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福建省猪伪狂犬病病毒新流行株gD、 gE基因遗传变异分析魏春华;戴爱玲;李晓华;刘建奎;陈泽铭;杨小燕【摘要】为了解福建地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行毒株的分子生物学特性与变异规律.本试验分离了2011-2013年福建省不同地区的11株PRV,并对其gD、gE 基因进行遗传变异分析.结果表明,福建地区被检测的规模化猪场均存在野毒感染,病料接种PK-15细胞均能出现典型的细胞病变,分离的毒株接种家兔能出现典型的伪狂犬病症状.PRVgD、gE基因序列分析表明,自2011年福建地区PRV同源性较高且处于一个独立的分支,表明福建地区流行的PRV可能存在一定的抗原变异.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2016(052)003【总页数】4页(P15-18)【关键词】伪狂犬病病毒;分离鉴定;gD基因;gE基因;变异【作者】魏春华;戴爱玲;李晓华;刘建奎;陈泽铭;杨小燕【作者单位】龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012;龙岩学院生命科学学院预防兽医学与生物技术福建省高等学校重点实验室福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心,福建龙岩364012【正文语种】中文【中图分类】S852.65+5伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的多种家畜和野生动物的一种高度接触性传染病，可导致怀孕母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，哺乳仔猪出现神经系统症状，死亡率达90%以上，并有从单一感染向混合感染扩大的趋势，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。
此j政丛27猪伪狂犬病（Porcine pseudorahies, PK)是由猪伪狂犬病病毒(Pseu<Wabies virus，P R V)所引起的一种急性传染病c I W V感染不同年龄的猪临床症状不同，仔猪出现高热、腹泻、鸣叫，四肢划水样 姿势等精神症状，死亡率较高;公猪表现 为睾丸炎，精液品质下降;成年猪及育肥 猪初期有高热、呼吸闲难症状耐过后通 常呈隐性感染;怀孕母猪发生流产、产死 胎，木乃伊胎；猪伪狂犬病是(M E通报 疫病，该病自上个世纪八十年代发现至 今，一直是全球范围内猪的重要传播疫 病。
1病原学概述1.1病毒结构V属于疱疹病毒科，a-疱疹病 毒亚科，线性l)N A双股病毒病毐粒子呈圆形或椭圆形，由核心、二十面体核衣 壳、旗膜构成，'德膜表面有呈放射状排列 的纤突长约8~10纳米P R V基因组大 小约为150 kb.编码7C M00种病#蛋1'1，主要包括衣壳蛋白、旗膜糖蛋广丨以及 各种酶。
病毒粒子直径约为1丨〇〜150纳 米，位于胞浆内带囊膜的病毒粒子直径 为丨50〜180纳米，带囊膜的完整病毒粒 子直径为丨80纳米P l i V只有一个血清 型但不同毐株之间毒力有所差异。
2流行病学猪伪狂犬病发病无明显季节性但以 春冬较为寒冷的季节多发，PKV nf感染多种动物如牛、羊、犬、猫、鼠等，但猪是 其病毒的储存宿主，2018年我「_首次报 道了人感染丨病例:猪伪犴犬病传播方式多样，怀孕母猪感染该病毐时，病毐 可通过胎盘屏障感染胎儿；健康猪接触 病猪的鼻液、丨丨腔分泌物之后可被感染，也可因污染的词料或词养用具被感染；健康猪接触牛、羊、猫、鼠等带毒动物也 可被感染I W V在我国难以得到净化的 主要原闪有：传播途径多样、免疫不到 位、野毒株正在发生变异、P K V可潜伏 感染猪群3基因组结构及功能3.1基因组概况P K V基因组为线状双链D N A大小约为150 kb,G+C含量为74%。
猪伪狂犬病病毒主要功能蛋白基因序列分析摘要:根据Genbank中已发表得猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、TK基因得序列各设计了1对引物,对分离得到得PRV毒株得gE、gG、TK基因进行了PCR扩增、回收、克隆、测序,测序结果与预期得PRV gE、gG、TK基因片段相符。
遗传进化树分析与氨基酸序列比对结果发现PRV毒株得gE、gG、TK氨基酸序列发生变化得位点与2012年国内分离到得PRV流行株相同,从而推测该毒株为PRV变异毒株。
关键词:伪狂犬病毒;gE基因;TK基因;序列分析猪伪狂犬(Pseudorabies,PR)就是由伪狂犬病毒(Peudorabies virus,PRV)引起得以家畜与多种野生动物发热、奇痒及脑脊髓炎为特征得急性传染病[1]。
该病在我国发生较为严重,就是严重危害我国养猪业得疫病之一。
我国目前广泛应用得就是自然缺失弱毒活疫苗Bartha-k61株,使猪伪狂犬病得到了很好得控制。
但就是,2011年底至2012年该病在中国东北部分省份流行,甚至在许多使用基因缺失活疫苗免疫得规模化猪场出现了猪伪狂犬病疫情,给中国得养猪业造成了巨大得经济损失[2-6]。
伪狂犬病病毒(猪疱疹病毒1型)属于双股线性DNA病毒,大小约150kb,DNA 基因组中G+C得含量高达73%,可编码100种蛋白质。
基因组由独特得长节段(UL)、独特得短节段(US)、内部倒转重复序列(IRs)与末端倒转重复序列(TRs)组成。
在病毒得结构蛋白中,gE糖蛋白就是主要毒力因子之一,并作为标志基因用来区分疫苗免疫与野毒感染。
TK基因不仅就是最主要得毒力基因,而且也就是决定病毒持续感染得重要因素[7]。
一旦TK基因缺失,PＲV变异株对宿主得毒力将丧失或明显降低。
2013年至2014年上海市农业科学院畜牧兽医研究所繁殖障碍研究室从山西某免疫猪伪狂犬病(Bartha)疫苗得规模化猪场成功分离并鉴定出四株PRV,命名为SX1,SX2,SX3,SX4株,为明确该四株分离株就是否属于PRV抗原变异毒株,本研究对PRV SX株得gE、gG、TK全基因进行克隆与测序,通过与国内外其她已公布PRV分离株得gE、gG、TK推导得氨基酸序列进行比对,构建核苷酸序列遗传进化树,以期为丰富PRV分子流行病学与开发科学有效得新型猪伪狂犬病疫苗提供重要科学依据。
猪伪狂犬病病毒河南分离株gE全基因的克隆与序列分析高晓云;顾阳;潘鑫龙;郭小参;崔保安;陈红英【摘要】为了确定河南部分地区按照正常免疫程序接种猪伪狂犬病病毒（ PRV）基因缺失苗的猪场是否发生了PRV野毒感染，了解新流行株的主要毒力基因gE 是否发生变异，利用PCR方法，对南阳、周口、巩义、济源、漯河、原阳等地采集的疑似PRV感染的病料进行检测。
对PCR检测为阳性的病料接种猪睾丸细胞，传至6代，分离出9株PRV，克隆其gE全基因并进行序列分析。
结果表明，9株PRV均能扩增出1862 bp的gE基因，且彼此之间同源性为99．9％～100％，与其他PRV毒株同源性为97．5％～99．6％。
9株分离株处于一大分支上，且均含有2个氨基酸插入，在448位和510位均发生氨基酸置换。
结果表明，分离株均为PRV野毒株，且gE基因有不同程度的变化，与河南省伪狂犬病的重新流行有密切联系。
%The purpose of this study was to determine whether Pseudorabies virus ( PRV) infection caused by wild strain occurred at the farms where PRV gene deletion vaccine was inoculated under normal immune procedure in some areas of Henan Province and whether variation had occurred in gE gene which was one of the most impor-tant virulence genes of PRV .Samples from swine with suspicious PRV infection were collected from Nanyang , Zhoukou and other regions of Henan and detected by PCR .PRV-positive samples were inoculated into swine testis cells and sub-cultured six times.The complete genomes of gE of 9 PRV strains were cloned ,sequenced and ana-lyzed.The result showed that the length of gE genomes of the 9 strains were 1 862 bp.The homologies between the 9 strains were 99.9%-100% and the homologies with otherstrains were 97 .5%-99 .6%.Phylogenetic tree showed the 9 PRV strains belonged to a relatively independent sub-branch ,and contained 2 amino acid insertions . The replacement of amino acid occurred at the locus of 448 and the locus of 510 .It indicated that all of the isolated PRV strains were wild isolates ,which were related with the new prevalence .The variation had occurred in gE gene of these isolates .【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】5页(P137-141)【关键词】猪伪狂犬病毒;gE基因;克隆;序列分析【作者】高晓云;顾阳;潘鑫龙;郭小参;崔保安;陈红英【作者单位】河南农业大学畜牧兽医工程学院，河南郑州 450002;河南农业大学畜牧兽医工程学院，河南郑州 450002;河南农业大学畜牧兽医工程学院，河南郑州 450002;普莱克生物工程股份有限公司，河南洛阳 471000;河南农业大学畜牧兽医工程学院，河南郑州 450002;河南农业大学畜牧兽医工程学院，河南郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S828Key words:Pseudorabies virus;gE gene;Cloning;Sequence analysis伪狂犬病(Pseudorabies,PR)又称Aujeszky氏病,是由PR病毒(Pseudorabies virus,PRV)所引起的多种家畜、家禽和野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主要症状的急性传染病[1]。
伪狂犬病病毒FS-2015株gE和gB基因序列分析庞旋飞;练斯南;伍建敏;万曾培;王征帆;李中圣;白挨泉【摘要】为了解猪伪狂犬病病毒(porcine pesudorabies virus,PRV) gB和gE基因变异及遗传演化情况,本研究针对PRV FS-2015野毒株,应用“蚀斑法”对组织病料中病毒进行三轮纯化,应用全长扩增引物对FS-2015株gB和gE基因进行全基因扩增,并对PCR产物进行测序和序列分析.结果显示,PRV FS-2015株的gB、gE基因与国内外PRV参考毒株的核苷酸同源性分别为97.0％～100.0％和97.5％～99.7％,氨基酸同源性分别为96.4％～100.0％和95.3％～99.7％.氨基酸变异位点分析表明,FS-2015株的gB和gE基因均有位点突变和缺失.遗传进化分析表明,FS-2015株与国内近几年分离的PRV变异株GY、ZJ0l、HB1201、HN1201、JS2012、BJ-YT和BP属于同一分支,同源性较高,亲缘关系较近;与PRV 经典株Kaplan、Becker、NIA3、Kolchis、Bartha和Yangsan株属于不同分支,同源性较低,亲缘关系较远.从PRV FS-2015毒株与国内外经典毒株和当前国内流行的变异毒株的分析结果可知,PRV FS-2015毒株发生了一定的变异,属于当前国内流行变异毒株.本研究结果为广东省伪狂犬病分子流行病学调查、伪狂犬病的防控和疫苗株挑选工作提供参考数据.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2018(045)012【总页数】11页(P3524-3534)【关键词】伪狂犬病病毒(PRV);FS-2015株;gB基因;gE基因;序列分析【作者】庞旋飞;练斯南;伍建敏;万曾培;王征帆;李中圣;白挨泉【作者单位】佛山科学技术学院,佛山528231;佛山科学技术学院,佛山528231;广东海大畜牧兽医研究院,广州511400;佛山科学技术学院,佛山528231;佛山科学技术学院,佛山528231;广东海大畜牧兽医研究院,广州511400;佛山科学技术学院,佛山528231【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.1猪伪狂犬病(porcine pesudorabies，PR)是由猪伪狂犬病病毒(porcine pesudorabies virus，PRV)引起的一种以怀孕母猪流产、产死胎和木乃伊胎，成年猪咳嗽、喘气，哺乳仔猪出现神经症状、呕吐、腹泻为临床主要特征的急性、热性、高度接触性传染病[1]，该病可感染各年龄猪，但主要危害怀孕母猪和哺乳仔猪[2]。
福建农业学报31(11):1139〜1144,2016 F ujian Journal o f A gricultura l Scienceshttp ： //w ww. fj nyxb. cn d oi:10. 19303/j. issn. 1008-0384. 2016. 11. 001陈如敬，周伦江，吴学敏，等.猪伪狂犬病毒基因序列分析[；!].福建农业学报，2016, 31 (11): 1139 —1144.CHEN R-J»ZHOU L-J»WU X-M, et al. Sequence Analysis on gB Gene from Pseudorabies Virus [J]. Fujian Journal o f Agriculiural Sciences, 2016, 31 (11): 1139 —1144.猪伪狂犬病毒g B基因序列分析陈如敬，周伦江％吴学敏，黄晓凤，车勇良，严山，王晨燕，王隆柏，刘玉涛，魏宏(福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福建福州350013)摘要：2011年以来我国多省免疫猪伪狂犬病毒g E基因缺失苗猪场出现变异型猪伪狂犬病毒（P R V)感染，经典猪伪狂犬病毒疫苗（Bartha-k61)对该病无法提供100%有效保护，已有研究发现变异型P R V和经典PRV 基因存在特征性变异。
为明确变异型P R V g B基因特征，本研究对G enB ank中登录的部分P R V代表株基因进行分析比较。
结果表明，我国经典型和变异型P R V在g B蛋白氨基酸编码区第395位、453位、562位和 739位存在特征性差异，但不同来源PRV基因的核苷酸和氨基酸同源性分别在98. 1%〜100%和96. 1%〜100%。
从相互之间的遗传进化关系可以看出，P R V遗传进化出现两个大的遗传分支，呈现明显的地域性。
新发 变异型和经典型P R V在中国P R V遗传进化分支上呈现各自独立进化小分支；我国近年分离的貉源和约克夏梗犬源与新发变异型P R V则处于同一进化小分支。
伪狂犬病病毒遗传变异及UL41和UL24基因功能分析伪狂犬病(Pseudorabies,PR),又称Aujeszky氏病,是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的以母猪出现繁殖障碍,仔猪出现呼吸和神经症状为特征的一种急性传染病。
长期以来,我国的养猪场采用弱毒疫苗免疫接种,使该病得到了有效控制。
但2011年以来,我国多个免疫过Bartha-K61疫苗的规模化猪场相继出现了变异PRV疫情,造成母猪流产和仔猪死亡率升高,给养猪业造成了巨大经济损失。
然而当前流行的变异毒株与经典毒株间的遗传差异以及变异毒株的重要毒力基因的特性与功能尚不清楚。
在本研究中,我们对一株国内经典PRV SC株和一株变异HLJ8株进行了全基因组的测序,获得了两株病毒的全基因组序列信息。
通过与数据库现有的PRV全基因组序列和PRV gC基因序列一起进行基因组比对和系统进化分析,我们证明来自不同地理区域的PRV毒株表现出不同的进化趋势,特别是我国的早期分离株和当前的变异株组成了新的基因亚型。
此外通过重组和系统发育分析,我们首次报道了发生在PRV毒株之间的重组事件,并表明SC株是国内PRV早期毒株和Bartha疫苗样毒株的自然重组株。
UL41是α疱疹病毒的保守蛋白,单纯疱疹病毒Ⅰ型的研究表明其具有RNase活性,是病毒感染时重要的调控蛋白。
为研究PRV UL41在病毒致病过程中的功能,本文利用体外同源重组技术将UL41上下游序列和eGFP序列连接到线性载体上获得供体质粒。
将质粒连同PRV 基因组共转染到Vero细胞中,通过筛选产生荧光病变的病毒获得△UL41 eGFP PRV;然后构建只包含UL41上下游序列的供体质粒及包含UL41编码框和HA标签的供体质粒,同时构建剪切eGFP序列的CRISPR/Cas9质粒,一并与△UL41 eGFP PRV基因组共转染Vero,通过细胞病变荧光的有无及PCR筛选得到UL41缺失和回复型PRV。
猪伪狂犬病病毒主要功能蛋白基因序列分析
摘要：根据Genbank中已发表的猪伪狂犬病病毒（PRV）gE、TK基因的序列各设计了1对引物，对分离得到的PRV毒株的gE、gG、TK基因进行了PCR扩增、回收、克隆、测序，测序结果与预期的PRV gE、gG、TK基因片段相符。
遗传进化树分析和氨基酸序列比对结果发现PRV毒株的gE、gG、TK氨基酸序列发生变化的位点与2012年国内分离到的PRV 流行株相同，从而推测该毒株为PRV变异毒株。
关键词：伪狂犬病毒；gE基因；TK基因；序列分析
猪伪狂犬（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病毒（Peudorabies virus，PRV）引起的以家畜和多种野生动物发热、奇痒及脑脊髓炎为特征的急性传染病[1]。
该病在我国发生较为严重，是严重危害我国养猪业的疫病之一。
我国目前广泛应用的是自然缺失弱毒活疫苗Bartha-k61株，使猪伪狂犬病得到了很好的控制。
但是，2011年底至2012年该病在中国东北部分省份流行，甚至在许多使用基因缺失活疫苗免疫的规模化猪场出现了猪伪狂犬病疫情，给中国的养猪业造成了巨大的经济损失[2-6]。
伪狂犬病病毒(猪疱疹病毒1型)属于双股线性DNA病毒，大小约150kb，DNA基因组中G+C的含量高达73%，可编码100种蛋白质。
基因组由独特的长节段(UL)、独特的短节段(US)、内部倒转重复序列(IRs)和末端倒转重复序列(TRs)组成。
在病毒的结构蛋白中，gE糖蛋白是主要毒力因子之一，并作为标志基因用来区分疫苗免疫和野毒感染。
TK基因不仅是最主要的毒力基因，而且也是决定病毒持续感染的重要因素[7]。
一旦TK基因缺失，PＲV变异株对宿主的毒力将丧失或明显降低。
2013年至2014年上海市农业科学院畜牧兽医研究所繁殖障碍研究室从山西某免疫猪伪狂犬病（Bartha）疫苗的规模化猪场成功分离并鉴定出四株PRV，命名为SX1，SX2，SX3，SX4株，为明确该四株分离株是否属于PRV抗原变异毒株，本研究对PRV SX株的gE、gG、TK全基因进行克隆和测序，通过与国内外其他已公布PRV分离株的gE、gG、TK推导的氨基酸序列进行比对，构建核苷酸序列遗传进化树，以期为丰富PRV分子流行病学和开发科学有效的新型猪伪狂犬病疫苗提供重要科学依据。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 毒株、菌种和质粒PRV SX株由上海市农业科学院畜牧兽医研究所繁殖障碍课题组分离并保存；pMD-19T载体购自宝生物工程（大连）有限公司；大肠杆菌DH5α感受态细胞购自天根生化科技（北京）有限公司。
1.1.2主要试剂病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒（DP315）、质粒小提试剂盒、琼脂糖凝胶回收试剂盒均购自天根生化科技（北京）有限公司；T4 DNA连接酶、TaKaRa LA Taq with GC Buffer均购自宝生物工程（大连）有限公司。
1.2方法
1.2.1引物设计与合成参照GenBank中PRV gE、TK基因序列，利用Primer Primer 5.0软件，设计2对引物。
引物序列：上游引物gE-F:5’-atgcggccctttctgctgcg-3’，下游引物：gE-R:5’-ttaagcggggcgggacatca-3’。
上游引物gG-F:5’-atgaagtgggcaacgtggat-3’,下游引物：gG-R:5’-tcaggcggaggccacgtgg-3’，上游引物TK-F：5’-atgcgcatcctccggatcta-3’，下游引物：TK-R：5’-tcacacccccatctccgac-3’，分别用于扩增gE、gG、TK全基因。
1.2.2 病毒基因组的提取与扩增取200µL病毒悬液于1.5mL离心管中，反复冻融3次，按照病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒（DP315）说明书提取病毒DNA。
用所设计的特异性引物进行PCR扩增。
取10µL PCR产物，置于浓度为10g/L 的琼脂糖凝胶上电泳。
将PCR产物经琼脂糖凝胶回收试剂盒切胶纯化回收后与pMD-19T载体连接，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取阳性重组质粒送测序。
1.2.3 目的基因的序列分析采用DNAStar生物软件对PRV所测定的gE、TK基因推导的氨基酸序列与GenBank中收录的其他国内外毒株的序列进行比对，并构建gE、TK基因核苷酸序列的遗传进化树。
2 结果与分析
2.1病毒gE、TK基因的PCR结果
以PRV SX株病毒基因组DNA为模板，用PCR的方法分别扩增出约1740bp，1500bp和963bp的基因片段，琼脂糖凝胶电泳图显示目的基因片段条带大小与预期结果符合（图１，图2，图3）。
PRV SX株gE、gG、TK基因的测序由上海
生工生物科技有限公司完成。
gE 、gG 、TK 基因去除起始密码子和终止密码子，全长分别为1734bp ，1494bp 和957bp ，分别编码578，498和319个氨基酸。
2.2 遗传进化树分析
从GenBank 中选取近几年国内外成功分离并已公布的的PRV 毒株，对
PRVSX 株的gE 、gG 、TK 基因构建遗传进化树，进行进化关系分析。
gE 、gG 、TK 基因遗传进化树分析 通过比对分析，gE 、gG 、TK 基因序
列和国内新分离得到的PRV 毒株具有很高的同源性，分别达到99%，98%，99%以上。
gE 基因的遗传进化树结果见图4，gG 基因的遗传进化树结果见图5，TK 基因的遗传进化树结果见图6。
由进化树结果可知，从所有参与分析的毒株来看，PRV SX 株与国内新分离得到的PRV 毒株亲缘关系很近。
泳道
1：样品1；泳道2：样品2,；泳道3：样品3，泳道4：样品4；泳道5：阳性对照，泳道6：阴性对照 图1 gE 基因PCR 电泳图
泳道1：样品1；泳道2：样品2,；泳道3：样品3，泳道4：样品4；泳道5：阳性对照，泳道6：阴性对照
图2 gG 基因PCR 电泳图 泳道1：样品1；泳道2：样品2,；泳道3：样品3，泳道4：样品4；泳道5：阳性对照，泳道6：阴性对照 图3 TK 基因PCR 电泳图
3 结论
2011年底至2012年在中国东北地区许多使用基因缺失活疫苗免疫的规模化
猪场出现了猪伪狂犬病疫情。
国内学者在2012年暴发猪伪狂犬病的疫情场中成功分离并鉴定出PRV 变异株[2-6]，为明确此次山西省该规模化猪场发生的猪伪狂犬病疫情是否为该类流行株引起，以及与各毒株之间的遗传进化关系，本研究运用PCR 方法对PRV SX 株的gE 、TK 基因进行了全基因扩增，与其他分离株的氨基酸序列进行同源性比对分析并进行核苷酸序列的遗传进化分析，明确了PRV SX 株gE 、gG 、TK 基因与其他国内外分离到的PRV 毒株具有很高的同源性。
综合上述结果可推测该规模化猪场发生的猪伪狂犬病疫情是由PRV 流行株引起。
本研究为PRV 的流行病学调查分析奠定了基础，也为开发科学、有效的新型猪伪狂犬病疫苗提供科学依据。
图5 gG 基因进化树分析
图4 gE 基因进化树分析
图6 TK 基因进化树分析
主要参考文献：
[1] 殷震, 刘景华. 动物病毒学[M]. 2版. 北京: 科学出版社,1997: 700-713
[2]安同庆，赵鸿远，彭金美，等．猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征[J]．中国预防兽医学报，2014，36（7）：506-509
[3] 陈红英，高晓云，郭小参，等．猪伪狂犬病病毒原阳株gE全基因的克隆与序列分析[J]．国外畜牧学：猪与禽，2014，3：58-60
[4] Yu X, Zhou Z, Hu D, et al. Pathogenic pseudorabies virus, China, 2012[J]. Emerging Infectious Diseases, 2014, 20(1):102-104
[5] Rui W, Bai C, Sun J, et al. Emergence of virulent pseudorabies virus infection in Northern China[J]. Journal of Veterinary Science, 2013, 14(3):363-365
[6] Wang C H, Yuan J, Qin H Y, et al. A novel gE-deleted pseudorabies virus (PRV) provides rapid and complete protection from lethal challenge with the PRV variant emerging in Bartha-K61-vaccinated swine population in China[J]. Vaccine, 2014, 32(27):3379-3385
[7]Prieto J, Martín Hernández A M, Tabarés E. Loss of pseudorabies virus thymidine kinase activity due to a single base mutation and amino acid substitution[J]. Journal of General Virology, 1991, 72 (6):1435-1439.
彭老师，这是分析的结果，采用MEGA软件采用Bootstrap Test of Phylogeny --- Neighbor-joining方法制作的进化树，跟您截图的有些区别，可能是采用的软件不一致的缘故。
数值代表的是frequency, 一般数值越高可信度越强，低于50代表二者之间进化上比较远。
