007空气中菌落总数测定方法

国标菌落总数检测方法一、引言菌落总数是指在一定条件下，通过菌落计数方法，测定在样品中存在的微生物总数。

它是评价食品、水质和环境卫生状况的重要指标之一。

国标菌落总数检测方法是指根据国家标准规定的菌落总数检测方法进行微生物总数的测定。

本文将详细介绍国标菌落总数检测方法的原理、步骤及其应用领域。

二、原理国标菌落总数检测方法基于菌落形成的原理，通过将待测样品进行适当稀释，并在寒暖培养条件下培养一定时间，然后对形成的菌落进行计数。

根据国家标准，通常采用平板计数法和膜过滤法两种方法进行菌落总数的检测。

平板计数法是将适量的待测样品均匀涂布在含有适宜培养基的平板上，然后在适当温度下进行培养，最后对菌落进行计数。

该方法适用于微生物菌落较多的样品，如食品和水样等。

膜过滤法是将待测样品通过特定的膜过滤器，过滤到含有适宜培养基的培养皿中，然后在适当温度下进行培养，最后对膜上形成的菌落进行计数。

该方法适用于微生物菌落较少的样品，如空气和药品等。

三、步骤1. 样品制备：将待测样品按照国家标准要求进行适当稀释，以确保在培养过程中菌落呈现合适的数量。

2. 平板计数法：将稀释好的样品用无菌棉签均匀涂布在含有适宜培养基的平板上，然后倒扣放置在恰当温度下进行培养。

3. 膜过滤法：将稀释好的样品通过无菌膜过滤器过滤到含有适宜培养基的培养皿中，然后倒扣放置在恰当温度下进行培养。

4. 培养：根据国家标准要求，将培养皿或平板在适当温度下培养一定时间，以促使菌落的生长和形成。

5. 计数：在培养时间结束后，使用显微镜或菌落计数器对菌落进行计数，然后根据国家标准计算出菌落总数。

四、应用领域国标菌落总数检测方法广泛应用于食品、水质和环境卫生等领域。

在食品行业中，菌落总数的检测可以评估食品的卫生状况和微生物污染程度，有助于保障食品的安全性；在水质监测中，菌落总数的检测可以评估水质的卫生状况和微生物污染程度，有助于确保饮用水的安全性；在环境卫生监测中，菌落总数的检测可以评估环境卫生状况和微生物污染程度，有助于维护公共卫生和环境健康。

空气中细菌含量的检测
空气中细菌含量的检测有两种方法即：空气采样器法和平板暴露法。

（一）空气采样器法
用空气微生物采样器，在鸡舍内四周和中央采样，采样1或2分钟，然后将琼脂平板置于37℃温箱中培养24小时，观察并计数平板的菌落，求出5个采样点的平均菌落数。

计算公式为：
（二）平板暴露法
将普通琼脂平板或血液琼脂平板，水平地放在鸡舍内四角和中央各1个，将平皿盖打开，扣放在平皿底的底边，根据鸡舍内的污染程度，暴露10~20分钟，然后盖好平皿，将平皿放在37℃温箱中培养24小时，观察并计数平板上的菌落数，求出5个平板中的平均菌落数，据测试，5分钟内在100平方厘米面积上降落的细菌数，相当于10升空气中所含的细菌数，因此，可按下列公式计算：
A=平板面积（平方厘米）
T=平板暴露于空气中的时间（分）
N=平均菌落数
（三）鸡舍空气中细菌允许量
一般认为：在有鸡的情况下，鸡舍每立方米空气中微生物（细菌和霉菌）不应高于25~30万个，笼养雏鸡每立方米空气中微生物总数不应超过13万个，其中大肠杆菌群不应超过1900个。

否则，可引起临床大肠杆菌病，必须采取预防措施。

实验室空气中细菌含量的测定
一．实验目的
测定实验室空气中沉降菌的含量，了解实验室的洁净程度。

二．实验原理
空气中漂浮着各种微生物，将盛有无菌培养液的平民放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落在培养基上，然后在37摄氏度的恒温培养箱中培养24h，计数每个培养皿表面的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。

三．实验材料
琼脂，锥形瓶，无菌水，电热炉，培养皿，卧室灭菌锅，烘箱，37℃生化培养箱，超净工作台
四．实验方法
称取2.35g琼脂，加热溶解到100ml无菌水，存放于锥形瓶中，用封口膜和牛皮纸包装好锥形瓶。

准备五个培养皿，用牛皮纸包好，和锥形瓶一起放进卧室灭菌锅中灭菌，温度121℃，时间30min。

于无菌工作台上，每个培养皿倒进10ml培养基，待冷却凝固。

分别置于室内同一平面五个不同的点（四角加中央），打开皿盖，暴露15min,盖好平皿盖，37℃恒温箱中培养24h，
五．计算方法
按照奥梅梁斯基氏计算法，面积为100平方厘米的培养基表面5min沉降下来的细菌数相当于10L空气中所含菌落数来计算
细菌数（m³）=N*100/A*5/T*100/10=50000N/AT
(A:平板面积cm2、T平板暴露时间min、N：平板菌落数)。

菌落总数的检测方法一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。

当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。

菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。

因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。

菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。

基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。

国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。

检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。

菌落总数检测方法菌落总数检测是一种常见的微生物检测方法，它可以用于食品、饮用水、医药制品等领域的微生物质量控制。

菌落总数检测方法的准确性和可靠性对产品的质量和安全至关重要。

因此，了解菌落总数检测方法的原理和操作流程对于相关行业的从业人员至关重要。

菌落总数检测方法的原理是通过将待检样品进行适当稀释后，均匀涂布在含有适当培养基的琼脂平板上，然后在一定的温度下培养一定的时间，最后根据菌落的数量来计算样品中微生物的数量。

这种方法的优点是简单易行，不需要复杂的设备和技术，适用于大批量样品的检测。

菌落总数检测方法的操作流程主要包括样品的制备、琼脂平板的制备、涂布和培养、计数和结果分析等步骤。

首先，对待检样品进行适当的稀释，以确保在琼脂平板上形成可数的菌落。

然后，制备含有适当培养基的琼脂平板，并进行涂布和培养。

在培养结束后，对菌落进行计数，并根据计数结果进行样品的微生物数量统计和分析。

在进行菌落总数检测时，需要注意一些关键的操作技巧和注意事项。

首先，样品的制备和处理要严格按照相关标准和规定进行，以避免外界环境的污染。

其次，在琼脂平板的制备、涂布和培养过程中，需要严格控制温度、湿度和时间等因素，以确保菌落的正常生长和形成。

最后，在菌落计数和结果分析时，需要仔细进行，确保结果的准确性和可靠性。

除了传统的琼脂平板法外，菌落总数检测方法还有其他一些新的技术和方法。

比如，膜过滤法、光学密度法、生物发光法等，这些方法在一定的情况下可以替代传统的琼脂平板法，具有更快速、更灵敏的特点。

但无论采用何种方法，都需要严格按照相关标准和规定进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。

总之，菌落总数检测方法是一种常见且重要的微生物检测方法，它对于食品、饮用水、医药制品等领域的微生物质量控制起着至关重要的作用。

了解菌落总数检测方法的原理和操作流程，掌握关键的操作技巧和注意事项，对于相关行业的从业人员具有重要的意义。

希望本文所述内容能够对菌落总数检测方法有所了解，为相关行业的微生物质量控制工作提供一些帮助。

公共场所空气中细菌总数检验方法1 定义撞击法（impacting method）是采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使用空气通过狭颖或小孔而产生高整气流，使用悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37°、48h培养后，计算出每m3空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。

自然沉降法（natural sinking method）是指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露15分钟，经37°、48h培养后计数生长的细菌菌落数的采样测定方法。

2 仪器和设备2.1高压蒸汽灭菌器。

2.2干热灭菌器。

2.3恒温培养箱。

2.4冰箱。

2.5平皿（直径9cm）。

2.6制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。

2.7撞击式空气微生物采样器。

3培养基3.1营养琼脂培养基3.1.1成分；蛋白胨牛肉浸膏10g氯化钠3g琼脂15～20g蒸馏水1000ml3.1.2制法将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min高压灭菌。

用自然沉降法测定时，倾注约15ml于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。

撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。

4操作步骤4.1撞击法4.1.1选择有代表性的位置设置采样点。

将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。

4.1.2样品采完后，将带核辐射营养琼脂平板置36±1℃恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每m3空气中的菌落数，以CFU/m3报告结果。

4.1.3选择撞击式空气微生物采样器的基本要求。

（a）对空气中细菌捕获率达95%。

（b）操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。

4.2自然沉降法4.2.1设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。

通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为1采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。

采样高度为1.2～1.5m。

平皿沉降法：采样时将普通琼脂培养基或血琼脂培养基5个，分别置于室内同一平面五个不同的点（室内四个角及中央），打开皿盖，让平皿暴露15～30min后盖好平皿盖，置于37℃温箱中培养，次日观察平皿菌落，计数五个平皿生长菌落数，根据5min内100cm2培养基中降落细菌数相当于10L空气中所含细菌数而计算1m3空气中的细菌数。

计算公式为：细菌数（CFU）/ m3＝N×100/A×5/T×1000/10＝50000N/AT
注：A：平板面积（cm2）；
T：平板暴露时间（min）；
N：平板平均菌落数（CFU）；
摘于医学检验专业2003年版《微生物检验学》
1，培养基的配制
称取10g蛋白胨、3g牛肉浸膏、5g氯化钠、20g琼脂，充分混合后，加入到1000毫升蒸馏水中，用盐酸和氢氧化钠调节溶液的ph值为7.4-7.6，过滤除去沉淀后，分装在5个250毫升三角烧瓶中，放入高压蒸汽灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌15分钟。

取出后置于暗处备用。

2.制作平皿
加热使测定所用的培养基融化，待冷至50-60摄氏度时，倾入培养皿，每皿注入15-20毫升，一共制作5块。

盖上皿盖
3细菌含量的测定
（1）利用微生物在空气中能随尘粒下沉的原理，将盛有培养基的平皿平放，移去平皿盖，在空气中暴露五分钟，培养皿距离地面1米，距离墙壁最近不可小于30cm,
室中中央及周角各放一平皿。

（2）培养：放入37摄氏度恒温箱中培养24小时。

公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定随着人们对公共场所环境质量要求的提高，对公共场所空气中微生物的检测也越来越重视。

其中，细菌总数是衡量空气中微生物含量的一项主要指标。

下面将详细介绍公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤。

1.样品采集首先，确定采样位置。

根据公共场所的具体情况，如是否有空调、通风设备等信息，选择具有代表性的采样点位。

一般来说，可选择通风良好、人员流动频繁的位置进行采样。

然后，采用采样器具进行空气采样。

空气采样器具常用的有空气生物分析仪、洒雾器等。

根据采样器具的具体操作手册，按照规定的操作步骤进行采样，同时注意采样时间和采样量的控制。

2.样品处理采样完成后，将采样器具中的采样物转移到适当的载体（如培养基、液体培养基）中。

根据具体情况，选择合适的载体。

对于空气样品，一般选择液体培养基，如生理盐水。

将采样管中的液体转移到含有生理盐水的试管中。

3.稀释操作将采样物进行稀释，以便于接种和计数。

稀释液的选择可依据之前的实验经验，一般选用营养琼脂或平板培养基。

将采样物中的适量细菌悬浮液取出，用移液管分别转移到不同稀释管中，依次进行系列二次稀释。

每次稀释后，需充分摇匀。

根据之前的实验经验，每一次稀释可选用10倍、100倍、1000倍等稀释倍数。

4.接种和培养将稀释液分别接种到含有固体培养基的平板上，均匀涂布。

然后将接种后的平板培养基放置于恒温培养箱中，选择适宜的培养温度和时间。

一般来说，菌落计数应在培养48小时后进行。

5.计数和结果分析计数时，将培养出的菌落进行清点，并将数量记录下来。

根据菌落的大小、颜色和形态等特征，可初步判断不同菌种的存在情况。

最后，将不同菌种的菌落数量进行统计和分析，并将细菌总数计算出来。

需要注意的是，在细菌总数测定过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度等，以确保结果的准确性。

另外，细菌总数的测定结果应与相关标准进行比较，以评估空气中微生物的含量是否符合要求。

总结：公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤包括样品采集、样品处理、稀释操作、接种和培养、计数和结果分析等。