血清二氧化碳酶试剂法测定法

酶法测定血清二氧化碳中试剂稳定性的研究
杨文杰;柯振符;何寿国;邱小琼
【期刊名称】《广东医学院学报》
【年(卷),期】2007(25)1
【摘要】目的建立一种克服酶法单试剂测定血清二氧化碳不稳定的方法.方法在商品酶法干粉单试剂中加入自配稳定成份,在OLYMPUS AU-640全自动生化分析仪上采用两点法进行方法学评价测定.结果本法的线性范围可达50mmol/L,批内变异系数(CV)为2.2%,批间CV为4.41%,平均回收率为101.0%,添加了稳定成份的试剂与原试剂在不同时间试剂空白A值比较差异均有统计学意义(P＜0.01);黄疸、脂血、溶血标本对结果无明显影响.结论加入的稳定成份明显提高了酶法单试剂的稳定性,更适合临床检测.
【总页数】3页(P43-45)
【作者】杨文杰;柯振符;何寿国;邱小琼
【作者单位】广东医学院第三附属医院检验科,广东茂名,525011;广东医学院第三附属医院检验科,广东茂名,525011;广东医学院第三附属医院检验科,广东茂
名,525011;广东医学院第三附属医院检验科,广东茂名,525011
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11+2
【相关文献】
1.酶法测定二氧化碳试剂开瓶稳定性与校准周期的研究 [J], 张育明
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5.酶法测定二氧化碳试剂开瓶稳定性的调查 [J], 施琛
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二氧化碳测定剂盒（酶法）标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中的二氧化碳的浓度。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测人血清或血浆中的总蛋白含量。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的二氧化碳试剂盒采用的是酶法。

5.原理血清（浆）中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶(PEPC)的催化作用下和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反应，生成草酰乙酸和磷酸盐，草酰乙酸在苹果酸脱氢酶的作用下生成苹果酸，同时将NADH氧化为NAD+，在340nm波长处反应液吸光度的降低与样品中二氧化碳含量成正比。

+ +--+−−→−+++−−→−+NADHNADHPO HCOHMDH PEPC苹果酸草酰乙酸草酰乙酸磷酸烯醇式丙酮酸42326.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R：GOOD’S缓冲液、磷酸烯醇式丙酮酸、NADH类似物、苹果酸脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、防腐剂校准品：碳酸氢钠（含量见瓶签）7.3试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存，有效期为一年。

试剂开瓶后存放在生化分析仪试剂仓中可稳定4周。

校准后校准曲线可稳定3周，但如果更换试剂批号、检测条件发生改变、质控品检测结果超出范围则需要重新校准。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

酶法检测血清总二氧化碳的实验评价及临床应用魏忠华;舒仁民;邹立新【期刊名称】《四川省卫生管理干部学院学报》【年(卷),期】2006(025)001【摘要】目的:探讨应用酶法检测血清总二氧化碳及临床应用.方法:用日立7600-10全自动生化分析仪酶法测定血清总二氧化碳,通过线性实验、回收实验、干扰实验、重复性实验和对比实验进行方法评价.结果:该法线性范围为4～50mmol/L,批内CV为2.96%,批间CV为3.85%,维生素C 300mg/L、脂血(TG)15mmol/L、胆红素600μmol/L、血红素5g/L对测定均无干扰,平均回收率为100.8%,本法与间接离子选择电极法对200份血浆标本总二氧化碳的测定结果作相关性分析,Y＝0.995X+0.456,r＝0.986.结论:酶法检测血清(浆)总二氧化碳具有较高的灵敏性和特异性,快速自动化分析,适合临床需要,是判断体内酸碱平衡的重要指标.【总页数】2页(P9-10)【作者】魏忠华;舒仁民;邹立新【作者单位】达州市中心人民医院,四川,达州,635000;达州市中心人民医院,四川,达州,635000;达州市中心人民医院,四川,达州,635000【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.血清总二氧化碳酶法全自动分析评价 [J], 高强;黄繁嫱;韩猛2.速率法与终点法检测血清总二氧化碳的方法学评价 [J], 陈桂明;陶晓军;赵芳3.间接离子选择电极法测定血清总二氧化碳的实验评价及临床应用 [J], 周细国;雷兰芳;杨伟平4.量压法与酶法检测血清总二氧化碳结果的比较 [J], 刘沛;李变荣;王舒5.量压法与酶法检测血清总二氧化碳结果的比较 [J], 刘沛;李变荣;王舒因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

二氧化碳测定试剂盒（PEPC酶法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清中的二氧化碳（CO2）的含量。

1.1包装规格序号规格1 试剂1：2×20ml ；校准品：1×3ml。

2 试剂1：2×40ml ；校准品：1×3ml。

3 试剂1：2×60ml ；校准品：1×3ml。

4 试剂1：2×80ml ；校准品：1×3ml。

5 试剂1：2×100ml ；校准品：1×3ml。

6 试剂1：1×1000ml ；校准品：1×3ml。

7 试剂1：5×24ml ；校准品：1×3ml。

8 试剂1：5L。

1.2主要组成成分本试剂由试剂1（R1）和校准品（STD）组成试剂1（R1）：磷酸盐缓冲液25mmol/LPEP 6.3mmol/LNADH 0.45mmol/LPEPC 200U/LMG 8.0mmol/LMDH ﹥600U/L校准品：CO溶液（基质：水溶液；浓度：25mmol/L）22.1 外观试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；R1为无色至淡黄色澄清液体，校准品为无色透明液体。

液体试剂不得有沉淀和絮状物。

2.2 装量试剂瓶内液体装量应不少于标示值。

2.3 空白吸光度以生理盐水为样品，在37℃、405nm波长、1cm光径条件下，吸光度≥0.7。

2.4 分析灵敏度浓度为25mmol/L的样本，吸光度差值△A＞0.2。

2.5 准确性用参考物质（GBW(E)060023c）对试剂盒进行测试，相对偏差不超过±10%。

2.6 重复性用浓度(25±3)mmol/L的样本进行检测，重复检测10次，其批内变异系数（CV）应不超过5％。

2.7 线性2.7.1在(2，50)mmol/L范围内，线性相关系数r应不低于0.990；2.7.2 在(2，10]mmol/L范围内绝对偏差不超过±1.0mmol/L；(10，50) mmol/L 范围内相对偏差不超过±10%。

二氧化碳测定试剂盒（PEPC酶法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人体血清中二氧化碳的含量。

1.1产品规格1.2产品组成PEP 12.5mmol/L，NADH 0.6mmol/L，MDH＞4100U/L，PEPC＞400U/L。

2.1 外观试剂无色或略带黄色透明溶液；试剂盒各组分齐全、完整，液体无渗漏，包装标签文字符号清晰牢固不易脱落，外包装完整无破损。

2.2 装量液体试剂的净含量应不少于标示量。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在405nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不小于0.70。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率在405nm波长、1cm光径条件下，用生理盐水作为样品加入试剂测试时，试剂空白波光度变化率（ΔA/min）应不大于 0.005/min。

2.4分析灵敏度测定30mmol/L二氧化碳时，吸光度变化率在（0.03±0.01）/min范围内。

2.5 准确度采用比对试验，相关系数r≥0.98；[1，10]mmol/L区间内，线性绝对偏差不超过±1.5mmol/L；(10，40]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±15%。

2.6 精密度2.6.1 重复性用血清样品或质控样品重复测试所得的变异系数（CV）应不大于10.0%。

2.6.2 批间差试剂（盒）批间相对极差应不大于10.0%。

2.7 线性区间试剂线性在[1，40]mmol/L区间内：a) 线性相关系数|r|应不小于0.990；b) [1，10]mmol/L区间内，线性绝对偏差应不超过±1.5mmol/L；（10，40]mmol/L区间内，线性相对偏差应不超过±15%。

2.8稳定性原包装试剂2～8℃避光保存有效期12个月，到效期后的样品检测试剂空白、分析灵敏度、准确度、重复性、线性区间应符合2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

二氧化碳测定试剂盒(PEPC酶法)产品技术要求zhongshengbeikong 二氧化碳测定试剂盒（PEPC酶法）适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中二氧化碳的浓度。

1.1包装规格液体单剂型试剂（R）：20mL×4，校准品：3mL×1；试剂（R）：20mL×6，校准品：3mL×1。

1.2主要组成成分试剂（R）液体:磷酸烯醇式丙酮酸（PEP） 12.5mmol/L磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC） 400U/L） 8.0mmol/L氯化镁（MgCl2苹果酸脱氢酶（MDH） 4100U/L还原辅因子 0.6mmol/L校准品液体：水溶液基质（1个浓度）碳酸氢钠目标浓度25.0 mmol/L(每批定值，详见值单) 2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足：2.1.1试剂（R）应为浅黄绿色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。

2.1.2校准品应为无色透明溶液，无杂质、无絮状物，外包装完整无破损。

2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。

2.3 试剂空白吸光度在波长400nm～420nm（光径1cm）处，试剂空白吸光度（A）应≥0.600；试剂空白吸光度变化率（△A/min）应≤0.015。

2.4准确度测定GBW06101，测定结果的相对偏差应不超过±10％。

2.5分析灵敏度对应于浓度为 25mmol/L的二氧化碳所引起的吸光度变化率（△A/min）的绝对值应在0.010～0.080的范围内。

2.6重复性重复测试高、中、低浓度样本，变异系数（CV）应≤10%。

2.7批间差测试同一样本，批间差（R）应≤10%。

2.8线性范围在［3，60］mmol/L范围内，线性相关系数（r）应≥0.990；在（25，60］mmol/L范围内，线性相对偏差应不超过±10％；在［3 ，25］mmol/L范围内，线性绝对偏差应不超过±2.5mmol/L2.9试剂稳定性2.9.1效期稳定性原包装的试剂盒在2℃～8℃避光贮存，有效期为12个月。

二氧化碳(CO2)测定试剂盒（PEPC酶法）说明书【产品名称】二氧化碳(CO2)测定试剂盒（PEPC酶法）【包装规格】a)单一试剂：1×15mLb)单一试剂：2×40mLc)单一试剂：5×60mLd)单一试剂：2×100mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中二氧化碳的含量。

血液中CO2含量对人体内酸碱平衡的调节起着重要的作用。

增高：代谢性碱中毒，如幽门梗阻、柯兴综合征等。

呼吸性酸中毒，如呼吸中枢抑制、呼吸机麻痹等。

降低：代谢性酸中毒，如严重腹泻、肾功能衰竭等。

慢性呼吸碱中毒[1]。

临床上测定二氧化碳代谢性与呼吸性酸、碱中毒的辅助诊断，通常与pH值同时进行。

【检验原理】样本中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下，与磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）催化下，生成苹果酸，同时NADH被氧化成NAD+，NADH被氧化的程度与碳酸氢根的含量成正相关。

【主要组成成分】试剂主要组分三羟甲基氨基甲烷缓冲液250mmol/L磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）10g/L磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）10KU/L苹果酸脱氢酶（MDH）8KU/L还原型辅酶I（NADH） 2.2g/L表面活性剂及稳定剂适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。

【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2～8℃储存，有效期为12个月，生产日期、有效期见标签。

2.开口后的试剂在仪器仓中（2～8℃）可稳定30天。

【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR；罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502；西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C；科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-14 00；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/ BS-600/BS-800/BS-2000M；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray420；英诺华D280；特康TC6010L；锦瑞GS400；普康6066。

酶法二氧化碳测定试剂的临床应用评价【摘要】目的评价浙江伊利康生物技术有限公司生产的二氧化碳（CO2）测定试剂盒。

方法通过试剂的精密度、线性范围、回收率、干扰试验等进行系统评估。

结果低、高值质控日内精密度（用CV日内值表示）分别为2.94和1.52%，日间精密度（用CV日间值表示）分别为4.66%和4.15%。

与电极法相比，相关方程为Y = 0.9722X + 4.1861，相关系数r2 = 0.9897，测定结果显著相关（P＜0.05）。

当甘油三酯（TG）浓度≤10mmol/L，血红蛋白（Hb）浓度≤5g/L，维生素C（Vc）浓度≤2540μmol/L，胆红素（BIL）浓度≤342μmol/L时对本法无显著性干扰。

结论该试剂完全符合临床应用要求，能适用于全自动化分析。

【关键词】二氧化碳；临床应用评价血清（浆）中的二氧化碳含量对人体内的酸碱平衡的调节起重要作用。

测定血清二氧化碳的方法有很多，目前临床实验室普遍采用的是电极法和酶法。

本文应用美国国家实验室标准委员会（NCCLS）的部分EP系列文件[1]对酶法试剂的精密度、准确度、线性范围、抗干扰性进行评价，并与电极法进行对比实验，评价结果报告如下。

1 材料与方法1.1样本我院住院及门诊病人当天空腹抗凝血浆标本，立即分离血浆后在1h内上机测定。

1.2试剂和仪器CO2测定试剂盒由浙江伊利康生物技术有限公司生产，批号：110201；仪器为HITACHI 7080全自动生化分析仪。

1.3方法均按试剂盒生产厂商提供测定参数、测定方法进行。

2 实验结果2.1精密度[2] 取低、高两个不同浓度的质控，连续测20次，再每天测1次，共测20天，CV日内分别为2.94和1.52%，CV日间分别为4.66和4.15%。

2.2回收试验取一份新鲜混合人血清，CO2的浓度26.5mmol/L，将其分成3份，每管0.9m1，分别加入CO2为8.1mmol/L、24.0mmol/L、38.2mmol/L的高、中、低血清0.1ml，混合后CO2浓度分别为24.66mmol/L、26.25mmol/L、27.67mmol/L共3个浓度的样品；用酶法试剂共测定5次，计算回收率分别为101.3%、99.6%、100.7%，平均为100.5%。

血清二氧化碳酶反应终点法测定1.实验原理VitrosCO2试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。

分布层中的高PH值能确保样品中所有的CO2以碳酸氢盐的形式存在。

碳酸氢盐分布到凝胶层中，在磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶的作用下被用来羟化磷酸烯醇式丙酮酸，生成草酰乙酸和无机磷。

反应最后是苹果酸脱氢酶氧化NADH及还原草酰乙酸，生成NAD+和苹果酸。

本干片要在37℃下孵育。

样品中的CO2浓度是通过用反射光谱法测定未反应的NADH 的吸光度来确定的。

测定方式：酶反应终点法波长：340nm测试时间和温度：37℃约５分钟反应过程：磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶碳酸氢根+磷酸烯醇式丙酮酸——————————→草酰乙酸+磷酸根苹果酸脱氢酶草酰乙酸+NADH+H+————→苹果酸+NAD2.标本：2.1病人准备：无特殊。

2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。

2.3标本采集与处理：血清和血浆样品：特别要注意的是：不要用枸橼酸盐作抗凝剂。

不要从正在静脉注射的手臂上采血。

采血时尽量将真空管装满，否则测试结果最多会偏低3mmol/L。

样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3.标本的存放：血清、血浆室温下密封保存最多24小时；4～8℃冷藏最多3天；-18℃冷冻保存可长达1个月。

4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发，不加盖的样品杯在空气中放置1小时，CO2浓度最多要偏低6mmol/L。

5.标本拒收的标准：污染、抗凝剂不符合要求，标本放置时间过长。

6.试验材料：6.1测试CO2所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit2；Vitros特制质控液；生理盐水稀释液。

强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份有磷酸烯醇式丙酮酸羟化酶，苹果酸脱氢酶，磷酸烯醇式丙酮酸和NADH。