腺苷脱氨酶(ADA)

腺苷脱氨酶检测方法研究进展【摘要】腺苷脱氨酶是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属巯基酶，能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。

测定体液中ada活性对临床某些疾病的鉴别、诊断、治疗以及免疫功能研究等具有重要意义。

本文对各种检测腺苷脱氨酶活性的方法学做了评述，并对检测腺苷脱氨酶新技术进行了展望。

【关键词】腺苷脱氨酶；方法学；研究进展；综述1 ada的生物化学腺苷脱氨酶（ada）广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。

血液ada主要存在于红、白细胞(淋巴细胞、粒细胞)中,其含量为血清中的40-70倍。

ada 有两种同工酶即ada1和ada2,其主要作用是催化腺苷, 2’-脱氧腺苷脱氨转化为肌苷和2’-脱氧肌苷。

ada1普遍存在于人体内，保证了其作用底物腺苷和2’-脱氧腺苷含量的下调，因为一个较低水平的腺苷、2’-脱氧腺苷对人体细胞发挥正常生理功能十分有益。

它也存在于红细胞内，红细胞可通过某种有效的机制获取2’-脱氧腺苷并使其内在化。

因此，红细胞对循环的2’-脱氧腺苷形成了一个透析系统，以保护有核细胞不被过多的2’-脱氧腺苷损伤。

2 方法学发展趋势近十几年来，随着对ada的深入研究，检测方法也不断发展。

现对检测腺苷脱氨酶活性的方法主要特点进行简述：腺苷测定法[1]: ada将腺苷脱氨产生次黄苷和氨。

一个ada活性单位在测试特定条件下每分钟脱氨1μmol腺苷成为次黄苷。

通过动态测量腺苷265nm处吸光度下降的速度，可以测算ada的活性大小，kaplan法由此建立。

由于高底物浓度造成吸光度过高，该法仅适用于腺苷浓度低于40μmol/l。

如此低的底物浓度达不到底物饱和要求，造成ada活性检测失真。

因此，该法不适用于临床应用。

奈氏显色法[2]：原理为腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷水解，产生次黄嘌呤核苷和氨。

ada催化底物产生的氨与奈氏试剂作用，然后进行比色测定。

腺苷脱氢酶（ADA）一、定义腺苷脱氨酶（Adenosine deaminase）是一种参与嘌呤代谢作用的酶。

它是用作拆解食物组织中的核酸中的腺苷。

在人体中，它主要参与了免疫细胞的制造；若该酶突变，会造成T细胞、B细胞、自然杀伤细胞皆无法表现的严重复合型免疫缺乏症(SCID)二、异构体有两种ADA同种型：ADA1和ADA2。

（一）ADA1存在于大多数体细胞中，特别是淋巴细胞和巨噬细胞中，它不仅存在于胞质溶胶和细胞核中，而且还存在于与二肽基肽酶-4（aka，CD26）连接的细胞膜上的外胚层中。

ADA1主要参与细胞内活动，并且以小形式（单体）和大形式（二聚体）存在。

小型到大型的相互转换受肺中“转换因子”的调节。

（二）ADA2首次在人类脾脏中发现。

随后在包括巨噬细胞在内的其他组织中发现它与ADA1共存。

这两种同种型调节腺苷与脱氧腺苷的比例，增强了寄生虫的杀灭。

ADA2主要存在于人血浆和血清中，并且仅作为同型二聚体存在。

三、临床意义（一）、用于肝胆疾病的诊断1．急性肝炎患者ADA与ALT均显著升高。

乙型肝炎患者ALT的升高大于ADA，而非甲非乙肝炎病人ADA的升高大于ALT，非甲非乙肝炎患者ADA活性极度升高者多易转变为迁延性肝炎。

2．慢性肝炎患者ADA活性均升高，慢性活动型肝炎比非活动型升高更甚。

3．肝纤维化、肝硬化及慢性肝炎患者ADA活性显著升高而ALT 不升高，所以同时测定ALT和ADA更具有临床价值。

4．阻塞性黄疸ADA不升高，而肝细胞性黄疸ADA活性升高，因此测定血清ADA有助于黄疸类型的鉴别诊断。

（二）、用于结核性胸膜炎及结核性腹膜炎的诊断胸腹腔积液ADA活性测定，可区别胸腹腔积液的性质。

结核性胸膜炎及结核性腹膜炎病人胸腹腔积液中ADA活性明显高于癌症和心衰性胸腔积液中的ADA活性，且积液中ADA/血清ADA的比值大于1，所以测定胸腹水和血清ADA活性及比值是诊断结核性胸膜炎和结核性腹膜炎的一项可靠有效的指标。

腺苷脱氨酶与临床疾病的相关性摘要】腺苷脱氨酶（ADA）它能催化腺苷和脱氧腺苷脱氨生成次黄苷和脱氧次黄苷,最终氧化成尿酸排出体外,并与细胞免疫反应相关。

ADA是由T淋巴细胞(T 细胞)产生的,ADA含量与T细胞数相关,与T细胞的增殖、分化关系更为密切。

腺苷脱氨酶广泛分布在人体组织中，它与多种疾病的发生、发展关系密切，测定其活性有助于肝脏疾病；恶性血液病；良、恶性胸腔积液；中枢神经系统感染性疾病的早期诊断与鉴别诊断。

【关键词】腺苷脱氨酶肝脏疾病恶性血液病良、恶性胸腔积液中枢神经系统感染性疾病1 腺苷脱氨酶代谢及分布腺苷脱氨酶(ADA),系统命名为腺嘌呤核苷酸氨基水解酶,编号为Ec 3、5、4、4,分子量:35kD,100kD。

ADA是一种巯基酶,是嘌呤核苷酸代谢的关键酶。

ADA有3种,其中2种为单体酶,另1种为酶-糖蛋白结合体。

ADA有两种同功酶ADA1和ADA2,它能催化腺苷和脱氧腺苷脱氨生成次黄苷和脱氧次黄苷,最终氧化成尿酸排出体外,并与细胞免疫反应相关。

ADA广泛分布在人体组织中,以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高,在纤维细胞、羊水细胞、肝、肾、肺、骨胳肌中也有发现,血液中ADA主要存在于红、白细胞(淋巴细胞、粒细胞)中,其中含量为血清中的40～70倍，各种细胞内ADA含量各不相同，淋巴细胞ADA活性较红细胞高10倍以上[1]。

ADA是由T淋巴细胞(T细胞)产生的,ADA含量与T细胞数相关,与T细胞的增殖、分化关系更为密切。

目前ADA检测试剂已标准化,可应用全自动生化分析仪进行检测，ADA目前可用于胸腹水良恶性鉴别[2]、肝脏疾病的诊断、中枢神经系统感染性疾病鉴别及恶性血液病诊断的研究。

ADA对这些疾病的诊断、疗效观察和发病机制的相关性研究已有很大进展，本文对其临床应用作一简要综述。

2 腺苷脱氨酶与临床疾病2.1 腺苷脱氨酶与肝脏疾病肝脏疾病患者中血清ADA升高常提示病情不断进展,可反映肝脏储备合成功能逐渐降低。

检验科腺苷脱氨酶（ADA）标准操作规程【目的】体外检测血清腺苷脱氨酶（ADA）含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。

2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理ADA腺苷 + H2O 次黄甘 + 氨PNP次黄甘+磷酸次黄嘌呤+核糖-1-磷酸XOD次黄嘌呤+2H2O 尿酸+H2O2POD2H2O2+4-AA+TOOS+H3+O 红色苯醌色素+5H20在上述反应中，通过在546nm处测定红色苯醌色素生成速率，即可测得样本中腺苷脱氨酶（ADA）的活性。

二、试剂1.试剂本科使上海复星长征医学科技有限公司ADA试剂盒，为液体双试剂。

各组分如下：试剂1（R1）4-氨基安替比林 0.4g/L嘌呤核苷酸磷酸化酶 1.3KU/L黄嘌呤氧化酶 2KU/L过氧化物酶 2KU/L试剂2（R2）TOOS 0.9g/L腺苷 4.0 G/L2.校准要求2.1使用与试剂配套使用的复星长征腺苷脱氨酶校准血清对测定进行校。

2.2校准间隔2.2．1 试剂批号变更时，使用与试剂配套使用的复星长征校准品对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。

三、操作按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数，并按校准、质量控制、样本测定的顺序进行常规测定。

血清腺苷脱氨酶ADA测定1.实验原理应用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)，黄嘌呤氧化酶(XOD)和过氧化物酶(POD)反应连续监测法。

ADA酶解腺苷(Adenosine)脱氨产生次黄苷(Inosine)；再通过偶联PNP的作用，生成次黄嘌呤(Hypoxanthine);后者在XOD氧化作用下生成尿酸和过氧化氢；最后在POD的作用下H2O2再与N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺(EHSPT)、4-氨基安替比林(4-AAP)反应(Trinder氏反应)，生成紫红色的有色醌。

通过测量有色醌550nm处吸光度上升的速度来测算ADA的活性。

ADAAdenosine + H2O Inosine + NH3PNPInosine + Pi Hypoxanthine + Ribose 1-phosphateXODHypoxanthine + 2H2O + 2O2 Uric acid + 2H2O2POD2H2O2 + 4-AA P+ EHSPT 4H2O + Quinone dy e2. 标本：2.1 病人准备：新鲜血清，采血后应及时分离，避免溶血。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：血清，采血后应及时分离避免溶血，ADA在4℃稳定一个星期。

4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：亚太ADA试剂盒（H013 090920 试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为12个月。

试剂必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：试剂出现颗粒或浑浊，被视作变质，应停止使用。

6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。

请勿吞服。

6.2 校准品：使用亚太提供的专用校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。

腺苷脱氨酶偏高的原因
一、腺苷脱氨酶偏高的原因二、腺苷脱氨酶测定的临床意义三、腺苷脱氨酶偏高要注意什么
腺苷脱氨酶偏高的原因1、腺苷脱氨酶偏高的原因是什么
腺苷脱氨酶反映肝损伤的指标,与ALT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变,偏高反应肝损伤,但不如ALT等转氨酶敏感。

腺苷脱氨酶偏高是肝炎的一种体现,意味着你有肝炎疾病,这种病的引起的因素比较多,当然也有一种比较极端的因素,就是那种先天性肝脏有缺陷的人群。

2、腺苷脱氨酶是什么
腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类,属于巯基酶,每分子至少含2个活性巯基,其活性能对氯汞甲酸完全抑制。

ADA广泛分布于人体各组织中,以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高,肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。

血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞,其活性约为血清的40～70倍,T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。

腺苷脱氨酶是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶。

3、腺苷脱氨酶第四代测试方法介绍
最新对第四代测试方法的改进为偶联PNP,XOD和过氧化物酶(Peroxidase,POD)反应。

ADA酶解腺苷(Adenosine)脱氨产生次黄苷(Inosine);再通过PNP的作用,生成次黄嘌呤(Hypoxanthine);后者在XOD氧化下生成尿酸(Uric Acid)和过氧化氢(H2O2);最后在POD的作用下H2O2再与N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline。

腺苷脱氨酶活性测定对临床疾病的诊断意义
魏小文;陈晨
【期刊名称】《海军医学杂志》
【年(卷),期】2005(26)1
【摘要】腺苷脱氨酶(adenosine deaminase，ADA)是一种核酸分解代谢酶类，可特异性催化腺嘌呤核苷产生不可逆脱氨反应，生成次黄嘌呤，最终氧化成尿酸排出体外。

它广泛分布于人体组织中，以盲肠、脾中含量最多，在纤维细胞、羊水细胞及肝、肾、肺、骨胳肌中也有存在。

血液中红细胞、白细胞(淋巴细胞、粒细胞)ADA含量为血清中的40～70倍。

近年来，ADA在一些疾病的早期诊断、治疗以及免疫障碍的发病机理研究中受到重视，体液中ADA的测定已越来越广泛应用于临床。

【总页数】3页(P78-80)
【作者】魏小文;陈晨
【作者单位】解放军第四二一医院检验科,广东,广州,510318;解放军第四二一医院检验科,广东,广州,510318
【正文语种】中文
【中图分类】R34
【相关文献】
1.血液疾病患者血清腺苷脱氨酶活性测定的临床意义 [J], 冯立民;殷舟;杨荣伟
2.血清腺苷脱氨酶测定在肝脏疾病诊断中的意义 [J], 张育群
3.结核性脑膜炎患儿脑脊髓液中腺苷脱氨酶活性测定的临床意义 [J], 程金玲
4.胸水腺苷脱氨酶活性测定在结核性与恶性胸腔积液鉴别诊断中的意义 [J], 刘爱莉
5.脑脊液腺苷脱氨酶测定在中枢神经系统疾病诊断的意义 [J], 胡全美;杨臣字因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

腺苷脱氨酶在结核性胸水中的诊断价值目的：比较结核性胸水腺苷脱氨酶（ADA）和非结核性胸水ADA活性差异和诊断阳性律，并观察不同年龄组结核性胸水中ADA活性水平和诊断的阳性率。

方法：对80例结核性胸水患者和48例非结核性胸水ADA进行分析，并以60岁为界限分为两组，进行组间ADA活性和诊断结核阳性率比较。

结果：结核性胸水患者中ADA活性高于非结核性胸水患者的ADA，并且ADA诊断结核性胸膜炎的阳性率高于后者。

另外，结核性胸水ADA在不同年龄组间无显著性差异。

结论：胸水中ADA的检测对结核性胸水的临床诊断有较大帮助。

标签：腺苷脱氨酶；结核性胸水；敏感性胸腔积液是呼吸科常见症状，其原因较多，其中较常见的由结核性、细菌性、癌性、结缔组织疾病等病因引起。

常规的胸水常规、生化检查虽对临床诊断有一定提示意义，但尚不能仅凭此确诊。

而胸膜活检虽然对诊断有一定特异性，但相对创伤较大，并且阳性率较低[1]。

近年来随着诊疗水平的提高，临床上对胸水中腺苷脱氨酶（ADA）的研究较多，均认为其对结核性胸腔积液有较高的诊断价值。

本文收集100例确诊为结核性胸膜炎伴胸腔积液的患者的ADA数据进行分析，并与48例非结核性胸水的ADA对比，借以评价ADA在结核性胸水中的诊断价值。

1 资料和方法1.1 研究对象本院2012年12月末至2014年12月末因胸腔积液住院的患者中，由胸水涂片或胸水培养，或者胸膜活检，抑或经诊断性抗结核治疗而痊愈的患者共100例，其中男性53例，女性47例，平均年龄（52.8±21.3）岁。

将其分为小于60岁组和大于等于60岁组。

同期住院的非结核性胸水患者48例，其中癌性胸水28例，结缔组织疾病所致胸水5例，各种心脏病所致心衰性胸水8例，细菌性胸水7例。

其中男性21例，女性27例，平均年龄（50.8±17.3）岁。

1.2 测定方法所有病例均在常规无菌操作下抽取胸腔积液，留取标本5ml，离心留取上清液冻存-40℃待测。

前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。

本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。

本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。

本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。

本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。

本规程主要起草人：蒙凯、蔡其浩、张丽伟。

本规程首次起草。

目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数腺苷脱氨酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清腺苷脱氨酶（,缩写ADA）测定；临床医生根据需要提出检验申请。

2.标本采集与处理2.1 受检者的准备：采血前2周保持平时的饮食习惯，3d内避免高脂饮食，24h内不饮酒，空腹12h后采集标本。

体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带，不抗凝，置普通试管中。

ADA的意义1用于判断急性肝损伤及残留病变急性肝炎时ALT明显升高。

ADA仅低度，中度升高。

但重症肝炎发生酶胆分离时，尽管ALT不高，而ADA常明显升高。

急性肝炎后期ADA升高率高于ALT，其恢复正常时间也较后者迟，并与组织学恢复一致。

ALT恢复正常而ADA持续升高者，常易复发或易迁延为慢性肝炎。

2协助诊断慢性肝病在反映慢性肝损伤时ADA较ALT为优。

慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌患者血清ADA活性显著升高，因而可判断慢性肝病的程度。

另外，慢性活动性肝炎活性明显高于慢性迁延性肝炎。

3有助于肝纤维化的诊断 ADA活性差异与肝细胞损害关系不大，与肝纤维化程度相关。

肝纤维化程度增加，ADA活性增加。

4有助于黄疸的鉴别据文献报道，阻塞性黄疸血清ADA活性明显低于肝细胞性黄疸及肝硬化伴黄疸。

5浆膜腔积液的鉴别诊断腺苷脱氨酶(ADA)检测意义，国内外研究表明ADA对诊断结核性渗出液的特异性和敏感性明显优于活检和细菌学等法。

结核性胸腹腔积液ADA活性显著增高，癌性胸腹腔积液不增高，而血清中ADA活性二者差异无显著性。

另外，腺苷脱氨酶(ADA)检测意义，脑脊液ADA检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标。

结核性脑膜炎显著增高，病毒性脑炎不增高，颅内肿瘤和中枢神经系统稍增高。

5-NT意义⒈ 5-NT活性增高常见于原发性和转移性肝癌、胆道癌、胰腺癌、胆道阻塞、胆管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、药物性肝损伤。

其活性增高可达2～6倍，且与病情严重程度呈正相关。

⒉ 5-NT是诊断肝肿瘤非常灵敏的酶学指标。

在病变早期，当肝功能、肝扫描和有关肝病检查阴性时本酶活性已明显增高。

对于AFP阴性病例，其与AFP互补诊断肝癌的阳性率可达94％。

⒊特异性高，能协助判断碱性磷酸酶（ALP）增设是肝胆系统疾病，还是骨髓系统疾病（如骨癌、骨肉瘤、骨转移癌、佝偻病等）。

ALP在肝胆系统疾病和骨骼系统疾病时均可增高。

除5-NT除肝胆系统疾病增高外，骨骼系统疾病一般均不升高。