巨噬细胞吞噬功能 检测指标

实验一巨噬细胞吞噬细胞功能实验原理：巨噬细胞具有活跃的吞噬功能，能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。

巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。

此次实验我们用体内法来介绍巨噬细胞的吞噬功能。

体内法：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美兰染色，显微镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞内被杀死而染为紫色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。

方法：（1）试验前3天，小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。

（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使鸡红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬。

（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用滴管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.06%冷美兰溶液，盖上盖玻片（4）高倍镜下进行观察，计数。

实验结果：100个巨噬细胞中已吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞的数目吞噬百分率 = ———————————————————×100%100个巨噬细胞100个已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞中鸡红细胞的数目吞噬指数 = ———————————————————×100%100个已经吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞结果分析：正常值吞噬百分率：62.77±1.38吞噬指数：1.058±0.049我们的实验结果偏低，原因可能是腹腔注射时没有完全注射到腹腔内，部分残留在腹腔壁上。

实验二沉淀反应（双向琼脂扩散实验）原理：双向琼脂扩散试验是定性实验。

将可溶性抗原与相应抗体与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。

如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。

本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。

方法：（1）将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/板。

一、实验目的1. 了解吞噬细胞吞噬功能的测定原理和方法。

2. 掌握中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定的操作步骤。

3. 分析吞噬功能测定的结果，评估吞噬细胞的功能状态。

二、实验原理吞噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有吞噬、消化病原微生物和衰老细胞等功能。

吞噬功能测定是评估机体免疫功能的一种方法。

本实验通过测定中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能，了解其吞噬能力，从而评估机体免疫功能。

三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（6-8周龄，体重20-25g）。

2. 试剂：中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂、鸡红细胞悬液、瑞氏染液、生理盐水、0.1%吐温-80、磷酸缓冲盐溶液（PBS）等。

3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、试管等。

四、实验方法1. 中性粒细胞和巨噬细胞分离将小白鼠处死，无菌操作取腹腔液，加入中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂，充分混匀后室温放置5分钟。

低速离心（1000r/min，5分钟）分离中性粒细胞和巨噬细胞。

2. 吞噬功能测定（1）中性粒细胞吞噬功能测定取分离的中性粒细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。

低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。

洗涤、干燥、封片，显微镜下观察中性粒细胞吞噬鸡红细胞的情况。

（2）巨噬细胞吞噬功能测定取分离的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。

低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。

洗涤、干燥、封片，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况。

3. 结果分析计算吞噬百分率和吞噬指数。

吞噬百分率=吞噬有鸡红细胞的细胞数/细胞总数×100%；吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的细胞数。

五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬功能吞噬百分率：60.5%；吞噬指数：1.2。

2. 巨噬细胞吞噬功能吞噬百分率：70.2%；吞噬指数：1.8。

六、讨论本次实验成功测定了中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能。

巨噬细胞吞噬水平的检测（1）实验原理：中性红是大分子的荧光试剂，在波长550nm 有强吸收峰。

由于中性红分子量较大，只能通过内吞作用才能被摄取进入巨噬细胞胞内，所以通过测量不同刺激和药物条件下细胞内中性红量来衡量巨噬细胞的吞噬功能。

本实验利用活巨噬细胞细胞所具有的吞噬活性，将大分子中性红内吞进入细胞内，去除胞外未被吞噬的中性红并用细胞裂解液破损细胞，放出溶解在细胞内的中性红，通过酶联免疫检测仪测出550nm 的光吸收值（A 550），被吞噬的中性红的量与A 550值成正比，所以可以用A 550衡量吞噬细胞的吞噬水平。

这种方法灵敏度较高，是目前较为常用的检测巨噬细胞吞噬能力的一种手段。

药物的恢复率recovery rate 由下面公式计算给出：%100ΑΑΑΑ1rate%recovery ATP 550control 550sample 550control 550⨯⎪⎭⎫ ⎝⎛---=,,,,。

其中A 550，control 为无处理对照组的中性红吸光值；A 550，sample 为加药样本的吸光值；A 550，ATP 为只加刺激的阳性对照吸光值。

（2）实验步骤：通过不同浓度药物孵育的巨噬细胞实验组和参照组中，加入不同刺激，摇匀后再加入无菌（需要抽滤）中性红（最终质量分数为0.1%）。

恒温培养箱中培养30min 让巨噬细胞充分吞噬。

取出细胞用HBSS 溶液清洗2遍以清除残留在胞外未被吞噬的中性红。

加入细胞裂解液（1:1=乙醇：乙酸），震荡15min 使细胞破裂，放出已被吞噬的中性红。

酶联免疫检测仪测出每个样本孔在550nm 的光吸收值（A 550），以表示每个样本内巨噬细胞的吞噬活性。

文献报道35mm 的培养皿中种植500K 细胞，一，加入60000K/皿尼罗红荧光微球（1um 大小），加入ATP 或其他刺激，37℃孵育30 min.二，然后用含有1％血清的PBS 洗三次.,加入胰酶 1000R/5min 用流式细胞仪检测（654~606nm ），并且可以分选到符合吞噬标准的细胞.三，将收集到的细胞铺到盖玻片上，用4％的多聚甲醛固定15min.四，用1ug/ml DAPI(溶于PBS)进行核染色1min ，在荧光显微镜下观察。

巨噬细胞吞噬功能测定【实验原理】巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。

当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。

取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。

计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断吞噬细胞的吞噬功能。

【试剂和器材】1. 动物体重20-25g的健康小鼠。

2. 1%鸡红细胞（CRBC）悬液自鸡液静脉或心脏采血，放Alsever液中保存（鸡血与Alsever 液1：5混合），置4℃可有效保存1个月，临用前用生理盐水将CRBC洗3次，按红细胞压积配成1%CRBC悬液。

3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g，混匀，置100℃水浴煮沸消毒。

4. 其他试剂瑞氏（Wright）染液、生理盐水等。

5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。

【步骤和方法】1.试验前3天，于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。

2.于试验当天，小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml，并轻轻揉腹。

3.30min后小鼠颈椎脱臼处死，取腹腔液涂片，自然干燥后瑞氏染色，用油镜观察。

【结果判定】镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。

呈油镜下随机观察100个巨噬细胞，计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。

吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100【注意事项】1.涂片的薄厚要适当，否则影响计数。

2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。

3.如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。

4.剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。

5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。

阿氏液配方：葡萄糖 2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠0.42克加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。

m1型巨噬细胞指标
M1型巨噬细胞具有一系列特定的表型特征，这些特征可以通过检测特定的标记物来鉴定巨噬细胞的亚型。

以下是M1型巨噬细胞的表型特征：
1.CD11c：M1型巨噬细胞通常表达CD11c，这是一种巨噬细胞的表面标记物，
用于区分巨噬细胞和其他免疫细胞。

2.CD86：M1型巨噬细胞表达高水平的CD86，这是一种共刺激分子，参与T
细胞的活化和免疫应答的调节。

3.iNOS：M1型巨噬细胞表达高水平的iNOS（一氧化氮合酶），这是一种产生
一氧化氮的酶，对于抗菌和抗肿瘤具有重要作用。

4.IL-12：M1型巨噬细胞产生高水平的IL-12（白细胞介素-12），这是一种重
要的炎症介质，能够促进Th1细胞的发育和活化。

此外，M1型巨噬细胞还可以分泌大量促炎因子，包括IL-1、IL-6、TNF-α等，主要起到促进炎症发生发展、杀菌及吞噬等作用。

同时，能产生趋化因子，通过趋化性吸引Th1细胞，促进强烈的Th1免疫反应。

并且，M1巨噬细胞可通过增加细胞表面MHC-II和共刺激分子CD80和CD86标记，提升抗原的提呈能力。

巨噬细胞功能检测巨噬细胞是一类具有吞噬能力的白细胞，是机体最重要的免疫细胞之一、它们由骨髓造血干细胞分化而来，广泛存在于机体的各个组织和器官中。

巨噬细胞的主要功能是吞噬、杀灭和消化各种病原微生物，包括细菌、病毒和真菌等。

除此之外，巨噬细胞还有调节和递质释放的功能，能够参与机体的炎症反应、组织修复和免疫调节等过程。

在巨噬细胞的功能检测中，常用的方法包括体外测定和体内评价两种。

体外测定是指将巨噬细胞分离、培养，并通过一系列方法和试剂来评价其功能。

最常用的体外功能检测方法是吞噬活度测定。

通过给巨噬细胞提供特定的病原微生物（如大肠杆菌、酵母菌等），并使用显微镜或流式细胞仪等工具观察巨噬细胞吞噬数量和效果，从而评价巨噬细胞的吞噬能力。

此外，还可以利用溶菌酶、超氧化物歧化酶等试剂来评价巨噬细胞杀菌和抗氧化能力。

体内评价是指通过动物实验研究巨噬细胞在机体免疫反应中的功能。

常用的方法包括巨噬细胞移行实验、伤口愈合实验以及炎症模型制备等。

巨噬细胞移行实验是通过将其中一部位的巨噬细胞标记，然后观察其在体内的移行情况，从而了解其调节和清除作用。

伤口愈合实验是通过制造小鼠皮下创伤刺激，并观察巨噬细胞在创伤修复中的作用。

炎症模型制备则是在小鼠体内引起炎症反应，然后观察和测定巨噬细胞的参与及相关分子的表达变化。

巨噬细胞功能检测的结果可以帮助医生了解患者免疫状态，并指导治疗方案的选择。

临床中常见的应用包括感染性疾病、自身免疫疾病和肿瘤等。

例如，在感染性疾病中，巨噬细胞的吞噬和杀菌能力对于清除病原微生物起着关键作用，通过评估巨噬细胞功能可以了解患者感染风险、判断疾病的严重程度以及监测治疗效果。

而在肿瘤中，巨噬细胞则具有抗肿瘤作用，通过评价其杀伤肿瘤细胞能力可以协助肿瘤治疗的选择和预后判断。

总之，巨噬细胞功能检测是一种重要的免疫学分析方法，可以评估巨噬细胞的吞噬、杀伤和调节能力，从而帮助医师了解患者的免疫状态和疾病发展情况，并指导相应的治疗方案。

一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本特性及其在免疫反应中的作用。

2. 观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。

3. 掌握显微镜下观察细胞吞噬作用的实验技术。

二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的细胞类型，具有强大的吞噬能力。

当巨噬细胞遇到抗原时，会通过吞噬作用将其捕获、消化并清除。

本实验以鸡红细胞作为抗原，观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，从而了解巨噬细胞的吞噬功能。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠（体重20-25g）2. 实验器材：解剖显微镜、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、剪刀、镊子、吸管等3. 实验试剂：生理盐水、鸡红细胞悬液、冷亚甲蓝染色液、无菌淀粉液四、实验步骤1. 小鼠腹腔巨噬细胞诱导：实验前3小时，将小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导腹腔巨噬细胞渗出。

2. 鸡红细胞悬液制备：将鸡红细胞用生理盐水洗涤三次，制成红细胞悬液，浓度为1×10^9/L。

3. 腹腔巨噬细胞收集：将小鼠处死，打开腹腔，用生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。

4. 巨噬细胞染色：取腹腔液1ml，加入1ml冷亚甲蓝染色液，混匀，染色5分钟。

5. 制片观察：取载玻片，滴加1滴腹腔液，盖上盖玻片，用解剖显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的形态学变化。

五、实验结果1. 在显微镜下观察到，巨噬细胞呈圆形或椭圆形，细胞质丰富，细胞核较大，呈蓝色。

2. 鸡红细胞呈圆形，直径约为7-8μm，呈红色。

3. 观察到部分巨噬细胞周围有红细胞聚集，说明巨噬细胞已经吞噬了鸡红细胞。

4. 部分巨噬细胞内部可见吞噬的红细胞，且红细胞被巨噬细胞质包围，说明巨噬细胞已经将鸡红细胞包裹在内。

六、实验分析1. 本实验观察到巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，说明巨噬细胞具有吞噬能力。

2. 吞噬过程中，巨噬细胞通过质膜内陷形成吞噬泡，将鸡红细胞包裹在内，然后将其消化。

3. 吞噬作用是机体免疫系统的重要组成部分，有助于清除体内的病原体和衰老细胞。

巨噬细胞吞噬功能试验
取前臂斑蛰发泡后的皮泡液。

巨噬细胞能吞噬和杀灭胞内寄生虫、细菌、自身衰老和死亡的细胞以及肿瘤细胞，参与机体的免疫防御、免疫自稳、免疫监视功能。

【正常参考值】
巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率 61.39～64.15 %
吞噬指数 1.009～1.107
【异常结果分析】
当手术切除肿瘤，或放疗、化疗后病情好转，吞噬率及吞噬指数可回升，因此可作为肿瘤疗效判断的参考指标。

恶性肿瘤病人（如食管癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌等）病人的吞噬百分率常在45％以下，吞噬指数也下降。

m1型巨噬细胞指标（原创实用版）目录1.M1 型巨噬细胞的概述2.M1 型巨噬细胞指标的意义3.常见 M1 型巨噬细胞指标4.M1 型巨噬细胞指标的临床应用5.M1 型巨噬细胞指标的研究进展正文一、M1 型巨噬细胞的概述巨噬细胞（Macrophage）是一种重要的免疫细胞，参与对病原体和损伤组织的清除。

根据功能和表型特点，巨噬细胞可分为 M1 型和 M2 型。

M1 型巨噬细胞主要参与对细菌和真菌等病原体的清除，以及对肿瘤细胞的杀伤。

它们具有高度的吞噬功能和细胞毒性，主要分泌促炎细胞因子，如 TNF-α、IL-12 和 IFN-γ等。

二、M1 型巨噬细胞指标的意义M1 型巨噬细胞指标可以用来评估巨噬细胞的功能状态和极化程度，对理解免疫应答和疾病发生发展具有重要意义。

异常的 M1 型巨噬细胞指标可能与多种疾病的病理过程密切相关，如炎症、感染、肿瘤和自身免疫病等。

三、常见 M1 型巨噬细胞指标常见的 M1 型巨噬细胞指标包括：CD86、CD16、CD54、CD58、CD11b、CD36、TNF-α、IL-12、IFN-γ等。

这些指标在不同疾病状态下，表达水平和活化程度可能有所不同。

四、M1 型巨噬细胞指标的临床应用M1 型巨噬细胞指标在临床应用中具有广泛的前景。

例如，检测肿瘤组织中 M1 型巨噬细胞指标的水平，有助于评估肿瘤免疫微环境的状态，指导肿瘤免疫治疗。

此外，对感染性疾病、自身免疫病等疾病的诊断、治疗和预后评估，也具有一定的参考价值。

五、M1 型巨噬细胞指标的研究进展随着对 M1 型巨噬细胞生物学功能的深入了解，研究者发现 M1 型巨噬细胞指标在多种疾病的发病机制、疾病进展和预后评估等方面具有重要作用。

一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本生物学特性；2. 掌握巨噬细胞吞噬功能实验的操作方法；3. 分析巨噬细胞吞噬功能的影响因素。

二、实验原理巨噬细胞是免疫系统中的一种重要细胞，具有吞噬、清除病原体、分泌细胞因子等生物学功能。

本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估巨噬细胞的吞噬功能。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠；2. 实验试剂：鸡红细胞、生理盐水、冷亚甲蓝染色液、培养皿、显微镜、移液器等。

四、实验方法1. 实验动物处理：取健康小鼠，腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导腹腔巨噬细胞产生。

2. 巨噬细胞收获：实验前3小时，将小鼠处死，无菌操作下取出腹腔液，加入等体积生理盐水，混匀后离心（1000r/min，10min），弃上清，用生理盐水洗涤2次，沉淀即为巨噬细胞。

3. 巨噬细胞吞噬实验：将收获的巨噬细胞加入培养皿中，加入适量鸡红细胞，37℃培养1小时。

4. 巨噬细胞染色：将培养好的巨噬细胞加入冷亚甲蓝染色液，染色5分钟。

5. 巨噬细胞观察：用显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，计算吞噬百分率和吞噬指数。

五、实验结果与分析1. 实验结果：显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，部分鸡红细胞被吞噬细胞包裹。

2. 实验分析：（1）吞噬百分率：吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100%；（2）吞噬指数：吞噬的鸡红细胞总数/吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数。

六、实验结论本实验成功观察到了巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，说明巨噬细胞具有吞噬功能。

吞噬百分率和吞噬指数可以作为评估巨噬细胞吞噬功能的重要指标。

七、实验讨论1. 巨噬细胞在免疫系统中具有重要作用，吞噬功能是其重要生物学特性之一。

2. 本实验采用腹腔巨噬细胞，操作简便，结果可靠。

3. 影响巨噬细胞吞噬功能的主要因素包括：巨噬细胞的来源、成熟度、环境因素等。

4. 本实验为后续研究巨噬细胞吞噬功能的影响因素提供了基础。

八、实验总结本实验通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，成功评估了巨噬细胞的吞噬功能。

组织中巨噬细胞的检测方法
巨噬细胞的检测方法主要包括以下三种：
1.巨噬细胞功能的检测：通过给小鼠定量静脉注射印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。

2.吞噬功能的检测：实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。

将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置37℃保温0.5〜Ih,其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。

3.巨噬细胞溶酶体酶的测定：巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。

请注意，这些方法需要一定的实验设备和专业知识，建议在专业人士的指导下进行。

单核－巨噬细胞吞噬功能测定单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。

小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法）1、原理巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物（鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等）共同温育,染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。

2、方法（1）．小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1 ml。

实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口（注意避开血管）用生理盐水(或1640）灌注腹腔,收集腹腔液于试管中（约4 ml），1500 r/min，离心10 min，去上清,沉积细胞用生理盐水(或1640)洗二次，离心转速、时间同上。

最后沉积细胞用含10%小牛血清1640配成适当浓度备用(1～2×106／ml)。

（2）被吞噬物的制备1）．鸡红细胞制备从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量Alsever液(2。

05 g葡萄糖,0.42 g NaCl,0.8 g枸橼酸钠5H2O、0.55 g枸椽酸，加双蒸水到100 ml，加热溶解后过滤分装，8磅高压灭菌，4℃保存)，置4℃可以保存1个月.用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1％的浓度备用。

2）．白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌,用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活,离心去掉上清,再用1%美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml 菌悬液，4℃冰箱保存备用.3、操作取巨噬细胞0.5 ml加1％鸡红细胞或l×l08／ml白色念珠菌悬液0。

5ml，置37℃温育30min。

取2滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000r／min，10min,取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定,姬姆萨染色、油镜观察计数。

未成熟巨噬细胞流式检测指标？答：未成熟巨噬细胞（也被称为单核细胞衍生巨噬细胞或单核-巨噬细胞系统的一部分）的流式细胞术检测通常涉及一系列细胞表面和细胞内的标记物。

这些标记物帮助研究人员识别、分离和表征不同发育阶段和激活状态的巨噬细胞。

以下是一些常见的流式检测指标，这些指标可用于识别和分析未成熟巨噬细胞：1.细胞表面标记物：- CD14：一种糖蛋白，通常在单核细胞和巨噬细胞上表达。

- CD16：也称为FcγRIII，在某些单核细胞亚群上表达。

- CD64：也称为FcγRI，在单核细胞和巨噬细胞上表达，尤其是在激活后。

- CD163：清道夫受体，通常在替代激活的巨噬细胞（M2）上表达，但也在某些未成熟巨噬细胞上发现。

- CD206：甘露糖受体，也是M2巨噬细胞的标记物。

2.细胞内标记物：- HLA-DR：主要组织相容性复合体II类分子，在抗原提呈细胞（包括巨噬细胞）上表达。

- 细胞因子和趋化因子：例如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12和IL-23等，可通过细胞内染色检测。

3.吞噬功能相关标记物：- 可以通过荧光标记的颗粒或微生物来评估巨噬细胞的吞噬能力。

4.活性氧（ROS）和氮中间体：- 使用荧光探针检测细胞内ROS或氮中间体的产生，这些是巨噬细胞激活和功能的重要指标。

5.其他功能相关标记物：- 酶活性，如髓过氧化物酶（MPO）或NADPH氧化酶等，可通过特异性底物或抑制剂进行检测。

进行流式细胞术实验时，通常会结合多种抗体和荧光染料来同时检测多个参数。

实验设计应考虑到细胞的来源（如外周血、组织或体外培养）、处理条件（如激活状态）、以及实验目的（如表型分析、功能研究或疾病诊断）。

实验一、巨噬细胞吞噬功能的观察
[原理]
吞噬细胞属于机体的固有免疫系统，对异物有识别和清除的能力。

巨噬细胞是吞噬细胞之一，主要分布于机体的淋巴结、脾脏、结缔组织等处。

[材料]
1．小鼠、1%绵羊红细胞、瑞氏染液等。

2．注射器、吸管、手术器械、显微镜等。

[方法]
1．实验前3天，小鼠腹腔注射硫乙醇酸钠培养基，诱导腹腔巨噬细胞。

2．将上述小鼠腹腔注射1%绵羊红细胞2ml/只，等待30-60min。

3．小鼠断颈椎处死，轻揉腹部约1min，吸取腹腔液做推片。

4．标本片充分干燥后，瑞氏染液染色10min，冲洗，吸干水后镜检。

5．镜下观察巨噬细胞的吞噬现象，计算吞噬百分数和吞噬指数。

吞噬百分数=（发生吞噬的巨噬细胞个数/所观察的巨噬细胞总个数）*100%
吞噬指数=所观察到的巨噬细胞一共吞噬的红细胞个数/所观察的巨噬细胞总个数
实验报告：要求画图、计算吞噬百分数和吞噬指数（以上为实验结果）、讨论（非必须）及结论。

强烈建议实验报告使用A4大小的纸张。

实验报告不返还，若要留底请自行备份。

一、实验目的1. 观察和了解巨噬细胞对异物的吞噬过程。

2. 掌握巨噬细胞吞噬实验的操作方法。

3. 分析巨噬细胞的吞噬功能。

二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞，主要来源于单核细胞。

在机体受到病原体感染时，巨噬细胞可以吞噬病原体，并激活其他免疫细胞，共同参与机体的免疫反应。

本实验通过观察巨噬细胞对异物的吞噬过程，了解巨噬细胞的吞噬功能。

三、实验材料1. 小鼠：体重20-25g，雌雄不限。

2. 无菌生理盐水。

3. 鸡红细胞悬液。

4. 巨噬细胞培养液。

5. 巨噬细胞培养瓶。

6. 显微镜及配套设备。

7. 吸管、试管、离心机、移液器等。

四、实验步骤1. 实验前准备：将小鼠置于恒温恒湿的环境中饲养，适应环境。

实验前1天，用无菌生理盐水给小鼠灌胃，以提高巨噬细胞的活性。

2. 巨噬细胞培养：取小鼠腹腔巨噬细胞，加入巨噬细胞培养液，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

3. 实验操作：a. 取鸡红细胞悬液，用生理盐水稀释至一定浓度。

b. 将培养好的巨噬细胞悬液加入鸡红细胞悬液中，混合均匀。

c. 将混合液加入巨噬细胞培养瓶中，置于培养箱中培养一段时间。

d. 取出培养瓶，用吸管轻轻吹打，使巨噬细胞与鸡红细胞分离。

e. 将分离后的巨噬细胞悬液离心，弃去上清液，收集沉淀。

4. 观察与记录：a. 取巨噬细胞沉淀，制成涂片。

b. 用姬姆萨染色液染色，置于显微镜下观察。

c. 记录巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，包括吞噬细胞的形态、吞噬的鸡红细胞数量等。

五、实验结果与分析1. 观察结果：在显微镜下，观察到巨噬细胞呈现出典型的吞噬形态，细胞内含有多个鸡红细胞。

2. 分析：a. 巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用，说明巨噬细胞在机体免疫过程中起着重要作用。

b. 吞噬细胞的形态变化与鸡红细胞的吞噬程度有关，吞噬程度越高，细胞形态变化越明显。

c. 通过观察巨噬细胞的吞噬功能，可以了解巨噬细胞在机体免疫反应中的活性。

六、实验结论本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，验证了巨噬细胞在机体免疫过程中的重要作用。