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食品安全国家标准食品中维生素B2的测定1 范围本标准规定了食品中维生素B2的测定方法。
本标准第一法为高效液相色谱法，第二法为荧光分光光度法，均适用于各类食品中维生素B2的测定。
第一法高效液相色谱法2 原理试样在稀盐酸环境中恒温水解，调pH至6.0—6.5，用木瓜蛋白酶和高峰氏淀粉酶酶解，定容过滤后经反相色谱柱分离，高效液相色谱荧光检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。
3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1盐酸（HCl）。
3.1.2冰乙酸（CH3COOH）。
3.1.3氢氧化钠（NaOH）。
3.1.4 三水乙酸钠（CH3COONa2·3H2O）。
3.1.5 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.6木瓜蛋白酶：活力单位10 U/mg。
3.1.7Taka-淀粉酶：活力单位100 U/mg。
3.1.8甲苯（CH3C6H5）：色谱纯。
3.2 试剂配制3.2.1盐酸溶液（0.1 mol/L）：吸取9 mL盐酸（3.1.1），用水稀释并定容至1000 mL。
3.2.2盐酸溶液（1+1）：量取100 mL盐酸（3.1.1），缓慢倒入100 mL水中，混匀。
3.2.3氢氧化钠溶液（1 mol/L）：准确称取4 g氢氧化钠，加90 mL水溶解，冷却后定容至100 mL。
3.2.4乙酸钠溶液（0.1 mol/L）：准确称取13.60 g三水乙酸钠，加900 mL水溶解，用水定容至1000 mL。
3.2.5乙酸钠溶液（0.05 mol/L）：准确称取6.80 g三水乙酸钠，加900 mL水溶解，用冰乙酸调pH 值至4.0-5.0，用水定容至1000 mL。
3.2.6混合酶溶液：准确称取2.345 g木瓜蛋白酶和1.175 g Taka-淀粉酶，加水溶解后定容至50 mL。
临用前配制。
3.2.7 盐酸溶液（0.012 mol/L）：吸取2 mL盐酸溶液，用水稀释并定容至1000 mL。
一．概述1.维生素B2片含量测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。
1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0. Olmol/L庚烷磺酸钠的0.5%冰醋酸溶液-乙腈-甲醇(85∶10∶5)为流动相；检测波长为444nm。
理论板数按维生素B2峰计算不低于2000。
1.2测定法避光操作。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素B2 10mg)，置500ml量瓶中，加盐酸溶液(1→2)10ml，振摇使维生素B2 溶解，加水20ml，继续振摇数分钟，再加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素B2对照品约10mg，同法测定。
按外标法以峰面积计算，即得。
1.3本品含维生素B2计算，应为标示量的90.0% ～110.0%。
2. 维生素B2片溶出度测定：照溶出度与释放度测定法（通则0931第二法）测定法避光操作。
取本品，以冰醋酸3ml与4%氢氧化钠溶液18ml用水稀释至600ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经20分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液，照紫外-可分光光度法（通则0401)，在444nm的波长处测定吸光度，按C17H20N4O6的吸收系数()为323计算每片的溶出量。
限度为标示量的75%，应符合规定。
3. 维生素B2片有关物质测定：照高效液相色谱法（通则0512）测定。
色谱条件照含量测定。
避光操作。
取本品的细粉适量（约相当于维生素B2 10mg)，置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（1→2)5ml，振摇使维生素B2溶解，加水10ml，继续振摇数分钟，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
精密量取供试品溶液与对照溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。
供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.75倍(1.5% ) ，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（3.0% )。
维生素b2片含量及含量均匀度测定方法的研究
维生素B2片含量及含量均匀度测定方法是利用酶法测定维生素B2片中维生素B2含
量及含量均匀度的一种测定方法。
通常采用UV波长292nm和AOAC法测定维生素B2片中
的维生素B2含量及含量均匀度，可用于维生素B2的质量控制和检验。
该测试方法具有较高的准确性，受试者可就地进行测定，只需使用分光光度计、标准
溶液和混合谱instrument即可处理完整批次，能有效数据传输，量程可调，自动选择批次，具有精确快速的数据处理能力，该测试方法为优质维生素B2片的质量控制提供了帮
助和支持。
本试验在pH为7.0的硫酸氢钠溶液中，将试样片重量折合为3mg，经混合后加入测定烧杯中，加入2ml硝酸氢钠50g/L的溶液，然后加入4ml硫酸十六氢羟基苯甲酰溶液，离
心后备用，再加入1ml琥珀酸钠溶液和LL微量盐晶，搅拌均匀后再离心，用淸洁的纯水
洗涤清洗1次，加入2ml洗涤液及2ml硝酸氢钠50g/L溶液，离心后备用，取滤液到新测
定烧杯中，加入2ml硝酸氢钠50g/L溶液，备用，再加入3ml硫酸十六氢羟基苯甲酰溶液，离心后得出测定结果。
54• 实验研究 •下午4时最高，入睡后由于血液流动相对缓慢，血液黏稠度增加，若于此时加服降高血压药物，就会使血压进一步下降，易引起有脑动脉硬化的高血压患者形成脑血栓，故不宜在睡前服用。
建议降高血压药根据药物半衰期在早晨7时一次给药，或上午、下午两次给药。
2.5 糖皮质激素类肾上腺皮质激素在体内有昼夜节律，长期应用突然停药可能发生肾上腺功能不全，引起严重后果，导致肾上腺皮质功能和其他功能的昼夜节律紊乱，如果在体内血液中皮质激素的自然峰值时（早晨7~8时）一次性给药，则对脑下垂体促皮质激素释放的抑制程度要比通常平均分为3~4次的给药方法轻得多，因此，应将皮质激素的药物给药每日总量在每日或隔日的早晨一次性给药，达到更合理的用药目的，如用泼尼松、地塞米松等在肿瘤化疗前和控制某些慢性疾病时，采用隔日给药法，即把48h用药量在早饭后8时左右1次服用，其疗效较每日用药好，而且不良反应小。
2.6 强心苷类心力衰竭患者对西地兰、地高辛等药物的敏感性以凌晨4时最高，比其他时间给药的效应高达40倍。
因此，如果需要早晨注射强心苷药物时应减少剂量，否则易出现毒性反应。
2.7 抗癌类根据有关资料和临床实践表明，上午10时是抗癌药物使用的最佳时间，因为癌细胞的DNA在每天上午10繁殖复制速度最快，晚上10时最慢，如：用抗癌药（阿糖胞苷）治疗白血病时最好是上午8~11时给药，而此时用药的毒性也最小。
2.8 胰岛素降血糖药糖尿病患者有“拂晓现象”的特点，对胰岛素的敏感时间大约在早晨，若此时给予最低剂量，便可获得最满意的疗效，故胰岛素降血糖药的使用，在上午给药要比下午给药好。
2.9 解热镇痛抗风湿阿司匹林在早晨服药的生物利用度较晚间服药者大，其体内消除速率慢，半衰期长，血药浓度高，建议早晨一次性服用。
吲哚美辛上午7时口服可达最高血浓度，不达到峰值也较其他时间服药时快；如在19时服药，血药浓度峰值则较24平均值低20%。
风湿、类风湿病患者常服吲哚美辛，不良反应较大，因此，为提高疗效减少不良反应，早晨剂量宜小，晚间剂量宜大。
第三节水溶性维生素的测定水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足，但由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化需求外，任何多余量都会从机体中排出。
为避免缺乏，需要经常由饮食来提供。
水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。
在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别在碱性条件下加热，可大部分或全部被破坏。
它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响；维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏；维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。
由于水溶性维生素具有上述特性，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理。
维生素B1、B2通常采用盐酸水解，或再经淀粉酶、木瓜蛋白酶等酶解作用，使结合态维生素游离出来，还可用活性人造浮石、硅镁吸附剂等进行纯化处理。
测定水溶性维生素常用高效液相色谱法、荧光法、比色法和微生物法等。
一、维生素B1的测定(荧光法，GB/T5009.84—2003)维生素B1又名硫胺素、抗神经炎素，通常以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。
在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。
动物组织不如植物含量丰富。
维生素B1在水中溶解度较大，在酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中加热极易分解。
近年来对利用带荧光检测器的高效液相色谱测定法进行了许多研究，并应用于实际试样测定。
这里我们主要介绍荧光法（参考GB/T 5009.84-2003食品中硫胺素(维生素B1)的测定）（一）荧光法1．原理试样在酸性溶液中加热，提取维生素B1，经蛋白分解酶处理，使维生素B1成为游离型。
再经层析柱纯化，去除荧光淬灭物质，同时浓缩，用碱性铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素，在紫外线下，硫色素发出荧光，再给定的条件下以及没有其他物质干扰时，此荧光之强度与硫色素量成正比即与溶液中维生素B1量成正比。
如试样中含杂质过多，应经过离子交换剂处理，使硫胺素与杂志分离，然后以所得溶液做测定。
HPLC法测定维生素B2片的含量及有关物质谢子立(安徽省食品药品检验所，安徽合肥230051)摘要：目的建立高效液相色谱法测定维生素B2片的含量和有关物质。
方法采用C18色谱柱（250mmˑ4．6mm，5μm）；以甲醇—乙腈—10mmol·L－1庚烷磺酸钠溶液（含冰醋酸为0．5%）（5ʒ10ʒ85）为流动相；检测波长：444nm；流速：1．0mL·min－1。
结果在建立的色谱条件下，维生素B2能与杂质完全分离；维生素B2在0．1117 0．8938μg范围内线性关系良好，r=1．000；平均回收率为100．5%（n=9）；测定维生素B2的最小检出量为2．2ng。
结论该方法操作方便、准确，灵敏度高，专属性强，可用于维生素B2片的质量控制。
关键词：维生素B2片；高效液相色谱法；含量测定；有关物质HPLC determination of vitamin B2tabletsXIE Zi-li（Anhui Institute for Food and Drug Control，Hefei230051，China）Abstract：Objective To establish a method for the determination of content and related substances for vitamin B2tablets．MethodsC18column（250mmˑ4．6mm，5μm）was adopted with the mobile phase of a mixture of methanol-acetonitrile-10mmol·L－1sodium heptanesulfonate solution（0．5%glacial acetic acid）（5ʒ10ʒ85）．The flow rate was1．0mL·min－1and the detection wavelength was444nm．Results Under the described chromatographic condition，vitamin B2was completely separated from its impurities．A linearity be-tween peak area and vitamin B2was achieved in the range of0．1117 0．8938μg，with r of1．000．The average recovery（n=9）was 100．5%．The lowest detectable amount was2．2ng．Conclusion The method is convenient，accurate，specific and sensitive and can beused for quality control of vitamin B2tablets．Key words：vitamin B2tablets；HPLC；content；related substances维生素B2别名维他命B2、核黄素等，它是人体多种辅酶的重要组成部分，临床用于治疗口角炎、眼结膜炎、脂溢性皮炎以及阴囊炎等。
乳制品中维生素B2的快速测定方法作者：杨丽英，李晓颀，杨世波来源：《现代食品》 2017年第5期维生素B2 又叫核黄素，为人体内黄酶类辅基的组成部分（黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用），其主要作用是参与机体的生物氧化，是配方奶粉以及乳制品的重要组成部分[1]。
目前，维生素B2 常用的检测方法有高效液相色谱法、荧光分光光度法[2-3] 和液相色谱-串联质谱法[4]。
国家标准方法[5] 为高相液相色谱法，上述方法在样品处理需在121 ℃高温灭菌30 min，需要酶解过夜，测定步骤繁琐。
因此本文选择乳粉作为研究对象，建立一种简便，有效，可行的维生素B2 检测方法。
1 仪器与试剂1.1 仪器与设备赛默飞世尔UltiMate 3000 高效液相色谱仪；UltiMate 3000 荧光检测器；恒诺超纯水器；Sartorius 万分之一电子分析天平。
1.2 材料与试剂维生素B2 标准物质（100 mg，国家药品标准物质，批号100369-201103，纯度99.1%，不确定度±0.5%）；甲醇（色谱纯）；三水乙酸钠（分析纯）；冰乙酸（分析纯）；盐酸（分析纯）。
2 实验方法2.1 色谱条件色谱柱：C18 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：0.05 mol/L 乙酸钠溶液- 甲醇（65 ∶ 35，体积比）；流速：1.0 mL/min；柱温:35 ℃；进样量：10 μL；激发波长：462 nm，发射波长：522 nm。
2.2 测定方法2.2.1 标准品溶液的制备准确称取10 mg（精确到0.1 mg）维生素B2 标准品于100 mL 容量瓶中，加入盐酸（1+1）2 mL，超声溶解后用水溶解并定容至刻度，配制成浓度为0.1 mg/mL 的标准储备液，置于棕色玻璃容器中于0 ～ 4 ℃冰箱贮存。
准确吸取1.00 mL 标准储备液，用水稀释并定容至100 mL，配制成浓度为1 μg/mL 的标准中间液。
维生素B2片含量及含量均匀度测定方法的研究
惠白
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2010(011)003
【摘要】目的:对维生素B2片的含量测定方法进行改进,并对其含量均匀度进行考察.方法:以冰醋酸和沸水为溶剂,立即密塞量瓶、强力振摇约2～3 min,并超声振荡约5 min使维生素B2溶解,暗室密塞放冷,加水稀释,快速滤过,以1%醋酸溶液为空白,用分光光度法测定含量.结果:方法学考察表明,维生素B2在1.69～42.32mg·L-1的线性范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9);平均回收率为100.3%(n=9,RSD 0.8%).结论:本法快速、简便、准确、重现性好.可有效控制维生素B2片的质量.【总页数】3页(P222-224)
【作者】惠白
【作者单位】陕西省渭南市药品检验所,渭南,714000
【正文语种】中文
【中图分类】R921.2
【相关文献】
1.HPLC法测定复合维生素B片维生素B1、维生素B2、烟酰胺的含量及含量均匀度 [J], 陈华龙;刘旺培
2.维生素B2片含量测定方法的改进 [J], 纪宇
3.复方肝浸膏胶囊（片）中维生素 B1、B2的含量及含量均匀度测定 [J], 张越华;李荣;孙晓;张亚锋
4.维生素B2片的含量均匀度测定 [J], 高静;王福贵
5.安神补脑胶囊中维生素B1含量测定与含量均匀度测定方法研究 [J], 吴嫣艳;周娟娟;尚姝;冯有龙
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目的：规范维生素B片检验操作，保证检验结果的准确值。
2片的中间产品、成品。
范围：维生素B2责任：质检员规定：1性状取供试品10片铺于洁净白纸上，观察其色泽及片型厚薄的均一性2鉴别1mg），加水100ml振摇，浸渍数分钟，取本品的细粉适量（约相当于维生素B2滤过，滤液照维生素B项下的鉴别（1）项试验，观察反应现象。
23检查3.1 溶出度避光操作。
取本品，照溶出度测定法（附录XC第一法），以冰醋酸3ml与4%氢氧化钠溶液18ml加水至600ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经20分钟时，取溶液10ml，滤过，取续滤液，照分光光度法（录IV A），在444nm的波长处测定吸收度，按C17H20N4O6的吸收系数（（E1%1cm）为323计算出每片的溶出量。
A×10×S计算公式：溶出量=E1%1cm×BA为供试品的吸收度B为供试品规格（mg）S为供试品稀释倍数维生素B2片检验标准操作程序第2页3.2重量差异按“重量差异检查操作程序”检验。
3.3水分用水分测定仪测定(颗粒)。
3.4微生物限度按“微生物检验操作程序”检验。
4含量测定4.1避光操作。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素B10mg），置1000ml量瓶中，加冰醋酸5ml与水100 ml，置水浴上加热1小2溶解，加水稀释，放冷后，4%氢氧化钠溶液30ml，并时，并时时振摇使维生素B2用水稀释至刻度，摇匀，滤过；取续滤液，照分光光度法（附录IVB），在444nm的波长处测定吸收度，按C17H20N4O6的吸收系数（E1%1cm）为323计算，即得。
4.2计算公式：A×稀释倍数×平均片重含量%= ×100%E1%1cm×W×标示量式中：A为供试品的吸收度E1%1cm为C17H20N4O6的吸收系数W为取样量（g）。
