橙皮苷对照品溶液稳定性考察报告

高效液相色谱法测定术后饮中橙皮苷的含量【摘要】目的建立术后饮中橙皮苷含量的测定方法。

方法采用高效液相色谱法,色谱柱为CenturySIL C18-AQ(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(21∶79),流速为0.8 mL/min,检测波长为284 nm,柱温为室温,进样量为20 μL。

结果橙皮苷浓度在1.004～10.04 μg范围内线性关系良好,平均回收率为98.59%,RSD＝0.72%。

结论方法简便、准确、重复性好,可作为术后饮中橙皮苷的含量测定方法。

【关键词】高效液相色谱法；术后饮；橙皮苷；含量测定Key words：HPLC；Shuhouyin；hesperidin；content determination术后饮系甘肃武威肿瘤医院研制的医院制剂,是由太子参、白花蛇舌草、陈皮、甘草等药味制成的合剂,具有补气理气、行气宽中、降逆下气的功能,用于手术后气血亏虚所致的腑气不通诸症的治疗。

经过临床多年使用,疗效显著。

为控制其质量,参考文献[1-6],采用高效液相色谱(HPLC)法对方中君药陈皮的主要有效成分橙皮苷进行了含量测定,结果方法简便、准确、重复性好,为术后饮质量标准的研究与指标的制定提供了试验依据。

1 仪器与试药SSI PC-2000型高效液相色谱仪,Model500紫外检测器,7725i手动进样阀,分析之星色谱工作站；XT120A电子分析天平(瑞士普利赛斯)；HS10260D超声波清洗器(天津市恒奥科技发展有限公司)。

橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110721-200512,供含量测定用)；术后饮样品及缺陈皮的阴性对照样品均由甘肃武威肿瘤医院提供(批号060810,060812, 060815)。

水为重蒸馏水,乙腈为色谱纯,聚酰胺为层析用试剂(80～100目),其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：CenturySIL C18-AQ(250 mm×4.6 mm,5 μm,大连江申分离科学技术公司)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(21∶79)；流速：0.8 mL/min；检测波长：284 nm；柱温：室温；进样量：20 μL。

橙皮苷在水溶液中的降解动力学研究目的：探究橙皮苷在不同温度、pH、离子强度的水溶液降解反应的动力学特性。

方法：应用高效液相色谱分析法研究不同条件水溶液下橙皮苷的降解程度，并利用化学反应动力学方法计算橙皮苷的降解反应动力学相关参数。

结果：橙皮苷在pH7水溶液中容易降解；温度越高，橙皮苷降解速度越快；pH=11时橙皮苷降解半衰期为2.1h，活化能为31.23kJ/mol；离子强度对其降解反应影响不显著；橙皮苷在不同溶液中的降解反应的相关系数均大于0.9，反应遵循一级动力学规律。

结论：橙皮苷在pH7水溶液内易降解，随着pH值增加降解速度明显加快。

温度越高橙皮苷降解速度越快，因此应在酸性低温环境保存橙皮苷。

标签：橙皮苷；水溶液；降解反应；动力学橙皮苷[1，2]是广泛存在于豆科植物、蝶形花科、唇形花科、柑橘属植物体内的一种由橙皮素与芸香糖形成的二氢黄酮醇类物质。

相关报道表明橙皮苷具有清除氧自由基功能，并能抗脂质氧化反应，从而起到消炎降脂、保肝抗癌等作用[3-5]。

此外，橙皮苷具有维持渗透压，增强毛细血管韧性，缩短出血时间，降低胆固醇等作用，在临床上常用于治疗心血管病变、慢性静脉机能不全、水肿、出血等疾病[6]。

然而，作为黄酮醇类物质，在水溶液中可能发生苷键水解，因而影响橙皮苷的治疗效果。

本研究利用高效液相色谱分析法分析不同条件水溶液下橙皮苷水解情况，并利用化学动力学方法计算橙皮苷的降解反应动力学参数，旨在为合理应用橙皮苷药物提供参考。

1 设备与药品1.1 仪器LC-10A系列高效液相色谱仪（日本岛津公司）、LC solution 色谱工作站（日本岛津公司）、AX205分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）、恒温水浴（南京凡帝朗信息科技有限公司）、pH计（上海精密科学仪器有限公司）等。

1.2 药品与试剂橙皮苷对照品（中国生物药物鉴定所，批号：110721-200613），氢氧化钠（南京化学试剂厂，分析纯），盐酸（南京化学试剂厂，分析纯），氯化钠（南京化学试剂厂，分析纯），甲醇（美国TEDIA公司，色谱纯），甲酸（美国TEDIA公司，色谱纯）。

橙皮苷对照品溶液稳定性研究方案文件编码DWF-2013-01 起草人/日期审核人/日期批准人/日期1目的本方案目的是为了研究橙皮苷对照品溶液的有效期。

2适用范围本方案适用于橙皮苷对照品溶液有效期的研究。

3 职责QC部门负责人：负责监督本方案的执行。

QC标准品管理员：负责按照本方案要求对橙皮苷对照品溶液进行稳定性研究。

4内容4.1对照品溶液的配制取橙皮苷对照品一定量于25ml容量瓶中，用甲醇色谱纯定容至刻度，得到浓度为0.25mg/ml 的溶液。

4.2储存条件密封储存于2~8℃冰箱内，用于验证分析前需放置至室温。

4.3测试时间点4.3.1首先测试3个月，可以参照下表。

测试时间点0天1月2月3月4.3.2若3个月内稳定性研究结果无异常，则延长测试时间为6个月，可参照下表。

测试时间点2个月3个月4个月5个月6个月4.3.3若6个月内稳定性研究结果无异常，则延长测试时间为1年，可参照下表。

测试时间点8个月 1 0个月12个月[χ][χ]备注： [χ]=可选择点4.4.4 每个测试的时间点可根据具体试验安排适当提前或错后，6个月以内的测试一般应在时间点的前后7天内完成，6个月-12个月的测试前后分别不应超过10天。

若有超出时限的时间更改点，需在总报告中说明。

4.4测试方法和程序4.4.1测试方法4.4.1.1照高效液相色谱法进行测定。

4.4.1.2色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为填充剂，以甲醇-醋酸-水（35：4：61）为流动相，检测波长为283nm。

4.4.1.3测定法：精密吸取配制好的对照品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定。

4.4.2测试程序4.4.2.1零时间点测试程序分别制备两份对照品溶液，在零时间点，对每份对照品溶液测试两次，互相复核，计算，并记录结果。

4.4.2.2在零时间点以外的测试程序新鲜配制一份对照品溶液，对新鲜配制的对照品溶液和零时间点配制的两份对照品溶液分别测试两次。

用新鲜配制的对照品溶液的平均响应值，来重新计算零时间点配制的两份对照品溶液的含量值，记录结果。

橙皮苷对照品溶液稳定性研究报告文件编码DWB-2013-01 起草人/日期审核人/日期批准人/日期1目的本报告是依据《橙皮苷对照品溶液稳定性研究方案》及研究数据来评估橙皮苷对照品溶液的稳定性，确定该溶液的有效期。

2 设备对照品溶液稳定性研究实验过程中使用的设备：设备名称型号冰箱Haire SC-226HPLC 岛津LC-20A纯水机Direct-Q3天平德国赛多利BP211D3对照品物质和测试过程3.1 稳定性研究实验过程中使用的对照品物质如下时间点对照品溶液配制批号对照品名称批号质量（mg）浓度(mg/m1)零点DP-C2-13-02 橙皮苷110721-201115 7.91 0.3164 DP-C2-13-03 橙皮苷110721-201115 6.28 0.25121个月DP-C2-13-04 橙皮苷110721-201115 7.02 0.28082个月DP-C2-13-05 橙皮苷110721-201115 7.08 0.28323个月DP-C2-13-07 橙皮苷110721-201115 5.84 0.23364个月DP-C2-13-08 橙皮苷110721-201115 3.76 0.1504 3.2测试过程色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱流动相的配制：甲醇-醋酸-水（35：4：61）对照品溶液的配制：取橙皮苷对照品一定量于25ml容量瓶中，用甲醇（色谱纯）定容至刻度，既得。

系统适用性试验结果：理论板数大于2000。

4储存条件研究用的对照品储存于棕色小瓶中，用封口胶封口。

研究用的对照品溶液储存在冰箱里，温度控制在2-8℃。

5 结果每个测试时间点的结果都是用新鲜配制的对照品溶液的平均响应值来重新计算用于研究期的两份对照品溶液的含量值。

计算标准偏差。

要求与零时间点的相对标准偏差不得过2.0%时间点对照品溶液配制批号含量(mg/m1)与零时间点的RSD（%）与零时间点的平均RSD（%）结果0天DP-C2-13-02 0.31461 0.40.4 合格DP-C2-13-03 0.25263 0.444天DP-C2-13-02 0.31460 0.40.4 合格DP-C2-13-03 0.24934 0.571天DP-C2-13-02 0.32506 1.91.6 合格DP-C2-13-03 0.25539 1.2100天DP-C2-13-02 0.31176 1.01.1 合格DP-C2-13-03 0.24684 1.2132天DP-C2-13-02 0.30566 2.42.4 不合格DP-C2-13-03 0.24289 2.46 变更稳定性研究草案中指定的测试时间点为0天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月。

橙皮苷的提取及其稳定性分析文赤夫;李国章;董爱文;刘干【期刊名称】《生物质化学工程》【年(卷),期】2006(40)3【摘要】为充分开发丰富的柑桔果皮资源,增加其经济附加值,采用碱溶酸析法提取椪柑果皮中橙皮苷,经D - 101大孔树脂纯化,再运用紫外 - 可见光谱扫描法分析了温度、时间、氧气、光照、pH值、金属离子等对橙皮苷的稳定性影响.结果表明:该方法提取、纯化的橙皮苷,经HPLC法检测,纯度达到 96.7 %,得率 1.92 %.提纯的橙皮苷水溶液在75 ℃以下加热 30 min 之内,以及无氧、无光、酸性及中性条件下可保持其性能稳定;Fe3+、Cu2+对橙皮苷氧化起诱导加速作用,且在充分的氧气和光照下,特别是强光下,会引起其结构变化.【总页数】4页(P37-40)【作者】文赤夫;李国章;董爱文;刘干【作者单位】吉首大学,城乡资源与规划学院,湖南,张家界,427000;湖南省林产化工工程重点实验室,湖南,张家界,427000;吉首大学,城乡资源与规划学院,湖南,张家界,427000;吉首大学,城乡资源与规划学院,湖南,张家界,427000【正文语种】中文【中图分类】TQ91;Q946.83【相关文献】1.陈皮不同提取工艺橙皮苷提取率分析 [J], 蔡庆顺;钟小群;余华2.超声提取法优选枳实中橙皮苷的提取工艺 [J], 卢静华;刘影;李羽佳3.不同提取方法对青皮中橙皮苷提取率的影响 [J], 蔡伟;曹阳;陈国俊;史晓晨4.基于橙皮苷提取转移率的青皮提取工艺研究 [J], 徐玉玲; 张文静; 王姚; 曾钦; 何岚; 雷燕莉5.响应曲面法优化枳壳中柚皮苷与新橙皮苷的提取工艺及抗氧化研究 [J], 徐坤勇;郭建忠;颜娟;韵国萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

xxxx药业有限公司对照品溶液稳定性研究方案起草人：日期：年月日审核人：日期：年月日批准人：日期：年月日1 目的本草案目的是为了研究在方法中未规定对照品溶液的效期的稳定性。

2 背景目前，在药典中没有规定对照品溶液的效期。

因此，对于没有规定效期的对照品溶液可以研究至少一个月的时间，来确定对照品溶液的稳定性。

对于对照品溶液效期的研究适用于常规分析方法，例如液相，气相，薄层，紫外等分析方法。

3 稳定性研究：3.1 标签所有用于对照品溶液效期研究的溶液标签上都需标注“用于对照品溶液效期研究”。

3.2 对照品溶液配制对照品溶液的配制应遵循相应的产品分析方法。

3.3 储存条件对照品溶液密封储存在2～8 ℃冰箱内（其他储存条件需在总结报告中说明），用于验证分析前需放置至室温。

3. 5. 1 程序方法对照品溶液的制备分别制备两份对照品溶液，在零时间点，对每份对照品溶液分析两次，互相复核。

在零时间点以外的测试时间点，新鲜配制一份对照品溶液。

对新鲜配制的对照品溶液和用于研究效期的两份对照品溶液分析两次。

用新鲜配制的对照品溶液的平均响应值，来重新计算用于研究效期的两份对照品溶液的含量值。

3. 5. 2接受标准在每次分析前，观察测试用的对照品溶液与新鲜配制的对照品溶液的外观是否一致。

如果溶液异常（如出现浑浊），或者色谱图中出现显著的杂质峰，则停止对照品溶液的测试。

在每次分析时，必须首先保证系统满足方法的系统适用性（如重复性，拖尾因子，分离度，理论塔板数等等）。

在零时间点，每份对照品溶液互相复核的结果不得过2.0。

在每个分析测试点，对照品溶液的活性成分的含量与零点的差异不得过2.0。

4 参考文件：《药品GMP指南（质量控制实验室与物料系统）》《中国药典》2015年版一部《中国药典》2015年版二部5 结果报告：对照品溶液效期研究结束后，需要总结分析数据并起草颁布稳定性研究报告。

在对照品溶液效期研究记录复核后，报告经主管领导签字后，新的效期可以执行。

橙皮苷在碱性溶液中的稳定性研究胡玉梅;孟兆青;张珊;程宁波;丁岗;王振中;萧伟【摘要】目的：研究橙皮苷在碱性溶液中的稳定性，为其提取、纯化工艺的质量控制以及制剂产品的开发提供实验依据。

方法：采用RP-HPLC法测定不同温度、pH、加热时间下橙皮苷的含量变化。

结果：加热条件下橙皮苷碱性溶液发生了降解，含量随加热温度的升高和加热时间的延长，呈不断下降趋势；弱碱条件下较稳定。

结论：为保证溶液中橙皮苷的稳定，在生产过程中应使溶液处于低温（50℃以下）及弱碱条件下，并尽量减少溶液的受热时间。

%This article was aimed to study the stability of hesperidin in alkaline solution, in order to provide experi-ment evidences for quality control of extraction and purification as well as formulation development. RP-HPLC was applied to determinate content changes of hesperidin in alkaline solution by changing the temperature, pH and heat-ing time. The results showed that hesperidin was degraded in alkaline solution by heating. The content of hesperidin decreased along with the increasing of heating temperature and heating time. The hesperidin appeared to be more stable in a weak base. It was concluded that for the purpose of ensuring of the stability of hesperidin in alkaline so-lution, it should be kept at low temperature (below 50℃), weak base conditions and shorten the heating time during the preparation process.【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》【年(卷),期】2014(000)010【总页数】4页(P2270-2273)【关键词】橙皮苷;稳定性;高效液相色谱法;降解产物【作者】胡玉梅;孟兆青;张珊;程宁波;丁岗;王振中;萧伟【作者单位】江苏康缘药业股份有限公司连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司连云港 222001; 中国药科大学中药学院南京 210009;江苏康缘药业股份有限公司连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司连云港 222001;江苏康缘药业股份有限公司连云港 222001【正文语种】中文【中图分类】R284橙皮苷（Hesperidin）是芸香科柑橘属植物果实的主要药效成分[1]，具有抗氧化、抗炎、维持血管正常渗透压、增强毛细血管韧性、降血脂、保护心血管和抗肿瘤等多种功效。

类别：确认报告编号：部门：质量管理部页码：共页，第页对照品稳定性确认报告版次：□新订□替代：实施日期：年月日授权：现授权下列部门拥有并执行本方案（复印数：）复印序列号：目录一、概述1 确认目的2 确认依据3 确认计划4 确认职责二、确认准备1、确认所需文件2、确认仪器、人员的检查三、对照品稳定性考察内容1、稳定性研究的对照品的标识2、对照品溶液配制3、对照品溶液储条件4、测试时间点5、程序和可接受标准 5.1 HPLC 对照品考察方法5.2紫外分光光度法对照品考察方法 5.3 薄层扫描法对照品考察方法 5.4 GC 对照品考察方法 四、验证结果评定与报告五、偏差变更 一、概述 1、目的：本方案的目的是为了研究在方法中未规定有效期的对照品溶液的稳定性。

2、验证依据目前在药典和质量标准中均未规定对照品溶液的有效期，为保证分析的准确性，控制检验成本，因此在没有规定有效期的情况下我们来研究对照品溶液的稳定性，确定对照品溶液的有效期。

对照品溶液的有效期适用于常规分析方法，我公司主要有液相、气相、薄层、紫外等方法。

3 验证时间安排验证时间安为 _____年_____月______日至_____ 年_____月______日。

4 验证职责 4.1验证领导小组职责4.1.1 负责验证管理的日常工作及公司内验证工作总的调度、协调及总结工作； 4.1.2 负责验证任务的下达及验证小组的确定； 4.1.3 负责验证计划和验证方案审核和批准工作； 4.1.4 负责验证报告的评价工作；1、 30ug/ml 栀子苷对照品甲醇溶液稳定性考察评定与报告表2、 70ug/ml 芍药苷对照品稀乙醇溶液稳定性考察评定与报告表3、 5ug/ml 阿魏酸对照品甲醇溶液稳定性考察评定与报告表4、 0.75mg/ml 三七皂苷Rb1、0.75mg/ml 三七皂苷Rg1、0.15mg/ml 三七皂苷R1对照品的甲醇混合溶液稳定性考察评定与报告表5、 80ug/ml 葛根素对照品30%的乙醇溶液稳定性考察评定与报告表6、 0.4mg/ml 盐酸麻黄碱对照品的甲醇溶液稳定性考察评定与报告表7、 10ug/ml 黄芩苷对照品甲醇溶液稳定性考察评定与报告表8、 15ug/ml 麝香酮对照品的无水乙醇溶液稳定性考察评定与报告表9、 0.043mg/ml 芍药苷对照品甲醇溶液稳定性考察评定与报告表 10、 50ug/ml 红景天苷对照品甲醇溶液稳定性考察评定与报告表 11、60ug/ml 黄芩苷对照品稀乙醇溶液稳定性考察评定与报告表4.1.5 负责验证周期的确定工作；4.1.6 负责发放验证证书；4.1.7 验证领导小组成员质量负责人、QC主管；4.2、化验室职责4.2.1 仪器QC负责验证方案和报告的起草，负责验证全过程管理并收集、整理验证数椐；QC主管负责方案和报告的审核，并对批准后的验证方案组织实施，参加验证方案的会审、会签；4.2.2 QC负责总结、写出验证报告；4.2.3 QC负责验证实施过程中的检测，并出具检测报告；4.3 验证小组职责4.3.1 负责验证方案起草，并对批准后的验证方案组织实施；4.3.2 负责验证全过程管理并收集、整理验证数椐；4.3.3 负责总结、写出验证报告；4.3.4 验证小组成员二、确认准备1确认结果：____________ 确认人：___________ 确认日期：_____________三、对照品稳定性考察确认内容1、稳定性研究的对照品的标识对所有对照品溶液有效期研究的溶液标签上均注明用于对照品溶液有效期研究。

一、实验目的本实验旨在通过液相色谱法测定陈皮中陈皮苷的含量，验证实验方法的准确性和可靠性，并分析陈皮苷在陈皮药材中的含量水平。

二、实验原理陈皮苷是一种黄酮类化合物，具有多种生物活性。

本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对陈皮中陈皮苷进行定量分析。

该方法基于陈皮苷在特定波长下的紫外吸收特性，通过建立标准曲线和样品分析，计算陈皮苷的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 陈皮药材（购自药材市场）- 陈皮苷对照品（纯度≥98%，购自中国药品生物制品检定所）- 甲醇（色谱纯）- 乙腈（色谱纯）- 水为超纯水- 其他试剂均为分析纯2. 实验仪器：- 高效液相色谱仪（配备紫外检测器）- 色谱柱：问度色谱科技Excsep C18，4.6250 mm × 5.0 m- 超声波清洗器- 电子天平- 移液器- 锥形瓶- 微孔滤膜四、实验方法1. 标准曲线的制备- 称取适量陈皮苷对照品，用甲醇溶解并定容至1 ml，得到浓度为0.4 mg/ml 的对照品溶液。

- 分别吸取0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml对照品溶液至5个锥形瓶中，用甲醇定容至5 ml，得到浓度分别为0.08 mg/ml、0.16 mg/ml、0.24mg/ml、0.32 mg/ml、0.40 mg/ml的标准溶液。

- 将标准溶液进样，记录峰面积，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 供试品溶液的制备- 称取陈皮药材粗粉（过二号筛）约0.2 g，精密称定。

- 将药材置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量。

- 超声处理（功率300 W，频率40 kHz）45分钟，放冷。

- 再称定重量，用甲醇补足减失的重量。

- 摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

3. 色谱条件- 色谱柱：问度色谱科技Excsep C18，4.6250 mm × 5.0 m- 流动相：乙腈-水（22：78）- 流速：1.0 ml/min- 检测波长：283 nm- 进样量：5 μl4. 样品测定- 将供试品溶液和标准溶液分别进样，记录峰面积。