高效液相色谱流动相选择(活动za)

简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化学、生物和制药样品的色谱技术。

在高效液相色谱过程中，流动相的选择和性能对分析的准确性和分离效果有着重要的影响。

下面将详细介绍高效液相色谱法中流动相的要求。

1.基础流动相特性：流动相应具有一定的极性和溶解性能。

常用的流动相包括水和有机溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈等。

流动相的选择应考虑到待分离组分的性质和分析目的，要保证样品能够溶解并很好的分离。

常用的流动相配比为水/有机溶剂（如乙腈）的比例，比如常见的70:30、50:50等。

2.pH值调节：根据待分离物和色谱柱的性质，适当调节流动相的pH值可以改变待分离物的电离状态，从而影响它们在色谱柱上的分配行为。

比如，对于具有酸性基团的分析物，可以通过酸或碱的加入来调节流动相的pH值，以影响它们与色谱固定相之间的相互作用。

3.离子强度调节：有些样品中可能存在电解质，其离子强度会对分离产生影响。

在这种情况下，可以通过添加相应的盐来调节流动相的离子强度，以改变分析物与色谱固定相的相互作用。

常用的盐有甲酸铵、硫酸铵、三氟乙酸等。

4.流速控制：流动相的流速也对色谱分离的效果有着重要的影响。

流速过快可能导致分离不充分，流速过慢则会增加分析时间。

流速的选择需根据待分离物的性质、色谱柱的尺寸和色谱仪的性能等因素综合考虑。

5.除气和过滤：流动相中的气泡和杂质会影响液相的流动性和检测信号的稳定性。

因此，在使用前应对流动相进行除气处理，以减小气泡对色谱分离的干扰。

同时，对流动相进行过滤处理，可以去除其中的固体颗粒和微生物等。

通常使用0.45μm的滤膜进行过滤。

6.流动相稳定性：流动相应具有良好的稳定性，以保证分析结果的准确性和重复性。

一般来说，流动相中的溶液成分要充分溶解，不发生相分离和析出现象。

所以，流动相的配制要求严格，要遵循相应的配方和混合方法，并在使用前进行充分的搅拌和均匀。

、信噪比的查看
在方法验证时，通常需要验证方法的检测限与定量限，而检测限与定量限通常是以信噪比（：）来衡量的。

一般以信噪比（）为时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限，而以信噪比（）为时的相应浓度或注入仪器的量确定定量限。

可按如下操作查看信噪比（）：
进入界面单击菜单栏的
弹出“: ”对话框输入噪音的进度范围（一般选择基线平稳、噪音小的进度段作
为噪音的进度范围），噪音范围可选择一段、两段或更多。

然后再单击菜单栏的（或直接点击该界面的图标，下图红色方框处）
弹出“”对话框在项下的“”下拉选项中选择“”项。

最后点击报告预览图标，如下图所示：
在报告中的“”项下有噪音的相关信息，然后还有样品相关信息将样品的峰高（）除以(*)[]即得信噪比，报告中的各种是通过各种不同的数据处理方式计算所得的噪音结果，因为(*)[]方式计算的噪音结果比较准确，所以一般取(*)[]。

另外，在报告最后的项下可直接读出信噪比。

若选择了多段噪音进度范围，在报告中系统会自动选择较小的噪音，如下图中，噪音进度段选择了、，的噪音为，的噪音为，则系统在计算信噪比（：）时自动选择的噪音（、）。

高效液相色谱流动相高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。

与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。

在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。

一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。

从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。

对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。

2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。

3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。

4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。

5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。

液相色谱流动相溶剂的选择步骤选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。

2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。

在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。

在液相色谱常用混合溶剂作流动相。

混合溶剂的P'具有加和性: P'ab= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。

关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。

其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。

一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。

一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。

溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。

在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。

一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。

2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。

甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。

水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。

3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。

在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。

2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。

3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。

二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。

这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。

2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。

这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。

简述液相色谱中流动相的选择
液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 中的流动相，也叫做溶
剂或移动相，是指样品在色谱柱中流动的溶液。

液相色谱的分离效果受到流动相的选择和配比的影响，因此流动相的选择是液相色谱分离技术中十分重要的一环。

液相色谱中常用的流动相包括有机溶剂、水、酸、盐酸/氢氧
化钠、醋酸/乙酸盐以及缓冲液等。

不同类型的溶剂或混合溶
剂可以用来分离不同性质的化合物：
1. 极性化合物的分离一般采用水和一些极性有机溶剂（如甲醇、乙醇、乙腈等）的混合物作为流动相。

2. 非极性化合物的分离则需要使用非极性有机溶剂（如正己烷、甲苯、乙酸乙酯等）或者混合有机溶剂（如乙醚和正己烷的混合物）作为流动相。

3. 酸类化合物和有机酸类化合物的分离用含有少量酸的水溶液（如醋酸溶液等）作为流动相。

4. 离子性化合物的分离则需要使用缓冲液作为流动相。

如果需要可逆电渗析检测器，则流动相需要含有离子对。

需要注意的是，在选择流动相时，不仅要考虑其相容性、带电性、缓冲效应等因素，还要考虑其挥发性、毒性和成本等因素。

因此，流动相的选择应该根据需要的分离效果、性质、成本和实验条件等综合因素进行考虑和选择。

规律1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

规律2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。

这是一个聪明而又省力的办法。

调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

规律3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

流动相1．流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低（应<2cp）。

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。

应选用挥发性溶剂。

2．流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。

液相色谱流动相的选择选择原则1 选择色谱醇的溶剂作为流动相不要随意加满溶剂瓶。

作为分析流动相，应避免不必要的浪费，防止污染环境，危害身体健康。

应该根据样哦数量，计算需要使用的溶剂体积，添加适量流动相到试剂瓶中作为流动相。

因为有些有机溶剂长期放置易变质，比如四氢呋喃在光照下就容易变质，甲醇或乙醇长期放置会生成酯类，乙腈水溶液会分解为醋酸与氨，在分析时导致基线抬高，对一些分析，特别是质谱分析造成影响。

2 配置某些酸或碱性流动相时要考虑色谱柱的使用pH范围有些酸并不适宜作为流动相，如盐酸、长期使用可能损坏泵及相关的钢制管线。

注意选择合适的截止波长的溶剂作为流动相。

紫外分析时，样品的检测波长至少应大于所用溶剂的截止波长20nm上。

3 配置的盐溶液一定用滤膜过滤常规液相用0.45µm滤膜过滤，高效液相色谱使用0.2µm滤膜过滤。

水或缓冲盐溶液好置于棕色瓶中，以防长菌，阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。

质谱分析不能使用不挥发性盐作为流动相。

使用挥发性盐作为流动相时，在保证分析的条件下，流动相中的盐尽量保持低浓度。

流动相的要求利用高效液相色谱法测定物质的含量时，流动相的选择至关重要。

对于流动相的要求一般有以下几点：1.作为流动相的溶剂，黏度要小。

2.与固定相不发生化学反应，不互溶。

3.对待测样品有适当的溶解度。

4.应与检测器匹配。

当然了，流动相的选择主要还是看具体的实验，但可以根据溶剂极性来选择。

常见溶剂极性大小为：水＞甲酰胺＞乙腈＞甲醇＞乙醇＞丙醇＞丙酮＞二氧六环＞四氢呋喃＞甲乙醇＞正丁醇＞乙酸乙酯＞乙醚＞异丙醇＞二氯甲烷＞氯仿＞溴乙烷＞苯＞氯丙烷＞甲苯＞四氯化碳＞二硫化碳＞环己烷＞己烷＞庚烷流动相的纯度对最后的测定结果有很大的影响，所以在检测中中一定要按照实验要求选择合适纯度的试剂进行配制。

高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，其流动相的选择对分离效果至关重要。

常用的流动相分为以下几种：
1. 甲醇：甲醇是一种常用的有机溶剂，具有良好的溶解性和极性。

在反相色谱中，甲醇常与水混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。

2. 乙腈：乙腈是一种有机溶剂，具有较高的极性。

与甲醇类似，乙腈也可以与水混合作为流动相，用于反相色谱中对极性物质的分离。

3. 水：水是一种无机溶剂，具有良好的极性。

在正相色谱中，水常与有机溶剂（如甲醇、乙腈等）混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。

4. 乙酸乙酯：乙酸乙酯是一种有机溶剂，具有较弱的极性。

在正相色谱中，乙酸乙酯可以与水混合作为流动相，用于分离弱极性物质。

5. 庚烷：庚烷是一种非极性有机溶剂，适用于分离非极性物质。

在反相色谱中，庚烷可以与甲醇或乙腈混合作为流动相。

6. 混合溶剂：根据被测物的极性和分离需求，可以选用两种或多种溶剂混合作为流动相。

例如，甲醇与水混合用于反相色谱，乙腈与水混合用于正相色谱等。

流动相的选择应考虑以下因素：
1. 被测物的极性：根据被测物的极性选择相应的流动相，以实现良好的分离效果。

2. 固定相的选择：根据固定相的极性，选择与之匹配的流动相。

3. 检测器的要求：某些检测器对流动相的极性有要求，需根据检测器类型选择合适的流动相。

4. 实验条件：如流速、柱温等实验条件，也会影响流动相的选择。

在高效液相色谱法中，常用的流动相包括甲醇、乙腈、水、乙酸乙酯、庚烷等，具体选择需根据被测物的极性、固定相、检测器要求等因素综合考虑。

关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种将混合物分离成单一组分的有效工具。

为了实现这种分离，高效液相色谱需要两种相：固定相和流动相。

其中，流动相是高效液相色谱仪中至关重要的组成部分之一，因为它决定着分离效果和分离时间。

因此，选择正确的流动相对于分离的精度和效率来说非常重要。

流动相简介流动相是指在柱床中连续流动的溶液。

在高效液相色谱中，流动相主要由溶剂和缓冲液组成。

溶剂是用于将样品分离的液体，在高效液相色谱仪中通常采用多种溶剂的混合物，称为流动相溶剂或者移动相溶剂。

缓冲液是在溶剂中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值，缓冲液的作用是保持样品成分的稳定性和防止封堵柱床。

流动相的选择取决于样品的特性、分离要求和分析环境的条件。

因此，选择合适的流动相是高效液相色谱仪分离分析的关键因素之一。

流动相的分类根据溶剂的极性，流动相可分为两种类型：有机相和水相。

具体分类如下：有机相有机相通常由疏水性的有机溶剂组成，这些有机溶剂的极性比水低。

主要有以下三类：•极性较小的有机溶剂：含有醚、酮或者类似于苯、四氢呋喃等非极性有机溶剂的混合物。

•极性中等的有机溶剂：含有乙腈、甲醇、乙醇等极性有机溶剂的混合物。

•极性较大的有机溶剂：如乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等。

水相水相是由水和缓冲液组成的混合物。

水是极性溶剂，本身具有良好的溶解性和稳定性。

缓冲液是在水中加入的一种化学物质来调节流动相的pH值。

流动相的选择原则在选择流动相时，需要考虑分析的目标和样品的特性。

下面列举几种常见的流动相选择原则：根据分析目标选择流动相首先，需要根据分析目标选择流动相。

如果需要分离极性物质，则应选择相对极性较强的水相，如果需要分离非极性物质，则应选择相对极性较弱的有机相。

如果需要同时分离多种溶质，则可以选择相组合。

根据样品的特性选择流动相如果样品是非极性的，则应选择相对极性较弱的有机相，例如乙酸乙酯-甲醇体系。

高效液相流动相的选择 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020高效液相色谱流动相选择流动相1.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。

这是一个聪明而又省力的办法。

调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低(应<2cp)。

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。

应选用挥发性溶剂。

流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

关于高效液相色谱色谱柱、流动相以及检测器的选择1.概述高效液相色谱已成为化学、医学、工业和法学等学科领域中一项十分重要的分离分析技术。

近年来，我国对食品安全有了更高的关注度，越来越多的研究人员将高效液相色谱应用于食品安全检测中，获得了良好的效果。

高效液相色谱是色谱法中十分重要的一个分支，这项技术采用高压输液系统将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂作为流动相，由流动相携带需测定的混合物液体泵入有固定相的色谱柱中，而在色谱柱中各成分能够得到有效的分离，分离完成后将其输送到检测器中进行检测，能帮助工作人员对样本进行有效的分析，了解其中存在的不同物质。

高效液相色谱在应用过程中可通过选择固定相和流动相以及调节流动相比例达到最优的分离效果，不仅速度较快且重复性较高，检测时间能控制在十几分钟至几十分钟。

同时高效液相色谱柱能反复使用，在进样分离测定时为仪器自动化处理，具有较高的分析精度，可减少人为干扰及误差。

2.高效液相色谱色谱柱的选择童优芸[1]等人使用高效液相色谱法同时检测液体食品中6种人工合成色素，该研究选择的色谱柱为美国安捷伦XDB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)。

色谱柱是分离的核心，选择色谱柱的要求是柱效高、选择性好、分析速度快等。

市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3、5、7、10 μm等。

C18和C8色谱柱的应用较为广泛，都属于反相色谱柱。

C8适合分析大分子类的物质，其对同一个物质的保留能力比C18柱弱，保留时间比C18柱早，一些物质出峰过于靠前时使用C8柱很难实现分离。

C18柱对中等极性化合物保留最强，主要应用于羧基、脂肪酸、苯胺、甘油酯等物质的测定，对分子量较小的物质有较好的分离效果。

因此，考虑合成色素的保留时间和分离度，选用C18柱作为此次试验的色谱分析柱。

刘艳荣[2]等人在保健食品中叶黄素总量的高效液相色谱分析测定中选择的色谱柱为C18色谱柱，5μm,250 mm×4.6 mm（内径），在该研究中比较了C18和C30这两种色谱柱的分离效果，结果表明，叶黄素都能很好的出峰。

液相色谱仪流动相的选择与优化液相色谱操作规程液相色谱是目前应用多的色谱分析方法，液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器构成，其整体构成仿佛于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。

液相色谱的流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。

它是影响分别的一个特别紧要因素。

在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的紧要工作。

选择方法1、由强到弱：一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试验，这样可以很快地得到分别结果，然后依据出峰情况调整有机溶剂（乙腈或甲醇）的比例。

2、三倍规定：每削减10%的有机溶剂（甲醇或乙腈）的量，保留因子约加添3倍，此为三倍规定。

这是一个聪慧而又省力的方法。

调整的过程中，注意察看各个峰的分别情况。

3、粗调转微调：当分别达到确定程度，应将有机溶剂10%的更改量调整为5%，并据此规定渐渐降低调整率，直至各组分的分别情况不再更改。

脱气方法1、吹氦脱气法利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60mL/min流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排出溶解的空气，能排出接近80%的氧气。

接受一个分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排出。

这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。

这种脱气方法虽然好，但氦气价格较高，很少使用。

2、加热回流法此法的脱气效果较好。

在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。

3、抽真空脱气法此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa，即可除去溶解的气体。

但是由于真空脱气会使混合溶剂构成发生变化，从而影响到试验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。

4、超声波脱气法将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中，用超声波震荡10～20min。

此法的脱气效果差。

5、在线脱气法HPLC仪器均可配置专门的在线脱气机。

高效液相色谱对流动相的要求是什么呢对于高效液相色谱来说，流动相的选择是非常重要的。

以下是一些对于流动相的基本要求：
1、流动相应与固定相相容，即不会与固定相发生化学反应或物理吸附。

2、流动相应具有合适的极性和沸点，以便在色谱柱中进行分离。

3、流动相应具有足够的纯度，以保证在色谱柱中不会产生背景杂质或干扰峰。

4、流动相应具有合适的pH值，以保护色谱柱和检测器，同时保证样品的完全分离。

5、流动相应具有合适的缓冲能力，以保持分离峰的稳定性和分离效果。

6、流动相应具有合适的流速和流量，以保证分离效果和分离速度。

7、流动相应易于更换和再生，以保持色谱柱的性能和延长其使用寿命。

因此，在选择流动相时，需要根据具体的实验条件和样品特点进行综合考虑，选择最适合的流动相，以确保高效液相色谱分析的准确性和可靠性。

高效液相色谱流动相选择流动相 1.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。

这是一个聪明而又省力的办法。

调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低(应<2cp)。

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。

应选用挥发性溶剂。

流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。

高效液相色谱流动相选择欧阳引擎（2021.01.01）流动相 1.流动相的性质要求一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。

流动相选择1：由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。

2：三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。

这是一个聪明而又省力的办法。

调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。

3：粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

选择流动相时应考虑以下几个方面：①流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。

使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。

当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低(应<2cp)。

高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。

如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。

应选用挥发性溶剂。

流动相的pH值采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。