酶联免疫技术检测

酶联免疫检测方法
酶联免疫检测是一种常用的生物技术方法，它结合了酶标记和免疫反
应的原理，可用于检测生物样品中特定分子的含量，如蛋白质、抗体、激
素等。

具体步骤如下：
1.准备样品：从生物样品中提取目标分子，例如血液、尿液、细胞等。

2.免疫反应：将一定浓度的目标分子加入到反应孔中，并加入与目标
分子特异性的抗体，使两者发生免疫反应。

3.洗涤：对反应孔进行洗涤，以去除未与抗体结合的杂质以及剩余的
抗体。

4.添加荧光标记的二抗：向反应孔中加入荧光标记的二抗，使其与已
结合的抗体形成复合物。

5.洗涤：对反应孔进行再次洗涤，以去除未结合的荧光标记的二抗。

6.酶标记：向反应孔中加入用酶标记的物质（如酶标记的抗体），使
其与已结合的荧光标记的二抗形成复合物。

7.洗涤：对反应孔进行最后一次洗涤，以去除未结合的酶标记化合物。

8.反应染色：向反应孔中加入染色物质，使其与酶标记化合物发生颜
色反应，形成分析结果。

最终，检测结果可以通过测量反应孔中染色物质的光密度或荧光强度
来评估样品中目标分子的浓度。

酶联免疫检测方法具有高灵敏度、高特异
性和高通量等优点，广泛应用于医学、生物工程、食品安全等领域。

酶联免疫检测法一、概述酶联免疫检测法是一种常见的生物分子检测方法，它利用酶作为标记物来检测目标分子，具有高灵敏度、高特异性、易操作等优点，广泛应用于医学、生物学、化学等领域。

二、原理酶联免疫检测法基于抗原-抗体反应原理，包括直接酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞争ELISA等多种类型。

其中，最常见的是直接和间接ELISA。

1. 直接ELISA直接ELISA是将已知抗体固定在微孔板上，并加入待检样本中含有目标抗原的溶液，经过一定条件下的反应后，再加入与目标抗原结合的酶标记二抗，在适当条件下进行染色反应并测定吸光度值。

其优点是操作简单快捷，但缺点是灵敏度略低。

2. 间接ELISA间接ELISA是将已知抗体固定在微孔板上，并加入待检样本中含有目标抗原的溶液，在适当条件下进行反应后加入与目标抗原结合的一抗，再加入与一抗结合的酶标记二抗，在适当条件下进行染色反应并测定吸光度值。

其优点是灵敏度高，但操作稍复杂。

三、步骤酶联免疫检测法的基本步骤如下：1. 预处理样本：根据不同的样本类型和检测要求，可以进行不同的处理方法，如离心、洗涤、稀释等。

2. 固定抗原或抗体：将已知抗体或抗原固定在微孔板上。

3. 加入待检样本：加入含有目标分子的待检样本。

4. 洗涤：将未结合的物质洗去。

5. 加入酶标记二抗或一抗：根据实验设计需要选择适当的酶标记二抗或一抗，并加入微孔板中与目标分子结合。

6. 洗涤：将未结合的物质洗去。

7. 加入底物：加入适当底物后，在适当条件下进行染色反应。

8. 停止反应并测定吸光度值：在反应停止后，使用光谱仪等设备测定吸光度值，并根据标准曲线计算待检样本中目标分子的浓度。

四、应用酶联免疫检测法在医学、生物学、化学等领域有广泛的应用，常见的应用包括：1. 临床诊断：如肝炎病毒、艾滋病毒等感染的诊断。

2. 药物检测：如抗生素、激素等药物残留的检测。

3. 食品安全：如农药残留、食品添加剂等的检测。

酶联免疫吸附试验结果酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA），是一种广泛应用于生命科学中的试验技术，主要用于检测生物体内特定蛋白质和抗体的存在和数量。

本文将根据不同类别，介绍ELISA试验结果的分析。

一、直接ELISA试验结果分析直接ELISA试验是指将已知抗原沉淀于微孔板上，再加入待检测物，之后加入特定抗体进行检测的试验方法。

当待检测物含有对应的抗原，则抗原和特定抗体结合，形成固定的复合物。

此时，待检测物在微孔板中残留，被进一步检测。

如果待检测物中含有特定抗体，则会与预先添加的抗原结合。

根据特定抗体标记的物质进行检测。

直接ELISA试验结果为同轴柱，并且呈现梯度性图谱。

二、间接ELISA试验结果分析间接ELISA试验是指使用抗原沉淀于微孔板上，加入待检测物，并再次加入特定抗体进行检测的试验方法。

在该试验中，患者血清或其他样品中含有抗体，抗体与固定的抗原结合，形成复合物。

之后添加特定抗体，间接ELISA试验的结果为同轴柱，并且呈现梯度性的图谱。

三、竞争ELISA试验结果分析竞争ELISA试验是对样品中的特定物质进行检测的试验方法。

在试管中，抗体与已知抗原结合后，特定抗体标记的物质被加入竞争ELISA反应体系中。

如果合适的特定抗体分子与抗原分子竞争结合，则可抑制特定抗体分子与标记物结合，标记物的含量随之减少。

竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。

四、间接竞争ELISA试验结果分析间接竞争ELISA试验是对患者中特定物质的抗体进行检测的试验方法。

在该试验中，已知抗原沉淀于微孔板上，加入患者样品，之后加入特定抗体。

如果患者样品中含有特定抗体，将与特定抗体竞争结合，导致标记物与它竞争结合量的减少。

间接竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。

总之，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于特异性分子识别原理的分析方法，具有操作简单、稳定可靠、敏感度高等特点。

酶联免疫标记技术酶联免疫标记技术（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用于检测生物样本中特定蛋白质、抗体、荷尔蒙、抗原等的定量和定性方法。

该技术利用酶与抗原-抗体复合物相互作用的原理，通过酶的催化作用将底物转化为可检测的产物，从而实现对目标分子的检测和测量。

ELISA技术通常分为直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA等不同类型，但它们的基本原理相似。

以下是酶联免疫标记技术的基本步骤：1．包被阶段（Coating）：将要检测的抗原或抗体吸附在固体表面上，如微孔板的底部或壁上。

2．阻断阶段（Blocking）：用非特异性蛋白质（如牛血清蛋白、鱼胶等）阻断未被包被的表面，以减少非特异性结合。

3．结合阶段（Binding）：将待测样本加入到包被的微孔板中，目标分子与包被的抗体或抗原发生特异性结合。

4．洗涤阶段（Washing）：使用缓冲液洗去未结合的样本成分，以减少背景干扰。

5．检测阶段（Detection）：加入与目标分子特异性结合的检测抗体，形成抗原-抗体复合物。

6．洗涤阶段（Washing）：再次使用缓冲液洗去未结合的检测抗体。

7．酶标记阶段（Enzyme Labeling）：加入与检测抗体特异性结合的酶，如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等。

8．底物加入阶段（Substrate Addition）：加入底物，酶催化底物产生可检测的产物。

9．测量阶段（Measurement）：使用光度计或荧光测量仪器测量产物的光学密度或荧光强度，从而定量目标分子的浓度。

ELISA技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便、成本较低等优点，因此在医学诊断、生物医学研究、药物开发等领域被广泛应用。

酶联免疫方法检测细胞因子步骤酶联免疫方法是一种常用的实验技术，用于检测细胞因子的含量和活性。

这种方法结合了酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹（Western blot）的优点，可以准确、快速地检测细胞因子的表达和分泌水平。

下面我们将详细介绍酶联免疫方法检测细胞因子的步骤。

第一步：收集样本在进行酶联免疫方法检测细胞因子之前，首先需要收集样本。

样本可以是细胞培养上清液、血清、血浆、组织匀浆等。

在收集样本的过程中，需要注意避免污染和降解，以保证后续实验的准确性和可靠性。

第二步：制备样品收集到样本后，需要进行样品的制备工作。

对于细胞因子的检测，通常需要进行细胞裂解或离心等步骤，以获得纯净的样品。

此外，还需要对样品进行稀释或浓缩处理，以确保在检测过程中细胞因子的浓度在可检测范围内。

第三步：选择合适的试剂盒在进行酶联免疫方法检测细胞因子之前，需要选择合适的试剂盒。

试剂盒的选择要根据要检测的细胞因子种类和检测方法来确定。

一般来说，试剂盒中包含了抗体、标记物、基质和洗涤缓冲液等试剂，可以满足细胞因子的检测需求。

第四步：进行酶标记接下来需要进行酶标记的过程。

酶标记是酶联免疫方法的关键步骤，通过在抗体或抗原上标记酶，可以实现细胞因子的特异性检测。

常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。

在酶标记过程中，需要严格控制反应条件和时间，以确保标记的稳定性和活性。

第五步：进行反应在准备好标记的抗体或抗原后，就可以进行酶联免疫反应了。

首先将标记的抗体或抗原加入到微孔板或膜上，然后加入待测样品，进行孵育反应。

在孵育反应过程中，细胞因子将与其特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

然后进行洗涤，以去除非特异性结合的物质。

第六步：显色反应经过洗涤后，就可以进行显色反应了。

显色反应是检测细胞因子含量的关键步骤，通过在酶作用下的底物转化，可以产生可检测的颜色或荧光信号。

根据试剂盒中所提供的底物种类和反应条件，可以确定最适合的显色方案。

酶联免疫法和化学发光法
酶联免疫法（ELISA）和化学发光法（CLIA）是两种常用的免疫分析技术，用于检测和定量生物分子，如蛋白质、抗体、激素等。

它们在实验室和临床诊断中广泛应用。

酶联免疫法是一种基于酶催化反应的免疫分析方法。

其基本原理是将待测物（抗原或抗体）与固相载体（如微孔板）上的抗体或抗原结合，然后加入酶标记的抗体或抗原，形成三明治复合物。

当加入底物时，酶会催化底物发生反应，产生可检测的信号，通常是颜色变化或荧光强度。

通过测量这些信号，可以定量待测物的浓度。

酶联免疫法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，适用于大规模样本的检测。

它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。

常见的酶联免疫法包括间接法、夹心法和竞争法等。

化学发光法是一种基于化学发光反应的免疫分析方法。

其基本原理是将待测物与固相载体上的抗体或抗原结合，然后加入标记有发光物质的抗体或抗原，形成三明治复合物。

当加入触发剂时，发光物质会被激发并产生光信号。

通过测量光信号的强度，可以定量待测物的浓度。

化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽、快速等优点，适用于微量和痕量分析。

它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。

常见的化学发光法包括间接法、夹心法和竞争法等。

总的来说，酶联免疫法和化学发光法都是常用的免疫分析技术，它们各有优缺点，适用于不同的应用场景。

选择哪种方法取决于待测物的特性、检测要求以及实验室的设备和技术水平。

酶联免疫方法检测细胞因子步骤酶联免疫方法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种广泛应用于生物医学研究领域的检测技术，它能够快速、准确地检测细胞因子等生物大分子的含量。

细胞因子是一类在调节和介导细胞间相互作用中发挥重要作用的细胞因子，它们在免疫反应、炎症反应和细胞信号传导等生理过程中具有重要的调节作用。

本文将对酶联免疫方法检测细胞因子的步骤进行详细介绍，让读者对该技术有一个全面的了解。

第一步：样品处理在进行酶联免疫法检测细胞因子之前，首先需要对样品进行处理。

样品处理的目的是提取细胞因子，并将其置于适宜的条件下以便后续的检测。

对于细胞因子的提取可采用离心、超声波破碎等方法，以获取高纯度的样品。

同时，对于血清、血浆等液体样品，还需通过凝胶过滤、醋酸纤维素柱层析等步骤进行净化处理，以去除样品中可能存在的干扰物质。

第二步：酶标记抗体的制备酶联免疫法的关键之一是酶标记抗体的制备。

酶标记抗体一般是通过将抗体与酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）进行共价结合而得到的。

在制备酶标记抗体时，需要考虑到抗体与酶的比例、结合条件等因素，并通过一系列的实验来优化制备条件，以确保酶标记抗体的稳定性和活性。

第三步：微板上样品的包被完成样品的处理和酶标记抗体的制备之后，下一步是将样品包被到微板上。

微板是一种通常由聚苯乙烯、聚碳酸酯等材料制成的微量反应容器，其表面具有一定的亲和性，可以吸附蛋白质等生物分子。

在将样品包被到微板上时，需注意包被的时间、温度等因素，以使样品能够均匀地吸附到微板上，并且保持其天然的构象和生物活性。

第四步：酶标记抗体的添加将样品包被到微板上之后，接下来就是添加酶标记抗体。

酶标记抗体作为二抗，可以与包被在微板上的靶分子结合，形成特异性的抗原-抗体复合物。

为了确保酶标记抗体的特异性和灵敏度，通常需要对酶标记抗体进行适当的稀释，并加入到微板上进行孵育。

第五步：底物的加入与反应在酶标记抗体添加完毕后，需要加入底物并进行反应。

酶联免疫吸附法标准
酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫分析技术，用于检测和定量分析特定蛋白质或其它
分子的存在。

这种分析方法是基于抗原与抗体的高度特异性结合原理。

以下是酶联免疫吸附法的一般标准步骤：
1. 准备微孔板：将酶标板的孔洞涂覆有抗原或抗体，使其吸附
在微孔板上。

2. 样本处理：将待检样本经过必要的预处理，如稀释、清洗等。

3. 加入样本：将处理好的样本加入到微孔板中，使抗原或抗体
与样本中的目标物质结合。

4. 免洗步骤：根据实验需要，可能需要进行一些免洗步骤来清
除非特异性结合物质。

5. 加入检测抗体：加入检测抗体，用于与目标物质结合。

6. 再次免洗步骤：如有需要，进行免洗步骤来清除非特异性结
合物质。

7. 加入酶标记抗体：加入酶标记抗体，它与检测抗体结合形成
复合物。

8. 加入底物：加入底物，使酶作用并产生可测量的信号。

9. 反应停止：加入反应终止剂停止酶反应，停止信号产生。

10. 信号检测：使用酶标仪或其他测量设备测量底物反应产生的
信号强度。

11. 数据分析：根据标准曲线或其他定量方法，计算样品中目标
物质的浓度。

需要注意的是，ELISA的具体步骤可能会因实验目的、样品类型
等因素有所差异，以上所述仅为一般标准步骤。

酶联免疫检测法在癌症诊断中的应用癌症是一种严重的疾病，其对人体的伤害是极大的，很多时候病人只有在疾病晚期才能发现病情的严重性。

因此，精确的癌症诊断非常重要，而酶联免疫检测法（ELISA）是一种非常实用的检测方法，被广泛应用于癌症诊断领域。

酶联免疫检测法是一种基于抗体与抗原相互作用的检测方法。

其原理是：将样品中的抗原通过相应抗体筛选出来，然后通过化学反应来进行标记。

在样品中发生化学反应后，通过酶标记物的測量来确定抗原的存在，从而辅助癌症诊断。

下面，我们来介绍一下酶联免疫检测法在癌症诊断中的应用。

1. 检测癌症标志物酶联免疫检测法可以被用来检测癌症标志物（tumor markers），这是一种在癌症发生过程中产生的分子。

这些分子经常被作为癌症的早期诊断指标，酶联免疫检测法可以通过筛选虽然不是完全精确，但是可以帮助医生进行更精准的诊断。

2. 确定化疗方案酶联免疫检测法还可以被用来在确定化疗方案时提供有用的信息。

特定抗原的浓度可以被用来确定癌症的严重程度以及对治疗的反应。

这些信息可以帮助医生更好地选择合适的化疗方案，更有效地治疗患者的疾病。

3. 了解癌症的生物学特征酶联免疫检测法可以发现癌症的生物学特征。

通过检测癌症标志物来了解癌症的分子特征，病人的医生可以更好地理解病人的疾病进展，诊断癌症的严重程度以及确定有效的治疗方案。

在癌症诊断中，酶联免疫检测法是一种非常有效的检测方法。

它可以用来检测癌症标志物、确定化疗方案，了解癌症的生物学特征，这些都是非常有用的信息。

虽然酶联免疫检测法仍然存在一定的缺点和不足，但是它无疑已经成为目前癌症诊断领域重要的工具之一。

酶联免疫法酶联免疫法是一种灵敏度非常高的检测技术，它可以用来检测微量物质，广泛应用于各种生物学研究中。

酶联免疫法的这种特殊特性，使它在医学检验、环境污染监测、食品安全检测以及其他科学研究中得到了广泛的应用。

一、酶联免疫法简介酶联免疫法，又称酶连接免疫吸附测定（ELISA），是一种常见的生物分子检测技术，可以检测出极低的抗原浓度。

它是一种免疫学技术，它通过特异性抗体和酶的特殊反应，以达到非常灵敏的检测效果。

酶联免疫法的基本原理是：首先，将要检测的样品（抗原或抗体）和特异性抗体在反应板上发生反应，然后，将一种酶修饰的抗原特异性抗体溶解液加入，反应结束后，再加入酶的底物溶液，底物溶液中的特异性酶会与反应板上的抗原特异性抗体结合，形成抗原-酶复合物，最后用测定仪测定抗原-酶复合物的光谱，从而得到检测结果。

二、酶联免疫法的应用1、医学检验酶联免疫法在医学检验方面，可以用于检测各种病毒、细菌及其抗原，如肝炎、梅毒、登革热等；也可以用于检测抗体，如抗体检测、免疫球蛋白检测等；还可以用于检测放射性标记的抗原或抗体，用于免疫学研究与临床诊断。

2、食品安全检测酶联免疫法可以用于检测各种污染物，如残留农药、重金属、疾病菌等，以确保食品安全。

3、环境污染监测酶联免疫法可以用于环境污染监测，可以检测出游离态的污染物，如氨、氯、硫酸盐等，以及致病菌、抗药性菌等，为控制环境污染提供重要的参考数据。

4、其他科学研究除了上述应用外，酶联免疫法还可以用于其他科学研究，如生物化学、分子生物学、遗传学、细胞生物学等，可以用来研究蛋白质、核酸、糖蛋白等生物物质。

三、酶联免疫法的优缺点1、优点a) 酶联免疫法的灵敏度很高，可以检测出极低的抗原浓度；b) 反应快速，结果准确；c) 操作简单，容易稳定；d) 可以同时检测多个抗原或抗体，效率高；e) 反应条件可以调整，可以根据不同的样品进行调整。

2、缺点a) 需要一定的抗体，而抗体的生产时间较长；b) 对抗原的特异性较弱；c) 稀释抗体可能会引起误差；d) 检测时，可能会受到干扰物的影响。

酶联免疫吸附试验ELISA一种酶联免疫技术。

用于检测包被于固相板孔中的待测抗原（或抗体）。

即用酶标记抗体，并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。

酶联免疫吸附试验（以下简称ELISA）:是酶免疫测定技术中应用最广的技术。

其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。

常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。

ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。

此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。

滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。

因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。

此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。

目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。

1•辣根过氧化物酶（HRP）过氧化物酶广泛分布于植物中，辣根中含量最咼，从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白（含糖量18%）,分子量约40000,约由300个氨基酸组成，等电点为pH3-9，催化反应的最适pH值因供氢体不同而稍有差异，一般多在pH5左右。

此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。

酶联免疫法原理
酶联免疫法是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析目标蛋白质或抗原的存在和浓度。

其原理是利用特定抗体与目标蛋白质或抗原之间的特异性结合，再借助酶的催化作用，将目标物与酶的反应产物相关联，通过测量反应产物的信号强度来间接测定目标物的存在和浓度。

酶联免疫法的步骤通常包括以下几个主要步骤：
1. 预涂板：将具有特异性的抗体或抗原预先涂覆在微孔板的表面上，形成抗原或抗体捕获层；
2. 孵育：将待检测样品加入微孔板中，样品中的目标物与捕获层上的抗体或抗原结合，形成特异性复合物；
3. 洗涤：通过洗涤步骤，去除未结合的样品成分，减少背景干扰；
4. 二抗结合：加入与目标物结合的抗体标记物，这种抗体与目标物不同的抗体结合，形成“夹心”结构；
5. 再次洗涤：去除未结合的二抗成分，减少背景干扰；
6. 底物添加：加入底物，底物与酶结合，酶的催化作用使底物产生可测量的信号，例如颜色变化；
7. 反应停止：通过加入反应停止剂，停止底物与酶的反应；
8. 信号检测：使用仪器测量底物的信号强度，常见的方法包括吸光度测定或荧光测定；
9. 数据分析：根据测得的信号强度，通过对照样品进行定量分析，计算目标物的浓度。

酶联免疫法通过将酶的催化作用与特异性抗体或抗原结合，能够高灵敏度地检测目标物，并且可同时处理多个样品，因此在生物医学研究和临床诊断中得到了广泛应用。

ELISA技术ELISA是一种免疫测定。

免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。

在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。

一、抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。

抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。

在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。

能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质，例如乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）等。

小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。

例如某些激素、药物等。

抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。

一个抗原分子可带有不同的决定簇，例如中可带有等决定簇。

二、抗体1．抗体的结构抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。

Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。

与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。

Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。

Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。

五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。

IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。

图1 IgG的结构见图①木瓜酶裂解部位；②胃蛋白酶裂解部位图2 重链和轻链的N端的氨基酸排列顺序: 因各种抗体而异，称为可变区，分别用VH和VL表示。

两者构成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合，是抗体专一性结合抗原的结构基础。

IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段（Fab）。

每个Fab都保存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。

另一区段称Fc段，无抗体活性，但具有IgG特有的抗原性。

IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段，一个Fab双体，称F（ab'）2，能和两个相同的抗原结合；另一片段类似Fc，随后被分解成小分子多肽，无生物活性IgM是由五个单体组成的五聚体，含10个重链和10个轻链，具有10个抗原结合价，由于空间位置的影响，只表现为五个抗原结合价。

酶联免疫分析技术1971年瑞典学者Engvail和Perlmannn,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附试验)。

其基本原理与RIA相同。

先将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。

测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。

用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离成分。

然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。

最初发展的免疫酶测定方法。

是使酶与抗体或抗原结合，用以检查组织中相应的抗原或抗体的存在。

后来发展为将抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶染色，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果。

这种技术就是目前应用最广的酶联免疫吸附试验，俗称ELISA (enzyme linked immunosorbant assay)。

众所周知, 酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可导致大量的催化过程，所以极为敏感。

免疫酶技术就是将抗原和抗体的免疫反应和酶的催化反应相结合而建立的一种新技术。

酶与抗体或抗原结合后，既不改变抗体成抗原的免疫学反应的特异性，也不影响酶本身的酶学活性，即在相应而合适的作用底物参与下，使基质水解而呈色，或使供氢体由无色的还原型变为有色的氧化型。

这种有色产物可用肉眼、光学显微镜相电子显微镜观察，也可以用分光光度计加以测定。

呈色反应显示了酶的存在，从而证明发生了相应的免疫反应。

所以，这是一种特异而敏感的技术，可以在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

酶联免疫吸附试验原理酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术，其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

测定时，将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应，后加入酶标抗体与免疫复合物结合，用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分，最后加入酶反应底物，根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法。