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高中生物同步课件：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(2)(人教版选修1)

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2019_2020学年高二人教版生物选修一课件：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

2019_2020学年高二人教版生物选修一课件：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

专题2　微生物的培养与应用第6课时　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习导航　1.通过分析具体培养基的配方，归纳选择培养基的选择作用，理解筛选微生物的原理。

2.结合实验设计，分析微生物数量测定实验中产生偏差的原因及解决措施，学会微生物的计数方法，并对培养结果进行分析和评价。

重难点击　1.研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

2.能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数问题。

内容索引一、研究培养基对微生物的选择作用二、进行微生物数量的测定当堂检测一、研究培养基对微生物的选择作用基础梳理1.筛选菌株(1)自然界中目的菌株的筛选①原理：根据目的菌株对 的要求，到相应的环境中去寻找。

②实例：能产生耐高温的Taq DNA 聚合酶的 就是从热泉中筛选出来的。

(2)实验室中目的菌株的筛选①原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时 其他微生物生长。

②实例：从土壤中筛选能分解尿素的细菌。

③方法：利用 培养基进行微生物的筛选。

选择生存环境Taq 细菌目的菌株抑制或阻止2.选择培养基(1)概念：允许种类的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基。

(2)举例：筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培养基是以 为唯一氮源，按物理性质归类为固体培养基。

尿素特定抑制或阻止问题探究1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基下面是本课题使用的培养基的配方，请分析：KH2PO4 1.4 gNa2HPO4 2.1 gMgSO4·7H2O0.2 g葡萄糖10.0 g尿素 1.0 g琼脂15.0 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？答案　碳源是葡萄糖，氮源是尿素。

(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？答案　该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。

人教版教学课件选修一2..2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件

人教版教学课件选修一2..2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件

1、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、 温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2) 1.0g 琼脂 15.0g ①在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O 葡萄糖 尿素CO(NH2) 琼脂
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g
②从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基 ③从用途看此培养基属于哪类？ 选择培养基 ④培养基选择分解尿素的微生物的原理 尿素是唯一氮源，原则上只有能够合成脲酶的 微生物才能分解尿素，在该培养基上生长。
四、实验的具体操作
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（一）土壤取样 （二）配制土壤溶液 （三）制备培养基
（四）系列稀释涂布平板操作
（五）培养、观察菌落并统计菌落数
四、实验的具体操作
（一）土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌。应在火焰旁称取土壤10g。
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不 同的稀释度进行分离。
（五）培养、观察菌落并统计菌落数 培养：
不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度 和培养时间。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
计算出的结果比实际值偏_____ 小

人教版高中生物选修一专题二课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 课件(共19张PPT)

人教版高中生物选修一专题二课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 课件(共19张PPT)
47. 不是境况造就人，而是人造就境况。48. 你想成为幸福的人吗?但愿你首先学会吃得起苦。——屠格涅夫49. 成功的时候，都说是朋友。但只有母亲——她是失败时的伴侣。——郑振峄 50.在我们的一生中，没有人会为你等待，没有机遇会 为你停留，成功也需要速度 51.不论做什么事，都要相信你自己，别让别人的一句话将你击倒。人生没有对错，只有选择后的坚持，不后悔，走下去，走着走着，花就开了。52.吃别人吃不了的苦，忍别人受不了的气，付出比别人更 多的，才会享受的比别人更多。53.我们每个人的人生之舟都需要自己掌舵，自己掌控。懂得，是跌倒了依然会选择站起，失败了依然会选择重来，受伤了依然会选择坚强;懂得，是在黑暗中依然不迷失方向，在生死关头依然不乱了 方寸，在灾难包围中依然会微笑前行。54.思路清晰远比卖力苦干重要，心态正确远比现实表现重要，选对方向远比努力做事重要，做对的事情远比把事情做对重要。成长的痛苦远比后悔的痛苦好，胜利的喜悦远比失败的安慰好。 55.再大的事，到了明天就是小事，再深的痛，过去了就把它忘记，就算全世界都抛弃了你，——你依然也要坚定前行，因为，你就是自己最大的底气。56.人生路上常有风雨，需要一个好的心态。再难的路，只要不放弃，一直走下 去，总会走到终点;再重的担子，笑着是挑，哭着也是挑，又何必让自己难堪;再不顺的生活，撑一撑，也就过去了，笑容，最终会出现在脸上。57.最精美的宝石，受匠人琢磨的时间最长。最贵重的雕刻，受凿的打击最多。58.只有 对过去既往不咎，才能甩掉沉重的包袱；只有能够看轻自己，才能做到轻装上阵。只要不放弃，就没有什么能让自己退缩；只要够坚强，就没有什么能把自己打垮。59.学会驾驭自己的生活，即使困难重重，也要满怀信心的向前。 不自怜不自卑不哀怨，一日一日过，一步一步走，那份柳暗花明的喜乐和必然的抵达，在于我们自己的修持。真正想做成一件事，不取决于你有多少热情，而是看你能多久坚持。60.永远不要沉溺在安逸里得过且过，能给你遮风挡 雨的，同样能让你不见天日。只有让自己更加强大，才能真正的撑起一片天。61.人生中谁都有梦想，但要立足现实，在拼搏中靠近，在忍耐中坚持，别把它挂在嘴边，常立志者无志。62.人这一辈子，其实做不了几件事，所以想做

生物选修Ⅰ人教新课标2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件(16张)

生物选修Ⅰ人教新课标2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件(16张)
但A同学认为自己选用土壤样品不同导致结果不同，但是A同学没有设计 对照，拿不出让同学信服的证据。你能通过设置对照，帮助A同学排除上 述两个可能影响因素吗？
方案1：其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学 一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培 养基的配制有问题。
㈢设置对照
1.目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
2.实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学 从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在 同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。其他同学认为A同学结果有问 题，可能是A同学培养基被杂菌污染，或者培养基混入其他含氮物质， 导致其他杂菌生长。
3.选择培养基
本课题使用的培养基
KH2PO4
1.4g
NaHPO4
2.1g
问题1：该培养基的配方中，为微生物的生 长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
MgSO4 .7H2O 0.2g
葡萄糖
10.0g
尿素
1.0g
问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？ 为什么？
能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作 为氮源而生存。
计算公式： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所 用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。
【例2】：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细 菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落 数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值 163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题， 错在哪？

高中生物人教版选修1课件：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

高中生物人教版选修1课件：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
-10-
课题2 土壤中分解尿素的 细菌的分离与计数
一 二 三 四
目标导航
知识梳理
重难聚焦
典例透析
(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物。如当石油是唯 一碳源时,可抑制不能利用石油的微生物生长,使能够利用石油的 微生物生存,从而分离出能消除石油污染的微生物。 (4)通过某些特殊环境分离微生物。如在高盐环境中可分离得到 耐盐微生物,其他微生物在盐浓度高时因易失水而不能生存;在高 温环境中可分离得到耐高温的微生物,其他微生物在高温环境中因 酶失活而无法生存。 2.利用选择培养基分离能分解尿素的微生物的原理 分离能分解尿素的微生物所用的选择培养基的氮源只有尿素。 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,缺乏脲酶的微生物不能分 解尿素,因缺乏氮源而不能生长、繁殖,所以用此培养基就能够分 离出能分解尿素的微生物。
-3-
课题2 土壤中分解尿素的 细菌的分离与计数
一 二 三
目标导航
知识梳理
重难聚焦
典例透析
2.统计菌落数目 (1)常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。即当 样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品 稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品 中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在 30~300的平板进行计数。 该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两 个或多个细胞在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此,统 计结果一般用菌落数来表示。 (2)显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。
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课题2 土壤中分解尿素的 细菌的分离与计数
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课题2 土壤中分解尿素的 细菌的分离与计数
一 二 三
目标导航

人教版高中生物选修一2-2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt同步课件

人教版高中生物选修一2-2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt同步课件

验操作与评价
1．实验设计 (1)土壤取样 ①土壤微生物大约70%～90%是 细菌 。
②细菌适宜在酸碱度接近中性 的 潮湿 土壤中生长，绝大多
数分布在距地表 3～8 cm 的土壤层。
(2)样品处理
样品的 稀释程度 直接影响平板上生长的 菌落数目，选用一定稀释 范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300 之间，便于计数。 (3)微生物的培养与观察 将培养基平板放置于 30～37 ℃ 温室中培养1～2d，每隔 24h 统计
(5) 在进行分离分解尿素的细菌的实验时， A同学从培养基上筛选
出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的
实验结果产生的原因可能有______。(填序号) ①由于土样不同 ③由于操作失误 思维导图： ②由于培养基污染 ④没有设置对照
深度剖析
(1)培养基中加入尿素的目的是筛选尿素细菌。
( ①加尿素 糖 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 )。 ⑤加葡萄
⑥不加葡萄糖
⑦加硝酸盐
⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦
解析
土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生
成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中只加尿素， 分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物 要用固体培养基；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物， 需要加葡萄糖作为碳源。
实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌
操作。 答案 (1)苯酚 A 稀释涂布平板 (2)④的培养基没有加入苯酚 稀释涂布平板法或平
作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源 板划线
以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作

人教版高中生物选修一2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt课件


操作提示
• 无菌操作
1. 取土样的小铁铲和盛土样的信封在使用前 都需要灭菌。 2. 应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称 好的土样倒入烧瓶中，塞好棉塞。 3. 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁操作。
做好标记
• 本实验使用的平板和试管比较多。为 避免混淆，最好在使用前就做好标记。
例如：
在标记培养皿时，应注明培养基种类、 培养日期以及平板上培养样品的稀释 度。
实验室微生物的筛选原理
应用筛选 Taq 细菌的原理，人为提 供有利于目的菌株生长的条件（包 括营养、温度、pH等），同时抑制 或阻止其他微生物生长。
统计菌落数目
常用稀释涂布平板法统计样品中活菌的数 目。样品的稀释度足够高时，培养基表面 生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就 能推测出样品中大约含有多少活菌。为保 证结果准确，一般选择菌落数30—300的
■高中生物课件（人教课标版）
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题背景
尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素并 不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的 细菌将尿素分解成氮之后，才能被植物利 用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是 因为它们能合成脲酶。
尿素最初是从人的尿液中ຫໍສະໝຸດ 现的。• 指示剂也可以帮助我们准确地鉴定该 种细菌能否分解尿素。
相关链接
• 活菌计数技术广泛应用于土壤含菌亮的测 定、食品卫生和水源污染度的检验等方面。 如果你赶兴趣，可以从下列项目中选做一 个。 空气中微生物总数的检测 水中细菌总数的检测 牛奶中细菌的分离与计数 土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数
规划时间
• 对于耗时较长的生物实验，我们需要 实现规划时间，以便提高工作效率， 在操作时更加有条不紊。

高中生物 人教版 选修1 专题2 微生物的培养与应用 2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件 (36张PPT)

B 体积为0.1 mL）（ ） A.2.34×108 .2.34×109 C.234 D.23.4
【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每 毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。
2020/6/12
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一、研究思路
（二）统计菌落数目 2.间接计数法→活菌计数法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 （2）常用方法：稀释涂布平板法。 （3）公式：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂 布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。
原因：高温条件淘汰了绝大多数微生物。
获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求， 到相应的环境中去寻找。
2020/6/Байду номын сангаас2
5
一、研究思路
（一）筛选菌株 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度 、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
方法：
（1）提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、
缺点
✓不能区分死菌与活菌；
✓不适于对运动细菌的计数；
✓ 2020/6/12 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
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一、研究思路
（二）统计菌落数目 2.间接计数法→活菌计数法 （1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 （2）常用方法：稀释涂布平板法。
2020/6/12
12
一、研究思路
（二）统计菌落数目
2.间接计数法→活菌计数法
（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

人教版高中生物选修一专题二课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 课件(共16张PPT)

方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进 行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测及分析：如果空白对照没有长出菌落，说明 培养基未被污染；如果空白对照长出菌落，则说明A 的培养基被污染。
实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
三、统计菌落数目
1、显微镜直接计数：
利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定 容积里样品中微生物的数量。
缺点：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察。
三、统计菌落数目
2、活菌计数法
⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上 所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一 个菌落代表原先的一个单细胞。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
◆在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因 培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的分析
在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养 基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同 样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其 原因，提出解决方案。
二、实验过程设计
1、配制培养基 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
2、土壤取样 湿润、肥沃，地表以下3～8cm。 ◆取土样的小铁铲和装土样的的信封在使用前都要灭菌。
3、样品梯度稀释
4、涂布平板
5、培养与观察
二、实验过程设计
3、样品梯度稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火 焰旁进行。
一、筛选菌株原理
思考2：以下培养基的C源和N源分别是什么？ 对微生物是否具有选择作用？

人教版高中生物选修一课件：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数+

专题2
微生物的培养与应 用
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、研究思路
（一） 筛 选 菌 株
1、PCR技术及提示
2、实验室微生物的筛选原理（P21）
pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
人为提供有利于目的菌株的条件（包括营养、温度、
3、选择培养基（阅读配方）
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称 做选择培养基。
通过这个事例可以看出，实验结果要有说 服力，对照的设置是必不可少的
四、实验设计
（实验案例 ）
实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
……
实验的具体操作步骤如下:
资料一.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 信封中。
制备培养基：
准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。
由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择 了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀 释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同 吗？ 答：这是因为土壤中各类微生物的数量是不同 的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性 厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万， 霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微 生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应 当有针对性地提供选择培养的条件。
（二）样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～ 300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够 进行菌落的计数。 （三）重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结 果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步 分析产生差大量的微生物，其 中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物 多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能 分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还 应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
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微生物的培养与应用
(一)筛选分离分解尿素的细菌 （1）实验方法:选择培养
人为提供有利于目的微生物生长 的条件(包括营养物质、温度、PH值 等),同时抑制其它微生物的生长.即微 生物的选择培养。
（2）实验原理
选择培养基其它微生物生
长的培养基.
4.细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数 在30～300的平板进行计数。在同一稀 释度下，至少对3个平板进行重复计数， 然后求出平均值，并根据平板所对应 的稀释度计算出样品中细菌的数目。
五、操作提示
无菌操作 做好标记 规划时间
附：鉴别大肠杆菌培养基
伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以 用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因 为的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈 深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落 显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑 制其他微生物的生长。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽
例2．在微生物群体生长规律的测定中， 种内斗争最显著最激烈的时期是 A．调整期 B．对数期 C．稳定期 D．衰亡期
答案：C
解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生 物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足 的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的 增加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少， 每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就 越来越激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡 期，微生物的数目已经开始减少，pH已经极度不适于微生物的 生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存 斗争主要是与无机环境的斗争。
1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出 每克样品中的菌落数？ 答：统计某一稀释度下平板上的菌落数， 最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平 均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。
（三）设置对照
对照实验是指除了被测条件(实验变量或自变
量),其它条件(无关变量)完全相同的实验.
分为:空白对照、条件对照、相互对照和标准对
照等.
A同学的结果与其他同学不同，可能的解释 有三种。 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误; 三是实验组太少，缺乏可重复性。
实验方案有两种
一种方案(相互对照)： 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验, 增加实验组数(每同学做四个平板)，如果结果与A同 学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同 学存在操作失误或培养基的配制有问题。 另一种方案(空白对照)： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培 养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染(做四 个平板)。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服 力，对照的设置是必不可少的。
3.微生物的培养与观察 将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理 盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为250 mL）， 充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀 释至107稀释度，并按照由107～103稀释度按 照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换 移液管。
将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养。 随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。 比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的 数量、形态等，并做好记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 酚红培养基的斜面中，观察能否产生如课本中 图2-10的颜色反应。
加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的培养基:分离自养微生物 不含碳、氮源的培养基：分离自养固氮微生物 改变某种条件:如温度、PH值等
(3)培养基成分分析
分析
在该培养基的配方中，葡萄糖是C 源也是能源;尿素是培养基中的惟一氮源. 因此，原则上该培养基只有能够利 用尿素的微生物才能够生长。具有选择作用, 能够将利用尿素的微生物选择出来
四、实验案例
土壤中某样品细菌的分离与计数
实验的具体操作步骤如下: 1.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表 层土3 cm左右，再取样，将样品装（事先 要灭菌）入准备好的信封中。
2.制备培养基
准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将 菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上 生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目， 因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来 判断选择培养基是否起到了选择作用。由于初次 实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一 个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。每个 稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨 培养基，因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏 蛋白胨培养基。
（二）微生物生长量的测定方法：
1、直接计数法:参见必修3 注意：接种一种微生物，在液体培养基培养，定期取样计数。 2、间接计数法:是根据微生物在培养基上所形成的菌落 数来推测样品液中活细菌的数目。
（1）理论依据： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来 源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统 计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的 菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行 计数。
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀 释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同 吗？ 答：这是因为土壤中各类微生物的数量（单 位：株/kg）是不同的。 例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧 及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为 477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同 类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离， 同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。
（2）操作：
1)设置重复组:增强实验的说服力与准确性（至少2个平板); 2)选择菌落数在30-300的平板计数。
（3）计算公式：
C ×M 每亳升样品中的菌株数= V
C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml) M代表稀释倍数
说明：
1）间接计数中，恰当的稀释度是成功统计的 菌落数目的关键（参见实验设计部分）； 2）间接计数统计的菌落数往往比活细菌数目 低。