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孕穗期水稻不同功能叶的发育蛋白质组学分析邵彩虹１，２ 谢金水１ 黄永兰１ 邱才飞１ 张振苗２ 林文雄２，＊（１江西省农业科学院土壤肥料与资源环境研究所，江西南昌３３０２００；２福建农林大学农业生态研究所，福建福州３５０００２；＊通讯联系人，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉｏｎｇ１８１＠１６３．ｃｏｍ）ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＬｅａｖｅｓｉｎＲｉｃｅ（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）ａｔｔｈｅＢｏｏｔｉｎｇＳｔａｇｅＳＨＡＯＣａｉ－ｈｏｎｇ１，２，ＸＩＥＪｉｎ－ｓｈｕｉ１，ＨＵＡＮＧＹｏｎｇ－ｌａｎ１，ＱＩＵＣａｉ－ｆｅｉ１，ＺＨＡＮＧＺｈｅｎ－ｍｉａｏ２，ＬＩＮＷｅｎ－ｘｉｏｎｇ２，＊（１ＳｏｉｌａｎｄＦｅｒｔｉｌｉｚｅｒ＆ＲｅｓｏｕｒｃｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＪｉａｎｇｘｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０２００，Ｃｈｉｎａ；２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｏ－Ｅｃｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ；＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉｏｎｇ１８１＠１６３．ｃｏｍ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｒｅｖｅａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｉｎｒｉｃｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｅａｖｅｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｆｏｕｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｅａｖｅｓａｔｔｈｅｂｏｏｔｉｎｇｓｔａｇｅｉｎｈｙｂｒｉｄｒｉｃｅＳｈａｎｙｏｕ６３ｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅａｐ－ｐｒｏａｃｈｏｆｐｌａｎｔｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｔｈｅｔｏｐｌｅａｖｅｓａｔｔｈｅ１３－，１４－，１５－ａｎｄ１６－ｌｅａｆｓｔａｇｅｓ（ｔｈｅｔｏｔａｌｎｕｍｂｅｒｏｆｌｅａｖｅｓｏｆＳｈａｎｙｏｕ６３ｗａｓ１６）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｍｏｎｇｔｈｅｆｏｕｒｓｔａｇｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＩｍａｇｅｍａｓｔｅｒ２ＤＥｌｉｔｅ５．０，ｗｈｉｃｈａｌｌｏｗｅｄｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ２３ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｌｓｐｏｔｓ．Ｔｈｅｓｐｏｔｓｗｅｒｅｆｕｒｔｈｅｒｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－ｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ｉｎｗｈｉｃｈ１４ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｓｅ１４ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｃａｎｂｅｄｒａｗｎｆｒｏｍｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｒｅｓｕｌｔ：ｔｈｅｍａｊｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ（９ｐｒｏｔｅｉｎｓ）ｗｅｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ，ｔｈｒｅｅｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｒｏｔｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｔｈｏｓｅ１２ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｒｅｇｕｌａｒｌｙｗｉｔｈｔｈｅｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｅｌｅｖａｔｉｏｎ；ｔｈｅｏｔｈｅｒｐｒｏｔｅｉｎｓ（２ｐｒｏｔｅｉｎｓ）ｗｅｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｓｈｏｗｉｎｇａｎｉｒｒｅｇｕｌａｒｌｙｃｈａｎｇｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｉｎｌｏｗｅｒｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄａｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎ－ｄａｎｃｅｉｎｆｌａｇｌｅａｆ．Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｉｓｔｈｅｃａｒｒｉｅｒｏｆｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｒｉｎ－ｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｒｅａｓｏｎｔｈａｔｃａｕｓｅｄｔｈｅａｂｏｖｅｐｒｏｔｅｉｎｃｈａｎｇｅｓｓｈｏｕｌｄｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｌｅａｖｅｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｅ；ｂｏｏｔｉｎｇｓｔａｇｅ；ｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｏｍｅ摘 要：从蛋白质组学角度对杂交水稻汕优６３孕穗期４个叶位功能叶片蛋白质组变化进行了研究，以揭示水稻孕穗期叶片蛋白质组的表达差异。
水稻种子蛋白质的组成和积累形态对稻米品质的影响作者：刘慧芳吴孚桂聂佳俊韦云飞马启林来源：《热带作物学报》2021年第04期摘要：設置水培试验对‘16-17’（谷蛋白前体聚合物明显，含量高）和‘16-20’（谷蛋白前体聚合物不明显，含量低）分别进行CK（氮2800 μmol/L，硫80 μmol/L）、N（氮3640μmol/L，硫80 μmol/L）、S（氮2800 μmol/L，硫260 μmol/L）、N+S（氮3640 μmol/L，硫260 μmol/L）处理，以此改变稻米品质和稻米贮藏蛋白质的组成与含量，从而对稻米蛋白质各组分及相关品质性状进行分析。
结果表明：（1）在N、S和N+S的不同处理下均增加了粗蛋白的含量，使‘16-20’的稻米粗蛋白百分含量分别增加2.35%、2.67%和2.73%;（2）在2个品种的各组分蛋白含量变化中，‘16-17’的醇溶蛋白和谷蛋白的百分含量在N、S和N+S下较对照分别增加了9.75%、4.21%和4.67%，3.92%、7.38%和12.92%。
‘16-20’的谷蛋白百分含量在S和N+S处理下增加了17.72%和29.38%，醇溶蛋白百分含量在N+S下增加了3.73%，而球蛋白百分含量在N、S和N+S三个处理下降低了2.86%、3.78%和3.69%，清蛋白在N、S处理下显著降低;（3）谷蛋白的2个亚基的相对含量和57 kDa谷蛋白前体及57 kDa以上谷蛋白聚合体的积累在‘16-20’品种中明显增加。
（4）稻米品质中，N、S配施对2个参试品种的碾磨品质性状的影响不明显，但有利于2个品种稻米外观品质和食味品质的改善，并使‘16-20’的营养品质显著增加，另外，‘16-20’的千粒重在S和N+S处理下显著增加。
故不同N、S配施处理下，不同品种水稻贮藏蛋白质的组成和积累形态差异很大，并改变了含巯基蛋白质组分的积累量和积累形态。
尤其是在富S条件下，蛋白质积累过程中形成较多的巯基及二硫键，并通过二硫键来改变含巯基的蛋白质亚基之间的聚合程度，形成不同分子量的谷蛋白聚合体，使蛋白质的积累形态发生明显改变，进而使稻米相关品质性状发生改变。
蛋白质组学在水稻生长发育研究中的应用研究进展
张晓婷;郑奇君;高飞;李瑞;赵全志
【期刊名称】《河南农业科学》
【年(卷),期】2011(040)001
【摘要】水稻不同生育时期的蛋白质组学是近年来的研究热点,对揭示水稻发育的分子机制具有重要价值.通过分析蛋白质组学在水稻生长发育研究中的应用现状,提出了亚细胞蛋白质组学和翻译后修饰蛋白质组学将是未来几年水稻蛋白质组学研究的热点,而技术手段的多样化、分析层次的多元化及与其他学科的紧密融合是水稻发育蛋白质组学的主要发展趋势.
【总页数】5页(P1-5)
【作者】张晓婷;郑奇君;高飞;李瑞;赵全志
【作者单位】河南农业大学植物保护学院,河南,郑州,450002;河南农业大学植物保护学院,河南,郑州,450002;河南农业大学植物保护学院,河南,郑州,450002;郑州市森林公园,河南,郑州,450045;河南农业大学植物保护学院,河南,郑州,450002
【正文语种】中文
【中图分类】S511
【相关文献】
1.基因组学和蛋白质组学在肉品质研究中的应用研究进展 [J], 张素红;孙术国;罗章;马美湖;辜雪冬;胡敏;王若晖
2.蛋白质组学技术在炎症性肠病研究中的应用研究进展 [J], 苏丽;李楠
3.蛋白质组学在帕金森病研究中的应用研究进展 [J], 郝军荣;沈丽霞
4.蛋白质组学在帕金森病研究中的应用研究进展 [J], 郝军荣;沈丽霞;
5.蛋白质组学在肉类研究中的应用研究进展 [J], 侯然;卢士玲;王庆玲;姬华;李文慧;董娟
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水稻蛋白质组研究进展摘要：水稻（Oryza sativa L.）是世界上最重要的粮食作物，是人类获得植物蛋白质的主要来源之一。
近年来，水稻蛋白质组学发展异常迅速，取得了非常显著的成绩。
综述了国内外学者对水稻组织器官蛋白质组、亚细胞水平蛋白质组、逆境胁迫下的蛋白质组、激素诱导下的蛋白质组以及水稻突变体蛋白质组的最新研究进展。
关键词：水稻（Oryza sativa L.）；蛋白质组；双向电泳；质谱水稻是世界上最重要的粮食作物之一，为全世界超过2/3的人口提供主食[1]。
水稻的基因组较小，由430M个碱基组成，重复序列少，易于遗传操作且与其他禾谷类作物存在共线性，目前已成为单子叶植物分子生物学研究领域的模式生物[2]。
2002年水稻栽培品种籼稻和粳稻基因组框架图绘制完成，2005年8月，国际水稻基因组测序计划（IRGSP）已经构建了水稻基因组的框架图，完成了水稻基因组95%高通量序列的测序工作[3，4]。
随着基因组研究的进一步深入，人们认识到单纯进行基因组研究已不能完全解释生命现象的本质问题[5]。
水稻从基因组时代步入后基因组时代，注重于功能的研究[6]。
传统的基因组功能研究方法主要有基因表达系统分析、微阵列法、基因芯片等，但这些方法都局限于研究mRNA在组织细胞中的丰度变化。
事实上mRNA受转录调控的局限，并不能完整描绘蛋白水平上的变化[7]。
而蛋白质组是动态的，能通过分离、鉴定和分析细胞、组织或生物体复杂的蛋白混合物来研究目的基因在不同时间是否表达、表达量有无变化、蛋白质不同修饰及亚细胞分布等[8]。
因此蛋白质组学研究对后基因组的发展是不可或缺的。
双向电泳和质谱技术是蛋白质组的核心研究工具[9]。
通过双向电泳获得蛋白质组表达谱或差异蛋白，再通过质谱技术对感兴趣的蛋白点进行鉴定。
通过分析各种蛋白质的结构和功能可以直接研究细胞、组织或生物体在不同生理过程或逆境条件下的变化机制。
目前，水稻蛋白质组学主要集中在对水稻各个组织器官及亚细胞水平基本表达模式的研究，同时水稻环境胁迫应答过程的比较蛋白质组学和水稻突变体、激素诱导的蛋白质组学研究也正在进行并逐步深入。
水稻各生育期图谱（2011-03-30 11:18:41）水稻的一生，包括营养生长和生殖生长两个阶段，一般以幼穗开始分化作为生殖生长开始的栋志。
2.1.1营养生长阶段是水稻營养体的增长，它分为幼苗期和分菓期。
衣_生产上又分为秧田期和丸（本丿田期（从移就返青到拔节）。
2.1.2生殖生长阶段是结卖器骨的增长，从幼穗分化到开抡结卖，又分为长穗期和开花结卖期。
幼穗分化到抽穗是蒼养生长和生殖生长并进时期，抽穗后基本上是生殖生长期。
长穗期从幼穗分化开始到抽穗止，一般30 天左右。
结卖期从抽穗开抡到谷耘成孰，因毛候和％种而异一般25?/FONT>50天之问。
2.1.3水稻生育类型（幼穗分化和拔节的关糸丿早、中、娩稻芫种各异，早稻品种丸幼穗分化后拔节，称重叠生育型；中稻品种，拔节和幼穗分化同时进行，称衔接生育型;吆稻品种拔节后隔一段时问再幼穗分化，称分禽生育型。
2.2水稻％种生育期的稔走性和可变性水稻％种的生育期受自身进传特性的控制，又受环境条件的影响。
2.2.1水稻％种生育期的稔定性同一品种旌.同一地区.同 -季节，不同年份我培，由于年际间都戏于相似的生态条件下，其生育期相对稔定，早熟器种总是表现早熟，迟熟％种总、是殺现迟熟。
这种稳定性圭要受进传因子所支配。
因此在生产卖践中可根据％种生育期长短划分为早稻，全生育期100?/FONT>125夭，中稻130?/FONT>150 夭，连作娩恼120?/FONT>140 天，一季阮稻150?/FONT>170夭，还可把早、中、迟熟稻中生育期长短差异划分为早、中、迟熟％种，以适应不同地区自然条件和耕作制度的需要，从而保证农业生产往—定时期内的相对的稳定性和连续性。
2.2.2水稻器种生育期的可变性随着生态环境和我培条件不同而变化，同一品种在不同地区我培时，表现出随纬度和海拔的升需而生育期延长，相反，随纬度和海拔需度的阵低，生育期缩短;同一％种衣.不同的季节里我培表现出随椿种季节推迟生育期缩短，摇种季节提早其生育期延长。
水稻两优培九不同氮素处理叶片和籽粒蛋白质组学研究的
开题报告
研究背景：
水稻是我国主要的粮食作物之一，其优质品种的培育是保障粮食安全的重要手段。
氮素是水稻生长中必需的营养元素，对水稻的生长发育和产量产生重要影响。
同时，
氮素还是水稻生长中合成蛋白质所必需的原料。
因此，对水稻优质品种的培育和高产
研究中，氮素的利用和调节具有重要意义。
现有的研究多集中在水稻生长和产量对氮
素的响应，而对于氮素对水稻蛋白质组成的影响还了解不够。
研究目的：
本研究旨在通过蛋白质组学的研究手段，探究氮素对水稻两优培九品种叶片和籽粒蛋白质组成的影响。
通过比较不同氮素处理下的蛋白质组成差异，分析氮素对水稻
生长发育和优质品种培育的影响机制。
研究方法：
选取两优培九品种的水稻作为研究对象，采用不同浓度的氮素溶液处理。
在不同处理下，采集叶片和籽粒进行蛋白质提取和分离。
通过质谱技术分析各自蛋白质组成
的差异，并进行差异蛋白的鉴定和分析。
研究意义：
本研究将为水稻优质品种的培育和高产栽培提供科学依据。
同时，揭示氮素对水稻蛋白质合成和组成的影响，以及差异蛋白的鉴定和分析，将有助于深入了解水稻生
长发育机制，并提出合理的氮素调控策略。
不同叶色水稻孕穗期不同叶位叶片的光合与叶绿素荧光特性韩光明;赵明辉;詹先进;蓝家样;陈温福【摘要】研究了4个不同叶色水稻品系孕穗期不同叶位叶片的光合和叶绿素荧光特性，结果表明：SPAD值最高的深叶色品系净光合速率并不是最高，说明叶绿素总量高其净光合速率并不一定最高；荧光参数在深叶色品系与浅叶色品系间差异也不显著；各品系间倒1叶净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Evap)均明显低于倒2叶；而胞间CO2浓度(Ci)基本维持不变，说明叶片Pn 的变化主要不是气孔因素引起的。
不同叶位叶绿素含量降低与Pn下降的表现一致，叶绿素荧光分析表明Fo、Fm、Fv/ Fm 和PI随叶位发生变化，而每个品系倒1叶的Fm均大于倒2叶，这表明孕穗期倒1叶PS域电子传递的潜力强于倒2叶。
不同叶色品系中，除沈农07015外，反映光合荧光参数中光合有活反应中心吸收(ABS/RC)、耗散(DIo/RC)的能量和用来还原QA的激发能(TRo/RC)均为倒1叶大于倒2叶，表明倒1叶有活性的反应中心剩余的耗能效率高于倒2叶。
%Four rice genotypes w ith different leaf colors were examined at booting stage for investigating the photosynthesis and chlorophyll fluorescence properties of different position leaves. The dark-green leaf rice genotype had the highest SPA D value, but not highest net photosynthetic rate (Pn), which suggested that the genotype with the highest chlorophyll content didn't mean the highest Pn. There were no significant differences in fluorescence parameters between dark-green leaf color and light leaf color genotypes.The Pn, stomatal conductance (Gs) , transpiration rate (Evap) of the first leaf were significantly lower than that of the second leaf, while the intercellular CO2 concentration (Ci) had little change, which indicated that the decrease ofPn did not result from the decrease of Gs. The decrease of SPAD value that has a close correlation with chlorophyll content was one of the apparent reasons resulted in decease of Pn. Further evidence from chlorophyll fluorescence showed that the Fo, Fm, Fv/Fm and PI changed with the leaf position but the Fm of the first leaf in the four genotypes was bigger than that of the second leaf, which showed that PSIIelectron transport potential of the first leaf was stronger than that of the second leaf. The absorption per active reactions centers (ABS/RC), dissipation per active reaction centers (DIo/RC) and happing per active reaction centers (TRo/RC) in the first leaf were higher than those in the second leaf in three rice genotypes except Shennong07015, which showed that the remainder energy dissipation efficiency in per active reaction centers in the first leaf was higher than that of the second leaf.【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】5页(P1-5)【关键词】水稻;叶位;叶绿素荧光;光合作用【作者】韩光明;赵明辉;詹先进;蓝家样;陈温福【作者单位】沈阳农业大学水稻研究所/农业部东北水稻生物学与遗传育种重点实验室/北方超级粳稻育种教育部重点实验室，沈阳110161; 湖北省农业科学院经济作物研究所/农业部长江中游棉花生物学与遗传育种重点实验室，武汉430064;沈阳农业大学水稻研究所/农业部东北水稻生物学与遗传育种重点实验室/北方超级粳稻育种教育部重点实验室，沈阳110161;湖北省农业科学院经济作物研究所/农业部长江中游棉花生物学与遗传育种重点实验室，武汉430064;湖北省农业科学院经济作物研究所/农业部长江中游棉花生物学与遗传育种重点实验室，武汉430064;沈阳农业大学水稻研究所/农业部东北水稻生物学与遗传育种重点实验室/北方超级粳稻育种教育部重点实验室，沈阳110161【正文语种】中文【中图分类】S511叶色变异是研究植物叶绿素代谢、光合作用及其光合电子传递链、激素生理,以及早衰、抗逆境等一系列代谢过程的理想材料,同时叶色深浅多与叶绿素含量密切相关,对其深入研究不仅有助于发现参与叶绿素代谢的新途径,而且还可以验证前人对叶绿素代谢过程的各种假说,甚至为新假说的提出提供依据,促进相关基础理论的发展和完善。
孕穗期水稻不同功能叶的发育蛋白质组学分析邵彩虹１，２ 谢金水１ 黄永兰１ 邱才飞１ 张振苗２ 林文雄２，＊（１江西省农业科学院土壤肥料与资源环境研究所，江西南昌３３０２００；２福建农林大学农业生态研究所，福建福州３５０００２；＊通讯联系人，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉｏｎｇ１８１＠１６３．ｃｏｍ）ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＬｅａｖｅｓｉｎＲｉｃｅ（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）ａｔｔｈｅＢｏｏｔｉｎｇＳｔａｇｅＳＨＡＯＣａｉ－ｈｏｎｇ１，２，ＸＩＥＪｉｎ－ｓｈｕｉ１，ＨＵＡＮＧＹｏｎｇ－ｌａｎ１，ＱＩＵＣａｉ－ｆｅｉ１，ＺＨＡＮＧＺｈｅｎ－ｍｉａｏ２，ＬＩＮＷｅｎ－ｘｉｏｎｇ２，＊（１ＳｏｉｌａｎｄＦｅｒｔｉｌｉｚｅｒ＆ＲｅｓｏｕｒｃｅａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＪｉａｎｇｘｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０２００，Ｃｈｉｎａ；２ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｇｒｏ－Ｅｃｏｌｏｇｙ，ＦｕｊｉａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００２，Ｃｈｉｎａ；＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｘｉｏｎｇ１８１＠１６３．ｃｏｍ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｒｅｖｅａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｉｎｒｉｃｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｅａｖｅｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｆｏｕｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｅａｖｅｓａｔｔｈｅｂｏｏｔｉｎｇｓｔａｇｅｉｎｈｙｂｒｉｄｒｉｃｅＳｈａｎｙｏｕ６３ｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅａｐ－ｐｒｏａｃｈｏｆｐｌａｎｔｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｓｏｆｔｈｅｔｏｐｌｅａｖｅｓａｔｔｈｅ１３－，１４－，１５－ａｎｄ１６－ｌｅａｆｓｔａｇｅｓ（ｔｈｅｔｏｔａｌｎｕｍｂｅｒｏｆｌｅａｖｅｓｏｆＳｈａｎｙｏｕ６３ｗａｓ１６）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｍｏｎｇｔｈｅｆｏｕｒｓｔａｇｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＩｍａｇｅｍａｓｔｅｒ２ＤＥｌｉｔｅ５．０，ｗｈｉｃｈａｌｌｏｗｅｄｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ２３ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｌｓｐｏｔｓ．Ｔｈｅｓｐｏｔｓｗｅｒｅｆｕｒｔｈｅｒｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｍａｔｒｉｘ－ａｓｓｉｓｔｅｄｌａｓｅｒｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ－ｔｉｍｅｏｆｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ｉｎｗｈｉｃｈ１４ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｓｅ１４ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｃａｎｂｅｄｒａｗｎｆｒｏｍｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｒｅｓｕｌｔ：ｔｈｅｍａｊｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ（９ｐｒｏｔｅｉｎｓ）ｗｅｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ，ｔｈｒｅｅｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｒｏｔｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｃｏｎｔｒｏｌ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｔｈｏｓｅ１２ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｒｅｇｕｌａｒｌｙｗｉｔｈｔｈｅｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｅｌｅｖａｔｉｏｎ；ｔｈｅｏｔｈｅｒｐｒｏｔｅｉｎｓ（２ｐｒｏｔｅｉｎｓ）ｗｅｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｍｉｎｏａｃｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｓｈｏｗｉｎｇａｎｉｒｒｅｇｕｌａｒｌｙｃｈａｎｇｉｎｇｐａｔｔｅｒｎｉｎｌｏｗｅｒｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄａｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎ－ｄａｎｃｅｉｎｆｌａｇｌｅａｆ．Ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｉｓｔｈｅｃａｒｒｉｅｒｏｆｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｒｉｎ－ｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｒｅａｓｏｎｔｈａｔｃａｕｓｅｄｔｈｅａｂｏｖｅｐｒｏｔｅｉｎｃｈａｎｇｅｓｓｈｏｕｌｄｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｌｅａｖｅｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｉｃｅ；ｂｏｏｔｉｎｇｓｔａｇｅ；ｌｅａｆｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｔｅｏｍｅ摘 要：从蛋白质组学角度对杂交水稻汕优６３孕穗期４个叶位功能叶片蛋白质组变化进行了研究，以揭示水稻孕穗期叶片蛋白质组的表达差异。
４个不同时期功能叶片蛋白质经双向电泳得到分离，应用Ｉｍａｇｅｍａｓｔｅｒ２ＤＥｌｉｔｅ５．０软件对所得到的双向电泳图谱进行分析比较，共得到差异表达蛋白质点２３个，差异表达蛋白质点经质谱分析，有１４个得到鉴定。
对鉴定出的蛋白功能进行研究，结果表明：差异表达的蛋白质大部分（９个）为参与光合作用和呼吸作用的蛋白质；其次为与蛋白结构及功能调控相关的蛋白质（３个），表达量表现为随叶位上升而上调；其余为参与氨基酸代谢的蛋白质（２个），表达量在较低叶位叶片中无显著规律，在剑叶中的表达量显著上调。
蛋白质是细胞功能执行者，受细胞功能或细胞环境变化的影响，因此，上述蛋白质发生变化的原因应与水稻不同叶位叶片生长发育特性有关。
关键词：水稻；孕穗期；叶位；蛋白质组学；差异蛋白质组中图分类号：Ｑ９４６．１；Ｓ５１１．０１文献标识码：Ａ文章编号：１００１－７２１６（２００９）０５－０４５６－０７ 水稻植株在倒４叶出现前后进入幼穗分化期，即孕穗期。
孕穗期是水稻产量形成关键时期，是水稻由前期营养生长转入生殖生长过渡期，营养需求上需要大量的养分供应。
上部功能叶片是水稻重要的源器官之一，对该时期水稻的生长发育具有重要的作用。
因此，国内许多研究单位从养分供应、环境胁迫等方面，以水稻上部功能叶片为材料研究了环境因素对孕穗期水稻某些生理指标、产量和品质的影响［１－５］，以及杂交水稻生育后期上部功能叶片早衰对水稻产量、品质形成的影响［６－９］。
已有研究主要侧重于对叶片光合或保护系统相关的生理指标的定量分析，而蛋白质是生命活动的执行者，水稻生理代谢的转变及其对外界环境的响应是植株体内一系列蛋白质共同作用的结果，因此，仅对既定的一些生理指标进行定量分析来揭示水稻叶片发育生长变化是不完善的。
随着现代生物科学技术的进步，尤其是水稻基因组精细图谱问世以来。
蛋白质组学被广泛应用于水稻特定组织的基因表达与转录分析及其响应逆境胁迫的研究［１０－１５］。
蛋白质组学技术把基因组序列信息和在特定组织、细胞或细胞器中执行收稿日期：２００８－１０－１０；修改稿收到日期：２００９－０３－１７。
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０６００３８５）；福建省科技厅重大专项资助项目（２００４ＮＺ０１－０４）。
第一作者简介：邵彩虹（１９７８－），女，博士。
６５４中国水稻科学（ＣｈｉｎＪＲｉｃｅＳｃｉ），２００９，２３（５）：４５６～４６２ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｉｃｅｓｃｉ．ｃｎＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－７２１６．２００９．０５．０２生命功能的蛋白质有机地联系起来，并能全面检测不同组织器官所表达的蛋白质及在不同发育阶段、不同条件下蛋白质表达的差异。
本研究应用蛋白质组学分析手段，探讨了水稻孕穗期不同功能叶片蛋白质差异表达，以期深入揭示在生育后期水稻叶片发育生物学的分子机制，为水稻高产育种与栽培调控提供理论支持和科学依据。
１ 材料与方法１．１ 试验材料供试材料为杂交水稻汕优６３（全生育期１６片叶片），由福建农林大学农业生态研究所提供。
将生长一致的５叶期水稻幼苗移栽至水培桶（１５Ｌ）中，每桶４株（以备４次取样用），营养液参照国际水稻研究所常规营养液配方［１６］，每周更换１次营养液，置于光照充足且便于通风的玻璃房中培养，水培期间，通过适时通风和人工洒水保持玻璃房的温度在２５～３８℃。
经观察与人工标记叶龄，分别于１３、１４、１５、１６叶期各桶选定１株，选取主茎的最上部全展开叶，立即用液态氮超低温处理后置于－８２℃冰箱中保存备用。
１．２ 叶片蛋白质提取称取混匀叶片１ｇ左右，立即放入预冷的加有０．５ｇ聚乙烯吡咯烷酮的研钵中研磨成均匀粉末，研磨过程中不断加入液氮以保持样品蛋白质稳定性。
研磨后样品用ＴＣＡ／丙酮法沉淀蛋白质，即加入预冷的１０％三氯乙酸丙酮溶液（含０．０７％β－巯基乙醇），混匀；样品于－２０℃下放置过夜，在０～４℃、１５０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心３０ｍｉｎ，去上清液，沉淀用预冷的８０％丙酮（含０．０７％β－巯基乙醇）重悬，按上述方法沉淀并离心，可重复多次，每次间隔８ｈ以上，直至样品的上清液呈无色。
沉淀真空干燥后制成蛋白干粉。
得到的沉淀加入适量蛋白质裂解液（８ｍｏｌ／ＬＵｒｅａ，４％ＣＨＡＰＳ，４０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ，６５ｍｍｏｌ／ＬＤＴＴ）于２０～２５℃下水浴超声３０ｍｉｎ充分溶解，２５℃下１８０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，弃沉淀，上清液即蛋白质样品溶液，于－８０℃下保存待用。
１．３ 叶片蛋白质含量测定蛋白质溶液制备按Ｒａｍａｇｌｉ等［１７－１８］介绍的方法进行，用牛血清蛋白作标准曲线测定样品浓度。
１．４ 双向电泳与凝胶成像电泳的第一向采用人工制备的胶条，蛋白样品的上样量为１８０μｇ，在２００Ｖ、３００Ｖ、４００Ｖ、５００Ｖ、６００Ｖ下分别聚焦３０ｍｉｎ；８００Ｖ下聚焦１４ｈ；１０００Ｖ下聚焦４ｈ。
第二向聚丙烯酰胺凝胶（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）电泳：胶条置于平衡缓冲液（６０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ６．８，２％ＳＤＳ，５％β－巯基乙醇，１０％甘油，０．０５％溴酚蓝）平衡３０ｍｉｎ，平衡后的胶条放置于制好的第二向ＳＤＳ胶上，并轻压使胶条与ＳＤＳ胶面充分结合，用加有少量溴酚蓝的１％琼脂糖封顶，进行第二向电泳。
第二向电泳参数为：１０ｍＡ／板，约１０ｈ。
硝酸银染色：电泳结束后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶在固定液（５０％甲醇、５％冰醋酸）中固定３０ｍｉｎ，双蒸水冲洗３次后放置过夜以降低背景颜色，于增敏液（３０％乙醇、０．２％硫代硫酸钠、６．８％醋酸钠）中反应３０ｍｉｎ，双蒸水冲洗３次，每次５ｍｉｎ，在硝酸银染色液（２．５％硝酸银、０．４％甲醛）中室温下反应２０ｍｉｎ，双蒸水冲洗２次，每次１ｍｉｎ，加显色液（２．５％碳酸钠、０．２％甲醛）显色，用５％冰醋酸终止显色，双蒸水冲洗３次，每次５ｍｉｎ，用保鲜膜密封，４℃下保存。
