免疫层析试纸条的分类

免疫层析试纸包被技术简介试纸生产过程中一般有三种溶液的包被处理，即质控溶液，检测溶液，和结合物溶液（胶体金）。

质控和检测溶液就是C/T线上包被的溶液。

在免疫层析试纸硝酸纤维素膜表面进行C/T线的包被，是试纸生产制作的关键环节之一。

免疫诊断试剂中使用的硝酸纤维素膜有两类，一种是免疫渗滤产品用的，按孔径选择一般采用0.45um-1.2um的膜，与分子生物学中用的印迹转移膜一样。

Whatman Schleicher &Schuell 的膜属于纯采用100%的纯硝酸纤维素，蛋白结合能力较高。

另一类即免疫层析用膜，一般按侧向流动速度来划分，常用的范围一般在120-180秒/4cm。

目前市场上的硝酸纤维素膜材以带塑料底衬为主，也有部分的膜不带底衬。

不带底衬的膜需注意膜面的正反面，其光滑度有适当差别。

鉴于流动封闭技术的普及，C/T线的包被目前流行先将膜粘贴在塑料底板上，然后直接将塑料底板放在仪器上进行划线操作，干燥后进行其他部分的贴板组装，这种划膜工艺可简称为划板。

但部分产品的工艺要求先直接在膜上划好C/T线，然后用特定配方的溶液将膜进行浸泡封闭处理，干燥后再贴膜及其他部分材料，这种划膜工艺可简称为划膜。

在结合物溶液（胶体金）的包被上，较多的用户倾向于用气动喷头进行定量操作。

在科研及研发项目中，往往喷一条线或几条线就够用了，因此在单维往复平台上一次喷一条线也可接受。

鉴于胶体金切条宽度一般在3--7mm，不方便一条条依次地在移动平台上固定和取放。

因此在批量生产过程中，一般建议采用成片的胶体金垫，用三维平台往复来回间隔喷线，一次即可喷出二三十条。

此后将喷好的金干燥再裁切成条，这样的操作会效率高，适合规模生产。

在某些免疫层析试纸产品生产工艺中，层析膜材或样品垫膜材需要用特定溶液进行整平面包被，要求效果均匀，如层析膜和样品垫的特定封闭处理。

而一般的浸泡或铺金工艺满足不了要求。

这时可用气动喷头叠加喷线成面。

通过对溶液量和气体压力的调节，往往可以取得好的效果。

免疫层析试纸包被技术简介试纸生产过程中一般有三种溶液的包被处理，即质控溶液，检测溶液，和结合物溶液（胶体金）。

质控和检测溶液就是C/T线上包被的溶液。

在免疫层析试纸硝酸纤维素膜表面进行C/T线的包被，是试纸生产制作的关键环节之一。

免疫诊断试剂中使用的硝酸纤维素膜有两类，一种是免疫渗滤产品用的，按孔径选择一般采用0.45um-1.2um的膜，与分子生物学中用的印迹转移膜一样。

Whatman Schleicher&Schuell的膜属于纯采用100%的纯硝酸纤维素，蛋白结合能力较高。

另一类即免疫层析用膜，一般按侧向流动速度来划分，常用的范围一般在120-180秒/4cm。

目前市场上的硝酸纤维素膜材以带塑料底衬为主，也有部分的膜不带底衬。

不带底衬的膜需注意膜面的正反面，其光滑度有适当差别。

鉴于流动封闭技术的普及，C/T线的包被目前流行先将膜粘贴在塑料底板上，然后直接将塑料底板放在仪器上进行划线操作，干燥后进行其他部分的贴板组装，这种划膜工艺可简称为划板。

但部分产品的工艺要求先直接在膜上划好C/T线，然后用特定配方的溶液将膜进行浸泡封闭处理，干燥后再贴膜及其他部分材料，这种划膜工艺可简称为划膜。

在结合物溶液（胶体金）的包被上，较多的用户倾向于用气动喷头进行定量操作。

在科研及研发项目中，往往喷一条线或几条线就够用了，因此在单维往复平台上一次喷一条线也可接受。

鉴于胶体金切条宽度一般在3--7mm，不方便一条条依次地在移动平台上固定和取放。

因此在批量生产过程中，一般建议采用成片的胶体金垫，用三维平台往复来回间隔喷线，一次即可喷出二三十条。

此后将喷好的金干燥再裁切成条，这样的操作会效率高，适合规模生产。

在某些免疫层析试纸产品生产工艺中，层析膜材或样品垫膜材需要用特定溶液进行整平面包被，要求效果均匀，如层析膜和样品垫的特定封闭处理。

而一般的浸泡或铺金工艺满足不了要求。

这时可用气动喷头叠加喷线成面。

通过对溶液量和气体压力的调节，往往可以取得好的效果。

胶体金免疫层析试纸条原理胶体金免疫层析试纸条（Colloidal Gold Immunochromatographic Strip）是一种通过胶体金纳米颗粒与抗体互作用检测特定生物标志物的生物分析方法。

胶体金免疫层析试纸条是一种基于抗体与抗原特异性结合的快速检测试剂，具有简单、快速、灵敏、特异性和便携等优点。

胶体金免疫层析试纸条的原理是利用胶体金纳米颗粒的特性与生物分子相互作用，完成快速检测分析。

试剂条通常由三个部分组成：采样孔、检测膜和吸收纸。

其中检测膜是由贴在聚丙烯酸纤维膜上的抗体分子组成。

检测过程中，样品通常在采样孔处进入试剂条，并沿着检测膜滤过。

样品中的目标分子与膜上的抗体分子结合，并形成膜上的免疫复合物。

在此过程中，胶体金纳米颗粒被添加进样品中。

这些胶体金纳米颗粒上载有反向包被（reverse electrophoretic coating），使胶体金纳米颗粒呈负电荷状态，防止颗粒之间发生不可逆聚集作用。

在测试区和控制区之间的吸收纸层包括了大量的胶体金纳米颗粒。

当测试完成时，样品和胶体金纳米颗粒将被移动到吸收纸层，并进一步与该层的各种化学试剂和物质反应。

控制区内的抗体分子能够与胶体金纳米颗粒发生特异性结合，从而产生红色的线条。

胶体金免疫层析试纸条是一种快速、可视化的生物分析方法，通过免疫反应，通过控制区和测试区之间可见免疫反应条带的形成，快速检测并定性或半定量特定生物标志物。

胶体金免疫层析试纸条的应用范围较广，主要应用于临床检测、环境监测和食品安全等领域。

在临床检测方面，胶体金免疫层析试纸条被广泛应用于诊断感染性疾病，如肺炎、流行性感冒、艾滋病和病毒性肝炎等。

胶体金免疫层析试纸条还可被用于检测肿瘤标志物。

在环境监测方面，胶体金免疫层析试纸条可被用于检测重金属、农药残留、水质监测和气体污染等。

在食品安全方面，胶体金免疫层析试纸条可被应用于检测食品中的防腐剂、色素、激素和有毒污染物等。

胶体金免疫层析试纸条具有多种优势。

荧光免疫层析试纸条原理宝子们，今天咱们来唠唠荧光免疫层析试纸条的原理，可有趣啦。

咱先得知道啥是免疫反应。

就好比啊，我们身体里有一群小卫士，就是免疫细胞和免疫分子。

当有外来的坏蛋，像细菌啊、病毒啊入侵的时候，这些小卫士就会立马识别出来，然后和这些坏蛋展开一场大战。

这就是免疫反应在咱们身体里的情况。

那在这个荧光免疫层析试纸条里呢，也有类似的情况。

这个试纸条上有一些特殊的东西哦。

它有一些能识别特定物质的抗体。

比如说，我们想检测是不是有某种病毒在样本里，就会有针对这个病毒的抗体在试纸条上等着呢。

这就像是在一个小迷宫的入口安排了专门抓特定小怪兽的小超人。

再说说这个荧光是咋回事。

荧光就像是给这些小超人加了个会发光的小标记。

当样本滴到试纸上的时候，如果里面有我们要检测的东西，比如说那个病毒，这个病毒就会和试纸上的抗体结合。

这一结合啊，就像是小怪兽被小超人抓住了手。

然后呢，因为抗体上带着荧光标记，这个结合体就会在试纸上显示出荧光来。

你可以想象这个试纸条是一个小小的舞台。

那些抗体就是舞台上的演员，它们在那静静地等着自己的“搭档”。

当样本这个神秘嘉宾到来的时候，如果嘉宾是抗体一直在等的，那它们就会迅速牵手，然后在荧光这个灯光师的照耀下，闪亮登场，让我们看到它们的存在。

而且哦，这个试纸条的结构也很巧妙呢。

它有不同的区域，就像不同的小房间。

样本首先会来到一个区域，这个区域就像是一个筛选室。

如果样本里没有目标物质，那它可能就直接过去了，不会引起什么大动静。

但是如果有目标物质，那在这个筛选室里就会开始和抗体结合，然后随着液体的流动，这个结合体就会被带到下一个区域。

这个下一个区域就像是展示厅，在这儿，荧光标记的结合体就会把自己的荧光展示出来，让我们一眼就能看到，“哦，原来样本里有我们要找的东西呢。

”这整个过程就像是一场小小的寻宝之旅。

我们在试纸条这个神秘的小世界里寻找特定的宝藏，也就是我们要检测的物质。

而荧光就像是宝藏发出的神秘光芒，指引着我们找到它。

应用胶体金免疫层析试纸条技术让食品安全检测更高效作者：林爱齐来源：《中国食品》2020年第15期胶体金免疫层析技术（c o l l o i d a l g o l d immunochromatography strip，CGIS）为免疫层析试纸条检测技术的延伸，免疫层析试纸条技术具有快速方便、操作简单、特异性强、灵敏度高、能够进行现场快速检测等优点，在食品安全检测方面具有很大的应用潜力以及发展空间。

一、原理CGIS主要依靠抗原和抗体能够进行特异性结合的基本原理。

胶体金通常是指直径在1nm-150nm之间的细小颗粒，在弱碱性环境下带负电，能与带有正电的蛋白质分子进行静电结合并形成稳定的胶体金标记物，而且不会影响蛋白质的性质。

胶体金的颜色在橙色到紫红色之间，可依此作为检测的依据。

CGIS试纸条是提前在层析膜上固定好具有特异性的抗原或抗体，并将胶体金标记试剂吸附到结合垫上。

在样本垫上添加尚未检测的样本，硝酸纤维素膜形成的微孔膜具有毛细作用，可以吸引着样品不断前进；当样品溶解并结合了垫上的胶体金标记试剂后，两者就会进行反应并形成结合物；继续前进到固定有抗原或抗体的特定区域，结合物又与抗原或抗体发生特异性反应并被截留在此，最终聚集在检测带上，根据C、T线的颜色来判断检测结果。

二、发展过程1971年，FAULK等人使用免疫金染色进行沙门菌的检测，拉开了纳米金免疫标记技术的序幕。

1974年，Romano等研究者巧妙地将胶体金标记在第二抗体上，成功建立了间接胶体金染色法。

目前，酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、单克隆抗技术等也为CGIS的不断完善和更新提供了理论以及技术上的支撑。

CGIS最开始是在人绒毛膜促性腺激素（HCG）测定时使用，此后在早孕、毒品、疾病、食品的检测方面得到广泛的应用。

虽然CGIS具有很多优点，但是仍然有很大的进步空间，有研究者融合银染的技术，有效提高了检测的靈敏性。

由于胶体金的成本较高，金颗粒标记物的稳定性较差，利用胶体硒来代替胶体金，既让整个制作过程更加简单方便，也降低了制作成本。

免疫层析试剂结构
免疫层析试剂是一种利用天然或人工制备的抗体或抗原选择性地结合
其相对应的抗原或抗体的化学试剂，用于检测或纯化目标蛋白质或分
子的技术。

在免疫层析过程中，靶分子通过和特异性抗体结合来进行
分离和检测。

因此，免疫层析试剂具有特异性和敏感性的优点，被广
泛应用于生物化学、医学、生命科学等领域中。

免疫层析试剂结构包括以下几个主要组成部分：固相载体、抗体或抗原、标记物、缓冲液和其他添加剂。

固相载体是免疫层析试剂的核心部分之一，它是一个固定的基质，用
于固定抗体或抗原。

目前常用的固相载体主要有丙烯酰胺凝胶、硅胶、纳米金颗粒等材料。

这些固相载体具有不同的特点和应用，可根据实
验要求选择不同的固相载体。

抗体和抗原是免疫层析试剂的另一个主要组成部分。

抗体和抗原之间
的特异性结合是免疫层析的关键步骤。

抗体和抗原的制备是一项复杂
的工作，常用的方法包括动物免疫、滴度蓝染色法等。

标记物是一种用于标记抗体或抗原的化学物质，广泛应用于免疫层析
试剂中。

标记物的选择也是实验设计中的一个重要环节，常用的标记
物有发光素酶、放射性同位素、发光材料等。

缓冲液和其他添加剂是免疫层析试剂中必不可少的组成部分，它们可调节pH值、离子强度、渗透压、抗氧化剂、保护剂等，提高试剂稳定性和灵敏度。

总体来说，免疫层析试剂的结构是一个复杂的体系，其中各组分之间相互协作，共同完成特定的生物化学功能。

研究免疫层析试剂的结构和优化其中的组成部分，能够提高免疫层析试剂的效率和稳定性，实现更为精准和高效的分离和检测。

免疫层析法检测原理分类介绍作者：佚名文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司点击数：88 更新时间：2005-10-16双抗体夹心·以 hCG试剂为例金标为鼠源性抗β-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。

妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。

当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位置hCG的β链和单抗β-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的α链和多抗α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。

当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。

当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。

该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG。

测HbsAg的HbsAg产品的检测原理是双抗体夹心。

竞争反应原理·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白）金标为鼠源性抗体Morphine单抗和胶体金的复合物，T线（为取得较强的免疫应答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA。

C 线包被羊抗鼠抗体。

当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。

当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到阴性结果。

漫谈免疫层析诊断试剂中的标记物前言免疫层析诊断试剂是根据免疫学原理、利用大孔径微孔滤膜为载体、通过固相标记物来定性、半定量或定量检测样本中待测物质含量的一种侧流快速检测技术。

由于其最符合WHO关于理想诊断试剂ASSURED（见附）的标准，自80年代末、90年代初以来已经得到了很大的发展。

表现在：1.检测项目越来越多；2.检测范围越来越广； 3.检测样本种类越来越多；4.标记物种类越来越丰富； 5.检测灵敏度越来越高； 6.从单一检测发展到多元检测； 7.从定性发展到半定量、定量检测。

勿容置疑，提高检测灵敏度、定量检测以及多元检测是免疫层析技术发展的三个方向。

尤其是检测灵敏度不高是限制免疫层析诊断技术发展的最主要技术障碍。

但三者的发展均与标记物的发展息息相关，因此，可以说，免疫层析诊断试剂的发展主要表现在标记物的发展上。

没有标记物的发展，多元检测、灵敏度的提高以及定量检测都不可能实现。

在免疫层析诊断试剂中，理想的标记物应具备以下条件：1．灵敏度高；灵敏度一般要达到ng级，甚至pg和甚至fg级，而且标记物容易被简便快速、价廉的检测系统检测到。

2．结合特性好；标记物应不影响抗体或抗原的免疫活性、亲和力和特异性，不减少免疫反应信号的产生。

另外，标记和纯化的方法比较简单。

3．均一性好，制作方便；4．稳定性好；标记物必须对样本中的可能影响物质，如、酶类、有色物质、淬灭物质等不敏感，才能保证标记试剂在较长时期内的稳定储存，减少批间和批内差。

5．环境因素的不敏感性；标记物对环境中的光、温度以及样本中缓冲液、温度或PH等变化不敏感。

6．安全性好；标记物必须无毒、安全、无危险、无废物处理问题。

7．应用性好；标记物必须来源方便，标记反应温和，容易得到理想结果和重复性好，能广泛应用于临床和研究。

“人无完人，金无足赤”，目前尚未发现完全符合上述要求的标记物。

本文将就免疫层析诊断试剂中使用的标记物做逐一介绍。

由于尚无使用相同材料来比较诸多的标记物，因此无法用同一种待测物比较检测灵敏度。

1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，材料附着应牢固，各组分应齐全、完整，标签清晰，卡固定紧密，液体无渗漏。

1.2物理检查
膜条宽为 4.0±0.5mm ；液体移行速度应不低于10mm/min。

1.3准确性
对于没有配备系列校准品的试剂盒，可在试剂盒规定的测量范围内检测国家
标准品，其实测值与理论值之比应在0.850~1.150 之间。

1.4最低检出限
应不高于12.87 nmol/L。

1.5线性
在（12.87~310）nmol/L 范围内，用lg-logit 数学模型拟合或其他适当的数学模型拟合，剂量-反应曲线线性相关系数的绝对值（|r|）应不低于0.9900。

1.6精密度
1.6.1分析内精密度
手工操作试剂盒参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于15%。

1.6.2批间精密度
在多个不同批次产品之间，参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于20%。

1.7特异性
1.7.1与三碘甲状腺原氨酸（TT3）
浓度不低于500ng/ml 的TT3 在本试剂盒上的测定结果应不高于19 nmol/L。

1.7.2与反三碘甲状腺原氨酸（r T3）
浓度不低于50ng/ml 的r T3 在本试剂盒上的测定结果应不高于19 nmol/L。