变性高效液相色谱在细菌耐药基因检测中的研究进展

水中抗生素污染现状及检测技术研究进展水中抗生素污染现状及检测技术研究进展一、引言近年来，抗生素的使用广泛而普遍，不仅在医疗领域，还在农业养殖以及家庭中被大量使用。

虽然抗生素在控制疾病和提高人类生活质量方面发挥重要作用，但滥用和过度使用抗生素已经造成了严重的环境问题。

水中抗生素污染是其中一个重要问题，对环境和公众健康产生了严重的威胁。

本文将介绍水中抗生素污染的现状，并探讨目前的检测技术研究进展。

二、水中抗生素污染的现状抗生素污染主要来自于医药废水、养殖场废水、农田灌溉用水以及生活污水等源头。

这些废水中的抗生素残留物会被直接或间接地排放到水环境中，对水生态系统产生严重的影响。

首先，抗生素污染会导致水中微生物的耐药性增加，从而使得微生物病原体产生抗药性。

其次，水中抗生素污染还会对水生动植物造成损害，破坏水生态系统的平衡。

此外，抗生素污染还会对人类健康产生潜在风险，因为抗生素残留物可能通过水源进入人体。

三、水中抗生素污染检测技术的发展针对水中抗生素污染问题，研究者们一直在致力于开发高效准确的检测技术。

目前已经有多种检测技术被广泛应用于水中抗生素残留物的检测，如基于色谱质谱联用（GC-MS、LC-MS/MS）的方法、免疫检测方法（如酶联免疫吸附试验，ELISA）、生物传感器等。

这些技术各有优缺点，对于不同类型抗生素的检测有不同的适用性。

基于色谱质谱联用的方法是目前最常用的水中抗生素污染检测技术。

该方法具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的优点，可以同时检测多种抗生素残留物。

然而，该方法的操作流程复杂，需要昂贵的仪器设备和专业技术人员进行操作和维护，限制了其在实际应用中的推广。

此外，色谱质谱联用的方法在分析过程中还会出现一些误差，需要校正和修正分析结果。

免疫检测方法是目前具有较高发展潜力的水中抗生素污染检测技术。

该方法基于抗生素分子与特定抗体之间的结合反应来实现检测。

与色谱质谱联用的方法相比，免疫检测方法具有操作简单，成本低廉以及快速检测等优点。

EGFR基因突变及其检测方法的研究进展高云;陈嘉昌;朱振宇;彭焕玉【摘要】表皮生长因子受体(EGFR)属于酪氨酸激酶受体,它介导的信号转导途径调节细胞的生长、增殖和分化.在癌症中发现EGFR酪氨酸激酶区常发生各种突变,这些突变和酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关.因此,EGFR突变的检测对癌症的个体化治疗具有重要的参考价值.目前常用的EGFR突变检测方法有测序法、PCR-SSCP、突变体富集PCR、ARMS、微数字PCR、HRM、DHPLC.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2011(003)001【总页数】7页(P51-57)【关键词】EGFR;突变;检测【作者】高云;陈嘉昌;朱振宇;彭焕玉【作者单位】中山大学中山医学院,广东,广州510080;中山大学达安基因诊断中心,广东,广州510665;中山大学中山医学院,广东,广州510080;中山大学达安基因诊断中心,广东,广州510665【正文语种】中文EGFR已成为近年来肿瘤治疗研究和抗肿瘤药物筛选的热点,有关EGFR突变与肿瘤发生以及EGFR突变在分子靶向治疗中的作用日益受到人们的关注。

EGFR突变是癌症患者是否对TKI敏感的强预测因子,因此EGFR基因突变的检测能为肿瘤靶向治疗提供依据。

现就EGFR基因突变及其主要检测方法做一综述。

1.1 EGFR的生物学特征人类表皮生长因子受体家族（epidermal growth factor receptor family, EGFR家族）属于酪氨酸激酶受体家族，也被称作HER家族或erbB家族。

EGFR家族由四个成员组成，分别是erbB1（EGFR/ HER1），erbB2 （neu/HER2），erbB3（HER3），erbB4（HER4）。

EGFR基因位于第七号染色体短臂上（7p12），长约118 kb，由28个外显子组成。

其转录形成的mRNA长约5.6 kb，编码的EGFR是分子量为170 kD的跨膜糖蛋白，编码蛋白由1186个氨基酸组成，具有酪氨酸激酶（tyrosine kinase, TK）活性，是传递胞外信号到胞内的重要途经蛋白。

降解多种抗生素残留的乳酸菌的筛选鉴定及特性研究郝莹;孙军;曾金金;赵晗【摘要】为研究和筛选高效降解抗生素残留的乳酸菌,采用高效液相色谱法与微生物学方法相结合的方式进行初步筛选,从土壤中分离获得一株乳酸菌菌株P3-4,结合菌落及菌体形态、通过Biolog自动微生物鉴定系统鉴定和16S rDNA基因序列相似性分析,鉴定菌株P3-4为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici).乳酸菌P3-4在MRS培养基中具有抗生素残留降解能力,对红霉素、罗红霉素与螺旋霉素的降解率分别能达到92.1％、68.9％和82.8％.为菌株P3-4的进一步开发利用提供了理论支持.%To study and screen the hight effective antibiotics-degrading lactic acid bacteria,a lactic acid bacteria strain P3-4 was isolated from soil by HPLC and microbiology methods.According to the colonies,cells morphology,the results of the Biolog automated microbial analysis system and 16S rDNA gene sequence similarity analysis,the isolated strain P3-4 was identified as Pediococcus acidilactici.The strain P3-4 had the antibiotics degradation ability in MRS medium,and could degrade erythromycin,roxithromycin and spiramycin.The degradation rate of erythromycin,roxithromycin and spiramycin were 92.1％,68.9％,and82.8％,respectively.These results had theoretical support for the further development and use of strain P3-4.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2017(036)010【总页数】5页(P104-108)【关键词】抗生素;降解;乳酸菌;鉴定;超高效液相色谱-串联质谱【作者】郝莹;孙军;曾金金;赵晗【作者单位】潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊261041;潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊261041;潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊261041;潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊261041【正文语种】中文【中图分类】TS201.3乳酸菌并不是分类学上的名词，是指能利用可发酵碳水化合物并产生以乳酸为主要代谢产物的革兰氏阳性菌的统称[1]。

高效液相色谱法检测鸡肉中替米考星药物残留的检测与分析曹忠君【摘要】本研究应用高效液相色谱法对来自市场中64批次鸡肉样品进行替米考星药物残留的检测。

结果表明，替米考星药物残留物在鸡肉中的平均回收率为70.5%～92.3%。

显示该方法具有灵敏、快速的特点，符合现行兽药残留分析的要求。

替米考星药物残留有一定检出率，相关部门应加强监管。

%Tilmicosin drug residue were tested from 64 chicken samples collected from urban areas using HPLC method. The results showed that recoveries for each analyte in chicken ranged from 70.5%~92.3%.This method is fast and sensitive, and can be used to simultaneously analyze residual of quinolones in actual samples. There is a relevance ratio of tilmicosin residue, therefore Au-thorities should take it seriously.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2014(000)010【总页数】4页(P13-16)【关键词】替米考星;鸡肉;高效液相色谱法【作者】曹忠君【作者单位】辽宁省铁岭市畜产品安全检测站，辽宁铁岭 112000【正文语种】中文【中图分类】S859.84替米考星（ti lmicosin，TIL）属于大环内酯类抗生素（macrol ide antibiotics，MALs），其分子式为C46H80N2O13，分子量为869.15。

英国Elanco动物保健品公司在20世纪80年代开发成功。

临床分子生物学习题与答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.常用于分析微生物的遗传学特征和基因突变的是A、PCR单链构象多态性法B、PCR-SSCP法C、高通量表面增强激光解吸电离飞行时间质谱D、PCR-RFLPE、PCR/AS0探针法正确答案：B2.以下不属于DNA分析检测技术的是A、基因芯片B、ASΟ杂交C、NorthernblotD、RFLP分析E、PCR正确答案：C3.生物芯片根据芯片上固定的探针种类不同可分为几种，其中不包括A、DNA芯片B、蛋白质芯片C、细胞芯片D、组织芯片E、测序芯片正确答案：E4.巢式PCR错误的是A、是对靶DNA进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢式PCR可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和(或)量较低时E、第二对引物在靶序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案：E5.PGS诊断方法主要借助于下列何种技术A、PCRB、CGHC、PGHD、FISHE、基因芯片正确答案：D6.DNA合成前期是指A、G0期B、G1期C、S期D、G2期E、M期正确答案：B7.上述检测方法中，不可用于对核酸片段突变的检测方法是A、基因测序B、SouthernblotC、WesternblotD、PCRE、RFLP正确答案：C8.目前最常用的TB分子检测方法是A、PCRB、real-timePCRC、SDAD、LPAE、DNAchip正确答案：B9.分子诊断对于下列哪类疾病最具有确切的临床诊断意义A、单基因遗传病B、染色体疾病C、畸形D、多基因遗传病E、肿瘤正确答案：A10.关于c-erbB-2/HER2基因说法不正确的是A、是乳腺细胞中较常见、易激活的原癌基因B、其扩增或过度表达在癌细胞和正常乳腺上皮细胞中均存在C、HER2强阳性表达可作为识别早起乳腺癌的有效指标D、HER2表达与乳腺癌的复发、转移及生存期明显相关E、过度表达者生存期缩短，预后不良正确答案：B11.HLA抗原不表达于上述哪类细胞表面A、T细胞B、B细胞C、树突状细胞D、巨噬细胞E、红细胞正确答案：E12.转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以RNA为模板B、首先由靶RNA合成DNA拷贝C、再由DNA转录生成大量RNA拷贝D、产物为DNAE、为等温扩增正确答案：D13.与移植排斥反应无关的是A、Ⅲ型超敏反应B、细胞免疫C、自身变态反应D、IFN-γ的释放E、补体依赖性细胞毒反应正确答案：C14.判断病毒基因突变最直接的方法是A、基因测序B、PCR-SSPC、LiPAD、PCRE、RFLP正确答案：A15.下列能够以凝聚电泳为基础进行定量检测的表达蛋白质组学研究方法是A、电喷雾质谱分析B、反向液相色谱分析C、双向凝胶电泳D、荧光差异显示双向电泳E、毛细管电泳正确答案：D16.扩增产物为RNA的技术是A、PCRB、逆转录PCRC、TSAD、巢式PCRE、多重PCR正确答案：C17.数字PCR技术与荧光定量PCR的区别主要在于A、数字PCR依赖Ct值，而荧光定量PCR不依赖Ct值B、荧光定量PCR是一种绝对定量，而数字PCR是一种相对定量C、数字PCR一般包括PCR扩增和荧光信号分析两部分，而荧光定量PCR不是D、荧光定量PCR一般包括PCR扩增和荧光信号分析两部分，而数字PCR不是E、荧光定量PCR是一种相对定量，而数字PCR是一种绝对定量正确答案：E18.用于基因定位分析的是A、点/狭缝杂交B、原位杂交C、Northern印迹杂交D、Southern印迹杂交E、菌落杂交正确答案：B19.多基因家族的特点描述错误的是A、由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因B、通常由于突变而失活C、假基因与有功能的基因是同源的D、所有成员均产生有功能的基因产物E、可以位于同一条染色体上正确答案：D20.DNA探针A、一般由17〜50个核苷酸组成B、长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA片段C、易降解，标记方法复杂D、仅长6个核苷酸E、几千碱基对正确答案：B21.关于单基因遗传病的叙述，正确的是A、原发性高血压是单基因遗传病B、发病机制都已阐明C、受多对等位基因控制D、在群体中发病率高E、可进行定性诊断和定量诊断正确答案：E22.全基因组关联分析技术已经成为哪种疾病易感基因寻找的有效途径，得到广泛应用A、染色体病B、复杂性疾病C、体细胞突变D、单基因遗传病E、线粒体疾病正确答案：B23.原核生物基因组结构特点不应包括A、含有重复顺序B、转录产物为多顺反子C、含插入序列D、具有操纵子结构E、断裂基因正确答案：E24.不可用于对核苷酸片段突变的检测方法是A、基因测序B、SouthernblotC、WesternblotD、PCRE、RFLP正确答案：C25.某人核型为46，XY，性腺为睾丸，内外生殖器呈间性，第二性征异常，说明此人为何种患者A、性腺发育不全B、真两性畸形C、女性假两性畸形D、男性假两性畸形E、性逆转综合征正确答案：D26.第三代DNA测序技术可能使用A、毛细管凝胶电泳B、PCR技术C、芯片技术D、荧光标记技术E、非光学显微镜成像正确答案：E27.目前通过何种技术扩增致病基因仍是PGD诊断单基因疾病的主要手段A、单细胞PCR技术B、微卫星DNA序列C、基因芯片D、变性高效液相色谱分析法E、原位杂交技术正确答案：A28.检测MELAS综合征、线粒体糖尿病mtDNA突变位点tRNALeu(UUR)，A3243G常用的限制性内切酶是A、BsmAⅠB、MaeⅢC、SsaHⅠD、MvaⅠE、ApaⅠ正确答案：E29.关于DHPLC技术的描述不正确的是A、可实现高通量检测B、自动化程度高C、灵敏度和特异性高D、是分析异质性突变的首选方法E、是分析突变的金标准正确答案：E30.丙型肝炎病毒基因组高变区位于A、E1区B、C区C、NS3区D、NS4区E、NS1/E2E正确答案：E31.最常发生基因重组的病毒是A、人流感病毒B、HBVC、HCVD、HIVE、SARS病毒正确答案：A32.以下关于mtDNA的描述不正确的是A、mtDNA为闭合双链环状分子B、mtDNA非编码序列少，只占mtDNA6%C、mtDNA重链(H)富含胞嘧啶，轻链(L)富含鸟嘌呤D、mtDNA呈母系遗传规律E、mtDNA在具有自主复制、转录功能正确答案：C33.血友病是一种A、先天性代谢缺陷病B、常染色体隐性遗传病C、先天畸形D、X连锁遗传病E、染色体病正确答案：D34.与神经胶质瘤高度表达相关的是A、Erb-B2B、Erb-B4C、Erb-B1D、Erb-B5E、Erb-B6正确答案：C35.以下不是白假丝酵母菌基因特征的是A、基因组中存在高度重复序列，结构基因中内含子较少B、完全遵循遗传密码的通用性C、能够产生遗传多样性，包括染色体长度多态性和单核苷酸多态性D、点突变频率远高于人类基因组和其他真核生物基因组E、白假丝酵母菌是二倍体真菌，有八对同源染色体，核型可变正确答案：B36.编码产物为周期素D1的基因是A、E-cadherin基因B、FHITC、CCND1D、NF1E、NF2正确答案：C37.限制性片段长度多态性是A、RFLPB、ASΟC、SSCPD、RT-PCRE、bDNA正确答案：A38.主要存在于乳腺癌的是A、CA72-4B、CA12-5C、CA24-2D、CA15-3E、NSE正确答案：D39.逆转录PCR扩增最终产物的特异性由A、随机引物决定B、oligo-d(T)决定C、PCR扩增的特异引物决定D、扩增效率决定E、逆转录酶决定正确答案：C40.关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术B、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法C、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法D、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多，但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物E、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断正确答案：B41.以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其它动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B42.1个体细胞中的全部染色体，按照其大小、形态特征顺序排列所构成的图像称为A、核型B、染色体组C、整倍体D、单倍体E、基因组正确答案：A43.下列关于real-timePCR引物设计的原则中，不正确的是A、两条引物的Tm值相差尽量大B、G+C的含量应在45%〜55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1〜0.2μmol/L之间E、引物过长可能提高退火温度正确答案：A44.不以UGA为终止密码子的是A、肺炎衣原体B、沙眼衣原体C、梅毒螺旋体D、解脲脲原体E、肺炎支原体正确答案：D45.对药物代谢个体差异起决定作用因素的是A、给药方式B、身体状态C、年龄与性别D、所患疾病E、遗传正确答案：E46.与异烟肼耐药无关的基因是A、katGB、ahpCC、embBD、inhAE、kasA正确答案：C47.结核杆菌耐利福平的相关基因是A、rpsLB、ropBC、rrsD、pncAE、embB正确答案：B48.在结肠上皮增殖起看门作用的基因是A、APC基因B、微卫星C、MMR基因D、HNPCC基因E、DCC基因正确答案：A49.线粒体糖尿病属于A、新发现的第5种糖尿病B、2型糖尿病C、1型糖尿病D、妊娠期糖尿病E、特殊类型糖尿病正确答案：E50.以下不属于DNA分析检测技术的是A、基因芯片B、ASΟ杂交C、NorthernblotD、RFLP分析E、PCR正确答案：C51.在同种骨髓移植HLA配型中，最重要的抗原是A、HLA-DR分子B、HLA-A分子C、HLA-B分子D、HLA-DP分子E、HLA-C分子正确答案：A52.利用DNA芯片检测基因的表达情况，杂交条件应选A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A53.HLA-DR是A、同种抗原B、同种异型抗原C、异嗜性抗原D、自身抗原E、肿瘤相关抗原正确答案：B54.基因芯片技术的优点不包括A、操作简便B、观察结果直观C、芯片检测稳定性高D、缩微化E、高通量正确答案：C55.mtDNA中基因数目为A、39个B、27个C、22个D、37个E、13个正确答案：D56.以下为比较Ct法的相对定量的描述不正确的是A、实验条件不需要严格优化B、不需要再对管家基因和目的基因做标准曲线C、使机体的不同组织，以及不同实验处理组之间的基因表达变化具有可比性D、运用了数学公式来计算相对量E、没有考虑PCR扩增效率对定量结果的影响正确答案：A57.属于抑癌基因的是A、p53B、MycC、MdrD、BCL-2E、c-jun正确答案：A58.镰状细胞贫血患者，代替其血红蛋白β链N端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、丙氨酸B、苯丙氨酸C、缬氨酸D、酪氨酸E、丝氨酸正确答案：C59.ICAT碘代乙酰亚胺结构与哪一种氨基酸发生耦联A、半胱氨酸B、胱氨酸C、酪氨酸D、精氨酸E、碱性氨基酸正确答案：A60.HIV结构具有CD4分子受体的部位是A、衣壳B、内膜C、包膜D、刺突E、核酸正确答案：D61.关于切口平移法下述不正确的是A、可标记线性DNAB、可标记松散螺旋DNAC、可标记超螺旋DNAD、可标记存在缺口的双链DNAE、可标记随机引物正确答案：E62.一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为A、100〜200bpB、2～10bpC、60〜lOObpD、200〜300bpE、17〜50bp正确答案：E63.属于靶序列扩增的是A、连接酶链反应B、分支DNAC、SSCPD、RT-PCRE、变性梯度凝胶电泳正确答案：D64.以下哪种检测技术不属于DNA分析A、基因芯片B、ASΟ杂交C、NorthernblotD、RFLP分析E、PCR正确答案：C65.关于K-ras说法不正确的是A、K-ras与肺癌的发生及预后有关B、80%〜90%的突变是由第12密码子A-T引起的C、K-ras突变与EGFR突变是相互排斥的D、伴随K-ras突变的NSCLC患者EGFR-TKIs药物敏感性较差E、20%〜30%的NSCLC患者存在K-ras基因突变正确答案：B66.一位男性血友病患者，他亲属中不可能是血友病的是A、叔、伯、姑B、外甥或外孙C、姨表兄弟D、同胞兄弟E、外祖父或舅父正确答案：A67.能够对核酸进行微量分析的技术是A、EMSA或ChipB、酵母双杂交技术C、PCR技术D、基因芯片技术E、RNAi技术正确答案：C68.规范化的临床基因扩增检验实验室工作区域不包括A、隔离区B、标本制备区C、试剂储存和准备区D、产物分析区E、扩增区正确答案：A69.基因诊断对下列哪些疾病最具有确切的临床诊断意义A、单基因遗传病B、畸形C、肿瘤D、染色体疾病E、多基因遗传病正确答案：A70.下列何种技术不可用于PGDA、微卫星DNA序列B、变性高效液相色谱分析法C、基因芯片D、基因测序E、Sourthemblot正确答案：E71.SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳具有A、分子筛效应B、电荷效应C、电渗效应D、浓缩效应E、稀释效应正确答案：A72.Southern杂交通常是指A、DNA和RNA杂交B、DNA和DNA杂交C、RNA和RNA杂交D、蛋白质和蛋白质杂交E、DNA和蛋白质杂交正确答案：B73.DTT可以断开蛋白质分子间氨基酸残基形成A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：C74.以下不符合5p﹣综合征的临床表现是A、严重智力低下B、小头畸形C、摇椅样足D、猫叫样哭声E、耳低位正确答案：C75.关于BRCA1基因说法正确的是A、位于人染色体2p32上B、编码含1840个氨基酸的蛋白质C、是一种DNA结合蛋白D、是一种原癌基因，其激活可促进肿瘤的形成E、BRCA1基因的突变使高危家族人群患乳腺癌的危险性比一般人降低8〜10倍正确答案：C76.下列关于细菌感染性疾病的分子生物学检验说法错误的是A、可以检测不能或不易培养、生长缓慢的病原菌B、可以实现对感染细菌的广谱快速检测C、可以对细菌进行基因分型D、可以检测病原菌耐药基因E、其检验技术都是PCR及其衍生技术正确答案：E77.猫叫综合征患者的核型为A、46，XY，t(5；8)(p14；p15)B、46，XY，del(5)(p14)C、46，XY，ins(5)(p14)D、46，XY，r(5)(p14)E、46，XY，dup(5)(p14)正确答案：B78.在对病原体检测中，一次性获得信息量最大的技术是A、ELISAB、荧光定量PCR技术C、PCR-RFLP技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E79.生殖健康的内容主要包括A、计划生育咨询、信息、教育、交流及服务，人工流产的预防和流产后果管理B、产前保健、安全分娩及产后保健的教育与服务，特别是母乳喂养和母婴保健C、不孕症的预防和适当治疗生殖道感染、性传播疾病及其他生殖健康问题治疗D、关于性行为、生殖健康及父母责任的信息、教育和咨询E、以上都是正确答案：E80.第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子DNA进行非PCR的测序B、针对SNP进行非PCR的测序C、高通量和并行PCR测序D、直接分析SNPE、直接进行个体基因组测序和SNP研究正确答案：C81.第一代DNA测序技术的核心技术是A、Sanger的双脱氧链终止法B、Maxam和Gilbert的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR技术E、DNA自动分析技术正确答案：A82.bDNA技术的特点描述错误的是A、不需要纯化标本核酸B、检测快速C、灵敏度高D、样品不易受污染E、不能检测石蜡包埋样本正确答案：E83.在器官移植中HLA配型最重要的位点是A、HLA-DRB、HLA-AC、HLA-BD、HLA-DPE、HLA-C正确答案：A84.关于逆转录PCR的描述，不正确的是A、首先应将RNA转化为cDNA才能进行PCRB、除了使用DNA聚合酶外，还应使用逆转录酶C、模板为RNAD、oligo-d(T)理论上可以将所有的mRNA进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案：E85.阴性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、标本交叉污染C、放射性污染D、基因组DNA或质粒的污染E、试剂污染正确答案：C86.引起镰状细胞贫血的珠蛋白基因突变类型是A、整码突变B、无义突变C、终止密码突变D、错义突变E、移码突变正确答案：D87.能够将蛋白质的分离、纯化、酶解和鉴定等步骤结合在一起的技术是A、2-DEB、ESIC、缩微芯片D、蛋白质功能芯片E、ICAT正确答案：C88.占肝脏CYP450总量的20%，参与华法林、苯妥英钠等药物代谢的是A、CYP1A1B、CYP1A2C、CYP2C9D、CYP2C19E、CYP2D6正确答案：C89.基因诊断间接方法不包括A、基于SNP的单倍型石析B、SouthenblotC、基于STR的微卫星分析D、PCR-PFLPE、RFLP连锁分析正确答案：B90.所有的第一代自动DNA测序仪和第二代DNA测序平台都使用A、毛细管凝胶电泳B、PCR技术C、芯片技术D、荧光标记技术E、非光学显微镜成像正确答案：B91.肿瘤细胞表观遗传学异常的主要分子机制不包括A、基因组印记丢失B、DNA由基化C、组蛋白修饰D、RNA突变E、染色质重塑正确答案：D92.下列不能用于分子生物学检验技术的是A、Southern印迹杂交B、PCRC、Northern印迹杂交D、核酸序列分析E、分光光度法正确答案：E93.由线粒体基因编码的ATP酶亚基数目有A、1个B、2个C、7个D、3个E、13个正确答案：B94.PCR-RFLP检测点突变和SNP时酶的质量控制要求是A、酶体积不要超过总体积5%B、酶体积不要超过总体积10%C、酶体积不要超过总体积15%D、酶体积不要超过总体积2.5%E、酶体积不要超过总体积7.5%正确答案：B95.结核杆菌的分子生物学检验临床意义中不包括A、早期诊断B、疗效评价C、耐药检测D、鉴别诊断E、快速诊断正确答案：A96.常用的质谱质量分析器是A、2-DEB、ICATC、TOFD、MSE、LCM正确答案：C97.父母之一是哪种平衡易位携带者时，因活婴将100%为易位型先天愚型患儿，所以应劝阻其生育A、21/21B、15/21C、13/21D、21/22E、14/21正确答案：A98.引起眼肌病的mtDNA突变形式是A、点突变B、插入C、缺失D、拷贝数变异E、动态突变正确答案：C99.关于定量PCR的描述，不正确的是A、可以定量或半定量PCR产物的方法B、定量PCR主要进行基因表达的分析和病原体的核酸检测C、水解探针技术中TaqMan探针的位置位于两条引物之间D、分子信标在自由状态下为发夹结构，荧光信号极低E、定量PCR在封闭状态下进行，有效避免了产物的实验室污染正确答案：A100.提高移植存活率的方法以下不可行的是A、HLA配型B、mH的鉴定C、ABΟ血型鉴定D、移植前输入补体和抗体E、移植前应用免疫抑制剂正确答案：D。

食品科技高效液相色谱在食品农兽药残留中的检测应用刘 姝（江苏省生产力促进中心理化测试服务中心，江苏南京 210042）摘 要：近年来，我国食品安全问题日益突出，食品农兽药残留检测作为保证食品安全的重要手段，具有十分重要的作用。

高效液相色谱法是一种迅速、灵敏、选择性高的检测方法，因操作简便、分离效率高等特点，在食品农兽药残留分析中得到广泛应用。

本文综述了高效液相色谱法在农药兽药残留分析中的应用，主要介绍了高效液相色谱在食品中农兽药残留检测中的作用和检测方法，以供相关人员参考。

关键词：高效液相色谱；食品；农兽药残留；检测Application of High Performance Liquid Chromatography in the Detection of Agricultural and Veterinary Drug Residuesin FoodLIU Shu(Jiangsu Provincial Productivity Promotion Center Physical and Chemical Testing Service Center,Nanjing 210042, China)Abstract: In recent years, China’s food safety issues have become increasingly prominent, the detection of residues of agricultural and veterinary drugs in food plays a very important role as an important means to ensure food safety. High performance liquid chromatography is a rapid, sensitive and selective detection method. It is widely used in the analysis of agricultural and veterinary drug residues in food because of its simple operation and high separation efficiency. This paper reviewed the application of high performance liquid chromatography in the analysis of pesticide and veterinary drug residues, mainly introduced the role and detection methods of high performance liquid chromatography in the detection of agricultural and veterinary drug residues in food, for the reference of relevant personnel.Keywords: high performance liquid chromatography; food; residues of agricultural and veterinary drugs; detection近年来，随着人们对食品安全关注度的不断提高，食品中农兽药残留问题成为公众关注的焦点。

QuEChERS－超高效液相色谱－串联质谱法测定蜂蜜中１９种喹诺酮类抗生素倪杨 杨军军 石磊 张莹莹 熊融（北京市农林科学院林业果树研究所，北京市落叶果树工程技术研究中心，农业农村部果品及苗木质量监督检验测试中心（北京），北京 100093）摘要：建立超高效液相色谱-串联质谱法（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS）同时测定蜂蜜中19种喹诺酮类药物含量的分析方法。

实验对样品前处理过程及色谱质谱仪器条件进行优化。

蜂蜜样品与超纯水1∶1混合后涡旋振荡溶解，经乙腈溶液超声提取，再加入氯化钠盐析分层，离心后上清液采用C18吸附剂进行净化处理，以ACQUITY BEH C18色谱柱分离。

在电喷雾离子（electrospray ionization, ESI）源正离子扫描模式下，采用多反应监测（multiple reaction monitoring, MRM）模式进行检测，外标法进行定量。

结果表明，19种喹诺酮类药物在3 min内完成色谱分离分析，在0.2~50 μg/L质量浓度范围内呈现良好线性关系，相关系数（R2）均大于0.995，检出限（limit of detection, LOD）为0.25~0.50 μg/kg，定量限（limit of quantification, LOQ）为0.80~1.50 μg/kg。

在低、中、高3个添加浓度水平下，蜂蜜中19种喹诺酮类药物的加标回收率为78.9%~96.5%，相对标准偏差（relative standard deviations, RSDs）为1.8%~4.9%（n=6）。

该方法稳定、准确、灵敏、快速，适用于蜂蜜中喹诺酮类抗生素的快速检测和分析确证。

关键词：QuEChERS；超高效液相色谱-串联质谱；喹诺酮类抗生素；蜂蜜Simultaneous determination of 19 quinolone antibiotics in honey byQuEChERS-UPLC-MS/MSNi Y ang, Y ang Junjun, Shi Lei, Zhang Yingying, Xiong Rong(Institute of Forestry and Pomology, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing Engineering Research Center for Deciduous Fruit Trees, Inspection and Testing Laboratory of Fruits and Nursery Stocks (Beijing) Ministry ofAgriculture and Rural Affairs, Beijing 100093, China)Abstract: To establish a method for simultaneous determination of 19 quinolone antibiotics in honey by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) combined with QuEChERS extraction. The pretreatment process and instrument conditions were optimized. Samples were mixed with ultrapure water at a ratio of 1:1, ultrasonic extracted with acetonitrile solution and salted out by adding NaCl. After centrifugation, the supernatant was cleaned up by C18 sorbent and separated on an ACQUITY BEH C18 column. In the electrospray ionization (ESI) positive ion scanning mode, the samples were analyzed by multiple reaction monitoring (MRM) and quantifi ed by external standard method. Result showed that all the 19 quinolone antibiotics were well separated in 3 min and the calibration curves in the range of 0.2-50 μg/L for all compounds were linear with correlation coeffi cients(R2)were more than 0.995. The limits of detection (LODs) and limits of quantifi cation (LOQs) in honey were 0.25-0.50 μg/kg and 0.80-1.50 μg/kg, respectively. The average recoveries of 19 quinolone antibiotics in different matrices at low, medium and high spiked levels were ranged from 78.9%-96.5%, with relative standard deviations (RSDs) in the range of 1.8%-4.9% (n=6). The method is proved to be stable, accurate, sensitive and rapid, and can meet requirements for the rapid and accurate determination of quinolone antibiotics in honey sample.Key words: QuEChERS; UPLC-MS/MS; quinolone antibiotics; honey基金项目：北京市科技计划项目（Z201100008920007），北京市农林科学院科技创新能力建设专项（KJCX20200302）作者简介：倪杨（1985-），女，博士，高级农艺师，研究方向农产品质量安全，E-mail:***************通信作者：熊融（1977-），女，硕士，高级工程师，研究方向植物资源评价与检测技术研究，E-mail:**********************中国蜂业APICULTURE OF CHINA和除杂富集效果有待提高，因其操作复杂、过柱时间长且成本较高，不适合大批量快速检测。

病原微生物检测方法研究进展综述作者：贺国华来源：《当代旅游（下旬）》2018年第01期摘要：目前用于病原微生物鉴定的高通量检测技术主要有多重PCR技术、实时荧光定量PCR技术、变性高效液相色谱分析技术、焦磷酸测序技术等，本文就这些高通量检测技术在病原微生物检测中的应用情况做一简短综述。

关键词：病原微生物；PCR技术；微生物检测一、前言目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有培养法、免疫学方法、PCR技术等，这些方法可以准确、灵敏地鉴定病原微生物，但是每次只能鉴定一种或少量几个样品。

2003年SARS引起了全球性恐慌，随后禽流感爆发，接着出现猪链球菌和牛炭疽感染人类事件，以及甲型H1Nl流感病毒引起的全球流感的爆发流行，上述事件的出现对病原微生物的检测和诊断提出了更高的要求。

鉴于可引起传染病的病原体种类繁多，并且不断发生变异，如何在最短时问内对病原体进行诊断成为目前研究的重点。

高通量检测技术是近年发展起来的前沿技术，具有所需样品和试剂较少，自动化操作程度较高，快速省时、无污染、诊断结果精确等特点，很适合病原微生物的诊断与检测。

目前用于病原微生物鉴定的高通量检测技术主要有：多重PCR 技术、实时荧光定量PCR技术、变性高效液相色谱分析技术、焦磷酸测序技术和芯片技术等，本文就这些高通量检测技术在病原微生物检测中的应用情况做一综述。

二、多重PCR技术的应用刘家云等初步建立了灵敏、特异的一步法检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR体系，可用于高危腹泻致病菌的早期快速诊断。

多重PCR还常用于病原微生物分子类型鉴定和抗药性研究，Kirschberg等应用多重PCR成功鉴定了乙肝病毒的6种基因型，此种方法与聚合酶链反应——限制片段长度多态型分析法相比，更简捷、准确率更高，且便于大量标本的检测。

但多重PCR技术也存在较明显的不足：如扩增效率不高，敏感性偏低；扩增条件需要摸索与协调；可能出现引物问干扰等问题。

DHPLC变性高效液相色谱(DHPLC)技术是一种能用于快速，自动和高通量检测基因的技术平台。

在分子生物学研究和临床基因诊断领域中，DHPLC技术可应用于DNA 的绝大部分检测，在很多领域已建立了快速、自动化核酸分析新方法和新标准。

利用该技术可以对单链和双链核酸进行快速、准确、自动化的分离、分析和定量；可用于单碱基替换（或单核苷酸多态性），小片段缺失或插入等多种已知和未知基因突变的检测；DNA/RNA片段大小判定；寡核苷酸分析及纯化；基因表达定量（Q-RT-PCR）和基因型分析（Genotyping）；基因表达差异分析；微卫星（MSI、STR）和杂和性丢失（LOH）分析；基因或染色体的部分缺失和多倍体的半定量分析等等；该技术可在生殖细胞系和体细胞系中筛查基因变异，它的应用范围包括：癌症基础研究、癌症放疗基因监控、癌症治疗药物基因组学监控、遗传性肿瘤早期诊断、肿瘤表观遗传学研究及诊断、各类遗传疾病的基因诊断、流行病学基因研究、临床微生物基因检测、法医鉴定、动植物遗传育种研究等。

原理DHPLC技术是利用液相色谱技术（HPLC），既在高压闭合液相流路中，将DNA 样品自动注入并在缓冲液携带下流过专利的DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下实现对DNA不同的分析；由紫外检测或荧光检测被分离的DNA样品，自动DNA片段收集器可根据需要自动收集被分离后的DNA样品，整个分析过程都是在计算机通过专用软件包NAVIGATOR完成的，专利的DNA分离柱具有很好的温度稳定性和酸碱稳定性，具有很长的有效寿命（大于6000次进样）和极好的分析稳定性（99%）。

DHPLC DNA色谱分离柱工作原理DNA分离柱，是使用无孔多苯乙烯-二乙烯基苯（PS-DVB）共聚物微球体作为稳定基质。

因为这些微球体都与含有18个碳原子的烷基长碳链相连，所以色谱柱的基质是疏水，电中性的，不会与核酸分子直接发生反应。

三乙基铵醋酸盐（TEAA）是一种离子对试剂，离子对试剂既是疏水性的又带正电荷，既能与核酸主链上的磷酸基团的负电荷反应，同时TEAA的疏水基团又与固定相上碳-18链的疏水基团发生反应。