平板划线法试验记录

实验五细菌的分离培养与移植[实验目的]1、掌握细菌分离培养及移植的基本要领和方法。

[实验原理]在细菌学诊断中，分离培养是不可缺少的一环。

分离培养的目的主要是在含多种细菌的病料或培养物中挑选出某种细菌。

在分离培养时应注意：选择适合于所分离细菌生长的培养基、培养温度、气体条件等。

同时应严格按无菌操作程序进行实验，并做好标记。

[实验材料]菌种：大肠杆菌斜面、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌等。

器械：剪刀、记号笔(以上小组共用)。

培养基：普通肉汤和普通琼脂斜面、普通琼脂平板、酒精灯、接种环。

[实验内容]1、细菌的分离平板划线接种法通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。

若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。

可用做分离纯种细菌。

操作方法（三区划线法）：a、右手拿接种环，烧灼冷却后，勾取菌种。

b、左手抓握琼脂平板（让皿盖留于桌上），在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。

划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。

c、接种环上多余的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。

d、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。

e、划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置37℃温箱孵育18-24小时观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征（如大小、形状、透明度、色素等）。

平板分区划线法培养后菌落分布情况平板划线培养的方法甚多，可按各人的习惯选择应用，其目的都是达到使被检材料适当的稀释，以求获得独立单在的菌落，防止发育成菌苔，以致不易鉴别其菌落性状。

细菌的人工培养方法[适用对象]生物工程专业[实验学时] 4学时一、实验目的了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。

初步掌握各种培养基接种技术；观察细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。

二、实验原理培养基是用人工方法将微生物生长繁殖所需的多种营养物质调配在一起，形成的一种营养物质的混合物，用以分离、传代和培养细菌。

按培养基的用途分为基础（普通）培养基、营养培养基、鉴别培养基，选择培养基、厌氧培养基等。

按培养基的物理形状又分为液体、固体和半固体三种。

三、仪器设备三角烧瓶、天平、试管、平皿、高压消毒灭菌器。

四、相关知识点培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多。

但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、无机盐、生长因子等。

不同的微生物在固体、半固体和液体培养基中能表现出各自特有的培养特征，这些特征可以作为不同种类微生物的鉴别特征之一。

了解它们的培养特征、掌握其生长规律对识别、控制和利用微生物具有重要价值。

五、实验步骤（一）常用培养基的制备1、普通液体培养基(1)将新鲜的精牛肉除去脂肪和筋膜制成肉馅，取500克牛肉馅加l000ml蒸馏水，置4℃冰箱浸泡过夜，使牛肉中的水溶性营养物质充分浸出。

(2)次日将浸泡过夜的牛肉馅加热煮沸30分钟，放凉，使残余的脂肪凝固，然后用纱布和滤纸过滤，最后将滤液补足为原量，此种液体为牛肉浸汁。

(3)取1 000ml牛肉浸汁加蛋白胨10克，氯化钠5克加热溶解，冷至50℃左右时用氢氧化钠调整pH至7．6，再煮沸10分钟(因牛肉浸汁中部分碳水化合物，经加热破坏产酸，影响pH；产生多磷酸盐，培养基不澄清)待冷却后，再调整pH至7．6，然后以滤纸过滤，滤液必须澄清，此种液体称为肉汤培养基。

(4)将肉汤培养基分装于试管或三角烧瓶中，塞好试管和瓶塞，包装好后，用15磅(121℃)蒸气15～30分钟灭菌。

一、实验目的1. 掌握光合细菌的分离筛选方法。

2. 熟悉光合细菌的形态特征和生理生化特性。

3. 提高微生物实验技能，培养严谨的科学态度。

二、实验原理光合细菌是一类在厌氧条件下进行光合作用的微生物，它们能利用无机物作为碳源和能源。

本实验通过平板划线法从土壤样品中分离筛选出光合细菌，并对其进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- 光合细菌培养基（PSB培养基）- 琼脂- 生理盐水- 氯化钠- 碳酸氢钠- 氯化钾- 磷酸氢二钠- 蛋白胨- 硫酸铵- 碘液- 75%酒精- 紫外灯- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验仪器：- 高压蒸汽灭菌器- 烧杯- 玻璃棒- 离心机- 移液器- 平板划线器- 紫外线灯- 恒温培养箱四、实验步骤1. 准备PSB培养基：称取PSB培养基成分，加入适量蒸馏水，溶解后分装于锥形瓶中，121℃高压灭菌15分钟，待冷却后备用。

2. 制备土壤样品：取适量土壤样品，用生理盐水进行梯度稀释。

3. 制备平板：将PSB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌接种环取适量稀释后的土壤样品，在平板上进行划线。

4. 恒温培养：将平板置于恒温培养箱中，在适宜的光照条件下培养。

5. 观察与筛选：定期观察平板上的菌落，挑选具有明显特征的菌落进行进一步鉴定。

6. 鉴定：a. 观察菌落形态：记录菌落的颜色、大小、形状等特征。

b. 进行生理生化试验：包括氧化酶试验、糖发酵试验、淀粉酶试验等。

c. 染色观察：采用革兰氏染色法、芽孢染色法等方法，观察细菌的形态和结构。

五、实验结果与分析1. 分离筛选：从土壤样品中分离出多种菌落，其中一种菌落具有明显的绿色荧光，初步判断为光合细菌。

2. 鉴定结果：a. 菌落形态：该菌落呈圆形，直径约1-2mm，边缘整齐，颜色为绿色荧光。

b. 生理生化试验：氧化酶试验阳性，糖发酵试验阴性，淀粉酶试验阳性。

c. 染色观察：革兰氏染色为阴性，芽孢染色为阴性。

综合以上结果，初步鉴定该菌为光合细菌。

微生物接种方法微生物接种是生物实验中的一项基本技术，也是各种微生物检测和研究中不可缺少的步骤。

本文将介绍一些常见的微生物接种方法，包括平板划线法、斜面接种法、液体培养基接种法和穿刺接种法等。

平板划线法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种纯化，得到单一的菌落。

该方法通过在固体培养基上划线，使菌种在培养基上繁殖并形成菌落。

具体步骤如下：(1)将固体培养基灭菌后倒入培养皿中，待凝固后加入适量菌液。

(2)用接种环取适量菌液，在培养皿表面划线。

(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。

(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。

斜面接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到斜面培养基上，以便于观察和保存。

该方法通过将菌液加入到灭菌后的斜面培养基中，使菌种在斜面上繁殖并形成菌落。

具体步骤如下：(1)将斜面培养基灭菌后放置在实验台上，用无菌操作法加入适量菌液。

(2)将接种环放入菌液中沾取少量菌种，然后在斜面培养基上划线接种。

(3)将培养皿放入适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。

(4)根据需要重复划线操作，直至得到单一的菌落。

液体培养基接种法是一种常用的微生物接种方法，其目的是将菌种接种到液体培养基中，以便于微生物的生长和繁殖。

该方法通过将菌液加入到灭菌后的液体培养基中，使菌种在液体培养基中繁殖并形成微生物。

具体步骤如下：(1)将液体培养基灭菌后倒入试管中，加入适量菌液。

(2)用摇床或其他设备将试管中的培养基混合均匀。

(3)将试管放入适宜的温度下培养，观察微生物的生长情况。

微生物接种技术是生物工程中一项重要的技术，广泛应用于生物制品制造、环境生物治理、医学诊断等领域。

本文将介绍微生物接种技术的基本原理、应用场景以及发展前景。

微生物接种技术是指将目的微生物通过一定的方式引入到培养基或发酵系统中，使其在特定的环境下生长繁殖，以达到特定的生物制品或环境治理的目的。

该技术的主要环节包括菌种选择、接种量确定、接种方法选择和培养条件控制等。

培养基的制备与细菌的接种的实验报告篇一：细菌的分离纯化和接种实验环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验实验报告环境科学与工程学院实验中心篇二：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 2021级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→ 用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。

第1篇一、实验目的1. 掌握土壤中微生物的分离与纯化方法。

2. 了解不同微生物的形态特征和生理特性。

3. 筛选具有特定生理功能的菌株。

二、实验原理土壤中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌、放线菌等。

通过选择合适的培养基和分离方法，可以从土壤中分离出具有特定生理功能的菌株。

本实验采用平板划线法、涂布分离法等方法，对土壤样品进行分离纯化，并对筛选出的菌株进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌平板、无菌试管、接种环、显微镜等。

2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、显微镜等。

四、实验步骤1. 样品处理：取一定量的土壤样品，用无菌水进行稀释，制成10^-3、10^-5、10^-7等不同浓度的土壤悬液。

2. 分离纯化：（1）平板划线法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用接种环进行划线分离，培养24小时后观察菌落形态。

（2）涂布分离法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用无菌玻璃棒轻轻涂布，培养24小时后观察菌落形态。

3. 菌落鉴定：（1）形态特征观察：观察菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等特征，记录下来。

（2）生理生化试验：对筛选出的疑似菌株进行生理生化试验，如革兰氏染色、氧化酶试验、过氧化氢酶试验等，以确定菌株的属种。

4. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，对筛选出的菌株进行鉴定，并统计不同生理功能菌株的筛选数量。

五、实验结果与分析1. 菌落形态特征观察：在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，观察到不同形态的菌落，如圆形、卵圆形、长条形等，颜色有白色、黄色、红色等。

2. 生理生化试验结果：（1）革兰氏染色：部分菌株为革兰氏阳性菌，部分菌株为革兰氏阴性菌。

（2）氧化酶试验：部分菌株产生氧化酶，部分菌株不产生氧化酶。

（3）过氧化氢酶试验：部分菌株产生过氧化氢酶，部分菌株不产生过氧化氢酶。

3. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，筛选出以下具有特定生理功能的菌株：（1）革兰氏阳性菌：可能为葡萄球菌、链球菌等。

微生物技术综合实验年级：13级生物工程（专升本）班级：2013011201学号：***********名：***指导老师：刘凤霞教授日期：二零一三十月五号目录1实验目的及原理 (1)1.1实验目的 (1)1.2实验原理 (1)2实验材料 (1)2.1实验仪器 (1)2.2实验试剂 (1)2.3培养基 (2)2.3.1 生长培养基 (2)2.3.2鉴定培养基 (2)2.3.3摇瓶培养基 (2)3试验方法 (2)3.1仪器的准备 (2)3.2培养基的配置 (2)3.3初步筛选及鉴定 (2)3.3.1采集土样 (3)3.3.2富集培养 (3)3.3.3稀释分离、纯化 (3)3.3.4初筛 (3)3.4复筛及鉴定 (4)3.4.1革兰染色 (4)3.5酶活力的测定 (4)3.5.1摇瓶培养 (4)3.5.2酶液稀释 (4)3.5.3酶液测定 (4)4结果分析 (5)4.1平板涂布分离 (5)4.2平板划线分离 (5)4.3初筛 (5)4.4复筛 (5)4.5摇瓶培养 (6)4.6酶活力测定 (6)5参考资料 (7)6附录 (8)微生物上游技术综合实验枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定1.实验目的及原理1.1实验目的（1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。

（2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。

（3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。

（4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。

（5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。

1.2实验原理选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。

将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。

一、实验目的1. 学习绿脓杆菌的分离与培养方法。

2. 掌握绿脓杆菌的形态观察和特征鉴定。

3. 了解绿脓杆菌的生物学特性。

二、实验原理绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa），又称铜绿假单胞菌，是一种革兰氏阴性杆菌，具有运动性、形成芽孢和荚膜等特点。

绿脓杆菌广泛存在于自然界，如土壤、水、空气等，是一种条件致病菌，可引起多种感染。

本实验采用平板划线法和稀释涂布平板法分离绿脓杆菌，通过显微镜观察其形态和运动性，并对其进行革兰氏染色、氧化酶试验等鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：绿脓杆菌标准菌株、土壤样品、营养肉汤、营养琼脂、生理盐水、无菌棉签、无菌镊子、无菌移液器、无菌试管、酒精灯、高压蒸汽灭菌器、显微镜、接种环、接种针等。

2. 试剂：革兰氏染液、氧化酶试剂、无菌生理盐水等。

四、实验方法1. 绿脓杆菌的分离（1）取土壤样品10g，放入100ml无菌生理盐水中，振荡混匀，制成10^-1稀释液。

（2）取10^-1稀释液1ml，加入9ml无菌生理盐水中，制成10^-2稀释液。

（3）取10^-2稀释液0.1ml，涂布于营养琼脂平板上，用接种环划线。

（4）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养24小时。

2. 绿脓杆菌的鉴定（1）观察分离得到的菌落，挑选典型菌落，用接种环挑取少量菌体，进行革兰氏染色。

（2）在显微镜下观察菌体形态，记录结果。

（3）进行氧化酶试验，观察菌体是否产生颜色变化。

五、实验结果与分析1. 绿脓杆菌的分离经过培养，营养琼脂平板上出现典型的绿色菌落，符合绿脓杆菌的特征。

2. 绿脓杆菌的鉴定（1）革兰氏染色：菌体呈革兰氏阴性，呈短杆状，两端钝圆，无芽孢，无荚膜。

（2）氧化酶试验：菌体产生颜色变化，说明具有氧化酶活性。

根据实验结果，分离得到的菌落符合绿脓杆菌的特征，可初步判断为绿脓杆菌。

六、实验结论通过本次实验，我们成功分离和鉴定了绿脓杆菌。

实验过程中，我们掌握了绿脓杆菌的分离、培养和鉴定方法，了解了绿脓杆菌的生物学特性，为后续研究绿脓杆菌的致病机制和防治提供了基础。