实验八.中性粒细胞吞噬功能检测
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一、实验目的1. 了解吞噬细胞的基本功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察和分析中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬能力。
3. 掌握吞噬细胞吞噬实验的基本操作和结果分析方法。
二、实验原理吞噬细胞是免疫系统的重要组成部分,能够识别、摄取和消化病原体、衰老细胞等异物。
中性粒细胞和巨噬细胞是两种常见的吞噬细胞,它们通过吞噬作用参与机体的非特异性免疫和特异性免疫。
三、实验材料1. 实验动物:小鼠2. 试剂:鸡红细胞、中性粒细胞吞噬试剂、巨噬细胞吞噬试剂、生理盐水、染色剂等3. 仪器:显微镜、离心机、培养箱等四、实验方法1. 实验分组将实验动物分为三组:中性粒细胞吞噬实验组、巨噬细胞吞噬实验组和对照组。
2. 中性粒细胞吞噬实验- 将小鼠血液分离出中性粒细胞,加入鸡红细胞混匀。
- 将混合液在37℃下孵育一定时间。
- 加入染色剂,进行染色处理。
- 在显微镜下观察中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 巨噬细胞吞噬实验- 将小鼠腹腔巨噬细胞分离出来,加入鸡红细胞混匀。
- 将混合液在37℃下孵育一定时间。
- 加入染色剂,进行染色处理。
- 在显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
4. 结果分析- 计算吞噬百分率和吞噬指数,比较不同实验组的吞噬能力。
- 分析吞噬能力与细胞种类、实验条件等因素的关系。
五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬实验- 吞噬百分率:实验组A(中性粒细胞)的吞噬百分率显著高于对照组B(未处理的中性粒细胞)和实验组C(巨噬细胞)。
- 吞噬指数:实验组A的吞噬指数也显著高于对照组B和实验组C。
2. 巨噬细胞吞噬实验- 吞噬百分率:实验组C的吞噬百分率略高于对照组B,但差异不显著。
- 吞噬指数:实验组C的吞噬指数略高于对照组B,但差异不显著。
六、实验分析1. 中性粒细胞具有较强的吞噬能力,能够有效吞噬鸡红细胞。
2. 巨噬细胞的吞噬能力略低于中性粒细胞,但在一定程度上也能吞噬鸡红细胞。
3. 吞噬能力受到细胞种类、实验条件等因素的影响。
中性粒细胞吞噬作用
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2.通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。
实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞,通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤,能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物,是机体非特异性免疫的重要组成部分。
实验材料
1.葡萄球菌18h孵育的斜面或肉汤培养物。
2.抗凝人血(
3.8%柠檬酸钠一滴加于无菌小试管中)、瑞氏染液、双蒸水
3.试管、玻片、采血针、酒精棉球、吸管、滴管、显微镜、香柏油
实验方法
1.取小试管一支,用滴管加入一滴3.8%柠檬酸钠溶液。
2..用酒精棉球消毒手指和采血针,从消毒部位采取2~3滴血加入试管中。
3..取一滴菌液加入小试管中,用吸管混匀。
4.置37℃水浴箱水浴15分钟,中途混匀一次。
5. 取出小试管,用吸管将试管中血液打匀后取血半滴于载玻片上,用另一载玻片推成薄血片。
6.待血片自干后,用瑞氏染液染色。
瑞氏染色法:取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。
然后加等量蒸馏水,
轻轻晃动混匀,继续染5分钟,水洗,用吸水纸吸干后镜检。
结果观察
油镜检查:寻找中性粒细胞,如果染色结果正确,可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色,而
粒细胞的细胞浆则为淡红色。
计数:1.吞噬百分率:观察100个中性粒细胞,计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数,计算出吞噬细胞百分率。
2.吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计算其中被吞噬的细菌总数,平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
一、实验目的1. 了解中性粒细胞吞噬功能的原理和实验方法。
2. 观察中性粒细胞对红细胞的吞噬现象,评估中性粒细胞的吞噬能力。
3. 掌握显微镜观察技术,提高实验操作技能。
二、实验原理中性粒细胞是人体内最丰富的白细胞,具有吞噬、杀伤病原微生物和参与免疫调节等功能。
中性粒细胞吞噬功能实验通过观察中性粒细胞对红细胞的吞噬现象,评估中性粒细胞的吞噬能力,进而反映机体的非特异性免疫功能。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜血液、生理盐水、鸡红细胞悬液、0.1%台盼蓝染色液、计数板、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 仪器:恒温培养箱、离心机、移液器、显微镜等。
四、实验方法1. 制备中性粒细胞悬液:取新鲜血液,用生理盐水洗涤3次,去除红细胞和血小板,制成中性粒细胞悬液。
2. 制备鸡红细胞悬液:取鸡红细胞,用生理盐水洗涤,制成鸡红细胞悬液。
3. 吞噬实验:将中性粒细胞悬液和鸡红细胞悬液按一定比例混合,置于37℃恒温培养箱中培养一段时间。
4. 染色:取培养后的细胞悬液,加入0.1%台盼蓝染色液,染色5分钟。
5. 计数:用计数板计数中性粒细胞和吞噬红细胞的数量,计算吞噬指数。
五、实验结果1. 中性粒细胞数量:每高倍镜视野下中性粒细胞数量为100个。
2. 吞噬指数:中性粒细胞吞噬红细胞的百分比为30%。
六、实验分析1. 中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬能力较好,吞噬指数为30%,说明中性粒细胞具有较好的吞噬功能。
2. 本实验结果表明,中性粒细胞在人体非特异性免疫中发挥着重要作用。
七、实验讨论1. 本实验通过观察中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬现象,评估了中性粒细胞的吞噬能力,为研究中性粒细胞在人体免疫中的作用提供了实验依据。
2. 吞噬指数是评估中性粒细胞吞噬功能的重要指标,但并非唯一指标。
在实际研究中,还需结合其他指标进行综合评价。
八、实验总结1. 本实验成功观察了中性粒细胞对鸡红细胞的吞噬现象,掌握了中性粒细胞吞噬功能实验的方法。
中性粒细胞吞噬实验报告篇一:小吞噬实验报告篇一:巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞,局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化,可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞,30min后处死小鼠,取出腹腔液,以冷亚甲蓝染色,显微镜下计数吞噬红细胞的百分数,及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目,以判断吞噬细胞的杀伤能力,由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法:(1)实验前3小时,小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
(2)实验时,每只小鼠注射鸡红细胞1ml,轻柔腹部,使其在腹腔中分布均匀,利于吞噬。
(3)30min后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用载玻片轻擦腹腔,使腹腔液均匀涂于载玻片过,再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液,盖上盖玻片。
(4)高倍镜下进行观察,计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内,二者均可发生扩散,并且随扩散距离的增大浓度降低,在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验,常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】(1)制板:将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml(2)打孔:待琼脂凝固后,将载玻片置于打孔样板上,用打孔器打孔(3)加样:在中央孔内加抗体,上下两孔加抗原1,左右加抗原二,每孔加10μl(4)结果观察:将琼脂板置于湿盒,37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线,有抗原抗体反应,为阳性反应,说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线,说明抗原2与抗体之间不相对应。
中性粒细胞吞噬实验报告篇一:小吞噬实验报告篇一:巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞,局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化,可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞,30min后处死小鼠,取出腹腔液,以冷亚甲蓝染色,显微镜下计数吞噬红细胞的百分数,及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目,以判断吞噬细胞的杀伤能力,由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法:(1)实验前3小时,小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
(2)实验时,每只小鼠注射鸡红细胞1ml,轻柔腹部,使其在腹腔中分布均匀,利于吞噬。
(3)30min后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用载玻片轻擦腹腔,使腹腔液均匀涂于载玻片过,再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液,盖上盖玻片。
(4)高倍镜下进行观察,计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内,二者均可发生扩散,并且随扩散距离的增大浓度降低,在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验,常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】(1)制板:将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml(2)打孔:待琼脂凝固后,将载玻片置于打孔样板上,用打孔器打孔(3)加样:在中央孔内加抗体,上下两孔加抗原1,左右加抗原二,每孔加10μl(4)结果观察:将琼脂板置于湿盒,37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线,有抗原抗体反应,为阳性反应,说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线,说明抗原2与抗体之间不相对应。
1. 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2. 观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象。
3. 分析实验结果,了解中性粒细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理中性粒细胞(又称小吞噬细胞)是血液中的主要吞噬细胞,具有吞噬和消化细菌、病毒、细胞碎片等异物的作用。
小吞噬实验通过观察中性粒细胞吞噬异物的过程,了解其吞噬功能的强弱。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜血液、生理盐水、2%中性红溶液、2%亚甲蓝溶液、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 实验仪器:离心机、移液器、恒温箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 取新鲜血液1ml,加入等量生理盐水,混匀后离心,取上清液作为实验用血液。
2. 将2%中性红溶液和2%亚甲蓝溶液按1:1的比例混合,作为吞噬剂。
3. 取2ml混合液加入实验用血液中,混匀后置于37℃恒温箱中培养30分钟。
4. 取1滴混合液滴于载玻片上,盖上盖玻片。
5. 在显微镜下观察中性粒细胞的吞噬现象,记录吞噬百分率和吞噬指数。
五、实验结果与分析1. 实验结果实验结果显示,中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒,吞噬百分率和吞噬指数分别为80%和1.5。
2. 结果分析实验结果表明,中性粒细胞具有较强的吞噬功能。
吞噬百分率和吞噬指数的升高,说明中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效地吞噬吞噬剂,具有一定的免疫防御能力。
通过小吞噬实验,我们了解到中性粒细胞在小吞噬实验中具有较强的吞噬功能,能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒。
这一实验结果有助于我们更好地了解中性粒细胞在人体免疫系统中的作用,为临床诊断和治疗提供理论依据。
七、实验反思与体会1. 实验过程中,需要注意无菌操作,防止污染。
2. 实验结果受多种因素影响,如实验材料、实验条件等,需要严格控制实验条件,提高实验结果的可靠性。
3. 通过本次实验,加深了对中性粒细胞吞噬功能原理的理解,提高了实验操作技能。
八、实验总结小吞噬实验是一种常用的细胞生物学实验,通过观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象,了解其吞噬功能的强弱。
小吞噬实验报告篇一:中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)中性粒细胞吞噬功能试验(小吞噬试验)实验目的1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
实验原理血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞,通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤,能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物,是机体非特异性免疫的重要组成部分。
实验材料实验方法片。
瑞氏染色法:取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染1分钟。
然后加等量蒸馏水,轻轻晃动混匀,继续染5分钟,水洗,用吸水纸吸干后镜检。
结果观察油镜检查:寻找中性粒细胞,如果染色结果正确,可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色,而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
中性粒细胞吞噬试验计数:1.吞噬百分率:观察100个中性粒细胞,计算其中吞噬有细菌的中性粒细胞数,计算出吞噬细胞百分率。
2.吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计算其中被吞噬的细菌总篇二:吞噬细胞吞噬功能检测实验-----吞噬细胞吞噬功能检测实验实验概要本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测(Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte)实验的基本原理、操作步骤及注意事项等。
实验原理吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能,在机体非特异性免疫中发挥重要作用。
小鼠腹腔内注射硫代乙醇酸钠,可刺激巨噬细胞的聚集。
四日后小鼠腹腔内注入羊红细胞悬液,一小时后解剖收集腹腔吞嗜细胞,染色、镜检可观察对羊红细胞的吞嗜现象。
通过计算吞嗜百分比或吞噬指数可测定吞噬细胞的吞嗜功能。
主要试剂1. PBS 缓冲液2. 3%硫代乙醇酸钠3. 1%羊红细胞悬液4. 瑞氏染液5. 甲醇主要设备1. 解剖器材2. 注射器3. 尖吸管4. 橡皮吸头5. 小试管6. 载玻片实验材料ICR 小鼠实验步骤1. 实验准备:用无菌注射器吸取3%硫代乙醇酸钠3ml,注射于小鼠腹腔内。
2. 四日后,注射1%羊红细胞悬液1ml 于小鼠腹腔内。