚忠;邹媚;袁志华;肖丽【摘要】目的探讨特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对顺铂诱导宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的作用及机制.方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),测定塞来昔布对顺铂诱导Hela细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Hela细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况.结果 5、10μmol/L的塞来昔布分别与顺铂联合应用,可增强顺铂对Hela细胞增殖抑制作用.塞来昔布(5 μmol/L)能促进顺铂诱导Hela细胞的凋亡.塞来昔布作用于Hela细胞后,Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖关系.结论塞来昔布能促进顺铂对Hela细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2蛋白表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关.%Objective To investigate the effect and its mechanism of celecoxib on cisplatin-induced proliferation and apoptosis in cervical cancer Hela cells. Methods The proliferation of celecoxib on cisplatin-induced cervical cancer Hela cells was examined by MTT assay. The apoptosis of Hela cells were tested by PI staining flow cytometry. The expression and their activity change of Bcl-2,Bax protein in Hela cells were investigated by Western hlot. Results5 ,10μmol/L concentrations of celecoxib combined with cisplatin significantly increased the cytotoxicity of cisplatin to Hela cells. Celecoxib ( 5 pdmol /L ) significantly promoted cisplatin to induced Hela cells apoptosis. the expression levels of Bcl-2 protein were decreased and the expression level of Bax protein was increased in Hela cells treated with celecoxib in a concentration dependent manner ( P ＜ 0. 05 ). ConclusionCelecoxih could enhance the effect of growth inhibtion and apoptosis induction of cisplatin on Hela cells. The effect of chemosensitization to cisplatin of celecoxib on Hela cells may be associated with downregulating the expression of Bcl-2 protein and upregulating the expression of Bax protein.【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2011(026)005【总页数】4页(P452-455)【关键词】宫颈癌;塞来昔布;凋亡;顺铂;化疗增敏【作者】周自华;徐宁红;陈尚忠;邹媚;袁志华;肖丽【作者单位】417000,湖南省娄底市中心医院肿瘤内科;417000,湖南省娄底市中心医院肿瘤内科;417000,湖南省娄底市中心医院肿瘤内科;417000,湖南省娄底市中心医院肿瘤内科;417000,湖南省娄底市中心医院肿瘤内科;417000,湖南省娄底市中心医院肿瘤内科【正文语种】中文【中图分类】R737.33COX-2在结肠癌、肺癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、宫颈癌、鼻咽癌等多种恶性肿瘤中均呈高度表达［1～7］。

ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ　６０１　Ｖｏｌ畅３０Ｎｏ畅７Ｊｕｌｙ２０１４（ＳｅｒｉａｌＮｏ畅１７７）不同质量浓度顺铂对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞增殖能力的影响ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｃｉｓｐｌａｔｉｎｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＨｅｌａｃｅｌｌ收稿日期：２０１４－０４－１７修回日期：２０１４－０５－０８基金项目：福建省卫生厅青年基金资助项目（２００８－２－２５）作者简介：陈秀慧（１９７３－），女，主治医师，主要从事妇科肿瘤研究通信作者：陈秀慧ＭＰ：１３７０５９７０８３３Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｕｈｕｉ＿ｃｈ＠１２６畅ｃｏｍ陈秀慧，曲军英（福建医科大学附属第一医院妇产科，福州　３５００００）ＣＨＥＮＸｉｕ－ｈｕｉ，ＱＵＪｕｎ－ｙｉｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌ－ｏｇｙ，ＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＦｕｊｉａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５００００，Ｃｈｉｎａ）摘要：目的　观察不同质量浓度顺铂对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞增殖能力的影响。

方法　选择人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞进行体外培养，分别用质量浓度为０，０畅０１，０畅１０，１畅００，１０畅００ｍｇ・Ｌ－１的顺伯对呈现对数生长期的Ｈｅｌａ细胞进行处理，处理后分别于１２，２４，４８，７２ｈ测定细胞增殖能力。

结果　不同质量浓度的顺铂对Ｈｅｌａ细胞增殖能力均有抑制作用，高质量浓度顺铂组对Ｈｅｌａ细胞抑制率明显高于低质量浓度组（Ｐ＜０畅０５）。

不同质量浓度组中，随顺铂作用时间的延迟，细胞增殖抑制率显著增加（Ｐ＜０畅０５）。

结论　顺铂对宫颈癌Ｈｅｌａ增殖能具有抑制作用，且随质量浓度的增高，抑制能力增强。

关键词：宫颈癌；Ｈｅｌａ细胞；顺铂；增殖能力ＤＯＩ：１０畅１３６９９／ｊ畅ｃｎｋｉ畅１００１－６８２１畅２０１４畅０７畅０１３中图分类号：Ｒ９７９畅１；Ｒ９３７畅３３ 文献标志码：Ａ文章编号：１００１－６８２１（２０１４）０７－０６０１－０２Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｃｉｓｐｌａｔｉｎｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｏｆＨｅｌａｃｅｌｌ畅Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＣｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＨｅｌａｗａｓｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ０，０畅０１，０畅１０，１畅００，１０畅００ｍｇ・Ｌ－１ｃｉｓｐｌａｔｉｎｉｎｔｈｅｓｔａｇｅｏｆｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃｐｈａｓｅ畅Ａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆ１２，２４，４８ｈａｎｄｔｈｅｃｅｌｌｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄ畅Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｃｉｓｐｌａｔｉｎｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅＨｅｌａｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ畅ＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＨｅｌａｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａ－ｔｉｏｎｗｅｒｅｍｕｃｈｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０畅０５）．Ｔｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｐｅｒｉｏｄｏｆｔｉｍｅｆｏｒｃｉｓｐｌａｔｉｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔ畅Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｃｉｓｐｌａｔｉｎｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌ，ａｎｄｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｅｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ畅Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｅｒｖｉｃａｌｃａｎｃｅｒ；Ｈｅｌａｃｅｌｌ；ｃｉｓｐｌａｔｉｎ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ子宫颈癌是临床上妇科常见恶性肿瘤，近年来随着人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染率的增加，宫颈癌的发病率呈现上升和年轻化趋势［１－２］。

术前应用TP方案诱导化疗后行同步放化疗治疗晚期子宫颈癌的效果及对远期预后的影响作者：柯柳杨朱的霞梁文胜来源：《中国医学创新》2021年第02期【摘要】目的：探讨术前应用TP方案诱导化疗后行同步放化疗治疗晚期子宫颈癌的效果及对远期预后的影响。

方法：选取2015年8月-2017年8月本院收治的68例局部晚期子宫颈癌患者为研究对象，按照随机数字表法将其分为对照组（给予同步放化疗）和观察组（给予多西紫杉醇+顺铂方案诱导化疗后行同步放化疗），各34例。

觀察两组近期疗效、肿瘤标志物、毒性反应及远期预后。

结果：观察组有效率和手术率较对照组均更高，差异均有统计学意义（P<0.05）。

治疗后，两组SCC-Ag、CA125及CEA水平均降低，且观察组SCC-Ag、CA125及CEA水平均较对照组低，差异均有统计学意义（P<0.05）。

观察组毒性反应发生率与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

观察组术后2年生存率较对照组高，差异有统计学意义（P<0.05）。

结论：术前应用多西紫杉醇+顺铂方案诱导化疗后行同步放化疗治疗晚期子宫颈癌患者可提高治疗效果，增加手术机会，改善肿瘤标志物水平，毒性反应少且能提高生存率。

【关键词】同步放化疗多西紫杉醇顺铂局部晚期子宫颈癌[Abstract] Objective： To explore the effect of simultaneous radiochemotherapy followed by preoperative TP-induced chemotherapy on patients with advanced cervical cancer and its impact on long-term prognosis. Method： A total of 68 patients with locally advanced cervical cancer admitted to our hospital from August 2015 to August 2017 were selected as study subjects， they were divided into the control group （concurrent chemoradiotherapy） and the observation group （concurrent chemoradiotherapy after Docetaxel + Cisplatin regimen induced chemotherapy） according to the random number table， 34 cases in each group. The short-term efficacy， tumor markers， toxicity and long-term prognosis of the two groups were compared. Result： The effective rate and operation rate of the observation group were higher than those of the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. After treatment， the levels of SCC-Ag， CA125 and CEA in both groups were decreased， the levels of SCC-Ag， CA125 and CEA in the observation group were all lower than those in the control group， with statistically significant differences （P<0.05）. There was no statistically significant difference in the incidence of toxicity between the observationgroup and the control group （P>0.05）. 2-year survival rate in the observation group was higher than that in the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion：Preoperative application of Docetaxel + Cisplatin regimen after induction chemotherapy and simultaneous chemoradiation therapy for patients with advanced cervical cancer can improve the treatment effect， increase the chance of surgery， improve the level of tumor markers， have fewer toxic reactions and improve survival rate.[Key words] Simultaneous radiochemotherapy Docetaxel Cisplatin Locally advanced cervical cancer子宫颈癌是妇科高发恶性肿瘤，由于该疾病发病隐匿，早期症状不明显，部分患者在就诊时处于晚期，处于该时期的患者单纯予以手术治疗，其长期生存率仅为40%以内[1]。

顺铂化疗方案顺铂化疗方案是一种常用的肿瘤治疗方法，适用于多种恶性肿瘤，如肺癌、卵巢癌和食管癌等。

这个方案的优点在于能够显著减少肿瘤细胞的生长和扩散，同时也对患者的生活质量进行了一定的保护。

下面我们来了解一下顺铂化疗的相关知识。

首先，让我们了解一下顺铂的作用机制。

顺铂是一种铂类药物，进入肿瘤细胞后能够与细胞的DNA结合，从而阻碍DNA的正常复制和修复，抑制肿瘤细胞的增殖和生长。

此外，顺铂还能够引起肿瘤细胞的凋亡，促使其死亡。

通过这些作用机制，顺铂化疗方案能够降低肿瘤的大小和转移的风险。

然而，顺铂化疗同时也会带来一些副作用。

常见的副作用包括恶心和呕吐、脱发、免疫功能下降等。

这些副作用给患者的生活带来了一定的困扰，但是我们可以通过一些方法来缓解这些不适。

例如，可以通过药物治疗来预防和减轻恶心和呕吐的发生，同时选择合适的护发产品和采取温和的洗发方式来预防脱发，还可以加强营养支持，提高免疫力等。

此外，顺铂化疗方案的具体应用还需要参考患者的具体情况和不同肿瘤类型的特点。

在选择化疗方案时，肿瘤的分期、患者的身体状况以及对治疗的耐受性都需要进行综合评估。

在不同的情况下，顺铂可以作为单药使用，也可以与其他化疗药物联合应用，以达到更好的治疗效果。

因此，在实际应用中，医生通常会根据患者的具体情况制定个体化的化疗方案。

除了传统的静脉注射形式，近年来，顺铂的用法也在不断创新，如通过经导管持续静脉泵入、腹腔注射等方式进行给药，以提高药物的浓度在肿瘤组织中的积累，减少对正常组织的损害。

最后，我们需要强调的是，顺铂化疗方案是一种重要的肿瘤治疗方法，但并不适用于所有患者。

患者在接受顺铂化疗之前，需要充分了解治疗的风险和益处，并与医生进行充分的沟通和讨论。

同时，患者在接受化疗期间也需要与医生保持良好的沟通，及时报告治疗的效果和不良反应，以便调整和优化治疗方案。

总之，顺铂化疗方案是一种常用的肿瘤治疗方法，通过阻碍肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡，来达到抑制肿瘤生长和转移的效果。

顺铂对Hela细胞辐射增敏的体外实验观察常萍;刘孜;王娟;苏进【摘要】目的探讨顺铂对宫颈癌细胞系Hela的细胞毒性和辐射增敏作用,并研究射线与顺铂联合应用的效应关系.方法 MTT法检测Hela细胞在不同浓度药物和不同辐射剂量下的细胞抑制作用;辐射与顺铂联合应用时,MTT法检测细胞抑制率,绘制细胞抑制率曲线,研究顺铂与辐射联合应用时协同效应的条件;克隆形成法研究药物的辐射增敏作用,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞辐射增敏比.结果顺铂作用于Hela细胞的半数致死质量浓度(IC50)为10μg/mL,药物与辐射共同作用于Hela 细胞时,12 Gy辐射剂量下,顺铂1～5μg/mi对Hela的细胞毒性显示出明显的浓度依赖性和48 h内的时间依赖性,5μg/mL以上浓度顺铂对Hela的细胞毒性未见明显增加;集落形成法结果显示,顺铂辐射增敏比为1.320;辐射剂量小于10 Gy时,放射线与药物联合应用具有协同效应,而当辐射剂量大于10 Gy时,呈现相加效应或次相加效应.结论顺铂与辐射并用时对宫颈癌Hela细胞增殖具有显著抑制作用,药物具有最佳的辐射增敏剂量;且应尽早应用顺铂增敏化疗,以保证协同效应.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】4页(P462-465)【关键词】宫颈癌;辐射增敏;协同效应;顺铂;Hela细胞;辐射剂量【作者】常萍;刘孜;王娟;苏进【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院放疗科,陕西西安710061;西安交通大学医学院第一附属医院放疗科,陕西西安710061;西安交通大学医学院第一附属医院放疗科,陕西西安710061;西安交通大学医学院第一附属医院放疗科,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌作为我国常见的十大肿瘤之一,中晚期患者多采用同步放化疗的综合治疗方案。

合适的放疗剂量及最佳的药物选择,都与治疗效果及副反应密切相关。

顺铂作用在细胞中的应用-概述说明以及解释1.引言1.1 概述顺铂是一种常用的抗肿瘤药物，具有广泛的抗癌作用。

它主要通过与DNA结合，抑制DNA复制和转录，从而造成细胞凋亡和停滞在细胞周期的G2/M期。

顺铂在癌症治疗中被广泛应用，尤其在卵巢癌、非小细胞肺癌、膀胱癌等多种癌症类型的治疗中表现出很好的效果。

此外，顺铂也在细胞生物学研究中得到了广泛的应用，成为了研究细胞分裂、DNA损伤修复等领域的重要工具。

本文将对顺铂在细胞中的应用进行系统的论述和总结。

1.2 文章结构文章结构部分：本篇文章将主要分为引言、正文和结论三个部分。

在引言部分，将以概述、文章结构和目的为主要内容，介绍顺铂在细胞中的应用背景和意义，并概述了本文的主要内容和结构安排。

在正文部分，将详细讨论顺铂的作用机制、在癌症治疗中的应用以及在细胞生物学研究中的作用，分别介绍顺铂的作用原理、在临床治疗中的应用情况以及在细胞学研究中的具体作用和方法。

在结论部分，将总结顺铂在细胞中的应用情况，展望未来研究方向，以及提出结论和展望。

1.3 目的：本文旨在探讨顺铂在细胞中的应用，通过对顺铂的作用机制、在癌症治疗中的应用以及在细胞生物学研究中的作用进行深入分析，以期为读者提供对顺铂在细胞层面上的全面认识。

同时，通过对顺铂在细胞中的应用进行总结和展望未来研究方向，旨在为相关领域的科研工作者提供参考，促进相关研究的深入发展和应用。

3 目的部分的内容2.正文2.1 顺铂的作用机制顺铂是一种铂类抗肿瘤药物，主要通过与DNA中的鸟嘌呤结合形成DNA外链和内链的交联，从而阻止DNA的复制和转录，引起肿瘤细胞的凋亡。

具体来说，顺铂与DNA形成的交联会导致DNA 双链的断裂，从而触发细胞内的信号传导通路，最终导致肿瘤细胞的死亡。

与此外，顺铂还能够抑制肿瘤细胞的DNA 修复机制，导致DNA 损伤得不到及时修复，进一步加剧细胞内的DNA 损伤，最终导致细胞凋亡。

此外，顺铂还可以干扰细胞的有丝分裂，抑制微管的形成，导致细胞周期阻滞和细胞凋亡。

Erastin逆转ABCG2介导的宫颈癌顺铂耐药性[1][摘要]多药物转运蛋白ABCG2的过表达与癌细胞多药耐药性（multidrug resistance, MDR）相关。

ABCG2表达的增加导致生存期较差的宫颈癌对顺铂的耐药性增强。

Erastin是一种新颖且特异性的小分子，其靶向SLC7A11诱导铁死亡。

在本研究中将探讨erastin和顺铂在宫颈癌中的协同作用。

本研究证明在ABCG2过表达的宫颈癌细胞中，erastin和顺铂的共递送显著降低宫颈癌细胞活力。

在机制方面，erastin主要通过限制ABCG2的药物外排活性来提高细胞内ABCG2底物水平，但不改变ABCG2的表达。

因此，erastin可以逆转ABCG2介导的宫颈癌中顺铂耐药性，这表明erastin和顺铂的联合使用可能为患有宫颈癌的化疗耐药患者提供一种有效的治疗方法。

[关键词]ABCG2；宫颈癌；顺铂；Erastin；铁死亡[中图分类号] [文献标志码]A [文章编号]宫颈癌是全球女性中第四大最常见的癌症，在晚期和预后不良的患者中，每年的生存概率为10%-20%[1-3]。

人乳头瘤病毒（human papillomaviruses, HPV）感染是宫颈癌发展的主要原因，占全球宫颈癌的70%[4]。

虽然大多数患者在感染HPV一段时间后会自发消退且无症状，但高危类型的持续感染可能会诱发女性宫颈癌。

多种生活方式因素，如多个性伴侣和吸烟均会增强高危型HPV感染发展为宫颈癌的可能性[5,6]。

尽管分子靶向治疗及免疫治疗在宫颈癌患者中起到有效治疗，但化疗在早晚期宫颈癌治疗中仍然起着关键作用[7]。

然而，在化疗过程中，肿瘤细胞对具有多种结构和不同机制的多化疗药物表现出交叉耐药性。

宫颈癌的MDR被认为是化疗失败、肿瘤复发甚至患者死亡的主要原因[8,9]。

ATP结合盒（ABC）转运蛋白的过表达导致药物在细胞内积累减少是介导MDR最常见的原因[10,11]。

利用MTT法测定抗癌药物顺铂对Hela细胞增殖的抑制效果摘要：目的：采用唾哇蓝(MTT)比色法来检测Hela细胞相对数和相对活力，利用已知浓度细胞培养后的吸光度生成细胞成长趋势曲线，从而推测抗癌药物顺铂对Hela细胞增殖的抑制效果。

方法：采用MTT法先测出一组Hela细胞浓度的吸光值的指数方程，同时培养加入不同浓度的顺铂的Hela细胞，最后根据指数方程来计算不同浓度的顺铂抑制后的Hela细胞数量。

结果：抗癌药物顺铂对Hela 细胞增殖有抑制效果，不同浓度的顺铂抑制的效果都不一样，几乎呈线性关系。

结论：采用MTT法检测有助于指导临床选择化疗药物剂量,提高化疗效果；顺铂对癌细胞的增殖有一定的抑制作用。

关键词：MTT比色法顺铂Hela细胞前言检测细胞存活与增殖，过去常用的方法有染料排斥法和掺入同位素的释放法。

前者易受主观因素影响，误差大；后者因放射线同位素污染环境，并需要价格昂贵的仪器设备，整个过程所需时间长，实际应用受到限制。

1983年Mos- manntl〕首创了MTT比色分析法，其基本原理是活细胞线粒体脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色甲瓒(Formazan)，从而可用比色法推测活细胞浓度〔1〕。

由于MTT法简单、灵敏、稳定;其检测结果与同位素掺入法有良好的一致性，同时又可避免同位素污染及特殊设备的需要，故可代替同位素掺入法，有效地应用于淋巴细胞转化[2j，IL一2[a]，抗肿瘤药物的筛选等研究中。

我们以检测抗癌药物顺铂对Hela细胞增殖活性的抑制效果为例，对MTT法的操作步骤及条件进行了探讨，还探讨一下不同浓度的顺铂对癌细胞抑制效果。

1材料与方法1.1细胞培养将吹打的单细胞悬液调整细胞浓度约为500000个/ML，再稀释细胞浓度直到每孔的细胞约为10000个、5000个、2500个、1250个L、625个等这五个梯度，将其接种到96孔板内，一般同一浓度的细胞接种4孔作为重复实验，同时分别做一组空白对照和一组未知细胞浓度；与此同时，制造一组药物处理组细胞，有调整细胞浓度为20000～30000/ML，每孔接入200ul，使每孔细胞数为5000个左右，最后同时放到培养箱内培养，24～36h后吸掉药物处理组的培养液加入不同浓度梯度的顺铂（1 ug/ml、5 ug/ml、10 ug/ml、15ug/ml）〔2〕各200ul，继续培养。

利用MTT法测定不同浓度顺铂对Hela细胞增殖的抑制效果摘要：目的：观察不同浓度顺铂对Hela细胞增殖的抑制作用，并探讨出最适合用于抑制Hela增殖的浓度梯度。

方法：采用MTT比色法对经不同浓度顺铂处理后的Hela细胞进行测定，检测不同浓度顺铂对细胞增殖的抑制情况。

结果：0.3～1μg/mL浓度的顺铂对Hela细胞的增殖主要起到促进作用；1～7.5μg/mL梯度内的顺铂作用不清晰，而7.5～80μg/mL这一浓度梯度内的顺铂则都是起抑制作用，且抑制作用随浓度升高而增强；只是在7.5～25μg/mL这一浓度梯度内，不同浓度顺铂间的抑制作用存在较大差异，而在25～80μg/mL这一范围内顺铂的抑制作用相差不大。

结论：高浓度顺铂对Hela细胞的增殖确实有抑制作用，而低浓度顺铂则不然，所以通过归结之后可知，较适合用于抑制Hela细胞增殖的顺铂梯度应在10～25μg/mL之间，可以是10μg/mL，15μg/mL，20μg/mL，25μg/mL。

关键词：MTT法，顺铂，Hela细胞，增殖，抑制MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazo-liumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，是一种黄颜色的染料。

MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法；其检测原理是：外源性MTT在哺乳类动物类活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶的作用下还原为水不溶性的蓝紫色（或蓝色）结晶甲瓒（Formazan），并沉积在细胞中；在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比[1]。

二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，因此用酶联免疫检测仪在490nm或570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

而死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用唐庄艳;赫东芸;盛敏佳;齐延新;王立岩【摘要】目的以宫颈癌Hela细胞为研究对象,探讨二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用以及二甲双胍联合卡铂是否对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制有协同作用.方法将宫颈癌Hela细胞分为空白对照组、不同浓度(0.01、0.5、1、5、10、20 mmol/L)二甲双胍组,采用MTT法检测不同浓度二甲双胍对宫颈癌Hela 细胞的增殖活性的影响;并应用AO/EB染色和流式细胞仪研究二甲双胍的体外抗肿瘤机制;将1.0 mmol/L及5.0 mmol/L的二甲双胍与25 mg/L、50 mg/L的卡铂单一或联合作用宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测各组细胞OD值,计算细胞增殖抑制率.结果二甲双胍对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力有明显的抑制作用,且呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;与对照组比较,荧光显微镜下计数发现不同浓度二甲双胍作用宫颈癌Hela细胞24 h后,随着二甲双胍浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高(P＜0.05),而以不同浓度(0、1、5 mmol/L)二甲双胍培养宫颈癌Hela细胞48h后,流式细胞仪检测实验组Hela细胞处于G0/G1期比例升高,S期细胞比例下降,差异具有统计学意义(P＜0.05);二甲双胍联合卡铂对抑制宫颈癌Hela细胞增殖具有协同作用,且随着二甲双胍浓度的增加,细胞增殖抑制率增加(P＜0.05).结论证实二甲双胍对体外宫颈癌Hela细胞增殖有明显的抑制作用,它是通过诱导细胞凋亡、细胞周期G0/G1期阻滞来实现的;二甲双胍与卡铂联合应用能够增强卡铂对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2018(022)006【总页数】5页(P1054-1058)【关键词】二甲双胍;宫颈癌;细胞增殖;细胞凋亡;细胞周期【作者】唐庄艳;赫东芸;盛敏佳;齐延新;王立岩【作者单位】吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春130033;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春130033;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春130033;中国科学院长春应用化学研究所;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春130033【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，目前宫颈细胞学检查及HPV检测可以早期发现宫颈癌，显著降低宫颈癌的发病率及死亡率。

[收稿日期]2020-09-08　[修回日期]2020-12-01[作者单位]江苏省无锡市妇幼保健院宫颈科,214000[作者简介]季　静(1985-),女,硕士,主治医师.[通信作者]詹惠英,主任医师.E⁃mail:wxzhy2013@[文章编号]1000⁃2200(2023)03⁃0301⁃06㊃基础医学㊃顺铂通过增加HeLa 人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和凋亡季　静,张　晔,陆晓红,徐　锋,詹惠英[摘要]目的:探讨顺铂对HeLa 人宫颈癌细胞中Nrf2蛋白表达及核转位的影响,并观察细胞自噬和凋亡的变化㊂方法:使用不同浓度的顺铂(0㊁2.5㊁5㊁10μmol /L)干预HeLa 人宫颈癌细胞,MTT 法检测细胞活性,Transwell 实验观察细胞迁移能力,mCherry⁃GFP⁃LC3B 融合蛋白腺病毒转染HeLa 细胞观察自噬水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫蛋白印迹检测Nrf2在细胞质和细胞核内的表达情况,免疫荧光法观察Nrf2的核转位情况㊂结果:与对照组相比,2.5㊁5㊁10μmol /L 的顺铂均可抑制HeLa 细胞的活性及细胞迁移能力(P <0.05),且随着药物浓度增高抑制作用增强(P <0.05)㊂与对照组相比,2.5㊁5㊁10μmol /L 的顺铂均可促进HeLa 细胞中LC3B 的表达㊁细胞凋亡及Nrf2的核转位(P <0.05),降低细胞质中Nrf2的蛋白表达水平(P <0.05),并升高细胞核中Nrf2的蛋白表达水平(P <0.05)㊂结论:顺铂通过增加HeLa 人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和细胞凋亡,并抑制细胞的活性和迁移能力㊂[关键词]HeLa 人宫颈癌细胞;顺铂;Nrf2;自噬;细胞凋亡[中图法分类号]R 737.33 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2023.03.005Cisplatin increases nuclear translocation of Nrf2and promotes autophagy and apoptosis in HeLa human cervical cancer cellsJI Jing,ZHANG Ye,LU Xiao⁃hong,XU Feng,ZHAN Hui⁃ying(Department of Cervical ,Wuxi Maternal and Child Health Care Hospital ,Jiangsu Wuxi 214000,China )[Abstract ]Objective :To investigate the effect of cisplatin on the protein expression and nuclear translocation of Nrf2,and on the changes of autophagy and apoptosis in HeLa human cervical cancer cells.Methods :After the HeLa human cervical cancer cells were treated with different concentrations of cisplatin(0,2.5,5and 10μmol /L),MTT assay was used to detect the cell activity,Transwell assay was used to observe the cell migration ability,mCherry⁃GFP⁃LC3B fusion protein adenovirus transfected HeLa cells were applied to observe the autophagy changes,flow cytometry was employed to detect the apoptosis,Western blotting was used to detect the expression of Nrf2in the cytoplasm and nucleus,and immunofluorescence staining was used to observe the nuclear translocation of Nrf2.Results :Compared with the control group,2.5,5and 10μmol /L cisplatin could inhibit the activity and migration ability of HeLa cells (P <0.05),and the inhibitory effect increased with the increase of drug concentration(P <0.05).Compared with the control group,2.5,5and 10μmol /L cisplatin could promote the expression of LC3B,apoptosis and nuclear translocation of Nrf2in HeLa cells(P <0.05),reduce the protein expression level of Nrf2in the cytoplasm(P <0.05),and increase the protein expression level of Nrf2in thenucleus(P <0.05).Conclusions :Cisplatin promotes autophagy and apoptosis by increasing nuclear translocation of Nrf2in HeLa human cervical cancer cells,and inhibits cell viability and migration ability.[Key words ]HeLa human cervical cancer cells;cisplatin;Nrf2;autophagy;apoptosis 虽然近年来我国宫颈癌的死亡率大幅下降,但作为女性常见的恶性肿瘤,我国每年宫颈癌新发病例仍高达13.15万,每年约5.3万女性死于宫颈癌[1]㊂顺铂作为宫颈癌经典的化疗药物,在单药化疗㊁联合其他药物化疗或同步放化疗的应用中都显示出对宫颈癌病人的有益作用[2]㊂自噬广泛参与宫颈癌的发生㊁发展㊁药物耐受等[3],有学者[4]报道顺铂对HeLa 人宫颈癌细胞自噬具有诱导作用,但顺铂对宫颈癌自噬的调节及其可能机制仍值得深入探索㊂本研究从顺铂对HeLa 人宫颈癌细胞中Nrf2入核影响的角度,探讨顺铂通过增加Nrf2的核转位促进细胞自噬相关的细胞凋亡抑制HeLa 细胞生长和迁移的可能机制㊂1　材料与方法1.1　药物与试剂　顺铂(Sigma⁃Aldrich 公司,货号:P4394);MEM 培养基(美国Thermo Fisher Scientific 公司,货号:11095072);胎牛血清(美国ThermoFisher Scientific公司,货号:10099);细胞消化液(美国Thermo Fisher Scientific公司,货号:12605010);青霉素-链霉素(美国Thermo Fisher Scientific公司,货号:15070063);噻唑蓝(MTT)(上海碧云天生物技术有限公司,货号:ST316);结晶紫染色液(上海碧云天生物技术有限公司,货号:C0121); mCherry⁃GFP⁃LC3B融合蛋白腺病毒(上海碧云天生物技术有限公司,货号:C3011);Annexin V⁃FITC细胞凋亡检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司,货号:C1062M);DAPI染色液(上海碧云天生物技术有限公司,货号:C1006);细胞核蛋白与细胞质蛋白抽提试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司,货号:P0027);GAPDH兔多克隆抗体(武汉三鹰生物技术有限公司,货号:10494⁃1⁃AP);Nrf2兔多克隆抗体(武汉三鹰生物技术有限公司,货号:16396⁃1⁃AP);LaminB1兔多克隆抗体(武汉三鹰生物技术有限公司,货号:12987⁃1⁃AP);HRP⁃标记的山羊抗兔IgG(武汉三鹰生物技术有限公司,货号:SA00001⁃2);Fluorescein(FITC)⁃标记的山羊抗兔IgG(武汉三鹰生物技术有限公司,货号:SA00003⁃2);其他试剂为分析纯,购自国药集团化学试剂有限公司㊂1.2　仪器　高速低温离心机(德国Sartorius公司,型号:Centrisart®D⁃16C);光学显微镜(日本Olympus公司,型号:IX83);荧光显微镜(德国Leica 公司,型号:AF6000);酶标仪(美国Thermo Fisher Scientific公司,型号:Multiskan FC);流式细胞仪(美国BD公司,型号:Accuri®C6Plus);电泳电源(美国Bio⁃Rad公司,型号:PowerPac Basic);垂直电泳/转膜槽(美国Bio⁃Rad公司,型号:Mini⁃PROTEAN Tetra);凝胶成像系统(美国Bio⁃Rad公司,型号: BIO⁃RAD Gel Doc XR+)㊂1.3　HeLa人宫颈癌细胞的培养及分组　HeLa人宫颈癌细胞株(产品目录号:TCHu187)购买于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库㊂使用MEM 培养基(90%)和胎牛血清(10%)配制完全培养基,在95%空气和5%CO2的37℃培养箱中培养HeLa人宫颈癌细胞㊂细胞生长至80%亚融合状态时,胰酶消化,分瓶继续培养㊂所有实验使用细胞复苏后4~6代的HeLa人宫颈癌细胞㊂实验分组:对照组㊁顺铂2.5μmol/L组㊁顺铂5μmol/L组及顺铂10μmol/L组㊂1.4　MTT法检测细胞的活性　取HeLa细胞,计数后用MEM完全培养基稀释,使细胞密度为1×105个/毫升,将细胞接种于96孔板,每孔5000个细胞,每组10个复孔,共4组,12h细胞贴壁后弃去原培养液,各组加入含有对应浓度顺铂的完全培养基200μL,对照组加入MEM完全培养基200μL,培养24h后,每孔加入20μL MTT(5mg/mL)试剂,培养4h后,吸弃培养液,加入150μL二甲基亚砜,摇床震荡10min后,使用酶标仪在490nm波长下测定吸光值(OD)㊂将对照组的细胞存活率定义为100%,细胞活性=给药组OD值/对照组OD值×l00%㊂1.5　Transwell实验检测细胞迁移　用含有不同浓度顺铂(0㊁2.5㊁5㊁10μmol/L)的单培养基将HeLa 细胞孵育24h后,收集各组细胞并计数,混匀于MEM单培养基中㊂Transwell小室上室中加入各组细胞5000个,每组6个重复,Transwell小室下室中加入含10%胎牛血清的MEM完全培养基,上室底部浸入下室完全培养基㊂培养24h后,4%多聚甲醛浸泡Transwell上室固定细胞30min,PBS缓冲液清洗2次,使用结晶紫染色液染色5min,再次清洗2次,使用棉签擦去Transwell上室内侧细胞,将小室置于载玻片上,使用倒置光学显微镜,对Transwell 上室外(下)侧的细胞进行拍照㊂1.6　mCherry⁃GFP⁃LC3B融合蛋白腺病毒转染细胞检测自噬　参考mCherry⁃GFP⁃LC3B融合蛋白腺病毒使用说明书,对HeLa细胞进行转染,6孔板中放入细胞爬片,并接种HeLa细胞,每组1块6孔板㊂细胞生长至50%融合时加入1.2mL单培养液,并加入腺病毒,培养24h㊂之后弃去所有培养液并更换为完全培养液后,继续培养24h㊂各组加入含有对应浓度顺铂的完全培养基2mL,对照组加入MEM完全培养基2mL,培养24h㊂4%多聚甲醛固定细胞30min,PBS缓冲液清洗2次后,取出细胞爬片,覆盖在载玻片上后,使用荧光显微镜观察mCherry⁃GFP⁃LC3B的荧光强度并拍照㊂1.7　流式细胞术检测细胞凋亡　用含有不同浓度顺铂(0㊁2.5㊁5㊁10μmol/L)的单培养基将HeLa细胞孵育24h后,收集各组细胞㊂参考Annexin V⁃FITC细胞凋亡检测试剂盒说明书检测HeLa细胞的凋亡率㊂将5~10万重悬细胞离心弃上清后,加入195μL Annexin V⁃FITC结合液,再加入5μL Annexin V⁃FITC,混匀后加入10μL碘化丙啶(PI)染色液,孵育20min,放入流式细胞仪样本架,设置仪器通道后检测并导出结果㊂1.8　免疫蛋白印迹法检测细胞Nrf2的蛋白表达　用含有不同浓度顺铂(0㊁2.5㊁5㊁10μmol/L)的完全培养基将HeLa细胞孵育24h后,收集各组细胞至新EP管内㊂使用细胞核蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒分别提取HeLa细胞的膜蛋白核核蛋白,BCA 法测定蛋白浓度㊂蛋白变性后,取等质量总蛋白(30μg)进行SDS⁃PAGE 电泳㊂之后将凝胶上的蛋白转移至PVDF 膜㊂PVDF 膜使用封闭液封闭2h㊂对于提取的细胞质内的蛋白,在封闭后孵育抗体GAPDH(1∶5000)和Nrf2(1∶500),对于提取的细胞核内的蛋白,在封闭后孵育抗体LaminB1(1∶5000)和Nrf2(1∶500),4℃过夜后洗膜3次㊂HRP 标记的山羊抗兔IgG(1∶10000)孵育2h 后,再次洗膜3次㊂使用凝胶成像系统化学发光成像并保存印迹图片㊂1.9　免疫荧光法检测细胞Nrf2的核转位　6孔板放入细胞爬片,并接种HeLa 细胞,每组1块6孔板㊂用含有不同浓度顺铂(0㊁2.5㊁5㊁10μmol /L)的完全培养基孵育24h 后,4%多聚甲醛固定细胞30min,PBS 缓冲液清洗2次,加入Nrf2(1∶100)抗体4℃孵育过夜㊂PBS 缓冲液清洗2次,加入FITC 标记的山羊抗兔IgG(1∶500)孵育2h 后,再次使用PBS 清洗2次,加入DPAI 染细胞核5min㊂使用PBS 清洗细胞3次,取出细胞爬片,覆盖在载玻片上,使用荧光显微镜观察Nrf2的荧光强度并拍照㊂1.10　统计学方法　采用方差分析和q 检验㊂2　结果2.1　顺铂抑制HeLa 人宫颈癌细胞的生长及迁移　与对照组相比,2.5㊁5㊁10μmol /L 的顺铂均可抑制HeLa 细胞的活性及细胞迁移能力(P <0.05),且随着药物浓度增高抑制作用增强(P <0.05)(见图1㊁表1)㊂2.2　顺铂促进HeLa 人宫颈癌细胞的自噬和细胞凋亡　使用mCherry⁃GFP⁃LC3B 融合蛋白腺病毒转染HeLa 细胞,采用荧光显微镜观察自噬相关蛋白LC3B 的表达情况,结果显示,与对照组相比,2.5㊁5㊁10μmol /L 的顺铂均可促进HeLa 细胞中LC3B 的表达(P <0.05)(见图2㊁表2)㊂使用流式细胞术检测各组HeLa 细胞的凋亡情况,结果显示,与对照组相比,2.5㊁5㊁10μmol /L 的顺铂均可促进HeLa 细胞的凋亡(P <0.05)(见图2㊁表2)㊂2.3　顺铂促进HeLa 人宫颈癌细胞中Nrf2的入核　免疫蛋白印迹结果显示,与对照组相比,2.5㊁5㊁10μmol /L 的顺铂均可降低HeLa 细胞的细胞质中Nrf2的蛋白表达水平(P <0.05),并升高细胞核中Nrf2的蛋白表达水平(P <0.05)(见图3A㊁表3)㊂使用免疫荧光法观察各组细胞中Nrf2的入核情况,结果显示,与对照组相比,2.5㊁5㊁10μmol /L 的顺铂均可促进HeLa 人宫颈癌细胞的中Nrf2的核转位(P <0.05)(见图3B㊁表3)㊂　表1　顺铂对HeLa人宫颈癌细胞的细胞活性及迁移能力的影响(x±s)分组细胞存活率/%(n i=10)迁移细胞数/个(n i=6)对照组100.0±5.6213.0±14.5顺铂2.5μmol/L组75.5±4.1*107.0±9.9*顺铂5.0μmol/L组63.0±4.3*#83.7±6.1*#▲顺铂10.0μmol/L组40.6±4.6*#▲59.5±7.1*#▲F281.72279.04P<0.01<0.01MS组内21.84798.391 q检验:与对照组比较*P<0.05;与顺铂2.5μmol/L组比较#P <0.05;与顺铂5.0μmol/L组比较▲P<0.053　讨论 研究[5-6]表明,癌细胞中Nef2的激活可促进癌症的进展和转移,并且会导致化疗和放疗敏感性的降低[7-8]㊂Nrf2在肿瘤中具有刺激肿瘤细胞增殖㊁抑制肿瘤细胞凋亡㊁增强肿瘤细胞复制潜力和肿瘤血管生产㊁增强肿瘤细胞对组织的侵袭和转移㊁促进炎症和增加基因突变等作用[9]㊂Nrf2在癌症中广泛的作用表明靶向Nrf2可能是治疗肿瘤的有效方法,如Nrf2的抑制剂可用于癌症治疗[9]㊂未来Nrf2可能会成为癌症的预后指标和治疗靶点㊂研究[10]显示Nrf2的高表达会增加肿瘤细胞的抗氧化能力,核内Nrf2高表达宫颈癌细胞具有增加的恶性潜能,Nrf2可能是宫颈癌病人预后不良的标志㊂有学者[11]报道,宫颈癌病变程度的升级增加Nrf2的核水平,并增强肿瘤细胞抗氧化反应中下游蛋白的表达㊂此外,有研究[12]证实辣椒素通过抑制宫颈癌细胞中Nrf2的表达抑制宫颈癌细胞的迁移与侵袭㊂本研究结果显示,顺铂作用于HeLa人宫颈癌细胞后,细胞核中的Nrf2蛋白水平升高,但降低了细胞质中的Nrf2水平㊂作为宫颈癌常用的化疗药物,顺铂对各类肿瘤的作用被广泛报道,包括其对宫颈癌细胞的抑制作用[13]㊂本研究结果还表明,顺铂对HeLa细胞的生长与迁移具有抑制作用,这些结果与前人的报道相一致㊂关于顺铂通过抑制Nrf2调节HeLa人宫颈癌细胞生长与迁移的潜在机制,本研究主要关注了顺铂对HeLa人宫颈癌细胞自噬依赖性的细胞凋亡的影响㊂据报道[14],自噬在化疗药物发挥作用中有重要的作用㊂有证据[15-16]显示,宫颈癌细胞中自噬作用的增强促进了宫颈癌细胞的凋亡,但也有研究[17-18]证实阻断自噬增加了耐药宫颈癌细胞对顺铂的敏感性㊂本研究结果显示,顺铂促进HeLa细胞的自噬并增加细胞凋亡㊂　表2　顺铂对HeLa细胞自噬及凋亡的影响(n i=6;x±s)分组GFP⁃LC3B阳性面积/%mCherry⁃LC3B阳性面积/%细胞凋亡率/%对照组 5.4±1.5 3.2±1.87.3±0.2顺铂2.5μmol/L组22.0±1.4*20.4±1.5*20.6±0.2*顺铂5.0μmol/L组22.9±1.8*22.1±1.6*63.1±0.6*#顺铂10.0μmol/L组29.5±3.6*#▲28.1±3.2*#▲68.4±0.3*#▲F126.62150.2544835.04P<0.01<0.01<0.01MS组内 5.004 4.5520.124 q检验:与对照组比较*P<0.05;与顺铂2.5μmol/L组比较#P<0.05;与顺铂5.0μmol/L组比较▲P<0.05　表3　顺铂对HeLa细胞中Nrf2表达的影响(n i=6;x±s)分组细胞质Nrf2蛋白相对表达水平细胞质Nrf2蛋白相对表达水平细胞核内Nrf2荧光强度(总光密度)对照组 3.7±0.3 1.1±0.1411.0±30.3顺铂2.5μmol/L 2.2±0.1* 2.2±0.1*1438.7±69.0*顺铂5.0μmol/L 2.2±0.2* 3.9±0.2*#1730.5±37.5*#顺铂10.0μmol/L 1.1±0.1*#▲ 3.9±0.3*#2163.3±57.9*#▲F219.46351.791278.08P<0.01<0.01<0.01MS组内0.0310.0322607.613 q检验:与对照组比较*P<0.05;与顺铂2.5μmol/L组比较#P<0.05;与顺铂5.0μmol/L组比较▲P<0.05 综上,顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和细胞凋亡,并抑制细胞的活性和迁移能力㊂[参考文献][1]　许驰,何玉.宫颈癌筛查方法的现状及进展[J].蚌埠医学院学报,2018,43(11):1538.[2]　周莉,陆安伟.局部晚期宫颈癌治疗的争议与对策[J].中国实用妇科与产科杂志,2019,35(10):1116.[3]　何白云,王艳林,黄利鸣.细胞自噬与宫颈癌关系的研究进展[J].现代妇产科进展,2018,27(2):149.[4]　邹霞,郑建英,赖开发,等.RAC3激活Akt通路促进宫颈癌对顺铂耐药的实验研究[J].临床肿瘤学杂志,2020,25(6):516.[5]　TAO S,ROJO 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粉防己碱诱导宫颈癌细胞凋亡的定性定量研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：朱克修，李玢，邓卓，袁彩萍，慕建宁，韩晓兵【摘要】目的从定性定量角度探讨粉防己碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用。

方法采用MTT法检测不同浓度粉防己碱作用不同时间对人宫颈癌HeLa细胞株的增殖抑制作用。

通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况。

结果粉防己碱对宫颈癌HeLa细胞具有增殖抑制作用，且呈时间、浓度依赖性。

应用流式细胞仪检测到15μmol/L粉防己碱诱导HeLa细胞产生的凋亡率为(51.8±0.97)%，显著高于对照组凋亡率(24.3±1.23)%(P0.05)。

通过激光共聚焦显微镜观察，与对照组比较，粉防己碱作用后HeLa细胞具有明显的凋亡形态。

结论粉防己碱能够抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡。

【关键词】粉防己碱；宫颈癌；凋亡；ChinaABSTRACT: Objective To study the effects of tetrandrine on apoptosis of HeLa cervical cancer cells qualitatively and quantitatively. Methods We measured tetrandrine-inducedinhibition of HeLa cell proliferation at different concentrations and time points by MTT assay. The rate of Hela cell apoptosis induced by tetrandrine was detected by flow cytometer and confocal laser scanning microscope (CLSM). Results Tetrandrine inhibited the proliferation of HeLa cells in dosage- and time-dependent manners. Flow cytometry showed that the apoptosis rate was (51.8±0.97)% at the concentration of 15μmol/L, which was significantly higher than that in the control group (24.3±1.23)% (P0.05). The cells treated with tetrandrine showed typical apoptotic morphology under CLSM. Conclusion Tetrandrine can inhibit proliferation and induce apoptosis of HeLa cervical cancer cells.KEY WORDS: tetrandrine; cervical cancer; apoptosis全球每年估计约有470000例新增的宫颈癌病例，并且每年约有230000例宫颈癌患者死亡。

膜联蛋白A4与妇科肿瘤关系的研究进展陈勇华;王桂青【摘要】膜联蛋白A4（Anxa4）是膜联蛋白超家族中的重要成员之一，介导细胞凋亡、分化，参与肿瘤的增殖、侵袭和转移、血管发生和化疗耐药等。

近年多项研究表明Anxa4在不同类型的卵巢癌及子宫内膜癌等肿瘤中差异表达：相对于化疗敏感的卵巢浆液性癌，化疗抗拒（chemoresistant）的卵巢透明细胞癌高表达Anxa4，恶性程度较高的子宫内膜浆液性癌相对于子宫内膜样腺癌则高表达Anxa4，但相对于母系卵巢浆液性腺癌细胞系，铂类抗拒的子细胞系低表达Anxa4， Anxa4高表达与宫颈癌细胞系HeLa细胞抗拒化疗药物所诱导的凋亡有关。

而Anxa4与上述肿瘤化疗敏感性相关的分子机制涉及钙离子信号等通路调节、化疗药物转运等相关的“非基因转录效应”，还有与核因子κB（NF-κB）信号通路相关的“基因转录效应”。

就Anxa4与妇科肿瘤间的关系进行综述，探寻分子靶向Anxa4治疗肿瘤的研究依据。

%Annexin A4 (Anxa4) is an important member of the annexin protein superfamily which mediates cellular apoptosis, differentiation and regulates proliferation, invasion, metastasis, angiogenesis and chemoresistance of cancer. Recent studies showed that Anxa4 has changes in expression levels in many cancers such as different types of ovary and endometrial cancer: chemoresistant ovarian clear cell carcinoma compared with chemosensitive serous adenocarcinoma of the ovary and uterine serous carcinoma with aggressive biological behavior compared with uterine endometrioid carcinoma, Anxa4 is overexpressed. But in comparison with the sensitive parental cell line, Anxa4 is less expressed in the cisplatin-resistant ovarian serous adenocarcinoma cell line.Overexpression of Anxa4 induced resistance against apoptotic stimulation by chemotherapeutic drugs. Anxa4 accomplishes its biological functions associated with tumour chemosensitivity through a non-transcriptional mechanism via the regulation of calcium signals pathway and anti-cancer drugs transport, and also exerts its biological process through a transcriptional mechanism via NF-κB rela ted genomic effect. In the article, we review about studies on the relationship between Anxa4 and gynecologic tumour to provide research data about molecular-targeted Anxa4 treatment.【期刊名称】《国际妇产科学杂志》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】4页(P575-578)【关键词】膜联蛋白A4;转录,遗传;钙信号;生殖器肿瘤,女(雌)性【作者】陈勇华;王桂青【作者单位】264000 山东省烟台市，青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院;264000 山东省烟台市，青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院【正文语种】中文膜联蛋白 A4（Annexin A4，Anxa4）是膜联蛋白超家族中的重要成员之一，由于膜联蛋白具备与钙离子结合的能力，因此Anxa4能够参与钙离子通道建立、钙信号传导等一系列依赖于钙离子的“非基因转录效应”的生物学活动。