胶体金免疫层析试验须注意的几个问题

免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。

免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。

而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。

1耗材的选择1.1不同型号膜的筛选。

硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。

不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径和分布结构不同。

膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。

用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。

1.2结合垫的选择。

结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物和待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。

1.3样品垫及吸水纸的选择。

样品垫和吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。

试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫和吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。

如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸和样品垫。

胶体金免疫试纸技术在食品兽药残留检测中应用摘要：动物产品中兽药残留是威胁人体健康和影响畜产品质量安全的重要因素。

虽然检测兽药残留的方法很多，但皆因其设备昂贵、操作繁琐、费时而受到限制。

而胶体金免疫层析技术因其快速、灵敏、简便等特点，在兽药残留检测中广泛研究与应用。

论文就胶体免疫层析法的原理，在兽药残留检测中研究应用以及发展前景做了较为详细的阐叙。

关键词：胶体免疫层析法；兽药残留；检测引言在残留毒理学意义上比较重要的兽药，按照用途主要有抗微生物类、驱虫类、抗球虫和抗原虫药物、抗生素类生长促进剂、合成代谢荷尔蒙类生长促进剂等[1]。

目前，国际上通用的兽药残留检测方法是先采用一种简便的方法对待检样品进行快速初筛，再采用准确性更高的方法对初筛为阳性的样品进行确证分析[2].国内食品受兽药污染问题严重，国家和政府对此已做了大量的投入，但执行情况仍不尽人意，造成该现象的主要原因之一是缺乏快速、灵敏、简便的检测方法[3]。

薄层层析、ELISA法、高效液相色谱、质谱检测技术，由于上述方法需借助仪器设备来完成检测过程时间较长不适宜现场快速检测。

近年来，胶体金免疫层析法因操作简单，不需辅助仪器和试剂，3~5分钟出结果，并可肉眼判断等特点。

因此它在大批量兽药残留现场和初筛检验中得到研究与应用。

1胶体金免疫层析法胶体金(colloidal gold)是氯金酸( chloroauricacid)的水溶液，是氯金酸在还原剂如白磷、柠檬酸三钠等的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定胶体溶液。

由于胶体金颗粒具有高电子密度的特性,且颗粒聚集达到一定密度时，出现肉眼可见的粉红色斑点，因而可以作为免疫层析试验的指示物。

因此胶体金免疫层析法是一种以胶体（红色）作为示踪标记物[4]。

让其与蛋白质等各种大分子物质结合，再利用抗原抗体反应以达到检测目的的一种新型的免疫标记方法。

GICA主要包括夹心法和竞争抑制法，夹心法包括双抗体夹心法测抗原和双抗原法测抗体，主要用于病毒、细菌和寄生虫等的检测[5]。

胶体金免疫层析技术原理胶体金免疫层析技术是一种基于胶体金颗粒的分析方法，常用于生物医学领域的分子检测和诊断。

该技术的原理是利用胶体金颗粒与特定抗原或抗体的高度特异性结合能力，通过可视化或仪器测量的方式实现目标分子的定量或定性分析。

胶体金是一种具有特殊光学性质的纳米材料，其颗粒大小一般在10-100纳米之间。

这种材料具有高度的稳定性和生物相容性，并且在可见光范围内具有强烈的吸收和散射光谱特性。

在胶体金免疫层析技术中，胶体金颗粒表面通常被修饰上特定的抗原或抗体。

在分析过程中，样品中的目标分子与胶体金颗粒表面的抗体结合形成复合物。

这种结合通常是由于抗原与抗体之间的特异性配对引起的。

复合物的形成会导致胶体金颗粒的聚集或分散状态发生变化。

胶体金免疫层析技术通常采用纸条或膜作为载体。

样品在载体上流动时，复合物会在特定位置停留，形成可见的信号线。

这个信号线的强度与目标分子的浓度成正比。

通过测量信号线的长度、颜色强度或使用专门的仪器分析，可以确定目标分子的存在与否以及其浓度。

胶体金免疫层析技术具有以下优点：1. 高度特异性：由于抗原与抗体之间的高度特异性结合，胶体金免疫层析技术可以准确地检测目标分子，避免了其他杂质的干扰。

2. 灵敏度高：胶体金颗粒具有强烈的吸收和散射光谱特性，使得该技术能够检测到非常低浓度的目标分子。

3. 快速简便：胶体金免疫层析技术通常只需要几分钟到几小时的时间完成分析，操作简单，不需要复杂的仪器设备。

4. 可视化结果：该技术可以通过肉眼观察或简单的仪器测量获得结果，无需复杂的数据处理。

胶体金免疫层析技术在临床诊断、食品安全监测、环境污染检测等领域具有广泛应用。

例如，在临床诊断中，可以利用该技术检测血液中的肿瘤标志物、病原体和药物残留等；在食品安全监测中，可以检测食品中的致病菌和有害物质；在环境污染检测中，可以检测水体、土壤和大气中的污染物。

胶体金免疫层析技术是一种快速、准确、简便且可视化的分析方法。

免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。

免疫胶体金技术的反应过程就是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。

而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响与制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。

1耗材的选择1、1不同型号膜的筛选。

硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。

不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物与表面活性剂的来源、类型与数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径与分布结构不同。

膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但就是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就就是假阳性越高。

用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小与分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。

1、2结合垫的选择。

结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物与待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。

1、3样品垫及吸水纸的选择。

样品垫与吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。

试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫与吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。

如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸与样品垫。

免疫胶体金技术常见影响因素分析自胶体金作为特殊标记物进行研究以来,建立的各种免疫胶体金技术以其特异性强、灵敏度高、操作简捷等特点,在医学、农牧业、环境及食品检测等领域被广泛应用。

免疫胶体金技术的反应过程是一个由金颗粒、抗原与抗体动态结合的反应过程,在这个过程中每个环节的好坏都直接影响试验的成败。

而试验过程中每个环节又受到很多因素的影响和制约,下面将影响免疫胶体金技术的因素作一分析,为成功制备胶体金检测产品提供参考。

1耗材的选择1.1不同型号膜的筛选。

硝酸纤维素膜的型号在试验中至关重要,作为反应载体影响到整个试验的成败。

不同的生产厂家生产硝酸纤维素膜时使用的聚合物和表面活性剂的来源、类型和数量均大不相同,对生产出的膜的性能产生较大影响——膜的孔径和分布结构不同。

膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增;膜孔径越小,层析速度也越慢,金标复合物通过T线的时间就越长,反应也就越充分;因此膜孔径越小灵敏度越高,但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高。

用于金标免疫快速试验的膜多为硝酸纤维素膜或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜,不同的包被蛋白对膜有特定要求,试验者应根据蛋白质的性质选择适合孔径大小和分布结构的膜,找到合适的平衡点,使胶体金的标记物在膜上的流动速率为最佳。

1.2结合垫的选择。

结合垫位于层析系统的中间,一般要求结合垫的网格均一且非特异性吸附低,能很好地负载胶体金标记物和待检测样品,而不被吸附;玻璃纤维素膜具备以上优点,同时具有一定的硬度,为试验中常用。

1.3样品垫及吸水纸的选择。

样品垫和吸水纸位于胶体金免疫层析系统的两端,对于胶体金层析系统功能的实现起着举足轻重的作用。

试验中应根据试纸条检测样品的性质选择合适的样品垫和吸水纸,保证样品在样品垫形成的通道中快速地流动而不被非特异性地吸附或者改变样品的性质。

如检测样品为血清,则可选择网格较疏松的玻璃纤维素膜即可;如果检测样品为毒素,则可选择质量好的吸水纸和样品垫。

胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留周萍;李樱红;尹志红;吕泽田;尹君;王静;徐初【摘要】建立了胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留的检测方法.样品在碱性条件下溶解稀释,20％高氯酸溶液除杂过滤后,加入碱化剂适量,经乙酸乙酯提取,盐析净化后,再用乙酸乙酯提取吹干,加入正己烷和复溶液溶解后,用胶体金快速检测试剂板快速检测.结果表明,胶体金免疫层析法对蜂胶及蜂胶提取物中氯霉素残留量的检测限分别为0.1μg/kg和0.2μg/kg.经高效液相色谱-串联质谱确证,假阳性率和假阴性率均为0％.该方法操作简单、灵敏度高、准确可靠,可用于加工蜂胶及蜂胶乙醇提取物过程中对氯霉素残留量的质量控制.【期刊名称】《中国蜂业》【年(卷),期】2019(070)005【总页数】5页(P68-72)【关键词】蜂胶;蜂胶乙醇提取物;氯霉素;胶体金免疫层析法【作者】周萍;李樱红;尹志红;吕泽田;尹君;王静;徐初【作者单位】杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;浙江省食品药品检验研究院,杭州310052;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;中国蜂产品协会蜂胶专业委员会,北京100050;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500;杭州碧于天保健品有限公司,桐庐311500【正文语种】中文蜂胶是工蜂采集胶源植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶黏性物质[1]。

蜜蜂主要用蜂胶堵塞蜂巢缝隙，以防止有害细菌、病毒或真菌的入侵，保证蜂箱洁净卫生。

蜂胶的化学成分复杂，含有多种活性物质，其功效成分主要为黄酮类、酸类、酯类化合物等[2]。

《中华人民共和国药典》（2015年版一部）载明蜂胶补虚弱，化浊脂，止消渴；外用解毒消肿，收敛生肌；用于体虚早衰，高脂血症，消渴；外治皮肤皲裂，烧烫伤[3]。

蜂胶凭借独特的医疗保健作用，正越来越受到消费者的青睐。

胶体金法操作注意事项全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：胶体金法是一种将金属离子还原成金属纳米粒子的技术，广泛应用于纳米材料制备、生物医药、传感器等领域。

在进行胶体金法操作时，有一些注意事项需要遵守，以确保实验顺利进行并获得理想的结果。

实验室安全是最重要的一点。

在进行胶体金法操作时，通风良好的实验室环境是必要条件。

操作人员应戴好实验室防护眼镜、手套等防护用具，避免金属离子或其他化学物质对皮肤和眼睛的刺激。

胶体金法操作中需要使用高纯度的试剂。

金属离子溶液、还原剂、稳定剂等试剂应该经过严格的处理和净化，以确保实验的准确性和可重复性。

实验器材也需要经过严格的清洁和消毒处理，避免杂质对实验结果的影响。

实验中需要严格控制反应条件。

胶体金纳米粒子的形貌和粒径大小受到反应条件的影响，如温度、pH值、还原剂浓度等。

操作人员需要根据实验要求精确控制反应条件，避免因条件不当导致实验结果不稳定或无法复制。

实验过程中需要定期监测反应的进行情况。

通过观察反应体系的颜色、浑浊度等变化情况，可以了解反应的进行情况，并及时调整操作步骤。

在操作过程中，遇到异常情况如反应失控、溶液溢出等，应立即停止操作并进行处理，避免事故发生。

实验后需要对产物进行适当的处理和储存。

胶体金纳米粒子具有一定的稳定性，但在长时间保存过程中仍可能发生聚集或变性现象。

操作人员需要选择合适的稳定剂、储存条件等手段，保证产物的质量和活性。

胶体金法是一种有效的制备金纳米材料的方法，但在操作过程中需要遵守一系列注意事项，以确保实验顺利进行并获得理想的结果。

只有严格按照操作规程进行操作，准确控制反应条件，及时监测反应的进行情况，对产物进行适当处理和储存，才能保证实验的成功和产物的质量稳定。

希望以上内容对胶体金法操作有所帮助。

第二篇示例：胶体金法是一种常用的合成纳米材料的方法，其中金纳米颗粒通过还原金盐来制备。

在进行胶体金法操作时，需要遵守一定的注意事项，以确保实验的顺利进行和结果的准确性。

胶体金免疫层析试验须注意的几个问题1971年，Faulk和Taylor首先报道将胶体金与抗体结合，应用于电镜水平的免疫细胞化学研究。

1974年，Romano等用胶体金标记抗球蛋白抗体，建立间接免疫金染色法。

此后，胶体金作为一种新型免疫标记技术发展很快[1]。

目前在医学检验中的应用主要是胶体金免疫层析法（gold immunochromatography assay GICA）和胶体金免疫渗滤法（gold immunofiltration assay GIFA）。

1990年Beggs[2]和Osikowicz[3]等相继建立了免疫层析试验。

胶体金免疫层析试验是将各种反应试剂分点固定在同一试纸条上，待检标本加在试纸条的一端，将一种试剂溶解后，通过毛细作用在层析条上移行并与膜上另一种试剂接触，标本中的待测物同层析材料上针对待测物的受体（如抗原或抗体）发生特异性免疫反应。

层析过程中免疫复合物被聚集或截留在层析材料的一定区域（检测带），通过可目测的胶体金标记物得到直观的显色结果。

而游离标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的。

其特点是单份测定、简单、快速，除商品试剂外不需任何仪器设备，几分钟即可用肉眼观察结果。

目前已在临床检测中获得广泛应用，极大地简化了检验步骤，同时，也给试纸条制备者带来了一定的难度。

胶体金免疫层析试纸条有十几种原材料及辅助材料组成，要想达到临床要求需作大量的试验，根据我们多年的工作经验，现就胶体金免疫层析试验过程中必须注意的几个关键问题作以介绍。

1 胶体金颗粒大小的选择胶体金颗粒的大小与产品的灵敏度及特异性有关。

我们制备了如下胶体金液体各100ml，0.01％氯金酸水溶液中加入1％柠檬酸三钠的量分别为：①1.0ml；②1.5ml；③2.0ml；④2.5ml。

各取其50ml，调PH值为6.9进行抗HBsAg抗体标记,分别做灵敏度及特异性实验,结果见表1。

由表1可看出：胶体金颗粒越大，灵敏度越高，但特异性越差。