第二讲菌种保藏
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菌种保藏和复苏-精简版菌种的保藏与复苏一、菌种保藏(一)菌种保藏的定义菌种保藏(culture preservation)是指将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏,避免死亡、污染,保持其原有性状基本稳定。
菌种保藏有许多的方法,其共同的目标是把菌株的优良性状保存下来,防止退化、死亡或杂菌污染。
(二)菌种保藏的原理微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但大都是根据这三个因素而设计的。
其中低温是保藏菌种的重要因素,也是常用的一种简单易行的方法。
在作低温保藏时,注意尽量不损伤细胞。
在缓慢冷冻时,胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高,造成细胞水分外渗而大量脱水,可能使细胞死亡。
如快速降温,胞内也很快形成冰晶,胞内外渗透压基本平衡,同时胞内冰晶较小,对细胞及原生质膜的损伤也较小,菌株不易死亡,影响也较小。
与低温相关的保藏方法,如冷冻干燥法、超低温保藏法等,都是利用低温条件下细胞与环境的特殊平衡原理而设计的。
(三)菌种保藏的方法本实验室常用菌种保藏方法主要有:1.低温保藏法将菌种接种在适宜的固体或液体培养基上,待菌生长充分以后,转移至4°C冰箱中保存。
平板在4°C存放时,最好用封口膜封口,不能长时间存放,一般7-10天,最多不应超过2个星期(特殊菌株可能时间更短,如铜绿假单胞菌只能存放3天)。
此法仅用于工作用菌种的短期保存,并应随时检查其污染杂菌和变异等情况,发现异常情况,应经灭活处理后销毁。
2.甘油冷冻管保藏法菌种长时间冻存应放于液氮或者-80 °C冰箱,利用10-15%的甘油进行冻存。
甘油的作用:甘油能够提高水体的粘稠度,使其冰点提高,防止细胞内部产生冰晶造成细胞的损害,一般使用甘油的终浓度在10%-20%,该范围外的浓度会对细胞产生毒性,如果是保存带有质粒的菌种建议甘油终浓度为8-10%,甘油浓度太高会导致质粒的不稳定。
菌种的保藏
菌种保藏的措施
斜面传代保藏方法
是将菌种定期在新鲜琼脂斜面培养逐上、液体培养基中或穿刺培养,然后在低温条件下保存。
它可用于实验室中各类微生物的保藏,此法简单易行,且不要求任何特殊的设备。
但此方法易发生培养基于枯、菌体自溶、基因突变、菌种退化、菌株污染等不良现象。
因此,要求最好在基本培养基上传代,目的是能淘汰突变株,同时转接菌量应保持较低水平。
斜面培养物应在密闭容器中于5℃保藏,以防止培养基脱水并降低代谢活性。
此方法一般不适宜作工业生产菌种的长期保藏,一般保存时间为3~6个月。
例如,放线菌于4~6℃保存,每3个月移接1次;酵母菌于4~6℃保存,每4~6个月移接1次;霉菌于4~6℃保存,每6个月移接1次。