赫克斯海默氏染色法

1）瑞氏染色法：为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须进行染色。

瑞氏染色法是血细胞分析最经典和最常用的染色法。

瑞氏染料：是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料。

染色原理：是染料透入被染物并存留其内部的一种过程，此过程既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。

因此，染色后同一血片上各种细胞可以染上各自特征性的颜色。

pH值的影响：细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中下正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

2）姬姆萨染色法：姬姆萨染液由天青、伊红组成。

姬姆萨染色原理和结果与瑞氏染色基本相同，但对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则染色较差。

HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。

以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。

之杨若古兰创作Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(次要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察后果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性感化更小一些，所以普通来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步调PI(Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，经常使用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不克不及透过完好的细胞膜，但凋亡中初期的细胞和坏死细胞因为细胞膜通透性的添加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能暗示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然初期凋亡PI亦可着色）.但是如果您只是想晓得细胞的死亡情况，而不是细心区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也能够.但是如果您必定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色明显不敷！annexin-v染色细胞凋亡初期,细胞膜标记发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.如许,Annexin-v 染色阳性,暗示细胞处于初期凋亡形态.Annexin-V结合分歧的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生.Annexin V用FITC标识表记标帜发绿色荧光；如果用PE标识表记标帜就发红色荧光.JC-1染色 JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时次要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以构成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主.线粒体本人存在必定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极.电位差由Ca2+、Na+和H+流调控.当线粒体形态良好时对JC-l摄取量少，因此在线粒体内次要以单体的方式存在绿光强度/红光强度的比值较高.在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的方式存在，绿光强度/红光强度的比值降低.JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形状、体积和密度都有关，因此能更好地反映线粒体的功能形态.因为凋亡发生的初期存在线粒体的去极性，是以，JC-1染色被用于检测凋亡的初期发生.其实验方法如下.JC-l染色非常简单.首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液浓缩至10ug/ml 终浓度.对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察.线粒体形态好时细胞以绿色为主，当红光旌旗灯号加强时，红绿相叠，以橙色为主.该染色应用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿旌旗灯号强度，计算其强度比.钙黄绿素-AM(Calcein-AM):Calcein -AM本人其实不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶感化，Calcein -AM能脱去AM 基，发生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）.是以Calcein -AM仅对活细胞染色细胞活力鉴定——台盼蓝染色法道理：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色.而活细胞能禁止染料进入细胞内.故可以鉴别死细胞与活细胞.用品：1. 4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保管.使用时.用PBS浓缩至0.4%.2. 吸管、血细胞计数板、显微镜步调：1、制备单细胞悬液.并作适当浓缩（106细胞/ml）2、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀.3、计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞结果统计：镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染.根据下式求细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100留意事项：台盼蓝染细胞时，时间不宜过长.否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数.台盼蓝染色道理通常认为细胞膜丧失完好性，细胞即可被认为曾经死亡.台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完好性最经常使用的生物染色试剂.健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完好性丧失，通透性添加，细胞可被台盼蓝染成蓝色.根据此道理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析.试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的道理，试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的缘由死细胞的细胞膜无屏障感化，台盼蓝马上进入细胞而显蓝色.活细胞细胞膜有选择透性，对台盼蓝的透性小，进入细胞慢.若染色时间过长，台盼蓝可能通过胞吞或胞饮感化进入细胞.。

染色是利用细胞中各种结构的生化组成不同，对染料的亲和力不同，而显示不同的颜色，使细胞的形态和结构易于辨认。

常用的染色有HE、巴氏及瑞-姬氏染色，其特点如下。

1.HE染色：此法染色效果也好，只是胞质色彩不丰富，不能用于观察阴道涂片对雌激素水平测定。

优点是操作简易，试剂易配制。

2.巴氏染色：此法染色特点是细胞具有多色性，色彩丰富鲜艳，胞内结构清晰，染色效果好，是细胞病理学检查常用的方法，尤其是观察女性雌激素水平对阴道上皮细胞的影响。

此法的缺点是操作程序复杂。

3.瑞一姬氏染色：此法适用于血片、淋巴穿刺液和胸腹水涂片。

病理切片的结果分析方法HE染色：又称苏木素-伊红染色法，其中苏木素是Hematoxylin，简称H，伊红是Eosin，简称E，这是是普通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死的一种染色方法。

这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。

经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

检验原理：* 苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。

被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性(Basophilic)。

* 伊红是酸性染料，粉红色。

可以将大多数细胞的细胞质染成红色。

被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性(Acidophilic)。

* 不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。

结果：细胞核呈蓝色，细胞质，肌纤维，胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。

钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。

Masson三色染色：主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。

Masson染色是最为常用的结缔组织染色法，此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布，纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。

对酒精性肝硬化/坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重要价值。

Masson染色在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积，对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。

检验原理：利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。

根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成份显示出来结果：细胞核呈黑色，肌纤维呈红色，胶原纤维呈亮绿色。

抗酸染色法: acid－fast staining method 1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。

HE染色法名词解释1. 引言在细胞学和组织学研究中，染色技术是一种非常重要的方法，可以通过染色剂将细胞和组织的结构及其组成部分可视化。

HE染色法（Hematoxylin and Eosin staining）是一种常用的染色方法，被广泛应用于组织学和病理学领域。

本文将对HE染色法进行详细解释。

2. HE染色法的原理HE染色法是通过对细胞和组织中的酸性成分和碱性成分进行染色，以区分它们的分布和结构。

该方法结合了两种染色剂：血红木素（Hematoxylin）和红精（Eosin）。

2.1 血红木素染色血红木素染色的目的是染色细胞核和呈碱性的细胞质。

血红木素是从天然产物血树中提取得到的紫色染料，它对酸性物质有亲和力。

在HE染色法中，血红木素溶液通常是呈酸性的，它可以与细胞核中的核酸结合形成复合物，使细胞核染上紫色。

另外，细胞内已染色的AB-PAS（Alcian Blue–Periodic Acid-Schiff）阳性物质也能与血红木素反应，被染成紫色。

2.2 红精染色红精染色的目的是给细胞胞质和特定细胞成分染色，以鉴别组织中的细胞类型和组织结构。

红精是一种酸性的有机染料，它对蛋白质和细胞膜等酸性物质有亲和力。

在HE染色中，红精溶液通常是呈碱性的，它可以与细胞胞质和胶原纤维等酸性成分反应，使其染上红色。

3. HE染色法的步骤HE染色法通常包括以下步骤：3.1 组织固定首先，需要将待染色的组织标本经过固定处理，使组织中的细胞和结构保持在染色过程中的原始状态。

常用的固定剂有福尔马林和乙醛溶液等。

3.2 组织脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以使组织中的水分逐渐被有机溶剂代替。

常用的有机溶剂有乙醇和二甲苯等。

组织脱水的目的是为了使组织中的脂质和有机物质逐渐转变为透明状态，为后续的染色提供条件。

3.3 组织浸渍在脱水之后，需要将组织标本浸入熔蜡中，使其浸透均匀并变得硬化。

这个步骤被称为组织浸渍。

3.4 组织切片组织浸渍后，需要将标本切割成薄片，通常为5-7μm厚。

几种常用的染色方法一、美兰染色法在已染色、固定好的抹片上，滴加适量的（足够覆盖涂抹点即可）美兰染色掖，经1—2分钟，水洗，干燥（可用吸水纸吸干，或自然干燥，但不能烤干），镜检。

二、革兰氏染色法1、在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色掖，经1—2分钟，水洗。

2、加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3分钟，水洗。

3、加95%酒精于抹片上脱色，约30秒至1分钟，水洗。

4、加稀释石炭酸复红（或沙黄水溶液）复染10—30秒，水洗。

5、吸干或自然干燥，镜检。

革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

三、抗酸染色法1、萋—尼氏抗酸染色法：首先在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰微微加热至发生蒸气为度（不要煮沸），维持微微发生蒸气，经3—5分钟，水洗。

然后用3%盐酸酒精脱色，至标本无色脱出为止，充分水洗。

再用碱性美兰染色液复染约1分钟，水洗。

最后吸干，镜检。

抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。

2、又法之一：滴加石炭酸复红液于抹片（在已干燥固定过的）上染1分钟，水洗；再用1%美蓝酒精溶液复染20秒，水洗，干燥，镜检。

抗酸菌红色。

镜检前对光检查染色片，标本片务必全呈蓝色，如标本片呈现红色或棕色，表示复染不足，应在作复染5—10秒，再观察，如仍未全呈蓝色时，仍可反复复染，至符合要求为止。

四、瑞特氏染色法1、抹片自然干燥后，滴加瑞特氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可多加些，或者看情况补充滴加；经1—3分钟，再加约与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，经5分钟左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干，镜检。

细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其他颜色。

2、另一染色法：抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况补滴，维持不使变干；染色3—5分钟，直接以水冲洗，吸干或烘干，镜检。

此法的染色液经滤纸滤过，可大大避免沉渣粘附抹片上而影响镜检观察。

实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。

联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。

试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。

2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。

3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。

4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。

5．瑞氏(Wright)染色液。

6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。

操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。

2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。

3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。

4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。

注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。

2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。

3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。

涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。

若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。

4．染色液pH应为5.5。

一、HE染液的配制：1、Harris苏木素：称取苏木素精1g一氧化汞0.5g硫酸铝钾20g量取无水乙醇10ml蒸馏水200ml苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存。

使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。

2、0.5%伊红(水溶性)：称取伊红0.5g量取95%乙醇25ml蒸馏水75ml先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。

白色小磨口试剂瓶密封保存。

3、1%盐酸水溶液：盐酸3ml蒸馏水297ml混匀，白色试剂瓶保存。

4、中性树胶封片剂：往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稠度即可。

试剂: 二甲苯1瓶Harris苏木素染液无水乙醇2瓶1%盐酸水溶液95%乙醇2瓶0.5%伊红(水溶性)染液中性树胶封片剂二、染色步骤1、电吹风吹片或烤片，至溶蜡；2、入二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；3、入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体；4、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；5、入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；6、入95%乙醇3分钟；7、入流水2分钟，用吸水纸吸干水分；8、Harris苏木素染色4~8分钟；9、自来水稍洗；10、1%盐酸水溶液分化5~10秒（切片由蓝变红）；11、自来水洗返蓝15~30分钟；12、0.5%伊红(水溶性)染色30秒~1分13、95%乙醇（I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；14、95%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；15、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；16、入100%乙醇（II）2分钟，用吸水纸吸干液体；17、入二甲苯（I）中透明2--3分钟，用吸水纸吸干液体；18、入二甲苯（II）中透明5分钟；19、中性树胶封片。

HE染色实验步骤HE染色是一种常用的细胞染色方法，用于染色细胞核和胞质。

以下是HE染色实验的详细步骤：1.组织样本的固定：将组织样本（如组织切片）固定在玻片上，以使其保持形态和结构。

常见的固定剂有甲醛、乙醇等。

将切片置于固定剂中浸泡一段时间，通常为24小时。

2.脱水：将固定的组织样本进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水过程常采用不同浓度的乙醇溶液，从低浓度到高浓度逐渐浸泡，通常为70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和绝对乙醇。

每个乙醇浓度的浸泡时间可以根据需要调整，但通常为2-3分钟。

3.渗透：为了使切片更容易与染料接触并吸收，需要对其进行渗透处理。

常见的渗透剂是亚麻酸，通常在乙醇浓度为90%时进行处理。

将切片放入亚麻酸中浸泡2-3分钟。

4.包埋：将渗透处理后的组织切片逐步置于熔蜡中，使其被包裹在蜡中。

可用化学品如戊二醛蜡、乙蜡等作为包埋材料。

首先，将切片置于低熔点蜡中，如55-60℃的乙蜡，浸泡30分钟至1小时。

然后，将切片置于高熔点蜡中，如60-65℃的戊二醛蜡，浸泡1小时至数小时。

5.包块切割：将包埋的组织块放在切片机中，用刀片切成薄片。

通常切片厚度为4-5μm。

切好的切片将浮在热水中，并从切片机上取出。

6.切片贴片：使用刷子将切片轻轻移至玻片上。

刷子应先浸泡在水中，然后轻轻刷过切片以避免切片损坏。

7.焙烧：将装有切片的玻片放在干燥器中，或将其放在烘箱中进行干燥。

干燥温度和时间可根据需要进行调整，通常为60-70℃，2-3小时。

8. 染色：使用Harris液体染料进行染色。

HE染色中的染料包括酸性染料苏丹Ⅰ（hematoxylin）和碱性染料伊红（eosin），也称为碱性苏丹染料。

将组织样本浸入苏丹Ⅰ染料中，时间为2-5分钟。

然后将其转移到酸性水中漂洗30秒至1分钟，以去除多余的苏丹Ⅰ染料。

接下来，将样本浸入伊红染料中，时间为1-2分钟。

最后，将样本漂洗并在流水下冲洗。

9.脱色：如果染色后的切片颜色过浓，需要进行脱色处理。

包埋，就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。

包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。

一．石蜡包埋法石蜡包埋法是制作光学显微镜切片的常规方法，它有许多优点，操作简易便于掌握，可进行连续切片，包埋后的组织可以长期保存。

包埋的方法有自动包埋机包埋和手工包埋两种。

手工包埋的步骤如下：1.组织浸入石蜡后，包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。

从恒温箱取出置于三角架上，其下点燃酒精灯，以保持石蜡的溶解状态。

2.准备好包埋框，将包埋用的镊子在酒精灯上加温（防止镊子粘蜡）后，左手持蜡杯，右手把加温的镊子放在蜡口（直立状）倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。

3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内，切面朝下放正置入框底并轻轻压平，以保证不再有气泡。

4.待石蜡表面凝固前将标签贴于其上，需注意勿使标签与标本混淆，当蜡块冷至蜡面有一层透明蜡膜时，浸入冷水中迅速使其冷却，否则蜡内常形成结晶。

5.蜡块完全硬固后除去铜框，以保证蜡彻底凝固，立即修切，准备制成切片或储藏备用。

二．石蜡包埋的注意事项1.作为包埋组织使用的石蜡不仅由于气候的不同需要加以选择，而且与组织的硬度也有密切关系，过硬的组织最好用硬度较高的石蜡包埋，反之，软组织则应以硬度较低的石蜡包埋。

其熔点一般要求再60。

C左右。

2.包埋用石蜡加温不可过高，以保持其不凝固为度，温度过高容易将组织烫坏，使得组织变硬，变脆，并发生卷曲，收缩变形而不利于切片，甚至影响诊断。

另外注意埋蜡的温度和组织本身的温度，两者是否合适，温度不一致常可造成组织与周围石蜡脱裂的现象，而达不到包埋的作用。

3.包埋用石蜡应掌握用量，以组织全部包埋完毕，石蜡也恰好用完为宜。

4.包埋应注意组织病变面放在下面，并尽可能使组织放平，在不损伤组织的情况下可用镊子轻压。

5.囊壁和消化道等组织包埋时更应注意组织方位，应将组织块直立拉平，不要卷曲。

Hochest染色方法
Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释，终浓度为10 ug/ml。

Hochest有一个储存浓度，一个工作浓度。

贴壁细胞PBS洗几遍，固定一次，洗一次，然后加入400ul的工作液体避光（六孔板）染15min，完了PBS洗三次，照相。

1.用蒸馏水配制10ug/ml HOechst，4度避光保存，标记时候用蒸馏水稀释100倍
2吸去细胞培养基
3用PBS冲洗细胞3次
4将细胞于HO标记液中室温孵育10－30分钟
5吸去标记液，用PBS冲洗3次，然后就可以观察或者固定盖玻片了
注意：用紫外光激发
秤取HOECHST33342溶于蒸馏水,配成1mg/ml,过滤,4℃避光保存. 将HOECHST33342加入培养皿,终浓度为10ug/ml。

常用的五种细胞化学染色方法一、细胞化学染色方法概述细胞化学染色是生物学和医学研究中常用的技术手段，通过对细胞内各种化学成分的染色，可以揭示细胞的结构、功能以及病变过程。

根据染色原理和目的的不同，细胞化学染色方法有多种分类。

本文将介绍五种常用的细胞化学染色方法，分别是：吉姆萨染色、瑞氏染色、巴氏染色、苏木素-伊红染色和福尔根染色。

二、常用的五种细胞化学染色方法1.吉姆萨染色吉姆萨染色是用于显示细胞内蛋白质和核糖体的方法。

该方法使用含有天青、伊红、酸性品红等染料的吉姆萨染液对细胞进行处理，使蛋白质和核糖体呈现紫红色或蓝紫色。

吉姆萨染色在免疫学和寄生虫学等领域有广泛应用。

2.瑞氏染色瑞氏染色是一种用于显示细胞内颗粒物质的染色方法，如细胞内酶、核酸等。

该方法使用含有伊红和天青染料的瑞氏染液对细胞进行处理，使颗粒物质呈现蓝紫色或红色。

瑞氏染色常用于病理学和血液学中的骨髓涂片检查。

3.巴氏染色巴氏染色是一种用于显示细胞内糖原的染色方法。

该方法使用含有苏丹III 或苏丹IV染料的巴氏染液对细胞进行处理，使糖原呈现红色或橙色。

巴氏染色在妇科和肿瘤学等领域有重要应用，常用于检查宫颈脱落细胞中的糖原含量。

4.苏木素-伊红染色苏木素-伊红染色是一种显示细胞核和细胞质的染色方法。

该方法使用含有苏木素和伊红染料的染液对细胞进行处理，使细胞核呈现蓝色，细胞质呈现红色或橘黄色。

苏木素-伊红染色在病理学中广泛用于组织切片的诊断。

5.福尔根染色福尔根染色是一种用于显示DNA的染色方法。

该方法使用含有品红和苦味酸的福尔根染液对细胞进行处理，使DNA呈现蓝色。

福尔根染色在遗传学和肿瘤学研究中常用作显示肿瘤细胞的DNA含量。

三、结论细胞化学染色在生物学和医学研究中具有重要价值，有助于揭示细胞的结构、功能和病变过程。

常用的五种细胞化学染色方法各有其特点和适用范围，可以根据研究目的和需求选择适合的方法。

这些常用的细胞化学染色方法在实验操作和试剂选择等方面有一定的标准和要求，熟练掌握这些方法有助于提高实验结果的可靠性和准确性。

HE染色的步骤及方法HE染色（hematoxylin and eosin staining）是一种广泛应用于组织学研究与临床病理学中的常规染色方法，用于显示组织和细胞的形态结构、特征和组织的组织学构造。

HE染色的主要步骤包括固定、脱水、透明、浸染、洗涤、脱色、洗涤、著色、酸洗、洗涤和封片等。

下面将详细介绍每个步骤的具体方法。

1.固定：将待染的组织标本放入含有4%至10%的缓冲醛（如10%的中性缓冲醛）中固定。

固定的时间一般为24至48小时，具体时间根据组织的大小和种类而定。

2.脱水：在固定后，将组织标本转移到带有不同浓度的乙醇溶液中进行脱水。

脱水的目的是逐渐将水分从组织中溶解掉，以便更好地进行后续处理。

常用的乙醇浓度为70%、80%、95%、绝对乙醇和绝对乙醇。

3.透明：将脱水的组织标本转移到透明剂中，如苯酚、甘油等。

透明的目的是去除残留的乙醇，并将标本与石蜡相容，以便进行后续处理。

4.浸染：将透明的组织标本转移到硬化的石蜡中，通过加热使其温度达到融点，使组织与石蜡充分浸透。

通常情况下，标本需要浸染多次以确保充分浸透。

5.洗涤：将浸染好的组织放入清洁的容器中，用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除未浸透的石蜡。

6. 脱色：将洗净的组织标本放入xylene或但醇溶液中进行脱色，以去除标本中的石蜡。

脱色时间视标本的大小和种类而定，通常为30分钟至1小时。

7.再洗：将脱色的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的脱色剂。

8. 著色：将洗净的组织标本置于染色剂中进行著色。

HE染色中，常用的染色剂为血红和嗜酸性染料安伊汀（Eosin）。

组织标本一般需在血红染色剂中浸泡2至5分钟，然后脱水，再在安伊汀染色剂中浸泡2至5分钟。

也可根据需要调整具体的染色时间。

9.酸洗：将著色好的组织标本用弱酸性缓冲液进行酸洗，以去除过量的染色剂。

酸洗时间一般为几秒钟至几分钟。

10.再次洗涤：将经酸洗的组织标本用去离子水或缓冲液轻轻洗涤，以去除残留的酸洗液。

（一）单纯固定液甲醛：1．浓度：40%，气体2．渗透力强，固定均匀，组织收缩小，3．不能使白蛋白和核蛋白沉淀4．保存脂类，必须用冷冻切片。

是糖的保护剂5．可固定高尔基体，线粒体重铬酸钾1.浓度：1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶2.穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，3.未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。

酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。

4.固定高尔基体和线粒体有良好效果。

5.酸性染料着色好，碱性染料着色差6.固定的组织需经流水冲洗12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。

苦味酸1.黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和溶液储藏2.穿透慢，组织收缩明显，无明显硬化。

3.能沉淀一切蛋白质4．对脂肪和类脂无固定作用。

5. 可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋6. 固定时间不宜超过24h，7. 固定的组织应尽快放入70%乙醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。

升汞1. 浓度为5%-7%的水溶液，针状结晶2．穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显3, 对蛋白质有固定作用，4. 对类脂和糖类无固定作用5. 临用时加冰醋酸醋酸1. 刺激性气味的无色液体，低于15℃为冰醋酸5%的醋酸PH为2-8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶。

2. 穿透力强3 不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4 不能固定脂肪和内酯，不能保存糖5 .固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体6, 缺点是组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白铬酸1.为三氧化铬的水溶液，浓度0.5%-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2 穿透力弱，一般组织需固定12-24h，固定的组织有收缩，3 能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。

4 对脂肪无固定作用5 固定线粒体和高尔基复合体6. 宜避光保存，以防蛋白质溶解。

7. 必须彻底流水冲洗（≥24h）。

锇酸（四氧化锇）1.淡黄色结晶，剧毒，浓度1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2. 渗透力极弱，易使组织变硬，延长固定时间，组织的脆性增加，对染色不利。

微生物革染色步骤及关键步骤是什么,为什么:1)初染:结晶紫1min 2）媒染：碘液1min 3)脱色：95%乙醇30s 4）复染：沙黄（番红）2min。

关键步骤为脱色，细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱能力的差异性，由酞聚糖层厚度和结构决定的，经结晶紫染色体的细胞用碘液处理后形成的不溶性复合物，乙醇能使它溶解，但在G+细胞中乙醇能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，复合物分子太大，不能通过细胞壁，故保持紫色，在G-细胞中，乙醇处理不但破坏细胞外膜，还可能损伤酞聚糖层和细胞质膜，于是被乙醇溶液的复合物从细胞中渗透出来，当再用衬托的染色剂复染时，显现红色，进入G-细胞但被紫色盖没，红色显示不出来，因此脱色最关键。

革染原理：细菌的不同显色反应主要是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异性：G+细菌的细胞壁酞聚糖含量最高，其分子胶联度密紧，遇乙醇洗脱时，酞聚糖网孔因脱水收缩，另外其不含类脂，无法在壁上溶出壁隙，而G-细菌却完全相反，因此，用结晶紫染色的细胞用碘液处理后可形成不溶性复合物，乙醇能使它溶解，对于G+细菌其网孔却不能让复合物的大分子通透溶出，故保持紫色，而G-细菌可让大分子溶出，从而脱去紫色，当在此复染时显现红色，此时G-细菌为紫中带红。

噬菌体侵染过程：1）吸附：噬菌体于宿主细胞接触，在宿主细胞的特异性受点上结合2）侵入：核酸从尾髓中注入到宿主细胞，蛋白质外壳留在外面，历时几秒钟3）复制：大量复制噬菌体核酸，并合成病毒所需要的蛋白质，但不形成壳体的粒子4）装配：寄主细胞合成噬菌体壳体，并组装成完整的噬菌体粒子5）释放：寄主细胞裂解释放出病毒粒子危害：主要是引起发酵中的噬菌体污染1）使发酵周期明显延长2）发酵液变轻，镜查时有大量的噬菌体出现3）发酵产物形成缓慢或根本形成不了4）底物表明出现大量噬菌斑防害措施：1控制活菌排放2选育抗噬菌体的菌种3在发现噬菌体存在时，使用药物抑制，如加入金霉素或四环素4经常轮换生产菌种EMB培养基为例说明工作原理，配方：蛋白胨10g，乳糖5g,蔗糖5g,K2HPO4 2g，伊红0.4g，美蓝0.065g，蒸馏水1000ml，最终pH=7.2 原理:其中伊红和美蓝两种,苯胺染料可抑制革氏阳性细菌和一些难培养的革氏阴性菌,在低酸度时,这两种染料结合生成沉淀,起着产酸指示剂的作用(深紫色有绿色的金属光芒),同时具有鉴别和选择作用的培养基:金黄色葡萄球菌的分离艾姆氏法原理:鼠伤寒杀门氏菌的组胺酸营养缺陷型(his-)菌株在基本培养基（一）的平板上不能生长，如果发生回复突变变成原氧型（his+）后则能生长，如果回复突变率因某种化学诱变剂（待测物）的作用而增加，那么可判断这种化学药物具有致癌性一般方法：在含待测可疑:"三致"物或（口恶）（日英）等的式样中，加入鼠肝均浆液，经一段时间保暖后，吸入滤纸片中，然后将滤纸片放置于上述平板中央优点：1）时间短，费用低，相对准确2）挑选优良的出发菌株3）处理单细胞或单孢子悬液4）选用最适诱变剂量5）充分利用复合处理的协同效应6）利用和创造形态，生理和产量的相关指标7）设置有效的筛选方案食醋：先由霉菌提供糖化酶，将淀粉水解成葡萄糖和糊精，而后酵母葡萄糖产乙醇，乙醇又在醋酸杆菌的作用氧化生成乙酸工艺流程：淀粉质→粉碎→液化（←a-淀粉酶）→糖化（←霉菌糖化曲）→酒精发酵（←酵母菌）→醋酸发酵（←醋酸菌）→霉菌→过滤→配置→包装→成品酱油：实际是许多微生物协同作用的过程，通过这些微生物产生的酶的催化作用，将原料中大分子有机物逐步分解为简单物质，在经过复杂的物理化学和生物化学的反应，就形成了具有独特风味的调味副食品—酱油工艺流程：原料—制曲—制酱酸—淋油—加热—调配—成品三糖铁琼脂成分：20.0g，牛肉膏3.0g,乳糖10.0g葡萄糖1.0g，硫酸亚铁铵（含6个结晶水）0.5g，酚红0.025g或5g/l溶液5ml，氯化钠5.0g硫代硫酸钠0.5g , 琼脂12.0g,蒸馏水1000.0ml(蛋白胨，牛肉膏是氮源，酚红指示剂酸性变黄，碱性变红，氯化钠是调节渗透压，琼脂是凝固剂，硫酸亚铁铵（含6个结晶水）硫代硫酸钠做硫化氢鉴别）处酚红琼脂外，0.1，另将琼脂加入400ml蒸馏水中，搅拌均匀，静止约10min，加热煮沸至完全溶解，调至ph7.4±0.1，另将琼脂加入600min蒸馏水，搅拌均匀，静止约10min，加热煮沸至完全溶解。