下载文档原格式
细胞裂解的方法引言细胞裂解是生物学和生物工程领域中非常重要的实验技术，用于破坏细胞膜，释放细胞内的有机物质和细胞器。
细胞裂解的方法有多种，本文将详细介绍几种常用的细胞裂解方法。
物理方法高压破碎法高压破碎法是通过机械力将细胞迅速破碎，常用的设备有高压均质机和球磨机。
高压均质机通过高压力和剪切力将细胞破碎，适用于细胞数量较少的样品。
球磨机则是通过球体的碰撞和摩擦力将细胞破碎，适用于大批量的样品处理。
超声波法超声波法利用超声波的机械振动作用将细胞破碎。
超声波振荡产生的高压缩力和剪切力可以破坏细胞膜和细胞壁，释放细胞内的成分。
超声波法操作简便，对样品的污染较小，常用于小型实验室中。
静电法静电法是利用静电场的力作用将细胞破碎。
细胞在强静电场的作用下，细胞膜受到外力破坏，细胞内容物溢出。
静电法对样品量大、浓缩度低的样品处理效果较好，但操作较为复杂，需要专门的设备。
化学方法渗透裂解法渗透裂解法是利用高渗透溶液将细胞破坏。
高渗透溶液能够快速渗透进入细胞内，造成胞内外浓度差，从而使细胞溶胀破裂。
常用的渗透溶液有甘油、尿素和高浓度盐溶液。
酶解法酶解法是利用酶的作用将细胞破坏。
酶可以降解细胞膜和细胞壁的主要成分，从而导致细胞破裂。
常用的酶有蛋白酶、葡萄糖酶和纤维素酶。
酸碱裂解法酸碱裂解法是利用强酸和强碱的腐蚀作用将细胞破坏。
酸性条件下，细胞膜和细胞壁的主要成分被腐蚀，细胞破裂。
碱性条件下，细胞膜和细胞壁的脂质成分被皂化，导致细胞破裂。
生物方法热裂解法热裂解法是利用高温将细胞破坏。
高温会导致细胞膜和细胞壁的熔化，使细胞破裂。
热裂解法操作简单，但温度和时间的控制较为关键。
冻融裂解法冻融裂解法是利用低温冷冻和溶解的循环作用将细胞破坏。
冻结过程中，水结晶会导致细胞膜和细胞壁破裂，溶解过程中溶液的渗透作用进一步破坏细胞。
震荡法震荡法是利用机械震动将细胞破碎。
通过高频率的震动作用，细胞膜和细胞壁会受到破坏，释放细胞内的物质。
震荡法操作简便，但需要注意震动频率和时间的控制。
细胞破碎技术——超声波破碎法摘要：细胞破碎技术的基本概念及其基本方法，重点介绍了从超声波破碎仪及超声波破碎常见的问题与解决方法上介绍了超声波破碎法。
关键词：细胞破碎方法超声波破碎仪常见问题正文：一、细胞破碎阻力细菌——几乎所有细菌的细胞壁都是由肽聚糖（peptidoglycan）组成，它是难溶性的聚糖链（glycan chain），借助短肽交联而成的网状结构，包围在细胞周围，使细胞具有一定的形状和强度。
短肽一般由四或五个胺基酸组成，如L-丙氨醯-D-谷氨醯-L-赖氨醯-D-丙氨酸。
而且短肽中常有D-胺基酸与二氨基庚二酸存在。
破碎细菌的主要阻力是来自于肽聚糖的网状结构，其网结构的致密程度和强度取决于聚糖链上所存在的肽键的数量和其交联的程度，如果交联程度大，则网结构就致密。
酵母菌——酵母细胞壁的最里层是由葡聚糖的细纤维组成，它构成了细胞壁的刚性骨架，使细胞具有一定的形状，覆盖在细纤维上面的是一层糖蛋白，最外层是甘露聚糖，由1,6一磷酸二酯键共价连接，形成网状结构。
在该层的内部，有甘露聚糖-酶的复合物，它可以共价连接到网状结构上，也可以不连接。
与细菌细胞壁一样，破碎酵母细胞壁的阻力主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度。
真菌——霉菌的细胞壁主要存在三种聚合物，葡聚糖（主要以β-1,3糖苷键连接，某些以β-1,6糖苷键连接），几丁质（以微纤维状态存在）以及糖蛋白。
最外层是α-和β-葡聚糖的混合物，第2层是糖蛋白的网状结构，葡聚糖与糖蛋白结合起来，第3层主要是蛋白质，最内层主要是几丁质，几丁质的微纤维嵌入蛋白质结构中。
与酵母和细菌的细胞壁一样，真菌细胞壁的强度和聚合物的网状结构有关，不仅如此，它还含有几丁质或纤维素的纤维状结构，所以强度有所提高。
植物细胞——对于已生长结束的植物细胞壁可分为初生壁和次生壁两部分。
初生壁是细胞生长期形成的。
次生壁是细胞停止生长后，在初生壁内部形成的结构。
目前，较流行的初生细胞壁结构是由Lampert等人提出的“经纬”模型，依据这一模型，纤维素的微纤丝以平行于细胞壁平面的方向一层一层敷着在上面，同一层次上的微纤丝平行排列，而不同层次上则排列方向不同，互成一定角度，形成独立的网路，构成了细胞壁的“经”，模型中的“纬”是结构蛋白（富含羟脯氨酸的蛋白），它由细胞质分泌，垂直于细胞壁平面排列，并由异二酪氨酸交联成结构蛋白网，径向的微纤丝网和纬向的结构蛋白网之间又相互交联，构成更复杂的网路系统。
实验室常用的细胞破碎方法
实验室常用的细胞破碎方法有物理法和化学法。
1、物理法
（1）反复冻融：将细胞反复放置于-20℃冷冻以及25-30℃环境下，反复冷冻溶解10次-20次。
适用于例如血细胞等大部分哺乳动物细胞。
（2）煮沸法：与冻融法相反，将细胞放置于100℃沸水煮沸5-10分钟，适用于大部分微生物细胞。
（3）超声法：将细胞放置于超声破碎仪中，以一定频率的超声破碎细胞，适用于绝大部分微生物细胞。
（4）渗透压法：将血细胞等细胞膜较为薄弱的细胞放置于纯水等低渗溶液，细胞吸收大量水分破解。
（5）液氮法：植物细胞一般采用液氮捻磨的方法破解细胞。
2、化学法
（1）强酸、强碱溶液：一般应用0.5N NaOH溶液可以裂解绝大部分动物细胞和微生物细胞。
（2）生物酶：一般用溶菌酶、蛋白酶K等酶裂解微生物细胞。
破坏细胞壁和细胞膜的方法破坏细胞壁和细胞膜是一项非常重要的技术，在微生物学、生物化学、生物工程等领域都有广泛的应用。
本文将介绍常见的破坏细胞壁和细胞膜的方法，并对它们的优缺点进行简要分析。
一. 物理方法1. 超声波破碎法超声波破碎法是一种以高频率机械振荡产生的声波为能量来破坏细胞壁或细胞膜的方法。
它的优点是操作简便，不需要任何酶或化学试剂，破碎效果好，但是需要注意的是，超声波的作用强度和时间要控制好，以免对感兴趣的分子造成损伤。
2. 研钵破碎法研钵破碎法是一种传统的细胞碎解方法，通过用研钵和石英砂对细胞进行摩擦和撞击破坏细胞壁。
它的优点是操作简单易行，装置成本低廉，不需要加入任何试剂，但是却有可能对细胞内部物质产生破坏。
二. 化学方法1. 高渗溶液法高渗溶液法是一种将高渗溶液与细胞混合并处理，使细胞失去渗透调节的能力而坏死的方法。
它的优点是对细胞壁和细胞膜都有破坏作用，可以同时破坏细胞内和外的膜结构，但是却可能对部分细胞内部物质产生破坏。
2. 酶解法酶解法是将特定的酶加入到细胞中，使其破坏细胞壁或膜的方法。
常用的酶有蛋白酶、纤维素酶、壳聚糖酶等。
它的优点是具有高度的选择性，可以中和细胞内的特定物质而不对其他分子造成伤害，但是操作较为繁琐，需要反复测定适当的酶浓度以及处理时间。
三. 其他方法1. 冷冻-解冻法冷冻-解冻法是将细胞低温处理后，进行快速升温解冻的方法。
这种方法可以使细胞壁和细胞膜受到冷冻和解冻的损伤而破坏。
它的优点是可以保存较多的细胞成分，避免部分物质受到酶解的影响，但是需要注意冷冻和解冻的速度和温度。
2. 电穿孔法电穿孔法是将细胞置于电场中，利用电场作用力使细胞膜产生微细孔洞，以便物质进出细胞的方法。
它的优点是可以具有选择性的穿过细胞膜，但是对于有机体而言，其穿透的效果相对有限，并且较难对细胞壁产生破坏.总的来说，各种破坏细胞壁和细胞膜的方法各有其优缺点。
在实际操作中，需要根据不同的研究目的选择恰当的方法，并进行有效的控制，以保证高效的细胞破碎效果。
细胞破碎技术
细胞破碎技术是一种将细胞壁破坏并使细胞内部成分释放出来的方法。
这种技术常用于提取和分离细胞内的蛋白质、DNA、RNA等分子。
常见的细胞破碎技术包括机械破碎、超声破碎、冻融破碎和化学破碎等方法。
1. 机械破碎：使用研钵、高速搅拌器、螺旋刀等机械设备对细胞进行破碎，通过物理力使细胞破裂，并释放出细胞内的分子。
2. 超声破碎：利用高频率的超声波对细胞进行振荡，产生剧烈的机械剪切力和微小气泡的崩溃，从而破碎细胞壁。
3. 冻融破碎：将细胞冷冻后迅速加热，重复冻结和加热的过程会使细胞壁破裂，并释放出细胞内的成分。
4. 化学破碎：利用化学试剂对细胞进行处理，如使用碱性溶液、表面活性剂或酶，以破坏细胞壁，使细胞破碎并释放出细胞内的分子。
细胞破碎技术广泛应用于细胞生物学、分子生物学、生物化学等领域，可用于提取纯化目标分子、研究细胞内的代谢过程、检测疾病标志物等。
细胞破碎的技巧
细胞破碎是一种常用的实验技术，用于释放和提取细胞内的蛋白质、DNA、RNA 等物质。
下面是一些常用的细胞破碎技巧：
1. 震荡法：使用震荡器或振荡器将细胞在缓冲液中震荡破碎。
这种方法适合于破碎较小数量的细胞，效果较轻微。
2. 超声波破碎法：使用超声波振荡器将细胞暴露在超声波中，超声波的能量对细胞进行破碎。
这种方法可以快速高效地破碎大量的细胞。
3. 高压法：利用高压机或高压均质器将细胞通过高压作用破碎。
这种方法适用于比较坚硬的细胞或细胞壁较厚的细胞。
4. 冷冻破碎法：将液氮浸入细胞悬液中，使细胞迅速冷冻，然后用玻璃杵或超声波破碎器打碎冷冻的细胞。
这种方法适用于需要保留细胞内部结构的实验。
5. 酶解法：使用特定的酶来破坏细胞壁或细胞膜，使细胞释放出内部的物质。
这种方法适用于特定的细胞类型和实验目的。
不同的细胞类型和实验目的可能需要不同的破碎方法，因此选择合适的方法是十分重要的。
此外，为了最大限度地保留目标物质的完整性和活性，选择合适的缓
冲液和温度条件也是非常重要的。
![[机械法]细胞破碎的方法、原理和优缺点](https://uimg.taocdn.com/d2010ee859eef8c75ebfb353.webp)
[机械法]细胞破碎的方法、原理和优缺点
1、高速组织捣碎机
捣碎机转速可达10,000r/min，具高速转动的锋利的刀片，宜用于动物内脏组织的
破碎。
操作：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至
最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。
特点：由于旋转刀片的机械切力很大，制备一些较大分子如核酸则很少使用。
2、组织匀浆器
制作匀浆器的材料通常用玻璃，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。
操作：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎。
特点：匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。
此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。
但是，这种方法也较易造成堵塞；团状或丝状真菌、较小的革兰氏阳性菌以及某些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合用该法处理。
3、研钵
多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。
值得注意的是：在研磨过程中局部往往生热导致变性或pH值变化，尤其是研磨玻璃粉和氧化铝时；而且磨细剂的吸附也可导致损失。
4、细菌磨
是一种改良了的研磨器，比研钵具有更大的研磨面积，而且低部有出口。
操作时先把细菌和研磨粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。
浅谈常用细胞破碎方法随着生物技术的逐渐发展，生物所产生的各种代谢产物也逐渐被人们发现其有用的一面，但是在获得目的产物过程中，往往因为不同产物所处的生物个体不同，造成了个体差异性，所以为了获得大量，不被破坏的产物，往往针对不同生物个体选用不同的细胞破碎技术来做预处理。
现将几年来一直常用的细胞破碎技术介绍一下：关键词：细胞破碎机械法酶法（一）细胞破碎的定义1.细胞破碎（cell rupture）技术:利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术。
2.破碎各种细胞的主要阻力：2.1破碎细菌细胞的主要阻力：肽聚糖网状结构的致密程度和强度，取决于聚糖链上所存在的肽键的数量和其交联的程度;2.2 破碎酵母细胞的阻力:葡聚糖交联的紧密程度和它的厚度;2.3 破碎霉菌细胞的阻力:葡聚糖网状结构的交联度,几丁质或纤维素的纤维状结构。
(二) 细胞破碎的方法1.机械法1.1高压匀浆破碎法（homogenization）高压匀浆器（High pressure homogenizer）操作原理：在高压下迫使细胞浆液在排出阀的小孔中高速冲出，并射向撞击环上，使细胞受到高的液相剪切力而破碎。
操作方式：单次或多次循环出口温度：20℃左右压力：55－70Mpa适用范围：酵母和大多数细菌细胞的破碎。
料液细胞浓度：20%左右。
☆团状和丝状菌，不宜使用。
注意事项：（1）操作温度：↑２－３℃/10MPa（2）对料液作冷却处理。
（3）多组破碎操作中需要在级间设置冷却装置可有效防止温度上升，保护产物活性。
（4）较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性菌以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀，也不适合该法处理【1】。
1.2珠磨机研磨珠磨机研磨：将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝等研磨剂一起快速搅拌，使细胞获得破碎。
工作原理：细胞的破碎是由剪切力层之间的碰撞和磨料的滚动而引起，磨室配有冷却夹套。
注意事项：操作参数较多，一般凭经验估计并且珠子之间的液体损失30%左右。
常见胞内酶细胞破碎方法胞内酶是细胞内的一种重要蛋白质，具有调控细胞代谢和信号传导的作用。
为了研究这些酶的功能和机制，科学家需要将细胞破碎，释放胞内酶。
本文将介绍几种常见的胞内酶细胞破碎方法。
一、机械破碎法机械破碎法是最常用的破碎细胞的方法之一。
它利用物理力学原理，通过机械力将细胞破碎。
其中最常用的方法是超声波破碎法和高压破碎法。
超声波破碎法利用超声波的高频振动作用于细胞，使细胞壁破裂，释放胞内酶。
这种方法具有操作简单、破碎效果好的优点，适用于各种类型的细胞。
高压破碎法则是利用高压力将细胞破碎。
在高压下，细胞壁会被破坏，从而释放胞内酶。
这种方法适用于较坚硬的细胞，如细菌和酵母等。
二、化学破碎法化学破碎法是利用化学试剂破坏细胞壁，使细胞破碎。
其中最常用的方法是利用洗涤剂和酶的作用。
洗涤剂破碎法是将细胞悬浮液加入含有洗涤剂的缓冲液中，洗涤剂会破坏细胞膜和细胞壁，使细胞破碎。
常用的洗涤剂有Triton X-100、Tween-20等。
酶破碎法则是利用酶的特定作用，破坏细胞壁。
例如，利用葡聚糖酶可以破坏细菌细胞壁，释放胞内酶。
这种方法适用于特定类型的细胞。
三、冻融破碎法冻融破碎法是将细胞悬浮液冷冻并迅速解冻，使细胞壁破裂。
这种方法适用于柔软的细胞，如动物细胞。
在冻融过程中，细胞内的水会结冰并膨胀，导致细胞壁破裂。
解冻后，细胞内的酶会被释放出来。
这种方法操作简单，不需要使用化学试剂，适用于一些对试剂敏感的样品。
四、超声波破碎法与化学破碎法的联合使用有时候，单独使用超声波破碎法或化学破碎法可能无法完全破碎细胞。
因此，科学家常常将超声波破碎法与化学破碎法结合使用，以增加破碎效果。
使用超声波破碎法将细胞破碎一部分，然后使用化学破碎法继续破碎。
这样可以充分释放胞内酶，提高实验的效果。
机械破碎法、化学破碎法、冻融破碎法以及超声波破碎法与化学破碎法的联合使用是常见的胞内酶细胞破碎方法。
在进行实验时，科学家可以根据实验需要选择合适的破碎方法，以获得准确可靠的结果。
细胞破碎的技巧细胞破碎（cell lysis）是实验室中常见的操作，目的是将细胞破裂释放细胞内容物，以便进行后续实验，如蛋白质提取、DNA/RNA提取等。
细胞破碎的技巧主要有机械破碎、化学破碎和生物学破碎等多种方法。
一、机械破碎1. 高压均质法：使用高压均质机对细胞进行破碎，将细胞悬浮液通过小孔或喷嘴，使细胞迅速受到高速液流和切割作用，从而实现细胞破碎。
此法适用于较硬的细胞，如细菌等。
2. 超声波破碎法：利用超声波产生的剧烈涡流和液体物理性质变化，使细胞迅速破裂。
应注意控制超声波功率和时间，以避免样品过热和损伤。
3. 球磨破碎法：将含有细胞的样品与玻璃或金属珠放入球磨研钵中，并用球磨研钵进行高速摩擦研磨，利用机械力使细胞破碎。
此法适用于软组织以及大量样品。
二、化学破碎1. 胶酶破碎法：将含有细胞的样品用适量的含有胶原降解酶的缓冲液处理，利用胶原降解酶分解细胞间质蛋白，使细胞破裂。
此法适用于软组织和动物组织。
2. 高温破碎法：将含有细胞的样品置于高温中进行热处理，使细胞质膜破裂。
此法适用于耐高温的菌株和细胞。
3. 低温冻融破碎法：将含有细胞的样品在液氮中预冷，然后迅速置于高温水浴中进行冻融循环，使细胞破裂。
此法适用于一些敏感细胞。
三、生物学破碎1. 厌氧破碎法：由于一些细菌或真菌在缺氧条件下生长，在其细胞膜上富含氧化亚氮酸盐酶，可以将细胞膜破裂。
2. 超声波破碎法：有些细菌的外膜结构相对较弱，在超声波的作用下容易破裂。
3. 冻融破碎法：一些细菌在冻融过程中由于细胞膜的合并作用不够强，容易破裂。
4. 酶处理法：利用胶原酶、丝氨酸酶等刺激性酶类物质，可引起细胞质膜和细胞壁的变性与解聚，从而使细胞破裂。
在实际操作中，需要根据不同实验的要求选择适合的细胞破碎方法，并注意以下几点：1. 样品处理：样品中的细胞应尽可能保持完整，不受损伤或降解，避免过度搅拌或过高的温度处理，以保持样品的完整性。
2. 温度控制：在进行细胞破碎时，对于需要保持活性的细胞内容物，如酶、蛋白质等，应注意控制温度以避免失活。
细胞破碎技术细胞破碎技术是我们根据国际九十年代最新技术研制成功的新产品。
对粘度低于0.2Pa.s，温度低于80摄氏度液体物料（液-液相或液-固相）的均质乳化，如乳品、饮料、化妆品、药品等产品的均质、乳化，细胞破碎技术有很好的适用性，下面小编给大家介绍一下细胞破碎技术。
1、细胞破碎技术工作原理样品必须经过严密的金刚石制备分散阀门，并承受超高压力能量狭缝瞬间释放所产生的剪切、空穴、碰撞三种均质分散效应，同时样品始终享受着低温水浴的冷却或恒温（4~6℃间任意调整），使之处理后的样品颗粒均匀纳米化且不易抱团；4-80℃间任意可调也可通过升温改变样品流动性，便于制备与分散。
2、细胞破碎技术用途适用于：高等院校、科研所、化工、涂料、新材料、新能源、生物医药等行业使用石墨烯，纳米碳管、碳粉制备与分散；纳米高分子材料制备与分散；纳米涂料制备与分散；纳米电池液、浆料制备与分散；纳米油墨制备与分散；纳米染料制备与分散；纳米油漆制备与分散；纳米药物制备与分散；其他•••••••••••3、细胞破碎技术设备操作说明整套机器设备安装到位后，检查各系统联接无误（进水管/出水管、排水管、冲洗水管、电源、电路），观察物料样品是否通过透明胶管进入主机进口，冷却循环水是否正常运转流通，然后操作相关按钮，使主机正常工作。
具体步骤见下：（1）接通总电源，整机通电。
将钥匙插入工作/锁定转换孔，并旋到工作位置。
（2）进样杯中加满纯净水或缓冲液，按“液压泵”“开”按钮（绿色），油泵启动，供油压力输入主附油缸。
（3）按“主机”“开”按钮，机器正常运转（往复运动）。
（4）顺时针缓慢调节调压阀，使低压表、高压表压力同步上升，根据样品种类，调节破碎压力（200Mpa以下）。
（5）当纯净水或缓冲液到达进样杯颈部时，按“主机”“关”按钮，机器停止运转。
将待破碎样品加入进样杯中，按“主机”“开”按钮，细胞破碎开始。
经均质阀破碎后的样品，沿循环冷却管路冷却后，从出样口流出，样品一次破碎完成（可根据需要，进行多次破碎）。
破除细胞壁和细胞膜的方法及原理
破除细胞壁和细胞膜的方法及原理：
1. 高渗透压溶液法
原理：高渗透压溶液法基于细胞内外质量浓度不同的原理，将高浓度的溶液添加到细胞中，使细胞外溶液浓度大于细胞内溶液浓度，细胞内部的水分子会向细胞外移动，导致细胞膜破裂。
方法：将细胞样品放入含有浓度较高的葡萄糖或盐溶液中，静置一段时间，使细胞膜破裂，释放细胞内部物质。
2. 超声波破碎法
原理：超声波破碎法是利用超声波的高能量使溶液中的气泡迸发破裂，产生冲击波，使细胞膜破裂。
方法：将细胞样品放入含有缓冲液的管中，用超声波振荡装置处理一定时间，使细胞膜破裂，释放细胞内部物质。
3. 高压破碎法
原理：高压破碎法利用高压破碎器产生高压力，使细胞膜破裂。
方法：将细胞样品放入高压破碎器中，加入缓冲液，产生高压力使细胞膜破裂，释放细胞内部物质。
4. 酶解法
原理：酶解法采用特定的酶，针对细胞壁进行酶解，使细胞膜破裂。
方法：将细胞样品放入含有适量特定酶的缓冲液中，酶可在较短时间内酶解细胞壁，使细胞膜破裂，释放细胞内部物质。
摘要：细胞破碎技术的根本概念及其根本方法关键词：细胞破碎技术破碎方法生物别离是从生物材料、微生物的发酵液、生物反响液或动植物细胞的培养液中别离并纯化有关产品〔如具有药理活性作用的蛋白质等〕的过程，又称为下游加工过程。
生物别离过程的主要特点:常无固定操作方法可循,生物材料组成非常复杂,别离操作步骤多，不易获得高收率,培养液〔或发酵液〕中所含目的物浓度很低，而杂质含量却很高,别离进程必须保护化合物的生理活性,生物活性成别离开生物体后，易变性、破坏, 基因工程产品，一般要求在密封环境下操作。
生物别离的一般工艺流程：发酵液→预处理→细胞别离→〔细胞破碎→细胞碎片别离〕→初步纯化→高度纯化→成品加工的过程，而胞产物需经细胞破碎，细胞碎片别离等步骤；胞外产物那么将细胞去除后，对余下的液体即可进展初步纯化。
在生物别离技术中细胞的破碎应用非常的广泛，尤其在生物技术迅猛开展的今天更是不可小视。
组织细胞的破碎方法很多，有机械方法、物理方法、化学方法和生物化学方法等。
在破碎前，材料常需要预处理，如动物材料要除去与实验无关甚至有阻碍的结缔组织，脂肪组织和血污等，植物种子需要除壳，微生物材料需将菌体和发酵液成分分开等。
不同实验规模、不同实验材料和实验要求，使用的破碎方法和条件也不同。
一些坚韧组织，如肌肉、植物的根茎等，常需要强烈的搅拌或研磨作用，才能把其组织细胞破坏。
而比拟柔软的组织如肝、脑等，用普通的玻璃匀浆器即可到达完全破坏细胞的目的破碎技术中细胞破碎法包括机械法和非机械法．机械法又包括高压匀浆、高速珠磨、超声波破碎等方法。
非机械法包括化学法、酶解法、渗透压冲击法、冻结融化法、枯燥法。
细胞壁的结构和破碎方法都会对细胞破碎产生影响。
了接细胞壁的组成对于选择破碎方法非常重要。
在微生物中各种生物的细胞虽小但是每一种都有其特有的组成方式。
例如：细菌球菌直径0.5-1um杆菌直径0.5-1um，长为直径1-几倍螺旋菌直径03-1um，长1-50um 细菌大小也不是一成不变的细胞重量10-13-10-12g，每g细菌根本结构是细胞不变局部，每个细胞都有，如细胞壁、膜、核。
第二章细胞破碎和分离提取技术2．1细胞破碎技术许多生物产物特别是蛋白质、基因重组产品、胞内产品如：青霉素酰化酶，碱性磷酸酶等胞内酶，干扰素、胰岛素、生长激素等基因工程产物以及部分植物细胞产物等都是胞内物质，这类生物产物需要分离纯化的第一步是收集细胞及细胞破碎，使目标产物释放出来，然后进行分离纯化。
如图所示：图胞内产品的分离纯化过程2．1．1细胞破碎方法及机理破碎细胞的目的是使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏（增大渗透性）或破碎、释放其中的目标产物，主要采用的方法有机械法和非机械法两大类，图1列出了一些主要方法：破碎方法固体剪切作用液体剪切作用干燥处理溶胞作用珠磨法压榨法高压匀浆超声破碎酶溶法化学法物理法撞击法图1 细胞破碎方法分类机械破碎中细胞所受的机械作用力主要有压缩力和剪切力，化学破碎则利用化学或生化试剂或酶改变细胞壁或细胞膜的结构，增大胞内物质的溶解速率，或完全溶解细胞壁，形成原生质体后，在渗透压作用下，使细胞膜破裂而释放胞内物质，各作用力细胞破碎机理如图22.1.2机械方法破碎机械破碎处理量大，破碎速度较快，时间短，效率较高，是工业规模细胞破碎的重要手段，细胞受到挤压，剪切和撞击作用，易被破碎在许多情况下，细胞内含物全部释放出来，由于机械搅拌产生热量，破碎要采用冷却措施，机械破碎主要的方法有珠磨法、高压匀浆法、撞击破碎法和超声波等方法。
2.1.2.1 珠磨法（Bead milling ）珠磨法是一种有效的常用的机械破碎方法，珠磨机是珠磨法所采用的设备，其结构示意图3，细胞悬浮液与玻璃珠（或石英砂，或氧化铝）一起高速搅拌，研磨使细胞达到某种程度破碎，在珠磨机中，细胞的破碎是由剪切力层之间的碰撞和磨料的滚动而引起的。
珠磨法破碎细胞可采用间歇式连续操作，研究表明，两种情况下，细胞破碎动力学可近似表示为：t k l S 11n ⋅=-其中， t 在间歇操作时，为破碎操作时间，连续操作时为细胞悬浮液在破碎室内的平均停留时间，即R Vt =，其中V 为悬浮液体积m 3，Q 为悬浮液流量m 3/S ，S 为破碎率，k 为破碎速率常数，与许多因素有关。
细胞破碎技术与方法
细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术，是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质(产品)的基础。
结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展，以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。
由于细菌、酵母、真菌、植物都有细胞壁，但成分不同，且同类细胞结成的网状结构不同，因此其细胞壁的坚固程度不同，总体呈现递增态势。
动物细胞虽没有细胞壁，但具有细胞膜，也需要一定的细胞破碎方法来破膜，达到提取产物的目的。
细胞破碎的方法主要分为化学法和机械法两大类。
具体如下：
化学法
渗透冲击破碎法
• 方法：渗透压冲击是较温和的一种破碎方法，将细胞放在高渗透压的溶液中(如一定浓度的甘油或蔗糖溶液)，由于渗透压的作用，细胞内水分便向外渗出，细胞发生收缩，当达到平衡后，将介质快速稀释，或将细胞转入水或缓冲液中，由于渗透压的突然变化，胞外的水迅速渗入胞内，引起细胞快速膨胀而破裂。
反复冻融法
• 方法：将细胞放在低温下冷冻(约-15℃)，然后在室温中融化，反覆多次而达到破壁作用。
由于冷冻，一方面能使细胞膜的疏水键结构破裂，从而增加细胞的亲水性能，另一方面胞内水结晶，形成冰晶粒，引起细胞膨胀而破裂。
对于细胞壁较脆弱的菌体，可采用此法。
酶溶破碎发法
• 方法：利用各种水解酶，如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶、半纤维素酶、脂酶等，将细胞壁分解，使细胞内含物释放出来。
有些细菌对溶菌酶不敏感，加入少量巯基试剂或8摩尔尿素处理后，使之转为对溶菌酶敏感而溶解。
• 特点：
a) 此法适用多种微生物
b) 具有作用条件温和
c) 内含物成分不易受到破坏
d) 细胞壁损坏的程度可以控制
• 存在的问题：
a) 易造成产物抑制作用
b) 溶酶价格高
c) 酶溶法通用性差
化学试剂法
• 方法：某些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内含物有选择地渗透出来。
SDS(十二烷基磺酸钠)是典型的阴离子表面活性剂
• 特点：提取核酸时，常用此法破碎细胞。
• 存在的问题：
a) 时间长，效率低;
b) 化学试剂毒性较强，同时对产物也有毒害作用
通用性差：某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。
方法技术原理效果成本应用
化学法渗透冲击渗透压破坏细胞温和便宜
动物组织均质物或细胞
悬液
酶消化法
细胞壁被消化，使细
胞破碎
温和昂贵细菌或酵母
增溶法表面活性剂溶解细胞
壁
温和适中
动物或植物组织均质
物，提取DNA
脂溶法有机溶剂溶解细胞壁
并使之失稳
适中便宜
动物或植物组织均质
物，提取DNA
碱处理法碱的皂化作用使细胞
壁融解
剧烈便宜
菌液质粒DNA提取，RNA
提取
机械法
组织捣碎机
• 方法：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。
• 特点：一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等，转速可高达10000rpm/M以上。
由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用。
匀浆器
• 方法：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎。
匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离。
制作匀浆器的材料，除玻璃外，还可以用硬质塑料、不锈钢、人造荧光树脂等。
• 特点：此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。
• 存在的问题：较易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性菌以及有些亚细胞器，质地坚硬，易损伤匀浆阀者，不适合用该法处理。
研磨
• 原理：将液氮预冻的样本放入研钵内研磨
• 特点：多用于坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。
超声波
• 原理：用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。
• 特点：
a) 处理少量样本，操作简单，重复性较好，节省时间;
b) 多用于微生物和组织细胞的破碎，如用大肠杆菌制备各种酶。
• 存在问题：
a) 超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。
b) 大容量装置声能传递，散热均有困难，应采取相应降温措施。
c) 对超声波敏感和核酸应慎用。
高压匀浆
• 方法：利用超高压能量使样品通过狭缝瞬间释放，在剪切效应、空穴效应、碰撞效应的作用下，使细胞破碎。
全过程在4~6℃低温循环水浴中进行，保持原有物质活性。
• 特点：可连续操作，适合于处理大量样本，主要用于从微生物样本中提取蛋白等胞内产物。
振荡珠击破碎
• 方法：将等体积的小量组织样品与高密度的ZircoBeads放入可密封的2ml螺旋盖微量管中，再加入缓冲液与稳定成份到1.5ml的体积，用6500RPM振荡机高速上下振动8秒，休息8秒，再振动8秒即可。
• 特点：此方法是目前最快且一次可处理最多样品的方法。
一台机器最多可以在一天处理2400支样品。
对小量且多样的人很方便。
方法技术原理效果成本应用
机械法匀浆法细胞被搅拌器劈碎适中适中动物组织
研磨法细胞被研磨物磨碎适中便宜植物组织
超声波法
用超声波的空穴作用使
细胞破碎
适中昂贵细胞悬液
高压匀浆
法
须使细胞通过的小孔，使
细胞受到剪切力而破碎
剧烈适中
细菌提取蛋白，
酵母
珠磨破碎
法
细胞被玻璃珠或铁珠捣
碎
剧烈便宜组织均质物。
