重组碱性成纤维细胞生长因子制作工艺简述
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生长因子的生产工艺流程和产品检验方法
生长因子的生产工艺流程和产品检验方法生长因子是一类具有促进细胞生长和分化能力的蛋白质，广泛应用于医学、生物工程等领域。
本文将详细介绍生长因子的生产工艺流程和产品检验方法。
一、生长因子的生产工艺流程1. 原料准备生长因子的主要原料包括细胞培养基、营养物质和辅助剂等。
首先需要准备好这些原料，并确保其质量符合要求。
2. 细胞培养细胞培养是生长因子生产的关键步骤。
首先需要选择适合的细胞株，并进行培养基配制。
将细胞接种到含有培养基的培养皿中，然后放入恒温恒湿的培养箱中进行培养。
定期观察细胞的形态和增殖情况，确保细胞处于健康状态。
3. 细胞扩增经过一段时间的培养，细胞数量会逐渐增加。
当达到一定密度时，需要进行细胞扩增。
将细胞从原来的培养皿中转移到更大的培养容器中，以提供更多的营养物质和空间。
细胞扩增的过程需要注意保持细胞的健康状态，避免细胞死亡或突变。
4. 生长因子制备细胞扩增到一定程度后，可以开始制备生长因子。
首先将培养基收集下来，然后通过离心等方法去除细胞和杂质。
接下来可以使用柱层析、凝胶过滤等技术对生长因子进行纯化和富集。
最后将纯化后的生长因子进行冻干或冷冻保存，以便后续使用。
5. 产品包装生长因子制备完成后，需要进行产品包装。
通常采用无菌包装方式，将生长因子装入无菌瓶或注射器中，并密封保存。
在包装过程中要注意避免污染和氧化。
6. 产品储存完成产品包装后，需要将生长因子储存起来。
一般情况下，生长因子应存放在低温、干燥、避光的条件下，以确保其稳定性和活性。
二、生长因子的产品检验方法1. 外观检查首先需要对生长因子的外观进行检查。
观察其颜色、透明度和是否有悬浮物等，以确保产品的质量。
2. pH值检测生长因子的pH值对其稳定性和活性有重要影响。
使用pH计测量生长因子溶液的pH值，确保其在合适的范围内。
3. 细菌检测生长因子作为一种生物制品，需要进行细菌检测以确保产品无菌。
常用方法包括培养基平板法和聚合酶链式反应（PCR）等。
重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶解析
重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶Chongzu Niu Jianxing Chengxianwei Xibao ShengzhangyinziNingjiaoRecombinant Bovine Basic Fibroblast Growth Factor Gel本品系由高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后，加入凝胶基质制成。
含适宜稳定剂、防腐剂，不含抗生素。
1.基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合现行版《中国药典》三部“凡例”的有关要求。
2 制造2.1 工程菌菌种2.1.1名称及来源重组牛碱性成纤维细胞生长因子工程菌株系由带有牛碱性成纤维细胞生长因子基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。
2.1.2 种子批建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
2.1.3 菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
2.1.3.1 划种LB琼脂平板应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。
2.1.3.2染色镜检应为典型的革兰氏阴性杆菌。
2.1.3.3 对抗生素的抗性应与原始菌种相符。
2.1.3.4 电镜检查（工作种子批可免做）应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。
2.1.3.5 生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。
2.1.3.6 牛碱性成纤维细胞生长因子表达量在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
2.1.3.7 质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
2.1.3.8目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。
2.2 原液制备2.2.1 种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。
2.2.2 发酵用培养基采用适宜的不含抗生素的培养基。
2.2.3 种子液接种及发酵培养在灭菌培养基中接种适量种子液。
在适宜温度下进行发酵，应采用经批准的发酵工艺，并确定相应的发酵条件，如温度、PH值、溶氧、补料、发酵时间等。
一种重组人碱性成纤维细胞生长因子胶囊剂及其制备方法[发明专利]
![一种重组人碱性成纤维细胞生长因子胶囊剂及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/ef4915accf84b9d529ea7a3d.png)
专利名称：一种重组人碱性成纤维细胞生长因子胶囊剂及其制备方法
专利类型：发明专利
发明人：陈咏,郑赞顺,朱爱堂,方海洲,姜若峰,陈雪平,兰暄
申请号：CN03126613.4
申请日：20030516
公开号：CN1548148A
公开日：
20041124
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种重组人碱性成纤维细胞生长因子胶囊剂及其制备方法，包括：(1)重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh－bFGF)冻干粉0.1％～100％(W/W)，(2)可药用的填充材料0％～99.9％(W/W)，其生产过程为：将处方量的甘露醇、人血白蛋白、rh－bFGF溶于适量蒸馏水中，经无菌过滤后，进行冷冻干燥，将冻干粉过筛与已经烘干并过筛的甘露醇按一定比例混合均匀并装入空胶囊，即可。
对胃液分泌各项指标如胃液体积、胃液酸度、胃蛋白酶排出量及活性等都没有影响，是一种与传统溃疡药物完全不同的新型药物，为溃疡病的治疗提供了另一条全新的思路和理论，具有划时代的意义。
申请人：珠海亿胜生物制药有限公司
地址：519070 广东省珠海市明珠北路东大电子城A03栋3楼
国籍：CN
代理机构：广州三环专利代理有限公司
代理人：温旭
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一种重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法[发明专利]
![一种重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/460963d2580216fc710afd74.png)
专利名称：一种重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法
专利类型：发明专利
发明人：于忠国,曲红艳
申请号：CN200510036465.3
申请日：20050810
公开号：CN1733294A
公开日：
20060215
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明特指一种重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法，包括有重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh－bFGF)原液0.1％～100％(W/W)；可药用的辅料0％～99.9％(W/W)，所述原液其组成为：有效治疗量的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh－bFGF)0.01％～1％(ug/g)、NaCl 0.01％～20％(W/W)、磷酸盐缓冲液2mMol～200mMol、注射用水适量；可药用的辅料可选取以下的物质：卡波姆940NF、透明质酸钠、海藻糖、甘露醇、右旋糖酐40、肝素钠。
本发明采用上述技术方案，具有以下显著的效果及优点：时间短、减少瘢痕的形成、对皮肤附属器官功能恢复更加有效、湿性愈合。
申请人：南海朗肽制药有限公司
地址：528222 广东省佛山市南海区南海软件园创业中心B202
国籍：CN
代理机构：佛山市南海智维专利代理有限公司
代理人：梁国杰
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重组牛碱性成纤维细胞生长因子
重组牛碱性成纤维细胞生长因子重组牛碱性成纤维细胞生长因子：作用机制与应用前景引言成纤维细胞生长因子（Fibroblast Growth Factors，FGFs）是一类广泛存在于多种组织和细胞中的细胞因子，参与了许多生理和病理过程。
近年来，研究人员对重组牛碱性成纤维细胞生长因子（Recombinant Bovine Alkaline Fibroblast Growth Factor，rBAFGF）的作用进行了深入研究，并在多个领域展示了其潜在的临床应用前景。
本文将对rBAFGF的作用机制和应用前景进行综述。
1. 重组牛碱性成纤维细胞生长因子的结构与特性rBAFGF是一种由基因工程技术制备的牛碱性成纤维细胞生长因子，其结构与天然BAFGF相似，由146个氨基酸残基组成。
rBAFGF具有多种生物活性，包括促进血管生成、促进细胞增殖和分化、维持干细胞自我更新等。
与其他FGF家族成员相比，rBAFGF具有较高的碱性，这使得其在一些特定的细胞生长环境中具有更好的生物活性。
2. 重组牛碱性成纤维细胞生长因子的作用机制rBAFGF通过与细胞膜上的FGF受体结合，激活下游的信号转导通路，参与多种细胞和组织的生理过程。
rBAFGF主要通过激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）通路来发挥其生物学功能。
此外，rBAFGF还能够与其他生长因子和细胞因子相互作用，调节复杂的细胞信号网络。
3. 重组牛碱性成纤维细胞生长因子在血管生成中的作用血管生成是新血管形成的过程，对维持正常的生理功能至关重要。
rBAFGF能够通过促进内皮细胞增殖和迁移，增加血管形成的效率。
临床试验表明，rBAFGF可用于治疗缺血性心脏病、冠心病和突发性心肌梗死等心血管疾病，极大地改善了患者的生活质量。
4. 重组牛碱性成纤维细胞生长因子在创伤修复中的应用创伤修复是机体对损伤的自我修复过程，rBAFGF在创伤修复中发挥重要作用。
研究发现，rBAFGF能够促进创伤部位的血管生成和纤维组织增生，加速伤口的愈合。
重组碱性成纤维细胞生长因子制作工艺简述
原液测定内容
• 2.1.1 生物学活性 • 2.1.2 蛋白质含量 • 2.1.3 比活性 • 2.1.4 纯度 • 2.1.5 分子量
为生物学活性与蛋白质含量之比，每1mg 蛋白质应不低于1.7×105IU。
• 2.1.6 外源性DNA残留量 • 2.1.7 等电点
• 每1支应不高于10ng。
用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15.0％，加样量应不低于1.0μg， 制品两条蛋白带的分子质量应分别为17.5kD+1.875kD和22.0kD+2.20kD。
• 1.1.3.6 牛碱性成纤维细胞生长因子表达量
在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
• 1.1.3.7 质粒检查
该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
• 1.1.3.8目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）
目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。
1.4 成品处理
• 1.4.1 分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 • 1.4.2 分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 • 1.4.3 规格 应为经批准的规格。 • 1.4.4 包装 应符合“生物制品包装规程” 的有关规定。
制作人：何尧 ^-^
1.1工程菌菌种
• 1.1.1名称及来源
重组牛碱性成纤维细胞生长因子工程菌株系由带有牛碱性 成纤维细胞生长因子基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。
• 1.1.2 种子批建立
应符合 “生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
• 1.1.3 菌种检定
主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
2.3 成品检定
除外观、装量检查外，应按经批准的方法预处理供试品后，进行其余各项检定。
重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶+重组人表皮生长因子凝胶(酵母)
重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶本品系由高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后，加入凝胶基质制成。
含适宜稳定剂、防腐剂，不含抗生素。
1.基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合现行版《中国药典》三部“凡例”的有关要求。
2 制造2.1 工程菌菌种2.1.1名称及来源重组牛碱性成纤维细胞生长因子工程菌株系由带有牛碱性成纤维细胞生长因子基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。
2.1.2 种子批建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
2.1.3 菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
2.1.3.1 划种LB琼脂平板应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。
2.1.3.2染色镜检应为典型的革兰氏阴性杆菌。
2.1.3.3 对抗生素的抗性应与原始菌种相符。
2.1.3.4 电镜检查（工作种子批可免做）应为典型大肠杆菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。
2.1.3.5 生化反应应符合大肠杆菌生物学性状。
2.1.3.6 牛碱性成纤维细胞生长因子表达量在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
2.1.3.7 质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
2.1.3.8目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。
2.2 原液制备2.2.1 种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。
2.2.2 发酵用培养基采用适宜的不含抗生素的培养基。
2.2.3 种子液接种及发酵培养在灭菌培养基中接种适量种子液。
在适宜温度下进行发酵，应采用经批准的发酵工艺，并确定相应的发酵条件，如温度、PH值、溶氧、补料、发酵时间等。
2.2.4 发酵液处理用适宜的方法处理菌体。
2.2.5 纯化采用经批准的纯化工艺进行纯化，使其达到3.1项要求，即为牛碱性成纤维细胞生长因子原液。
加入稳定剂，除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。
【FGF 2】重组人碱性成纤维细胞生长因子说明书
【FGF 2】重组人碱性成纤维细胞生长因子说明书
碱性成纤维细胞生长因子是成纤维细胞生长因子（FGF）家族的一员。
FGF家族成员具有广泛的有丝分裂和细胞存活活性，参与了胚胎发育、细胞生长、形态发生、组织修复、肿瘤生长和侵袭等多种生物学过程。
该蛋白可作为内皮细胞迁移和增殖的修饰物，同时也是血管生成因子。
它在体外作为多种中胚层和神经外胚层衍生细胞的有丝分裂原，因此被认为参与了器官发生。
描述了编码不同亚型的三种可选拼接变体。
HPR结合生长因子是体内血管生成因子，是多种细胞类型体外的强有丝分裂原。
这两种生长因子在组织分布和浓度上存在差异。
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重组牛碱性成纤维细胞生长因子原液生产车间工艺设计
重组牛碱性成纤维细胞生长因子原液生产车间工艺设计重组牛碱性成纤维细胞生长因子原液生产车间工艺设计摘要重组牛碱性成纤维细胞生长因子（Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，简称rb-bFGF）是一种用于急慢性溃疡、创伤等症状的药品。
能刺激来源于中胚层和神经外胚层细胞的生长，如成纤维细胞、血管内皮细胞、角膜细胞、上皮细胞、神经细胞、肌细胞、骨细胞等，有广泛的生物活性。
日常生活中常应用于美容行业和各种溃疡、创伤、烧伤等治疗，能显著地缩短伤口愈合周期。
具有良好的市场前景。
本设计主要包括：根据发酵、纯化工艺对生产工艺选择、生产所需设备的选型、成本估算、物料衡算、生产车间的设计和CAD图纸的绘制等。
对车间的设计符合GMP标准加上适当的创新，实现人与物料分离，保证了车间的生产效率，有效地避免污染和交叉污染，便与车间的清洁操作和维护。
稳定生产质量的同时尽可能减少成本，确保车间的经济效益。
关键词：重组牛碱性成纤维细胞生长因子；设备选型；物料衡算；CAD图纸绘制；车间设计；Process design of production plant of recombinant bovine basicfibroblast growth factor stock solutionAbstractRecombinant bovine basic fibroblast growth factor (RB bFGF) is a kind of drug for acute and chronic ulcer, trauma and other symptoms. It can stimulate the growth of mesoderm and neuroectoderm cells, such as fibroblasts, vascular endothelial cells, corneal cells, epithelial cells, nerve cells, muscle cells, bone cells, etc. it has a wide range of biological activities. In the daily life, it is often used in the beauty industry and treatment of various ulcers, wounds, burns, etc., which can significantly shorten the wound healing cycle. It has a good market prospect. The design mainly includes: according to fermentation and purification process, production process selection, selection of equipment required for production,cost estimation, material balance, design of production workshop and drawing of CAD drawings, etc. The design of the workshop conforms to GMP standard and appropriate innovation, realizes the separation of people and materials, ensures the production efficiency of the workshop, effectively avoids pollution and cross pollution, and facilitates the clean operation and maintenance of the workshop.Stabilize the production quality while reducing the cost as far as possible, ensure the economic benefit of the workshop.Keywords: Recombinant bovine basic fibroblast growth factor; Equipment selection; Material balance;CAD drawing;Workshop design目录1前言 (1)1.1概述 (1)1.1.1碱性成纤维细胞生长因子简介 (1)1.1.2牛碱性成纤维细胞生长因子简介 (1)1.1.3牛碱性成纤维细胞生长因子作用机理 (1)1.1.4重组牛碱性成纤维细胞生长因子的应用 (2)1.2bFGF在国内外的发展概况及存在的问题 (2)1.3本设计的目的、意义及应达到的技术要求 (3)2工艺流程 (3)2.1种子复苏 (3)2.2一级种子制备 (3)2.3二级种子制备 (4)2.3发酵罐发酵 (4)2.3.1使用前的准备 (4)2.3.2 接种，发酵 (5)2.4 rb-bFGF的分离纯化 (5)2.4.1粗提 (5)2.4.1.1磷酸缓冲液的配制 (5)2.4.2 CM层析 (6)2.4.2.1 CM琼脂糖凝胶操作说明[13] (6)2.4.3肝素亲和层析 (7)2.5工艺流程图 (8)3物料衡算 (8)3.1 物料衡算的基准 (8)3.2 物料衡算的条件 (8)3.3 物料衡算的过程 (9)3.3.1 确定每批的时间 (9)3.3.2 每批次投料量的计算 (9)3.3.3纯化水用量计算 (11)3.3.4注射用水用量计算 (12)3.4热量衡算 (14)3.4.1二级种子制备 (14)3.4.2发酵罐发酵 (14)3.5蒸汽用量计算 (15)3.5.1种子罐实消 (15)3.6.2发酵罐实消 (15)3.7无菌空气用量计算 (15)3.7.1种子罐用无菌空气量 (15)3.7.2发酵罐用无菌空气量 (15)4设备选型 (15)4.1设备选型原则 (16)4.2恒温摇床 (16)4.3电子秤 (17)4.4超低温保存箱 (18)4.5酸度计 (18)4.6分光光度计 (19)4.7种子罐 (19)4.8超声波细胞粉碎机 (20)4.9离心机 (21)4.10发酵罐 (22)4.11注射用水机 (23)4.12纯化水机 (23)4.13层析系统 (24)4.14CM层析柱 (24)4.15肝素层析柱 (25)5车间设计 (25)5.1 设计原则说明 (26)5.2车间布置说明 (26)参考文献 (27)谢辞 (28)附录1 (29)附录2 (30)1前言1.1概述1.1.1碱性成纤维细胞生长因子简介碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor，bFGF）是一种很有应用潜力的生长因子，目前主要应用于细胞体外培养增殖、诱导分化以及体外组织再生领域。
重组碱性成纤维细胞生长因子制作工艺简述共24页文档
Байду номын сангаас重组碱性成纤维细胞生长因子 制作工艺简述
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网
15、机会是不守纪律的。——雨果
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
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目的基因核苷酸序列应与批准序列相符。
1.4 成品处理
• 1.4.1 分批 应符合“生物制品分批规程”规定。
• 1.4.2 分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
• 1.4.3 规格 应为经批准的规格。
bGFG分布
• 主要分布于垂体、脑和神经组织及视网膜、肾上腺、 胎盘等，尤以垂体含量最高，能纯化大量的bFGF（0.5 mg／kg），其它组织含量很少，约为其1／10～1／50。 bFGF不存在或以极低浓度存在于血清和体液中。
• bFGF 作为细胞分裂原，主要作用在起源于中胚层和神 经外胚层的骨骼肌细胞、成纤维细胞和骨细胞等，其受体 也相应的分布于上述细胞表面。FGF存在两类受体：一类 是亲和力受体，属跨膜性酪氨酸蛋白激酶类受体；另一类 是低亲和力受体，即肝素样受体，为硫酸乙酰肝素蛋白多 糖类物质。它们是一条单链多肽，约 110～150 KD，受体 数目约2×103～8×104／细胞，受体对bFGF的亲和力 KD＝18～80 pm。受体至少有4种形式，由细胞外区、跨 膜区、胞浆区的近膜区和酪氨酸激酶区组成，由于每种 FGF受体均能和FGF家族每个成员结合，而不同FGF受体 的表达存在着组织细胞特异性。bFGF与受体亲和力显著 大于aFGF 。
• 30年来，各国学者们研究发现，bFGF通过与细胞膜上 的受体，广泛作用于外胚层、中胚层和内胚层多种来源的 细胞，包括上皮细胞、粘膜细胞、血管内皮细胞、平滑肌 细胞、骨骼肌细胞、卵巢颗粒细胞、成纤维细胞和神经细 胞等，都具有促丝裂原作用和趋化作用，是一种与组织创 伤的愈合过程密切相关的内源性活性因子，因此又被分子 生物学家称之为“人体愈合素”。
• 本品系由高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠 杆菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。
• 成纤维细胞
• 外用重组牛碱性成纤维细 胞生长因子外包装
重组牛碱性成纤维细胞生长因子制备 及检验测定
一、 制备流程
• 1.1工程菌菌种 • 1.2原液制备 • 1.3半成品制备 • 1.4成品处理
• 其主要生物学作用有：（1）作为血管生长因子； （2） 促进创伤愈合与组织修复；（3）促进组织再生；（4）参 与神经再生等。
重组牛碱性成纤维细胞生长因子介绍
• 1974年，英国Gospodarowicz教授从脑垂体中纯化出一 种细胞生长因子，因首先发现对BALT/C3T3细胞等成纤维 有明显的促分裂增殖活性，而被命名为碱性成纤维细胞生 长因子（bFGF）。
应符合 “生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
• 1.1.3 菌种检定
主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
1.2原液制备
• 1.2.1 种子液制备
将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含 适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。
• 1.2.2 发酵用培养基
采用适宜的不含抗生素的培养基。
二、相关检定
• 2.1 原液检定
• 2.2 半成品检定
2.2.1 生物活性检验 2.2.2 无菌检验
• 2.3 成品检定
三、 保存、运输
于2～8℃避光处保存和运输。自生产分装之日 起，按批准的有效期执行。
四、 使用说明
应符合“生物制品包装规程”的规定和批准的 内容。
最终产品图
The end...
应为典型大• 1.1.3.5 生化反应
应符合大肠杆菌生物学性状。
• 1.1.3.6 牛碱性成纤维细胞生长因子表达量
在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
• 1.1.3.7 质粒检查
该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
• 1.1.3.8目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）
bFGF的生物学功能
• bFGF 的生物学效应分体内和体外两大部分。体外作用十 分强烈，成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、 肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有 很强的促细胞分裂增殖活性。体外细胞培养中能在低浓度 （1 mg•ml－1）发挥其作用。bFGF是重要的促有丝分裂 因子，也是形态发生和分化的诱导因子。
• 1.2.6 原液检定
分别测定其生物活性、蛋白质含量等数据。
1.1.3菌株检定
• 1.1.3.1 划种LB琼脂平板
应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。
• 1.1.3.2 染色镜检
应为典型的革兰氏阴性杆菌。
• 1.1.3.3 对抗生素的抗性
应与原始菌种相符。
• 1.1.3.4 电镜检查（工作种子批可免做）
以上理论内容主要来自互联网
参考文献:《动物细胞培养基本技术指南》 ------【英】R.I.弗雷谢尼 著;章静波, 徐存拴 译
制作人：何尧 ^-^
1.1工程菌菌种
• 1.1.1名称及来源
重组牛碱性成纤维细胞生长因子工程菌株系由带有牛碱性 成纤维细胞生长因子基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。
• 1.1.2 种子批建立
重组碱性成纤维细胞生长因子
工艺简述
碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）
• 碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor , bFGF）含155个氨基酸残基的单链蛋白质，分子量为 18kD，是一种能促进各类细胞增殖的一种蛋白质分子， 具有相当广泛的生理功能。
• bFGF作用的靶细胞有成纤维细胞、血管内皮细胞、软骨 细胞、成骨细胞、平滑肌细胞、神经原、神经胶质细胞、 骨骼肌细胞、晶状体上皮细胞、角膜上皮细胞、肾上腺皮 质、髓质细胞等[4]。目前已有研究证实，它在促新生血管 生成、神经细胞及骨组织的再生，损伤愈合方面起着相当 重要的作用[5-10]。由此可见，bFGF在临床上将会有非常 广泛的应用前景。
• 1.2.3 种子液接种及发酵培养
在灭菌培养基中接种适量种子液。在适宜温度下进行发酵， 应采用经批准的发酵工艺，并确定相应的发酵条件，如温 度、PH值、溶氧、补料、发酵时间等。
• 1.2.4 发酵液处理
用适宜的方法处理菌体。
• 1.2.5 纯化
采用经批准的纯化工艺进行纯化，使其达到各项要求，即 为牛碱性成纤维细胞生长因子原液。加入稳定剂，除菌过 滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。
1.4 成品处理
• 1.4.1 分批 应符合“生物制品分批规程”规定。
• 1.4.2 分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
• 1.4.3 规格 应为经批准的规格。
bGFG分布
• 主要分布于垂体、脑和神经组织及视网膜、肾上腺、 胎盘等，尤以垂体含量最高，能纯化大量的bFGF（0.5 mg／kg），其它组织含量很少，约为其1／10～1／50。 bFGF不存在或以极低浓度存在于血清和体液中。
• bFGF 作为细胞分裂原，主要作用在起源于中胚层和神 经外胚层的骨骼肌细胞、成纤维细胞和骨细胞等，其受体 也相应的分布于上述细胞表面。FGF存在两类受体：一类 是亲和力受体，属跨膜性酪氨酸蛋白激酶类受体；另一类 是低亲和力受体，即肝素样受体，为硫酸乙酰肝素蛋白多 糖类物质。它们是一条单链多肽，约 110～150 KD，受体 数目约2×103～8×104／细胞，受体对bFGF的亲和力 KD＝18～80 pm。受体至少有4种形式，由细胞外区、跨 膜区、胞浆区的近膜区和酪氨酸激酶区组成，由于每种 FGF受体均能和FGF家族每个成员结合，而不同FGF受体 的表达存在着组织细胞特异性。bFGF与受体亲和力显著 大于aFGF 。
• 30年来，各国学者们研究发现，bFGF通过与细胞膜上 的受体，广泛作用于外胚层、中胚层和内胚层多种来源的 细胞，包括上皮细胞、粘膜细胞、血管内皮细胞、平滑肌 细胞、骨骼肌细胞、卵巢颗粒细胞、成纤维细胞和神经细 胞等，都具有促丝裂原作用和趋化作用，是一种与组织创 伤的愈合过程密切相关的内源性活性因子，因此又被分子 生物学家称之为“人体愈合素”。
• 本品系由高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠 杆菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。
• 成纤维细胞
• 外用重组牛碱性成纤维细 胞生长因子外包装
重组牛碱性成纤维细胞生长因子制备 及检验测定
一、 制备流程
• 1.1工程菌菌种 • 1.2原液制备 • 1.3半成品制备 • 1.4成品处理
• 其主要生物学作用有：（1）作为血管生长因子； （2） 促进创伤愈合与组织修复；（3）促进组织再生；（4）参 与神经再生等。
重组牛碱性成纤维细胞生长因子介绍
• 1974年，英国Gospodarowicz教授从脑垂体中纯化出一 种细胞生长因子，因首先发现对BALT/C3T3细胞等成纤维 有明显的促分裂增殖活性，而被命名为碱性成纤维细胞生 长因子（bFGF）。
应符合 “生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
• 1.1.3 菌种检定
主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
1.2原液制备
• 1.2.1 种子液制备
将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含 适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。
• 1.2.2 发酵用培养基
采用适宜的不含抗生素的培养基。
二、相关检定
• 2.1 原液检定
• 2.2 半成品检定
2.2.1 生物活性检验 2.2.2 无菌检验
• 2.3 成品检定
三、 保存、运输
于2～8℃避光处保存和运输。自生产分装之日 起，按批准的有效期执行。
四、 使用说明
应符合“生物制品包装规程”的规定和批准的 内容。
最终产品图
The end...
应为典型大• 1.1.3.5 生化反应
应符合大肠杆菌生物学性状。
• 1.1.3.6 牛碱性成纤维细胞生长因子表达量
在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。
• 1.1.3.7 质粒检查
该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
• 1.1.3.8目的基因核苷酸序列检查（工作种子批可免做）
bFGF的生物学功能
• bFGF 的生物学效应分体内和体外两大部分。体外作用十 分强烈，成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、 肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有 很强的促细胞分裂增殖活性。体外细胞培养中能在低浓度 （1 mg•ml－1）发挥其作用。bFGF是重要的促有丝分裂 因子，也是形态发生和分化的诱导因子。
• 1.2.6 原液检定
分别测定其生物活性、蛋白质含量等数据。
1.1.3菌株检定
• 1.1.3.1 划种LB琼脂平板
应呈典型大肠杆菌集落形态，无其他杂菌生长。
• 1.1.3.2 染色镜检
应为典型的革兰氏阴性杆菌。
• 1.1.3.3 对抗生素的抗性
应与原始菌种相符。
• 1.1.3.4 电镜检查（工作种子批可免做）
以上理论内容主要来自互联网
参考文献:《动物细胞培养基本技术指南》 ------【英】R.I.弗雷谢尼 著;章静波, 徐存拴 译
制作人：何尧 ^-^
1.1工程菌菌种
• 1.1.1名称及来源
重组牛碱性成纤维细胞生长因子工程菌株系由带有牛碱性 成纤维细胞生长因子基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。
• 1.1.2 种子批建立
重组碱性成纤维细胞生长因子
工艺简述
碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）
• 碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor , bFGF）含155个氨基酸残基的单链蛋白质，分子量为 18kD，是一种能促进各类细胞增殖的一种蛋白质分子， 具有相当广泛的生理功能。
• bFGF作用的靶细胞有成纤维细胞、血管内皮细胞、软骨 细胞、成骨细胞、平滑肌细胞、神经原、神经胶质细胞、 骨骼肌细胞、晶状体上皮细胞、角膜上皮细胞、肾上腺皮 质、髓质细胞等[4]。目前已有研究证实，它在促新生血管 生成、神经细胞及骨组织的再生，损伤愈合方面起着相当 重要的作用[5-10]。由此可见，bFGF在临床上将会有非常 广泛的应用前景。
• 1.2.3 种子液接种及发酵培养
在灭菌培养基中接种适量种子液。在适宜温度下进行发酵， 应采用经批准的发酵工艺，并确定相应的发酵条件，如温 度、PH值、溶氧、补料、发酵时间等。
• 1.2.4 发酵液处理
用适宜的方法处理菌体。
• 1.2.5 纯化
采用经批准的纯化工艺进行纯化，使其达到各项要求，即 为牛碱性成纤维细胞生长因子原液。加入稳定剂，除菌过 滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。