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大鼠脊髓损伤后不同时期移植人脐带间充质干细胞的修复效果观察

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Ｔ ＩＣ标记 山羊抗兔 ＩＧ二抗 ， 一 脒基一 一 ＲＴ ｇ ４６ 二 ２ 苯 基 吲哚 （ Ａ Ｉ复染 细胞核 ， Ｄ Ｐ） 并设 立 Ｐ Ｓ替代 的 阴 Ｂ
性 对照 ，用荧 光倒置 显微镜 观察移植 细胞 分化情 况 ． 小 鼠抗 大 鼠 ｖ ． 用 ＷＦ和 Ｇ Ａ Ｆ Ｐ多克隆抗 体分别
基 金 项 目：ｑ ｆ然 科 学 基 金 【０ ７ ６ ３ 、 津 市 『牛局 科 技 重 点 基 金 （７ Ｇ 、 津 市卫 生 局 科 研 基 金 （９ Ｚ１４） 『家 ｆ ３ ８ ２ ０ ）天 Ｊ ０ Ｋ ２）天 ０Ｋ ０
第 一 作 者 简 介 ： （ ９ ５ ， 士 研 究 牛 ， 究 方 向 ： 柱 脊 髓 损 伤 男 １ ８ 一） 硕 研 脊
移 植后 １周 与 Ａ 组 相 应 时 Ｍ 、的 ＢＢ Ｂ评 分 尤 著 性 等 异 （ Ｏ０ ） 移 植 后 ２ Ｐ＞ ．５ ， ｗ起 各 时 间 点 分 均 明 高 于 Ａ 组 棚 时间 点 ， 差异 有 统 汁学 意 义 （ ＜ ．５）Ａ组 存 Ｓ Ｉ ９ 时 到达 平 台 期 ， 寅 验 结 束 时 卡 尸 ００ ； Ｃ ｗ Ｈ比差 异尢 统 计 学
Ｒｅ ｉｉ ｅ ｅ ｔ ｏ ｈｕｍ ａｎ ｕ ｂ ｌｃ ｌ ｃ ｄ ｍ ｅ ｅ ｈｙ ａ ｓｅ ｃ ｌｓ ｔ ａ ｐｌ ｎｔ ｉ ａ ｄｉ ｅ ｅ ｔｍ ｅ ｐａ ｒｎｇ ｆ ｃ ｆ ｍ ｉｉ ａ ｏｒ ｓ ｎｃ ｍ ｌ ｔ ｍ ｅ ｌ ｒ ｎｓ ａ ａｔｏｎ ｔ ｆ ｒ ｎｔ ｉ
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Ｓ Ｉ 局 部移 值 的 ｈ Ｃ Ｃ Ｃ后 Ｕ ＭＳ ｓ能 长 期 活 ， 制 胶质 瘢 痕 形 成 ， 抑 改善 后 肢 运 动 功 能 ；Ｃ 后 １ ＳＩ ｗ移 植 的 效 果 优 于
Ｓ Ｉ后 ３ Ｃ ｄ和 ３ ｗ时 移 值 的效 果
【 键 词 】脊 髓 损伤 ； 关 脐带 间充 质 ｆ细 胞 ； 胞 移 植 ； 鼠 细 大 ｄ ｉ１ ． ６／ｉ ｎ１０ — ０ Ｘ２ １．１ ９ ｏ ：０３ ９ ．ｓ． ４ ４ ６ ． ０１． ９ ｊｓ ０ ０ ０ 中 图分 类号 ：６ ３２Ｑ １ Ｒ ８ ．，８ ３ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编号 ：０ ４ ４ ６ ２ １ ） １— ９ ８ ０ １０ — ０ Ｘ（０ ０ 一 １０ １— ８
ｐ ｉｔ ａｔｒ ｓｉａ ｏｄ ｉ ｕ ｙ ｉ ｄ ｌ ｒｔ Ｗ Ａ ｎ ，Ｅ ｈｑｎ ， ＨＡ Ｐ ｎ ，ｔａ／ ｈｎｓ ｏｎｓ ｆ ｐｎ ｌｃｒ ｎ ｒ ｎ ａ ｕｔ ａｓ ｅ ｊ ／ ＮＧ Ｙｉｇ Ｆ ＮＧ Ｓ ｉｉｇ Ｚ Ｏ ｅ ｇ ｅ ｌＣ ｉｅｅ ／
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区 管 形 怠 欠 宄 ， 见新 牛 血管 ： 伤 周 ．ｌ 形 片 细 胞 火 量增 ， ， 胞 肥 大 、 起 增 多 、 列 不 规 则 ， 成 未 损 韦星 奁质 丰 细 突 排 形
胶 质壤 痕 ： 见 Ｂ Ａ 标 记 的 戊质 脊 髓 束通 过 损 伤 区 Ｂ、 Ｄ 组 脊髓 『 均 有 Ｂ ｄ 未 Ｄ Ｃ、 ｝ １ ｒ ｕ阳性 标 记的 细 胞 存 活 ， Ｄ组 Ｃ、 『 细胞 数 量 明 多 丁 Ｂ组 ，ｆ 组 巾均 未 见 到移 植 细 胞 向神 绛 元 或 神 经 胶 质 样 细 胞 分 化 ； Ｄ组 损 伤 周 的 １ １ Ｉｉ Ｊ Ｂ、
ｈ Ｃ Ｓ ｓ ｔ ｎ ｐａ ｔ ｉ １ ｆ ｒ ｉ ｕ （ｒｕ Ｕ Ｍ Ｃ ｒ ｓ ｌｎ ｔ ｎ ａ ｅ ｎ ｒ ｇｏ ｐ Ｃ） ａ ｄ ｈ Ｃ Ｃ ｒ ｓ ｌ ｔ ｉｎ ３ ｆ ｒ ｉ ｕ （ｒｕ ． ａ ａｏ Ｗ ｔ ｊｙ ｎ Ｕ ＭＳ ｓ ｔ ｎ ｐａ ａ ｏ ｗ ａ ｅ ｎ ｒ ｇｏ ｐ Ｄ） ａ ｎ ｔ ｔ ｊｙ
（ Ｕ ＭＳ ｓ ｔ ｎ ｐａ ｔ ｎ ａ ｄ ｆ ｅ ｔ ｔ ｅ ｐ ｉｔ ａ ｅ ｐｎ ｌ ｃｒ ｎｕ ｙ ｉ Ｗｉ ａ ａｓａ ｄ ｔ ｅｐｏｅ ｔｅ ｈ Ｃ Ｃ ） ｒ ｓ ｌ ｉ ｔ ｉｅ ｎ ｉ ｏｎｓ ｆ ｒ ｓ ｉ ｏｄ ｉ ｒ ｎ ａ ｎｏ ｆｒ ｍ ｔ ａ ｊ ｓ ｒ ｒｔ，ｎ ｏ ｘ ｌ ｈ ｔ ｒ
活 、 化 和 ｍ管 生 情 ， ０周 时用 生物 素 葡 聚 糖 胺 （ｉｔ ｅ ｔ ｎ ａ ｎ ， Ｄ 示 踪 皮 质 脊髓 束 （ ｏｔ ｏ ｐ ａ 分 １ ｂｏ ｎ ｄ ｘ ａ ｍｉ Ｂ Ａ） ｉ ｒ ｅ ｅｒｃｓｉ ｌ ｉ ｎ ｔ ｃ． Ｓ ） ｒ ｔＣ Ｔ 舰察 轴 突 的 冉 牛情 况 结 果 ：Ｃ ２ ｈ各组 人 鼠 Ｂ Ｂ评 分 无 著 性 差 异 （ ＞ ． ） Ｄ组 在 移 植 前 和 ａ ． ＳＩ ４ Ｂ Ｐ Ｏ０ ， ５
星 形 胶 质 细 胞较 Ａ 绀 减 少 ， 排 列 仍 欠规 则 ； ｆ Ｃ组 损 伤 周 同 星 形 胶 质 细 胞 形 态 趋 丁正 常 ， 列 规 则 ， 排 且 大 量
星 彤 胶 匝细 胞 通 过损 伤 区 ， ｍ管 ｆ Ｊ 数 目及通 过 损 伤 区的 皮 质脊 髓 束 神 绎 纤 维 也 明 多 于 Ｂ、 组 。 论 ： 鼠 ｆＬ ｆＥ Ｄ 结 大
９ｌ ８
『 枉脊 髓 杂 志 ２ １ 脊 ０ ０年第 ２ ０卷第 ｌ １期
ｉｅｅＪｕｍｄ０ ｉｅａｄ ｉ Ｃ ｒ ，０ ０ Ｖ １ ０．ｏｌ ｎｓ ｏｒ ／ ｎ ｎ ｎ ｏｄ ２ １ ， ｏ． ３ １ ２ Ｊ
大鼠脊髓损伤后 不 同时期移植人脐 带间充质 干 细胞 的修 复 效果观 察
意 义 （＞ ． ） Ｐ Ｏ０ 植 各 组 移植 后 Ｂ Ｂ评 分逐 渐 上 升 ， 一 叫 问点 与 同组 前一 时 间点 比较 崖 肆 行 著 性 意 义 ５ ．移 Ｂ 后 个 ‘
（ ＜ ． １ 移 植 卮 ６ 开 始 Ｃ组 明 高 于 Ｂ、 Ｐ Ｏ０ ． ５ ｗ Ｄ组 （ ＜ ． ） 免疫 组 化 染 色 Ａ组 脊 髓 中 未 Ｂ ｄ ５ｌ 细 胞 ， 伤 Ｐ Ｏ０ 。 ５ ｒｕ［ ｝ 口乍 损
ｒｔ ｗ ｒ ｒｎｏ ｙｄｖｄｄ ｉｔ ｃｎｒｌｇｏｐ （ｒｕ ，Ｕ ＭＳ ｓｔ ｎｐａ ｔｉｎ ３ ｆ ｒｉ ｕｙ （ｒ ｐ Ｂ ， ａ ｅｅ ａ ｄｍｌ ｉ ｅ ｎｏ ｏ ｔ ｒ ｓ ｉ ｏ ｕ ｇｏｐ Ａ）ｈ Ｃ Ｃ ｒ ｓｌ ａ ｏ ｄ ａ ｅ ｎ ｒ ｇｏ ） ａ ｎｔ ｔ ｊ ｕ
记损 伤 中心及 头尾端 ． 一半 标本 连续 ５ ｍ石蜡 纵 １ ｘ
切 片 ， Ｅ染 色 观察 损 伤 区情 况 ；一 半标 本 连 续 Ｈ
５ ｍ石 蜡 横切 片 ． ｔ ｘ 每组 每个 标本 取 ５张切 片进 行
免疫 组化 染色 。 先用小 鼠抗 Ｂｄ 首 ｒｕ单 克隆抗 体和
兔抗 人 Ｇ Ａ Ｆ Ｐ或 Ｎ Ｅ多克 隆抗体 处 理 ， Ｓ 经上述 处 理后 先加 ＦＴ ＩＣ标记 山羊抗 小 鼠 ＩＧ二 抗 ， ｇ 然后 加
ｍ ｌｓ ｍ ｃ ｌ ．Ｕ Ｍ Ｃ ） 复 脊 髓 损 伤 的效 果 ， Ｈ ｈ Ｃ Ｃ ａ ｔ ｅｌ ｈ Ｃ Ｓ ｓ 修 ｅ ｓ 探 Ｕ ＭＳ ｓ局 部 移 植 治疗 脊 髓 损 伤 （ｐａ ｌｃ ｒ ｎｕｙ ｓｉｎ ｏｄ ｉｊｒ ， Ｓ Ｉ 的最 佳 移 植 时 机 方法 ： 性 Ｗｉ ａ 夫 鼠 ８ Ｃ） 雌 ｓｒ ｔ ０只 ， 机 均 分 为 Ａ、 Ｃ、 随 Ｂ、 Ｄ组 ， ｉ ａ ｔ ｄ ｌ Ⅱ打 击 器 制 以 ｍｐ ｃ ｒ Ｍｏ ｅ一 ｏ
备 脊髓 胸 １ （ １ ） 伤 模 型 ， ０Ｔ０ 损 、Ａ组 单 纯 损 伤 组 ， Ｂ组 损 伤 后 ３ ｄ移植 ｈ Ｃ Ｃ ， Ｕ ＭＳ Ｕ Ｍ
Ｓ ｓ Ｄ组 损 伤 后 ３ Ｃ、 ｗ移 植 ｈ Ｃ Ｓ ｓ 分 圳 丁 造模 后 ２ ｈ 移 植 前 ¨ 及 移 植 后 ８ （ Ｕ Ｍ Ｃ ４ 、 ｗ Ａ组 Ｄ绀 损 伤 后 中 府 时 间 Ｒ 点 相 同 ） 删 对 符 组 大 鼠后 肢 功 能 进 行 行 为 每 分 （Ｂ Ｂ Ｂ评 分 ） 移 植 后 ８周 免 疫 组 化 染 色 观 察 移植 细胞 的 存 ；
电 话 ：０ ２ ６ ３ ３ ３ Ｅ ｍ ｉ ｗ ｋ １ ８ ＠ｙ ｈ ｏ Ｊ ｎ （２ ）０ ６ ９ ６ — ａｌ ｅ ｙ ９ ５ ａ ｏ （ ｌ ： ｉｃ ｌ
通汛作者： 冯 厌
Ｅ ｍ ｉ ｆｎ ｓ ＠ｈ ｔ ｉ（Ｊ — ａｌ ｅ ｇｑ ｏｍａ ． ｉ ： ｌ ！ｌ （ｌ
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处 理 切 片 后 分 别 加 入 ＦＴ 和 Ｔ ＩＣ标 记 的 山 羊 ＩＣ ＲＴ
抗 小 鼠 ｌＧ二抗 ．荧 光显微 镜下 观察损 伤 区血管 ｇ

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间充质干细胞外泌体修复脊髓损伤作用机制的研究进展

间充质干细胞外泌体修复脊髓损伤作用机制的研究进展

山东医药2021年第61卷第17期间充质干细胞外泌体修复脊髓损伤作用机制的研究进展马麟，张晓勃，赵光海，巩朝阳，张海鸿兰州大学第二医院，兰州730030摘要：脊髓损伤（SCI）通常会导致不可逆的神经退行性改变并影响终生，但目前缺乏有效治疗策略。

间充质干细胞外泌体可通过促进血管生成、促进轴突生长、调节炎症反应、调节免疫反应及抑制细胞凋亡等方式修复SCI，或可能成为SCI患者治疗的新选择。

关键词：间充质干细胞；外泌体；脊髓损伤；脊髓修复；作用机制doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2021.17.024中图分类号：R744.9；R651.2文献标志码：A文章编号：1002-266X（2021）17-0089-03脊髓损伤（SCI）是一种破坏性神经退行性疾病，临床上目前缺乏对该病有效的治疗方法，而纳米技术和再生医学策略为新型疗法的开发带来了希望。

干细胞可通过替代丢失或受损的细胞为神经元提供营养支持，改善脊髓的微环境，从而促进受损轴突再生，加快SCI修复［1］。

间充质干细胞（MSCs）可来自骨髓、脂肪、脐带血和胎盘等多种组织，具有归巢、增殖、分化、分泌和免疫调节的功能，是动物研究和人类临床试验中最常用的干细胞［2］。

外泌体是释放到细胞膜外的纳米级囊泡，含有大量复杂分子如蛋白质、脂类和各种核酸，而这些分子的特性与它们的来源细胞有关［3］。

MSCs外泌体（MSCs-Exo）的生物学功能与MSCs相似，但MSCs-Exo更稳定，不会引发机体免疫排斥反应；其具有易分离的特点，故可用于将遗传物质或药物转运至靶细胞；并且尺寸相对较小，故能渗透血脑屏障到达中枢神经系统损伤部位［4-5］。

因此，MSCs-Exo是无细胞治疗的合适选择。

多项研究显示，MSCs-Exo在SCI修复中有巨大潜力。

本文就MSCs-Exo修复SCI的作用机制综述如下。

1MSCs-Exo通过促进血管生成修复SCI血管生成是SCI修复的关键，局部血管丢失与血脑屏障损伤引起的破坏可导致缺血和炎症反应，从而引发脊髓神经组织的综合性损伤［6］。

骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展


５ ＭＳ ｓ Ｃ 移植 治疗 的时间
ＭＳ ｓ Ｃ 移植 治疗 Ｓ Ｉ Ｃ 的适宜 时间 目前研 究 尚未 统一 。 目 前 的基 础 研 究及 临床 研 究 多认 为较 早 治疗 能 取得 更佳 的效 果 。陈 少强等 “ 观察 了不 同 时间窗对静 脉途 径移 植 ＭＳ ｓ Ｃ 在 脊髓 损伤 大 鼠内存活 和迁 移 的影 响 ，发现 Ｓ Ｉ后三天 是 Ｃ 最 佳 的治疗 时 间 。从病 理机制 上讲 ，Ｓ Ｉ后 急性期 由于血一 Ｃ 脊髓 屏 障破坏 ， 损伤 区有 严重 的免 疫炎性 反应 ，多种炎性 因
着 科学研 究 的深入 ，干 细胞 移植有 望成 为治疗 Ｓ Ｉ的最 佳 Ｃ 方法 。可供选择 的细 胞类 型包括 ：骨 髓 间充质干 细胞 （ ｓ ｍｅ． ｅ ｃ ｙ ｌｔｍ ｌ ， Ｃ 、神经干 细胞 、胚 胎干 细胞 、雪 ｎ ｈ ｍａ ｓ ｃ ｌ ＭＳ ｓ） ｅ ｅ ｓ
可以从脑室 下带沿 着 白质束 迁移 到皮 层 、 状体 、 纹 前脑 和 小 脑等部位 ， 炎症和 免疫 反应 ， 实 了 ＭＳ ｓ 无 证 Ｃ 具有神 经干细 胞 的特性 。Ｍｅｅ “把雄性 小 鼠的骨髓 注射到 雌性基 因突变 ｚｙ 的小 鼠腹 腔 ，也发现 移植细 胞 能够 迁移 到脑 内，并 能分化 为 表 达 Ｎ ｕ （ 经元特 异性 核 内抗 原 ） ｅＮ 神 阳性 的神经 元样细 胞 ， 以上实验 研究表 明 ＭＳ ｓ 以在体 内存活 、迁 移 ，与体 内组 Ｃ可 织有很好 的相容 性 ，并在微 环境 的影响下 分化 为神 经细胞 。
活 率 ［９成年 哺乳 动 物脊 髓 中央 管周 围及 其 实质 一些 区域 １ ３ ］
内含有 丰 富的神 经干 细胞 ， 以 ＭＳ 移植 治疗 Ｓ Ｉ ，移 所 Ｃｓ Ｃ时 植 细 胞 可诱 导 这些 神经 干 细胞 分 化 为神 经元 而 进行 自我修 复 ，促 进神 经功 能 的恢 复 。 ３４ 桥 接作 用 ．
超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞在脊髓损伤中的应用进展

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞在脊髓损伤中的应用进展

中国脊柱脊髓杂志２０１０年第２０卷第４期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｐｉｎｅａｎｄｓｐｉ，埘Ｃｏｒｄ，２０１０，Ｖ０１．２０，Ｎｏ．４３３１懋■■■■●一超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞在脊髓损伤中的应用进展王春源．冯世庆（天津医科大学总医院骨科３０００５２天津市）ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－４０６Ｘ．２０１０．０４．１６中图分类号：Ｒ４４５．９，Ｒ６８３．２文献标识码：Ａ文章编号：１００４－４０６Ｘ（２００９）一０４—０３３１—０３脊髓损伤（ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ．ＳＣＩ）是一种高度致残的中枢神经系统损伤性疾病．对其治疗一直是医学界的难题。

近年来骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅＩｌｌａｌＴＯＷｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）移植成为治疗ＳＣＩ的热点…。

由于ＢＭＳＣｓ不仅可以表达腩源性神经营养因子（ｂｒａｉｎ—ｂｅｒｉｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒｓ，ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ。

ＮＧＦ）等。

在损伤局部分化为特定神经细胞，促进ＳＣＩ的功能恢复。

同时还具有低免疫原性、取材方便、扩增迅速、可自体移植等优点，在ＳＣＩ修复方面具有广阔的前景。

但ＢＭＳＣｓ移植后．如何无创伤性地在活体内动态监测移植细胞的存活、迁移、分化状况一直是困扰医学科研工作者的难题。

随着纳米科技在医学领域的广泛应用．超顺磁性氧化铁纳米颗粒（ｓｕｐｅｒｐａｒａｍｇｎｅｔｉｃｉｒｏｎｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＳＰＩＯＮ）作为一种新型的磁性标记物成为研究的热点。

目前ＳＰｌ０Ｎ标记的ＢＭＳＣｓ在治疗心、肝、肾及中枢神经系统疾病方面得到了快速应用，现对其在修复ＳＣＩ中的应用做一综述。

ｌＳＰＩｏＮ的特性及标记作用ＳＰＩＯＮ粒径小．穿透力及驰豫率强，对外加磁场具有高敏感性．在较弱的磁场中即可产生较大的磁性。

撤除外加磁场后磁性也迅速消失，即所谓的超顺磁性［２１。

总体来说ＳＰＩＯＮ具有以下几点作用１３ｌ：（１）磁性分离靶细胞和其他生物体；（２）作为ＭＲＩ显像的对比增强剂；（３）具有靶向性呈递药物、基闪和放射性核素的作用；（４）磁性纳米粒子还可以在外磁场作用下进行定位能量传递．在癌组织的局部产生过热使癌细胞失活。

大鼠肌肉注射移植人脐带间充质干细胞的安全性

大鼠肌肉注射移植人脐带间充质干细胞的安全性

大鼠肌肉注射移植人脐带间充质干细胞的安全性张美荣;张学峰;胡建霞;王丽;张桂芝;高宏;苗志敏;王颜刚【摘要】方法:SPF级雄性Wistar大鼠51只,取3只作为空白对照,剩余48只随机均分为4组:低、中、高浓度细胞移植组分别于大鼠左下肢腓肠肌外侧肌肉注射2.5×109 L-1,5×10L-1,1.5×1010L-1人脐带间充质干细胞悬液,共注射2个位点,每个位点注射0.1 mL,2个位点间隔约0.5cm;溶媒对照组同法注射50g/L葡萄糖溶液.分别于注射后1d及1,2,4周进及血小板、乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶轻度炎症反应性升高;高浓度细胞移植可引起肌肉注射局部明显炎症反应.提示人脐带间充质干细胞免疫原性极低,在掌握了细胞移植的适宜浓度及剂量的前提下,以肌肉注射的方式进行异种移植不会引起受者严重的免疫排斥反应.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)027【总页数】4页(P4997-5000)【关键词】肌肉;安全性;注射;人脐带间充质干细胞;干细胞移植【作者】张美荣;张学峰;胡建霞;王丽;张桂芝;高宏;苗志敏;王颜刚【作者单位】青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003;青岛大学医学院附属医院干细胞研究中心,山东省,青岛市,266003【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言间充质干细胞又称多能基质细胞，是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层[1]。